專利名稱：一種以莖尖和莖段為外植體的黃連木快速高效生根方法
技術領域：
本發明屬于植物生物技術領域，具體涉及一種以莖尖和莖段為外植體的黃連木快速高效生根方法。
背景技術：
黃連木O0Z1Siacia chinensis Bunge)雌雄異株,又名偕木、偕樹等,屬于漆樹科黃連木屬落葉喬木。它耐干旱、鹽堿、瘠薄，適應性強，分布范圍廣，是一種優良的綠化、用材、觀賞、藥用和油料樹種。鮮葉可提取芳香油，具有清熱解毒等藥效。根、莖、葉、樹皮、葉均可入藥。葉片、種子及樹皮等富含單寧，是制取栲膠的上好原料。雌雄株具有不同的經濟價值，雄株木材堅韌致密、紋理細密、耐腐蝕性強，可作建筑、家具及雕刻用材。雌株果實含油量35%，種子含油量40%，種仁含油量56%，是制取生物柴油的上佳原料，已被專家列為未來20年最具有發展潛力的生物柴油原料樹種之一，對解決目前及將來的能源危機具有重要的作用。目前，黃連木主要通過播種、扦插和嫁接繁殖，遠遠不能滿足國內外對黃連木種苗的巨大需求。黃連木組培快繁技術的應用能夠為生產上提供大量優質的種苗，其中黃連木組培苗生根是黃連木成長為實生苗必不可少的步驟，而黃連木組培苗生根的快慢和生根率的高低，標志著實驗的成敗。目前學術界對黃連木組培快繁的研究日益增多，比如程世平、施江等采用1/2 WPM +1.0 mg/L IBA + O. 2 mg/L NAA作為生根培養基，培養35天，生根率達100%。何敬房等采用1/2 DKff + 6.0 mg/L IBA作為生根培養基，培養30天，生根率達91. 15%。郭玉霞等人采用 MS + 10. O mg/L IBA + 3. O mg/L IAA + 30 g/L 蔗糖+ 4 g/L瓊脂作為生根培養基，培養30天，生根率達60%以上。然而，其生根質量、對材料的適應性、縮短生根時間方面有待提聞。
發明內容
本發明的目的在于找到一種簡單、方便且能夠使黃連木快速高效生根的方法。本發明所采用的技術方案是，一種以莖尖和莖段為外植體的黃連木快速高效生根方法，包括以下步驟
(1)選材選取當年九月下旬至十月上旬的成熟飽滿的黃連木種子；
(2)消毒處理先去掉黃連木種子外面的硬殼，然后將種子放在75%的乙醇溶液中浸泡30秒，用無菌水洗滌3-5次，再將種子放在O. 1%的升汞溶液中浸泡8-10分鐘，期間不停的搖動，用無菌水洗滌3-5次；
(3)接種培養將消毒漂洗后的種子接種在不加任何激素的MS培養基上，培養條件為溫度20-30°C，光照強度1500-2500 lx，光照時間14 h/d，獲得黃連木無菌實生苗；
(4)外植體培養取生長30天的黃連木無菌實生幼苗，在超凈工作臺上剪下莖尖和莖段，將莖尖和莖段接種在加有WPM中無機鹽的1/2、MS中的有機物、I. O mg/L IBA、0. 2 mg/L NAA、30 g/L蔗糖和6. 8 g/L瓊脂粉的pH為5. 8的生根培養基上，外植體6天即有小白根長出，培養25天后，生根完成，即得完整的黃連木無菌幼苗。
本發明的有益效果是在初代培養過程中，以WPM為基本的培養基效果很好，MS培養基效果要差很多；在種子萌發及幼苗生長過程中，MS培養基比WPM培養基好許多。本發明通過從WPM和MS培養基中選取有效成分，優化配比，再與其它培養基成分混合，結合了 WPM和MS這兩種培養基的優點，使黃連木的生根時間進一步縮短，得到了一種快速、高效、高質、適用范圍廣的黃連木生根方法。
圖I為采用本發明的黃連木組培苗30天生根情況。
具體實施例方式下面對本發明的實施例做詳細說明本實施例在以本發明技術方案為前提下進行實施，給出了詳細的實施方式和具體的操作過程，但本發明的保護范圍不限于下述的實施例。一種以莖尖和莖段為外植體的黃連木快速高效生根方法，包括以下步驟
(1)選材選取成熟飽滿的黃連木種子；
(2)消毒處理先去掉黃連木種子外面的硬殼，然后將種子放在75%的乙醇溶液中浸泡30秒，用無菌水洗滌4次，再將種子放在O. 1%的升汞溶液中浸泡9分鐘，期間不停的搖動，用無菌水洗滌4次；
(3)接種培養將消毒漂洗后的種子接種在不加任何激素的MS培養基上，培養條件為溫度25°C，光照強度2000 lx，光照時間14 h/d，獲得黃連木無菌實生苗；
(4)外植體培養取生長30天的黃連木無菌實生幼苗，在無菌臺上剪下莖尖和莖段，將莖尖和莖段接種在加有1/2 WPM無機、MS有機、I. O mg/L ΙΒΑ、0· 2 mg/L NAA、30 g/L蔗糖和6. 8 g/L瓊脂粉的pH為5. 8的生根培養基上，外植體6天即有小白根長出，培養25天后，生根完成，即得完整的黃連木無菌幼苗，25天統計生根率即達100%，達到了快速高效生根的目的。
圖I為采用本發明的黃連木組培苗30天生根情況。上述實施例結果表明本發明是一種有效的黃連木快速高效生根方法，采用本發明培養的黃連木具有生根快、生根率高的優勢。
權利要求
1.一種以莖尖和莖段為外植體的黃連木快速高效生根方法，包括選材，消毒處理，接種培養和外植體培養四個步驟，其特征在于接種培養的具體操作是將消毒漂洗后的種子接種在不加任何激素的MS培養基上，培養條件為溫度20-30°C，光照強度1500-2500 Ix,光照時間14 h/d;外植體培養的具體操作是取生長30天的黃連木無菌實生幼苗，在超凈工作臺上剪下莖尖和莖段，將莖尖和莖段接種在加有1/2 WPM無機鹽、MS有機物、I. O mg/L IBA、O.2 mg/L NAA、30 g/L蔗糖和6. 8 g/L瓊脂粉的pH為5. 8的生根培養基上。
2.根據權利要求I所述的一種以莖尖和莖段為外植體的黃連木快速高效生根方法，其特征在于所述消毒處理具體操作是，先去掉黃連木種子外面的硬殼，然后將種子放在75%的乙醇溶液中浸泡30秒，用無菌水洗滌3-5次，再將種子放在O. 1%的升汞溶液中浸泡8-10分鐘，期間不停的搖動，用無菌水洗滌3-5次。
全文摘要
本發明屬于植物生物技術領域，具體涉及一種以莖尖和莖段為外植體的黃連木快速高效生根方法。在本發明中，接種培養的具體操作是將消毒漂洗后的種子接種在不加任何激素的MS培養基上，培養條件為溫度20-30℃，光照強度1500-2500lx，光照時間14h/d；外植體培養的具體操作是取黃連木無菌實生幼苗，將超凈工作臺上剪下的莖尖和莖段接種在加有1/2WPM無機鹽、MS有機物、1.0mg/LIBA、0.2mg/LNAA、30g/L蔗糖和6.8g/L瓊脂粉的pH為5.8的生根培養基上。通過采用本發明使黃連木的生根時間進一步縮短，得到了一種快速、高效、高質、適用范圍廣的黃連木生根方法。
文檔編號A01H4/00GK102907324SQ201210437288
公開日2013年2月6日 申請日期2012年11月6日 優先權日2012年11月6日
發明者施江, 辛莉, 王小燕, 馬香麗, 郭倩, 史國安 申請人:河南科技大學