一種龍爪柳未生根組培苗的生根方法
【專利摘要】本發明提供了一種龍爪柳未生根組培苗的生根方法，通過包括MS、0.01～1mg/L萘乙酸（NAA）、0.01～1mg/L6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)、30g/L蔗糖、6.5g/L瓊脂粉和0.5～3g/L活性炭制備得到的培養基對龍爪柳未生根組培苗進行生根培養，根據本發明提供的方法未生根組培苗生根快，生根率高，并且在組織培養過程中無需更換培養基配方，簡化組織培養操作，具有較高的科學價值、經濟價值及實用價值。
【專利說明】一種龍爪柳未生根組培苗的生根方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及林木培育領域，尤其涉及植物組織培養。
【背景技術】
[0002]龍爪柳，又名龍須柳，拉丁名:Salix matsudana var.tortuosa,科名:楊柳科Salicaceae柳屬，是生長在東北、華北、西北、華東等地的楊柳科柳屬落葉灌木或小喬木，濕地、旱地皆能生長，生長快，其有陽性，耐寒等特點，春至夏季為適期，其枝條卷曲，姿態別致，在園林中廣泛應用栽培。但其數量有限，并且自身繁殖不易，因此在園林應用中受到一定的限制，目前尚無良好的繁殖方法對其進行大規模繁殖。
[0003]龍爪柳的繁殖方法有播種法或扦插法繁殖。其中，播種法即是在適宜萌芽的條件下在土壤中播撒龍爪柳種子，等待龍爪柳自然萌芽。這種方法受氣候、土壤、水源等自然條件限制嚴重，選種、播種工作繁重，勞動強度大，出芽率低，因此播種法逐漸被淘汰。
[0004]相對于播種法扦插法具有操作簡單、繁殖速度快等特點。傳統的龍爪柳扦插技術的生根方法主要有以下兩種:
[0005]一種為自然生根法，即在不做任何處理的情況下，讓扦插苗在土壤中自然生根，該方法成活率低，生根慢，會受限于土壤、天氣、氣候等自然條件；另一種方法為，在扦插前，用中國林業科學研究院生產的ATB生根粉對扦插苗進行處理，然后再使扦插苗在土壤中生根，該方法相對于不作處理的方法提高了生根率，但操作復雜，而且重復性不高。
[0006]以上兩種扦插方法均會受到季節限制及數量限制，同時需要優選種條，種條用量大，在扦插過程中不便運輸攜帶。
[0007]然而，植物組織培養則具有繁育速度快、組培苗成活率高、培養條件人為可控、不受自然環境影響等諸多優勢，目前，存在大量通過組織培養的方法進行植物繁殖及所用培養基的報道，如中國專利CN102860261A中公開了一種花葉玉簪植物組織培養基配制方法，其分化培養基配方為:基本培養基MS、6-芐氨基嘌呤1.2~1.8毫克/升、1-萘乙酸0.08~0.12毫克/升、蔗糖25000~35000毫克/升、瓊脂粉4000~6000毫克/升，該培養基主要用于多年生宿根草本花卉玉簪的組織分化培養，并未用于其組培苗的生根培養。再如中國專利CN101953307A中公開了一種通過植物組織培養生產福建道地金線蓮的方法，將經過無菌處理后的福建道地金線蓮小段組織在誘導培養基中進行組織誘導培養叢生芽，培養周期:10~60天，培養溫度:10~35°C，光照培養時間:0~24小時/天，光照強度:0~20001ux ;所述的誘導培養基為舊3培養基+蔗糖10~5(^/1+瓊脂6~88/1+活性炭2.0~
3.0g/L+萘乙酸0.1~3.0mg/L+6-芐氨基腺嘌呤0.1~5.0mg/L, PH值為5.0~7.0,該培養基適用于草本植物金線蓮，并且在大規模使用時需要額外添加硝酸鈣、香蕉泥等物質，并需降低培養環境的PH，在實際生產中存在較大的成本及能耗，并且操作繁瑣，需要大量勞動，其是否適用于木本植物尚未可知。
[0008]因此，可以尋求通過植物組織培養的方法對龍爪柳進行大量快速的繁殖。然而，目前尚無對龍爪柳進行組織培養的相關報道。
【發明內容】
[0009]為了解決上述問題，本發明人經銳意研究，結果發現:龍爪柳未生根組培苗在包括MS、萘乙酸(NAA)、6-芐氨基腺嘌呤出-BA)、蔗糖、瓊脂粉和活性炭的培養基中生根率高，且生根后根生長迅速，成活率高。其中，萘乙酸和6-芐氨基腺嘌呤均為常用的植物生長激素，其不同濃度對植物生根生長所起的作用不同，濃度過高時會抑制植物生根，當濃度過小時對植物生根又不能起到足夠的促進作用。本發明人經不斷探索，確定該兩種激素促進龍爪柳生根的最佳濃度，經多次試驗證明，該兩種激素在此濃度下能夠有效誘導龍爪柳未生根組培苗生根。同時，本發明人在培養基中加入一定濃度的活性炭，一是可以吸附植物生長中產生的次生代謝物質，促進生根；二是其僅對根部提供黑暗環境，有利于龍爪柳根的生長。 [0010]因此，本發明以MS、萘乙酸(NAA)、6-芐氨基腺嘌呤(6_BA)、蔗糖、瓊脂粉、活性炭制備培養基，并在此培養基中培養龍爪柳未生根組培苗使其生根，從而完成本發明。
[0011]本發明的目的在于提供以下幾方面:
[0012]第一方面，本發明提供一種龍爪柳未生根組培苗的生根方法，其特征在于，包括以下步驟:
[0013]將龍爪柳未生根組培苗葉片的形態學上端剪去，保留0.5~1cm，將剪葉后的龍爪柳未生根組培苗的形態學下端插入培養基中，每個培養基中接種I個龍爪柳未生根組培苗，置于組織培養室中在以下培養條件下培養:
[0014]溫度27°C，光照30001x，10小時光周期；
[0015]其中，
[0016]所述培養基包括:
[0017]
MS;
萘乙酸(NAA ):0.01-1 mg/L;
6-芐氨基腺嘌呤(6-BA):0.01~lmg/L;
篇糖:3 Og/L;
[0018]
琮脂粉:6.5g/L; 活性炭:0.5~3g/L;
[0019]其中，所述g/L是基于每升培養基所述成分的重量。
[0020]第二方面，本發明提供上述龍爪柳未生根組培苗的生根方法，其特征在于，所述培養基包括:
[0021]MS;
萘乙酸(NAA ):0.05~0.5mg/L;
6-芐氨基腺嘌呤(6-BA):0.1~I mg/L;
蔗糖:30 g/L;
瓊脂粉:6.5 g/L;
活性炭:0.7-2 g/L;
[0022]其中，所述g/L是基于每升培養基所述成分的重量。
[0023]第三方面，本發明提供上述龍爪柳未生根組培苗的生根方法，其特征在于，所述培養基包括:
[0024]
MS；
萘乙酸(NAA ):0.1 5-0.3 mg/L;
6-芐氨基腺嘌呤(6-BA)’.0.5~I mg/L;
蔗糖:30 g/L;
瓊脂粉:6.5 g/L;
活性炭:0.8~1.2 g/L;
[0025]其中，所述g/L是基于每升培養基所述成分的重量。
[0026]第四方面，本發明提供上述龍爪柳未生根組培苗的生根方法，其特征在于，所述培養基由以下步驟制得:
[0027](I)調節MS培養基pH至5.8~6.0，加入瓊脂粉，后于121 °C下高溫蒸汽滅菌20~30min，冷卻至50~60°C待用；
[0028](2)萘乙酸和6-芐氨基腺嘌呤滅菌待用；
[0029](3)將活性炭、步驟(2)中滅菌后的萘乙酸和6-芐氨基腺嘌呤加入步驟(1)中制備的瓊脂_MS中,凝固制備完成。
[0030]第五方面，本發明提供上述龍爪柳未生根組培苗的生根方法，其特征在于，所述滅菌方式為通過濾膜過濾滅菌，其中，濾膜孔徑為0.22 μ m。
[0031]第六方面，本發明還提供一種用于龍爪柳未生根組培苗生根的培養基，其特征在于，其包括:
[0032]
【權利要求】
1.一種龍爪柳未生根組培苗的生根方法，其特征在于，包括以下步驟: 將龍爪柳未生根組培苗葉片的形態學上端剪去，保留0.5~1cm，將剪葉后的龍爪柳未生根組培苗的形態學下端插入培養基中，每個培養基中接種I個龍爪柳未生根組培苗，置于組織培養室中在以下培養條件下培養: 溫度27°C，光照30001x，10小時光周期； 其中， 所述培養基包括:
MS；蔡乙酸(NAA ):0.01-1 mg/L;6-芐氨基腺嘌呤(6-BA):0.01-1 mg/L; 蔗糖:30 g/L; 瓊脂粉:6.5 g/L；活性炭:0.5-3 g/L; 其中，所述g/L是基于每升培養基所述成分的重量。
2.根據 權利要求1所述的一種龍爪柳未生根組培苗的生根方法，其特征在于，所述培養基包括:
MS;萘乙酸(NAA):0.05~0.5mg/L; 6-芐氨基腺嘌呤(6-BA):0.1~I mg/L; 蔗糖:30 g/L; 瓊脂粉:6.5 g/L; 活性炭:0.7-2 g/L; 其中，所述g/L是基于每升培養基所述成分的重量。
3.根據權利要求1所述的一種龍爪柳未生根組培苗的生根方法，其特征在于，所述培養基包括:
MS；萘乙酸(NAA):0.15~0.3mg/L;
6-芐氨基腺嘌呤(6-BA):0.5~I mg/L 蔗糖..30 g/L; 瓊脂粉:6.5 g/L; 活性炭:0,8~1,2 g/L;其中，所述g/L是基于每升培養基所述成分的重量。
4.根據權利要求1所述的一種龍爪柳未生根組培苗的生根方法，其特征在于，所述培養基由以下步驟制得: (1)調節MS培養基pH至5.8~6.0，加入瓊脂粉和活性炭后于121°C下高溫蒸汽滅菌20~30min，冷卻至50~60°C待用； (2)萘乙酸和6-芐氨基腺嘌呤滅菌待用； (3)將步驟(2)中滅菌后的萘乙酸和6-芐氨基腺嘌呤加入步驟(1)中制備的瓊脂-MS中，凝固制備完成。
5.根據權利要求1所述的一種龍爪柳未生根組培苗的生根方法，其特征在于，所述滅菌方式為通過濾膜過濾滅菌，其中，濾膜孔徑為0.22 μ m。
6.一種用于龍爪柳未生根組培苗生根的培養基，其特征在于，其包括:
7.根據權利要求6所述的一種用于龍爪柳未生根組培苗生根的培養基,其特征在于，其包括:
8.根據權利要求6所述的一種用于龍爪柳未生根組培苗生根的培養基,其特征在于，其包括:MS;萘乙酸(NAA ):0.1 5-0.3 mg/L; 6-芐氨基腺嘌呤(6-BA):0.5-1 mg/L; 蔗糖:30 g/L; 瓊脂粉:6.5 g/L;活性炭:0.8~1.2 g/L; 其中，所述g/L是基于每升培養基所述成分的重量。
9.根據權利要求6所述的一種用于龍爪柳未生根組培苗生根的培養基,其特征在于，所述培養基由以下步驟制得: (1)調節MS培養基pH至5.8~6.0,加入瓊脂粉，后于1211:下高溫蒸汽滅菌20~30min，冷卻至50~60°C待用； (2)萘乙酸和6-芐氨基腺嘌呤滅菌待用； (3)將活性炭、步驟(2)中滅菌后的萘乙酸和6-芐氨基腺嘌呤加入步驟(1)中制備的瓊脂_MS中，凝固制備完成。
10.根據權利要求6所述的一種用于龍爪柳未生根組培苗生根的培養基,其特征在于，所述滅菌方式為通過濾膜過濾滅菌，其中，濾膜孔徑為0.22 μ m。
【文檔編號】A01H4/00GK103535279SQ201310495800
【公開日】2014年1月29日 申請日期:2013年10月21日 優先權日:2013年10月21日
【發明者】張建國, 饒國棟, 睢金凱 申請人:中國林業科學研究院林業研究所