專利名稱：蝴蝶蘭植物組織培養基配制方法
技術領域：
本發明屬于農業生物技術領域，涉及一種植物的組織培養技術。
背景技術：
蝴蝶蘭是蘭科植物中栽培最為廣泛、普及的種類之一。由于花大，花期長，花色鮮艷，色澤多樣，花型優美，深受人們的喜愛，市場需求量大，但是蝴蝶蘭傳統分株繁殖系數極低，雜交育種繁殖速度慢，雜交種子在自然條件下不易萌發，很難滿足市場需求。許多學者對蝴蝶蘭的組織培養做了大量研究，但是蝴蝶蘭雜交品種多，缺少適應性廣、滿足多個品種工廠化生產的培養基。
發明內容
本發明的目的是提供一種蝴蝶蘭植物組織培養基配制方法，以解決蝴蝶蘭分株繁殖系數極低，雜交育種繁殖速度慢，雜交種子在自然條件下不易萌發，的問題，缺少適應性廣、滿足多個品種工廠化生產的培養基等問題。本發明解決其技術問題所采用的技術方案是采用組織培養技術，蝴蝶蘭的植物組織培養基配方，由種子萌發培養基、分化培養基、壯苗培養基、生根培養基組成，4種培養基分別配制、配套應用。種子萌發培養基以MS培養基為基礎添加了 6-芐氨基嘌呤、I-萘乙酸、活性炭。分化培養基以1/3MS培養基為基礎添加了 6-芐氨基嘌呤、I-萘乙酸、活性炭、香蕉汁，壯苗培養基以MS培養基為基礎添加了 6-芐氨基嘌呤、吲哚-3-丁酸、花寶I號、花寶2號、活性炭，生根培養基以MS培養基為基礎添加了 I-萘乙酸、香蕉汁、活性炭，從而滿足蝴蝶蘭生長需要。種子萌發培養基配方基本培養基MS、6-芐氨基嘌呤4. 5-5. 5毫克/升、I-萘乙酸O. 1-0. 3毫克/升、活性炭500-1500毫克/升、蔗糖15000-25000毫克/升、瓊脂粉4000-6000毫克/升；分化培養基配方基本培養基1/3MS、6-芐氨基嘌呤2. 5-3. 5毫克/升、I-萘乙酸O. 18-0. 22毫克/升、活性炭800-1200毫克/升、香蕉汁80000-120000毫克/升、蔗糖25000-35000毫克/升、瓊脂粉4000-6000毫克/升；壯苗培養基配方基本培養基MS、6-芐氨基嘌呤I. 2-1. 7毫克/升、吲哚-3- 丁酸I. 2-1. 7毫克/升、花寶I號200-800毫克/升、花寶2號800-1200毫克/升、活性炭1500-2500毫克/升、蔗糖15000-25000毫克/升、瓊脂粉4000-6000毫克/升；生根培養基配方基本培養基MS、1-萘乙酸O. 2-0. 8毫克/升、香蕉汁50000-150000毫克/升、活性炭1500-2500毫克/升、蔗糖15000-25000毫克/升、瓊脂粉4000-6000毫克/升；其制備工藝如下
I、種子萌發培養基配方的制備
按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝O. 8升純凈水的鍋中煮沸；取O. I升10倍MS母液與6-芐氨基嘌呤、I-萘乙酸、活性炭溶解后加入鍋中；稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化；定容到I. O升；調整pH值為5. 8 ;分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓O. 1-0. 14MPa滅菌15分鐘；冷卻成固體；接無菌苗進行無菌培養。2、分化培養基配方的制備按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝O. 8升純凈水的鍋中煮沸；取O. 0333升10倍MS母液與6-芐氨基嘌呤、I-萘乙酸、活性炭、香蕉汁溶解后加入鍋中；稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化；定容到I. O升；調整pH值為5. 8 ;分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓O. 1-0. 14MPa滅菌15分鐘；冷卻成固體；接無菌苗進行無菌培養。3、壯苗培養基配方的制備
按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝O. 8升純凈水的鍋中煮沸；取O. I升10倍MS母液與6-芐氨基嘌呤、吲哚-3-丁酸、花寶I號、花寶2號、活性炭溶解后加入鍋中；稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化；定容到I. O升；調整pH值為5.8 ;分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓O. I-ο. 14MPa滅菌15分鐘；冷卻成固體；接無菌苗進行無菌培養。4、生根培養基配方的制備
按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝O. 8升純凈水的鍋中煮沸；取O. I升10倍MS母液 與I-萘乙酸、香蕉汁、活性炭溶解后加入鍋中；稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化；定容到I. O升；調整pH值為5. 8 ;分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓O. 1-0. 14MPa滅菌15分鐘；冷卻成固體；接無菌苗進行無菌培養。采用本發明的積極效果是種子萌發培養基種子播種后萌發時間比較短，40天體內全部萌發并形成類原球莖，這個分化培養基配方使培養周期只有40天左右，分化倍數在
5-15之間，理論上一個芽一年可以繁殖上百萬株苗；壯苗培養基使蝴蝶蘭組培苗生長速度加快生根，生產出的苗子整齊度高；生根培養基配方生根率高，當接種40天后。生根率在95%以上，且每棵苗生根條數在3-10之間。
具體實施例方式以制備I升分化培養基，I升生根培養基為例，其原料配方配比為種子萌發培養基種子萌發培養基配方10倍MS母液O. I升、6-芐氨基嘌呤5毫克、I-萘乙酸O. 2毫克、活性炭1000毫克、蔗糖20000毫克、瓊脂粉5000毫克；分化培養基配方10倍MS母液O. 0333升、6-芐氨基嘌呤3毫克、I-萘乙酸O. 2毫克、活性炭1000毫克、香蕉汁100000毫克、蔗糖30000毫克、瓊脂粉5000毫克；壯苗培養基配方10倍MS母液O. I升、6-芐氨基嘌呤I. 5毫克、吲哚-3- 丁酸I. 5毫克、花寶I號500毫克、花寶2號1000毫克、活性炭2000毫克、蔗糖200000毫克、瓊脂粉5000毫克/升；生根培養基配方10倍MS母液O. I升、I-萘乙酸
O.5毫克、香蕉汁100000毫克、活性炭2000毫克、蔗糖20000毫克、瓊脂粉5000毫克；其制備流程如下
I、種子萌發培養基配方的制備
按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝I升純凈水的鍋中煮沸；取O. I升10倍MS母液與
6-芐氨基嘌呤、I-萘乙酸、活性炭溶解后加入鍋中；稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化；定容到I升；調整pH值為5. 8 ;分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓O. 1-0. 14MPa滅菌15分鐘；冷卻成固體；接無菌苗進行無菌培養。2、分化培養基配方的制備
按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝I升純凈水的鍋中煮沸；取O. 0333升10倍MS母液與6-芐氨基嘌呤、I-萘乙酸、活性炭、香蕉汁溶解后加入鍋中；稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化；定容到I升；調整pH值為5.8 ;分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓O. 1-0. 14MPa滅菌15分鐘；冷卻成固體；接無菌苗進行無菌培養。3、壯苗培養培養基配方的制備
按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝I升純凈水的鍋中煮沸；取I. O升10倍MS母液與6-芐氨基嘌呤、吲哚-3- 丁酸、花寶I號、花寶2號、活性炭溶解后加入鍋中；稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化；定容到I升；調整PH值為5.8 ;分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓O. I-ο. 14MPa滅菌15分鐘；冷卻成固體；接無菌苗進行無菌培養。4生根培養基配方的制備
按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝I升純凈水的鍋中煮沸；取I. O升10倍MS母液與I-萘乙酸、香蕉汁、活性炭溶解后加入鍋中；稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化；定容到I升； 調整pH值為5. 8 ;分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓O. 1-0. 14MPa滅菌15分鐘；冷卻成固體；接無菌苗進行無菌培養。
權利要求
1.一種蝴蝶蘭植物組織培養基配制方法，其特征是采用組織培養技術，通過調整激素配比使其適應蝴蝶蘭的生長發育，蝴蝶蘭的植物組織培養基配方由種子萌發培養基、分化培養基、壯苗培養基、生根培養基組成，4種培養基分別配制、配套應用；種子萌發培養基以MS培養基為基礎添加了 6-芐氨基嘌呤、I-萘乙酸、活性炭；分化培養基以1/3MS培養基為基礎添加了 6-芐氨基嘌呤、I-萘乙酸、活性炭、香蕉汁，壯苗培養基以MS培養基為基礎添加了 6-芐氨基嘌呤、吲哚-3-丁酸、花寶I號、花寶2號、活性炭，生根培養基以MS培養基為基礎添加了 I-萘乙酸、香蕉汁、活性炭，從而滿足蝴蝶蘭生長需要；種子萌發培養基配方基本培養基MS、6-芐氨基嘌呤4. 5-5. 5毫克/升、I-萘乙酸0. 1-0. 3毫克/升、活性炭500-1500毫克/升、蔗糖15000-25000毫克/升、瓊脂粉4000-6000毫克/升；分化培養基配方基本培養基1/3MS、6-芐氨基嘌呤2. 5-3. 5毫克/升、I-萘乙酸0. 18-0. 22毫克/升、活性炭800-1200毫克/升、香蕉汁80000-120000毫克/升、蔗糖25000-35000毫克/升、瓊脂粉4000-6000毫克/升；壯苗培養基配方基本培養基MS、6-芐氨基嘌呤I. 2-1. 7毫克/升、噴B朵-3- 丁酸I. 2-1. 7毫克/升、花寶I號200-800毫克/升、花寶2號800-1200毫克/升、活性炭1500-2500毫克/升、蔗糖15000-25000毫克/升、瓊脂粉4000-6000毫克/升；生根培養基配方基本培養基MS、1-萘乙酸0. 2-0. 8毫克/升、香蕉汁50000-150000毫克/升、活性炭1500-2500毫克/升、蔗糖15000-25000毫克/升、瓊脂粉4000-6000毫克/升；其制備工藝如下 (1)種子萌發培養基配方的制備 A按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝0. 8升純凈水的鍋中煮沸； B取0. I升10倍MS母液與6-芐氨基嘌呤、I-萘乙酸、活性炭溶解后加入鍋中； C稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化； D定容到I. 0升； E調整pH值為5. 8 ； F分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓0. 1-0. 14MPa滅菌15分鐘； G冷卻成固體； H接無菌苗進行無菌培養； (2)分化培養基配方的制備 A按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝0. 8升純凈水的鍋中煮沸； B取0. 0333升10倍MS母液與6-芐氨基嘌呤、I-萘乙酸、活性炭、香蕉汁溶解后加入鍋中； C稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化； D定容到I. 0升； E調整pH值為5. 8 ； F分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓0. 1-0. 14MPa滅菌15分鐘； G冷卻成固體； H接無菌苗進行無菌培養； (3)壯苗培養基配方的制備 A按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝0. 8升純凈水的鍋中煮沸； B取0. I升10倍MS母液與6-芐氨基嘌呤、吲哚-3-丁酸、花寶I號、花寶2號、活性炭溶解后加入鍋中； C稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化； D定容到I. O升； E調整pH值為5. 8 ； F分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓0. 1-0. 14MPa滅菌15分鐘； G冷卻成固體； H接無菌苗進行無菌培養； (4)生根培養基配方的制備 A按上述原料配比稱量瓊脂粉加入裝0. 8升純凈水的鍋中煮沸； B取0. I升10倍MS母液與I-萘乙酸、香蕉汁、活性炭溶解后加入鍋中； C稱量蔗糖加入鍋中并讓其融化； D定容到I. 0升； E調整pH值為5. 8 ； F分裝26瓶進行高溫121-126°C，高壓0. 1-0. 14MPa滅菌15分鐘； G冷卻成固體； H接無菌苗進行無菌培養。
全文摘要
一種蝴蝶蘭植物組織培養基配制方法，涉及一種植物的組織培養技術。該配制方法采用組織培養技術，其培養基配方由種子萌發培養基、分化培養基、壯苗培養基、生根培養基組成，4種培養基分別配制、配套應用。種子萌發培養基配方基本培養基MS、6-芐氨基嘌呤、1-萘乙酸、活性炭、蔗糖、瓊脂粉；分化培養基配方基本培養基1/3MS、6-芐氨基嘌呤、1-萘乙酸、活性炭、香蕉汁、蔗糖、瓊脂粉；壯苗培養基配方:基本培養基MS、6-芐氨基嘌呤、吲哚-3-丁酸、花寶1號、花寶2號、活性炭、蔗糖、瓊脂粉；生根培養基配方基本培養基MS、1-萘乙酸、香蕉汁、活性炭、蔗糖、瓊脂粉；按上述組分配方分別制備、獲得所需培養基產品，實現了蝴蝶蘭植物組織培養和高倍繁育。
文檔編號A01H4/00GK102845311SQ20121038380
公開日2013年1月2日 申請日期2012年10月11日 優先權日2012年10月11日
發明者張友秋, 趙學燕, 王雙雙, 王道帥 申請人:山東鑫秋種業科技有限公司