專利名稱：一種用于水產養殖的消毒劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種用于水產養殖的消毒劑，尤其還涉及其制備方法，具體地說，是將生物制劑制備成消毒劑用于水產養殖環境的消毒滅菌。
背景技術：
蛭弧菌是寄生于其他細菌并能導致其裂解的一類細菌，它雖然比通常的細菌小，能通過細菌濾器，有類似噬菌體的作用，但它不是病毒，確確實實是一類能"吃掉"細菌的細菌。1962年首次發現于菜豆葉燒病假單胞菌體中，隨后從土壤、污水中都分離到了這種細菌。根據其基本特性，命名為Bdellovibrio bacteriovorus。其中，“Bdello”一詞來自希臘字，是“水蛭”的意思，“vibrio”意為“弧菌”，而種名“bacteriovorus”是“食細菌”的意思。由于它們具有特殊的捕食生活方式以及有可能充當決定自然界中微生物種群變動的角
色，因而引起了許多科學工作者的興趣。蛭弧菌分布非常廣泛，普遍存在于各種水域以及土壤之中，能寄生和裂解大多數水產動物致病菌，是一類攻擊、侵染、裂解宿主菌的寄生菌，有類似噬菌體的作用，蛭弧菌的宿主范圍極為廣泛，對多種腸道革蘭氏陰性菌有噬菌、裂解作用。它作為有效的生物防治病害的生物制劑，受到動物病害防治及環境改善行業人士青睞。目前，蛭弧菌的工業生產利用主要是固體制劑類，一般是利用冷凍干燥的方法制備，成本較高，且目前很少有針對水產養殖環境的消毒滅菌產品。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是提供一種用于水產養殖的消毒劑及其制備方法，利用蛭弧菌的作為寄生菌的特性，防治水體中的有害菌。為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是一種用于水產養殖的消毒劑，為液體形態，包括氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀，重量百分數均為1% -5%，其余為蒸餾水，其特征在于消毒劑中含有寄生型蛭弧菌，含量為 109-1013CFU/mL。消毒劑中還包含一種或多種以下物質甘油、椰子油脂和羧甲基纖維素鈉，它們的質量百分數為1% -10%，該物質或其組合可以保持消毒劑中蛭弧菌的活性，并均勻分布在消毒劑中。一種制備上述消毒劑的方法，包括以下步驟A.制備蛭弧菌的宿主菌的液體培養基，培養基由以下成分組成氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀，重量百分數為-10%的蛋白胨，1% -5%的酵母粉，1% -5%的牛肉膏，通過控制培養基中磷酸鹽的含量使培養基的pH保持在7. 0-8. 0，培養基在 121°C 滅菌 20min ；B.將A步驟制備的培養基放入發酵罐中，并植入蛭弧菌的宿主菌，35°C_37°C通氣培養24-48小時，菌落總數檢測保證宿主菌菌數大于I X 109CFU/mL ；
C.將1% -3%的蛭弧菌種(菌數為lX106CFU/mL)接種于裝有步驟B制備的發酵罐中，35 °C -37°C通氣培養24-48小時，菌落總數檢測保證發酵罐中蛭弧菌含量為109-1013CFU/mL，發酵完成后，發酵液中加入甘油、椰子油脂和羧甲基纖維素鈉中的一種或幾種，它們的質量百分數為1% _10%，既得本發明的消毒劑。蛭弧菌的宿主菌為下列菌的一種或幾種大腸桿菌、沙門氏菌、副溶血弧菌，優選為大腸桿菌，菌數大于I X 109CFU/mL。使用時將消毒液體按照適當的比例稀釋，放入水產養殖水體中即可。消毒劑可以低溫保存也可常溫保存，低溫可以保存一年以上，常溫可以保存3到4個月。蛭弧菌種可通過購買目前商業銷售的蛭弧菌制劑獲得，蛭弧菌 的宿主菌為常見菌種，獲得比較方便。本發明的有益效果是利用生物防治的方法，得到一種高效、環保、對水產養殖動物不會產生有害物質殘留的消毒劑，制備方法簡單，成本較低，適合大規模應用。
具體實施例方式實施例I該消毒劑通過下列步驟得到A.制備蛭弧菌的宿主菌的液體培養基，培養基由以下成分組成氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀，重量百分數為5%，5%的蛋白胨，5%的酵母粉，5%的牛肉膏，培養基的pH為7.0，培養基在121°C滅菌20min ；B.將A步驟制備的培養基放入發酵罐中，并植入蛭弧菌的宿主菌，37°C通氣培養24小時，菌落總數檢測保證宿主菌菌數大于I X 109CFU/mL ；C.取3g蛭弧菌制劑，用無菌水制備3 %的蛭弧菌種，將蛭弧菌種接種于裝有步驟B制備的發酵罐中，37°C通氣培養48小時，菌落總數檢測保證發酵罐中蛭弧菌含量為1013CFU/mL。蛭弧菌的宿主菌為下列菌的一種或幾種大腸桿菌、沙門氏菌、副溶血弧菌，優選為大腸桿菌，菌數大于I X 109CFU/mL。獲得的發酵液即為本發明的消毒劑，發酵完成后，加入甘油、椰子油脂和羧甲基纖維素鈉等物質的一種或幾種，使它們的質量百分數為I %。按照上述方法獲得的一種用于水產養殖的消毒劑，為液體形態，包括氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀，重量百分數都為5%，其余為蒸餾水，消毒劑中含有蛭弧菌，含量為 1013CFU/mL。消毒劑中還包含一種或多種以下物質甘油、椰子油脂和羧甲基纖維素鈉，它們的質量百分數為I %。實施例2該消毒劑通過下列步驟得到A.利用無菌水制備蛭弧菌液體培養基，培養基由以下成分組成氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀，重量百分數為1%，5%的蛋白胨，1%的酵母粉，1%的牛肉膏，并用磷酸鹽緩沖液使培養基的P為8. 0，培養基在121°C滅菌20min ；B.將A步驟制備的培養基放入發酵罐中，并放入大腸桿菌，菌數大于IXlO9CFU/mL, 35°C通氣培養24小時，菌落總數檢測保證宿主菌菌數大于I X 109CFU/mLC.取Ig蛭弧菌制劑，用無菌水制備I %的蛭弧菌種，接種于裝有步驟B制備的發酵罐中，35°C通氣培養24小時，菌落總數檢測保證發酵罐中蛭弧菌含量為109CFU/mL，獲得的發酵液即為本發明的消毒劑，發酵完成后，加入甘油、椰子油脂和羧甲基纖維素鈉等物質的一種或幾種，使它們的質量百分數為10%。按照上述方法獲得的一種用于水產養殖的消毒劑，為液體形態，包括氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀，重量百分數都為I%，其余為蒸餾水，消毒劑中含有蛭弧菌，含量為 109CFU/mL。消毒劑中還包含一種或多種以下物質甘油、椰子油脂和羧甲基纖維素鈉，它們的質量百分數為10%。實施例3將本發明制備的消毒劑應用于九孔鮑的養殖試驗，檢測其對具體養殖動物的影響。利用實施例I中的消毒劑，并設空白對照，觀察不同養殖條件下九孔鮑的生長狀況及水體中主要微生物的數量。本試驗采用添加蛭弧菌制劑并結合周期換水的方式研究蛭弧菌在九孔鮑養殖中的應用潛能，以目前進行生產的養殖池作為對照A組，實驗組水體中添加不同含量的消毒齊U，使養殖池中蛭弧菌的濃度分別為102CFU/mL、104CFU/mL和106CFU/mL，分別為B組、C組和D組，其余養殖條件完全相同。同時實驗采用20d的換水周期。實驗采用增重率、重量日平均增長量、殼長增長率、殼長日平均增長量和存活率為判據，確定蛭弧菌對九孔鮑生長的影響。此外，在整個實驗周期中的換水前分別對各組中養殖水體中所含的弧菌數進行檢測，試驗結果表明，實驗組九孔鮑的生長指標和存活率均顯著高于對照組(P < O. 05)，隨著蛭弧菌在水體中濃度的升高，九孔鮑的生長和存活率也相應提高，蛭弧菌在水體中的濃度為106CFU/mL時，九孔鮑的增重率、殼長增長率和存活率分別為125. 3%U70. 2%和96. 5%，弧菌檢測結果表明，蛭弧菌可有效控制和消除養殖水體中的弧菌數。
權利要求
1.一種用于水產養殖的消毒劑，其特征在于其溶劑為蒸餾水，其中包括氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀，重量百分含量均為1% -5%，還含有寄生型蛭弧菌，含量為109-1013CFU/mL。
2.根據權利要求I所述的消毒劑，其特征在于其還包含一種或多種下列物質甘油、椰子油脂和羧甲基纖維素鈉，其重量百分含量均為1% _10%。
3.一種制備權利要求I所述的消毒劑的方法，其特征在于，包括以下步驟 A.制備蛭弧菌的宿主菌的液體培養基，溶劑為蒸餾水，培養基由以下成分組成氯化鈉、氯化鉀、磷酸氫二鈉、磷酸二氫鉀，重量百分數為I % -5 %，5 % -10 %的蛋白胨，I % -5 %的酵母粉，I % -5%的牛肉膏，通過控制培養基中磷酸鹽的含量使培養基的pH保持在7. 0-8. 0，培養基在 121°C 滅菌 20min ； B.將A步驟制備的培養基放入發酵罐中，并植入蛭弧菌的宿主菌，35°C_37°C通氣培養24-48小時，菌落總數檢測保證宿主菌菌數大于I X 109CFU/mL ； C.將1%-3%的蛭弧菌種接種于裝有步驟B制備的發酵罐中，35°C _37°C通氣培養24-48小時，菌落總數檢測保證發酵罐中蛭弧菌含量為109-1013CFU/mL，發酵完成后，發酵液中加入甘油、椰子油脂和羧甲基纖維素鈉中的一種或幾種。
4.根據權利要求3所述的制備消毒劑的方法，其特征在于，蛭弧菌的宿主菌為大腸桿菌、沙門氏菌、志賀氏菌和副溶血弧菌中的一種或幾種。
5.根據權利要求4所述的制備消毒劑的方法，其特征在于，所述蛭弧菌的宿主菌為大腸桿菌。
全文摘要
本發明公開了一種用于水產養殖的消毒劑及其制備方法，為生物消毒劑，消毒劑中含有蛭弧菌，含量為109-1013CFU/mL。制備方法包括以下步驟A.制備蛭弧菌宿主菌的液體培養基；B.將A步驟制備的培養基放入發酵罐中，并放入蛭弧菌的宿主菌；C.將蛭弧菌種接種于裝有步驟B制備的發酵罐中，35℃-37℃通氣培養24-48小時，菌落總數檢測保證發酵罐中蛭弧菌含量為109-1013CFU/mL。本發明利用生物防治的方法，得到一種高效、環保、對水產養殖動物不會產生有害物質殘留的消毒劑，制備方法簡單，成本較低，適合大規模應用。
文檔編號A01P1/00GK102870818SQ20121031339
公開日2013年1月16日 申請日期2012年8月21日 優先權日2012年8月21日
發明者邵緒霞 申請人:青島叁鼎衛生制品有限公司