解淀粉芽孢桿菌井岡霉素復配生物殺菌劑及其應用的制作方法
【專利摘要】本發明涉及一種解淀粉芽孢桿菌井岡霉素復配生物殺菌劑，包括有效活性成分以及助劑，其特征在于：有效活性成分占成品藥劑的重量百分比為99%，所述的有效活性成分由解淀粉芽孢桿菌Lx-11和井岡霉素組成，在復配生物殺菌劑中，解淀粉芽孢桿菌生防菌株Lx-11的含量為30億解淀粉芽孢桿菌活芽孢/毫升，井岡霉素的含量為2.5%。所述復配生物殺菌劑稀釋后在水稻生長期噴灑在水稻上，用于防治水稻病害。
【專利說明】解淀粉芽孢桿菌井岡霉素復配生物殺菌劑及其應用
【技術領域】:
[0001]本發明涉及一種復配生物殺菌劑及其應用，尤其是一種將解淀粉芽孢桿菌Lx-1l和井網霉素復配的生物殺菌劑及其在防治水稻病害中的應用。
【背景技術】:
[0002]隨著國民經濟的快速發展和人民生活水平的不斷提高，對農產品的數量、質量及其安全性提出了越來越高的要求。保障無公害、優質農產品的供給和實現資源的可持續利用是21世紀農業生產面臨的最大挑戰。但是，近十年來，由于大面積種植晚熟型的優質、高產水稻品種，以及氣候變暖和輕型栽培技術的推廣使用，水稻病蟲害的發生為害總體呈大幅度上升態勢。2012年全國水稻白葉枯病發生約4000萬畝，在南方秈稻稻區偏重發生；全國水稻紋枯病發生2.3億畝，在華南、江南、長江流域及江淮稻區偏重發生。上述兩種病害嚴重威脅水稻安全生產。目前農業生產上防治水稻白葉枯病和紋枯病主要依賴化學藥劑，據不完全統計，每年用于防治水稻白葉枯病、紋枯病的藥劑多達上萬噸，這不僅造成了嚴重的水田生態環境和水質污染，而且直接增加了稻米中有毒化學物質的殘留，對人類健康造成嚴重威脅。因此，“優質高產”與“安全性”已成為水稻生產中十分突出的矛盾。解決這一問題的根本途徑是:突破目前以化學農藥為主的防治對策的局限性，開拓以高效、無公害微生物復配農藥為主的綜合防治水稻病害的技術體系，為無公害優質稻米的產業化生產提供可持續發展的核心保障技術。
[0003]解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)是植物病害生物防治研究中的重要微生物之一，其種類多分布廣，是土壤和植物微生態的優勢種群。該類微生物通過分泌抗生物質和生長競爭，在防治植物病害方面發揮多種有益作用，大量研究發現一些解淀粉芽孢桿菌可以產生對植物病原菌有抑菌活性的抗菌物質，這些抗菌物質主要有低分子量的抗生素如肽類、脂肽類、細菌素以及高分子量蛋白類抗菌物質等。
`[0004]中國專利文獻CN101985608A公開了江蘇省農科院篩選獲得的對水稻白葉枯病有很好防效的解淀粉芽孢桿菌Lx-11，該菌株于2010年4月30日保藏于在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號為CGMCCN0.3789，該菌株命名為Lx-1I，分類命名:解淀粉芽孢桿菌(Bacillusamyloliquefaciens)。分離、純化獲得的Lx-1l菌株在YPGA培養基上單細胞繁殖生長形成的菌落為圓形，四周光滑，乳白色；細胞形狀為桿狀，細胞直徑大于Ium ;形成芽孢，不形成伴孢晶體；需氧生長；接觸酶、氧化酶反應為陽性；精氨酸雙水解酶、賴氨酸脫羧酶、鳥氨酸脫羧酶、脲酶、色氨酸脫羧酶反應為陰性;VP試驗和硝酸鹽還原為陽性；能利用葡萄糖，木糖，L-阿拉伯糖，甘露糖，乳糖，蔗糖，山梨糖，苦杏仁苷；不能利用蜜二糖，鼠李糖，肌醇等。
[0005]解淀粉芽孢桿菌生防菌Lx-1l還具有許多優良性能，如:有較廣的抑菌譜，對多種水稻病原菌有很強的抑制作用；生長速度快，適應環境能力強，能在土壤和植物表面定殖，并形成優勢種群；誘導寄主產生抗病性；分泌產生多種抗菌物質；對水稻白葉枯病、細菌性條斑病有相當好的防治效果，對水稻紋枯病也有一定的防治效果。[0006]目前，江蘇省蘇科農化有限責任公司生產用于防治水稻白葉枯病、細菌性條斑病的解淀粉芽孢桿菌Lx-1l水劑。
[0007]井岡霉素，英文通用名Validamycinjv^S /結構式，C2tlH35O13N,分子量:497.51，其他名稱:有效霉素。純品為白色無定型粉末，溶于水、二甲基甲酰胺，微溶于乙醇，不溶于丙酮、苯、乙酸乙酯、等有機溶劑，吸濕性強，在室溫PH3-9水溶液中穩定。井岡霉素屬低毒殺菌劑。純品大小鼠急性經口 LD50均大于2000毫克/公斤，皮下注射LD50均大于1500毫克/公斤。5000毫克/公斤涂抹大鼠皮膚無中毒反應。對魚類低毒，鯉魚TLM(96h)LD50>40毫克/升。井網霉素是一種放線菌產生的抗生素，具有較強的內吸性，易被菌體細胞吸收并在其內迅速傳導，作用機理主要是干擾和抑制菌體細胞生長和發育。主要用于水稻紋枯病防治，也可用于水稻稻曲病、玉米大小斑病以及蔬菜和棉花、豆類等作物病害的防治。
[0008]目前，將解淀粉芽孢桿菌Lx-1l和井R霉素復配的生物殺菌劑并未見諸報道。
【發明內容】
:
[0009]本發明的目的在于:針對目前生產上大量使用化學農藥防治水稻病害、嚴重污染農田生態環境、導致農藥殘留超標、影響優質稻米品質的問題，提出了一種對水稻重要病害——白葉枯病和紋枯病具有良好防治效果的解淀粉芽孢桿菌井R霉素復配生物殺菌劑及其在防治水稻病害中的應用。解淀粉芽孢桿菌Lx-1l和井R霉素復配后，形成優勢互補的特點，既能發揮井R霉素能夠有效控制紋枯病的作用，又能發揮解淀粉芽孢桿菌Lx-1l誘導水稻植物抗病性、防治白葉枯病的作用。通過使用該復配生物殺菌劑劑，在稻田生態環境引進大量有益微生物，惡化病原菌的生存環境，結合栽培管理等農業措施，形成一個穩定的、平衡的、生物多樣化的水稻生態系統，達到一藥多治、持久地控制水稻病害流行的目的。
[0010]本發明的目的是這樣實現的:一種解淀粉芽孢桿菌井R霉素復配生物殺菌劑，包括有效活性成分以及助劑，其特征在于:有效活性成分占成品藥劑的體積百分比為99%，所述的有效活性成分由解淀粉芽孢桿菌Lx-1l和井R霉素組成，在復配生物殺菌劑中，解淀粉芽孢桿菌Lx-1l的含量為3 0億解淀粉芽孢桿菌Lx-1l活芽孢/毫升，井R霉素的含量為5% ο
[0011]本發明中，復配生物殺菌劑的有效活性成分是由60億解淀粉芽孢桿菌Lx-1I活芽孢/毫升水劑與5%井R霉素水劑以重量比1:1復配后獲得。
[0012]在本發明中，助劑為NNO (亞甲基雙荼磺酸鈉)，NNO占復配生物殺菌劑重量的1%。
[0013]一種上述的復配生物殺菌劑的應用，其特征在于:將復配生物殺菌劑稀釋100-1000 倍。
[0014]在所述的復配生物殺菌劑的應用中:將稀釋后的復配生物殺菌劑在水稻生長期噴灑在水稻上，用于防治水稻病害。
[0015]在所述的復配生物殺菌劑的應用中:所述的水稻病害是指:水稻白葉枯病，或水稻紋枯病。
[0016]本發明的優點在于:將生防微生物解淀粉芽孢桿菌Lx-1l和農用抗生素井R霉素按一定比例混合使用，不僅能發揮井R霉素有效控制紋枯病的作用，又能發揮解淀粉芽孢桿菌Lx-1l誘導水稻植物抗病性、防治白葉枯病的作用。通過復配、協同作用，達到優勢互補、擴大防治范圍、減少用藥次數、降低用藥成本、提高防治效果的目的。[0017]由于有效成分含量高，便于存儲和運輸，使用時取水稀釋，非常方便。
[0018]經測試表明，本發明復配殺菌劑產品中的井R霉素對解淀粉芽孢桿菌Lx-1l的生長、繁殖無干擾作用，并且延長了解淀粉芽孢桿菌活芽孢的貨架期，使產品具有更加穩定的藥效。
【具體實施方式】
[0019]實施例1、2.5%井R霉素.30億活芽孢/毫升解淀粉芽孢桿菌水劑的配制
[0020]有效藥物:
[0021]5%井R霉素水劑由浙江省桐廬匯豐生物科技有限公司生產提供。
[0022]60億解淀粉芽孢桿菌Lx-1l活芽孢/毫升水劑(以下簡稱60億活芽孢/毫升水劑)由江蘇省蘇科農化有限責任公司生產提供。
[0023]助劑:NNO (亞甲基雙萘磺酸鈉)，外購。
[0024]將5%井岡霉素水劑和60億活芽孢/毫升水劑按照重量百分比1:1備料，助劑NNO總重量的1%備料，gp:
[0025]5%井岡霉素水劑:49.5% ；60億活芽孢/毫升水劑:49.5% ;助劑NNO: 1%。
[0026]制備過程:將5%井R霉素水劑和60億活芽孢/毫升水劑按上述比例置于混合器中，加入上述比例 的助劑ΝΝ0，所有物料在混合器中混合均勻后，即成2.5%井R霉素.30億解淀粉芽孢桿菌Lx-1l活芽孢/毫升的解淀粉芽孢桿菌復配生物殺菌劑(以下簡稱2.5%井岡霉素.30億活芽孢/毫升解淀粉芽孢桿菌水劑)。
[0027]實施例2、2.5%井R霉素.30億活芽孢/毫升解淀粉芽孢桿菌水劑抑制水稻白葉枯病菌生長的增效作用測定
[0028]供試菌株:水稻白葉枯病菌:ΧοοΖ173由江蘇省農科院植保所提供。
[0029]被測藥劑:由實施例1提供的2.5%井R霉素.30億活芽孢/毫升解淀粉芽孢桿菌水劑。
[0030]對比藥劑:
[0031]5%井R霉素水劑由浙江省桐廬匯豐生物科技有限公司生產提供。
[0032]60億解淀粉芽孢桿菌活芽孢/毫升水劑由江蘇省蘇科農化有限責任公司生產提供。
[0033]室內增效生物測定:
[0034]供試水稻白葉枯病菌ΧοοΖ173菌株在NA (每升中含牛肉浸膏3.0g，蛋白胨5.0g，葡萄糖2.5g，瓊脂18.0g)斜面培養基上活化，挑取一環接種到NA液體培養基中于28°C下培養24h，將菌液稀釋到108cfu/ml，吸取200 μ I均勻涂在NA平板上晾干，將I個直徑為5mm滅菌濾紙片放在平板中央備用。
[0035]將5% 井網霉素稀釋成 500ppm、100ppm、50ppm、10ppm、5ppm、lppm6 個不同梯度；
[0036]將60億解淀粉芽孢桿菌活芽孢/毫升稀釋成6 X 106cfu/ml、3 X 106cfu/ml、6X 105cfu/ml、3X 105cfu/、6X 104cfu/ml、3X 104cfu/ml6 個不同梯度；
[0037]將2.5%井岡霉素.30億活芽孢/毫升解淀粉芽孢桿菌水劑稀釋成250ppm+3X 106cfu/ml、50ppm+l.5X 106cfu/ml、25ppm+3X 105cfu/ml>5ppm+l.5X 105cfu/ml、2.5ppm+3 X 104cfu/ml、0.5ppm+l.5 X 106cfu/ml6 個不同梯度；[0038]將3種待測藥劑稀釋成6個不同梯度，然后分別吸取20 μ I不同濃度的待測藥液滴入滅菌濾紙片上。同時設立空白對照(將NA培養基滴入滅菌濾紙片)，每處理3個重復。當空白對照平板長滿白葉枯病菌時，測量抑菌圈直徑，并計算抑制率。
[0039]抑制率(％) =2 X抑菌圈直徑/病原菌直徑X 100%
[0040]采用毒力曲線法即取劑量對數為橫坐標(X)，抑菌百分率值為縱坐標(y)，在計算機上繪制毒力曲線，求出兩種藥劑毒力回歸方程(y=a + bx)、相關系數(r)，進而計算出EC5tl值。
[0041 ] 復配劑的理論EC5tl=單劑IEC5tl X配比數+單劑IIEC5tl X配比數
[0042]增效系數SR=混合物的理論EC5tl/混合物的實測EC5tl
[0043]參考Wadley公式(增效系數SR>1.5為增效作用，1.5>SR>1.0為相加作用，SR〈1.0為拮抗作用)，求出在各種配比中的類擴展系數(SR)復配增效作用的大小。
[0044]室內試驗結果(表1)表明，被測的2.5%井R霉素.30億活芽孢/毫升解淀粉芽孢桿菌水劑增效系數為1.01，該復配組合表現出對抑制水稻白葉枯病菌的生長有相加作用。
[0045]表12.5%井R霉素？30億活芽孢/毫升解淀粉芽孢桿菌水劑抑制水稻白葉枯病菌生長的增效測定
【權利要求】
1.一種解淀粉芽孢桿菌井R霉素復配生物殺菌劑，包括有效活性成分以及助劑，其特征在于:有效活性成分占復配生物殺菌劑的重量百分比為99%，所述的有效活性成分由解淀粉芽孢桿菌Lx-11和井R霉素組成，在復配生物殺菌劑中，解淀粉芽孢桿菌Lx-1 1的含量為30億解淀粉芽孢桿菌Lx-1l活芽孢/毫升，井R霉素的含量為2.5%。
2.根據權利要求1所述的解淀粉芽孢桿菌井R霉素復配生物殺菌劑，其特征在于，所述有效活性成分是由60億解淀粉芽孢桿菌Lx-1l活芽孢/毫升水劑與5%井R霉素水劑以重量比1:1復配后獲得。
3.根據權利要求1或2所述的解淀粉芽孢桿菌井R霉素復配生物殺菌劑，其特征在于，助劑為NNO，NNO占復配生物殺菌劑重量的1%。
4.一種權利要求3所述的復配生物殺菌劑的應用，其特征在于:將復配生物殺菌劑稀釋 100-1000 倍。
5.根據權利要求4所述的復配生物殺菌劑的應用，其特征在于:將稀釋后的復配生物殺菌劑在水稻生長期噴灑在水稻上，用于防治水稻病害。
6.根據權利要求5所述的復配生物殺菌劑的應用，其特征在于:所述的水稻病害是指:水稻白葉枯病或水稻紋枯病。
【文檔編號】A01N43/16GK103749542SQ201410059589
【公開日】2014年4月30日 申請日期:2014年2月21日 優先權日:2014年2月21日
【發明者】陳志誼, 張榮勝, 劉永峰, 戴秋華 申請人:江蘇省農業科學院