一種用于烏雞雛雞的微生態復合添加劑及其制備方法
【專利摘要】本發明涉及一種用于烏雞雛雞的微生態復合添加劑及其制備方法，按重量份數取枯草芽孢桿菌制劑2-4份、黨參10-20份、黃芪10-20份、茯苓10-20份、神曲5-10份、麥芽5-10份、山楂5-10份、甘草2.5-5份，混合后攪拌均勻，得到微生態復合添加劑。該微生態復合添加劑，每克微生態復合添加劑中益生菌孢子數約為100億個，能夠提高烏雞雛雞生長以及免疫性能。
【專利說明】—種用于烏雞雛雞的微生態復合添加劑及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及飼料添加劑【技術領域】，具體涉及一種用于烏雞雛雞的微生態復合添加劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002]隨著抗生素飼料添加劑的危害逐漸被人們所認識，禁用抗生素已成世界共識，尋找新的能促生長、無毒副作用的綠色添加劑成為飼料行業研究的熱點。研究發現芽孢桿菌微生態制劑具有促生長、提高機體免疫力等多種益生作用，其抗逆性強，耐酸堿、耐高溫高壓且生產工藝簡單，作為抗生素替代品得到了廣泛的研究與應用。由于胃腸道微生物具有宿主和環境專一性，因此，研制開發理想的禽用飼料添加劑，必須加強對家禽胃腸道益生微生物的研究。
[0003]中藥作為我國傳統醫學的重要組成部分，是我國的傳統醫學文化遺產及國寶，具有作用廣泛、副作用少、無殘留、無耐藥性、費用低廉等優點并逐漸為世界所接受。現代研究證明現代研究表明，中藥含有多種成分，包括多糖、生物堿、苷類等，少則數種、數十種，多則上百種。隨著實際需要的增長與現代科學的迅速發展，中藥的研究日益深入，包括來源、栽培、炮制、鑒定、化學成分和藥理作用，臨床應用等諸多方面。已有很多研究表明中藥有效成分在神經學，免疫學，心血管血方面均有提高與改善的作用。現在已有很多將中藥療法引入到動物疾病的預防與治療中，中藥制劑作為動物飼料添加劑可以起到促進生長、改善動物健康、提高飼料利用率等作用。另一方面中草藥具有天然性、毒副作用小，不宜在畜禽機體內殘留，長期使用不產生抗藥性和耐藥性等特點。與目前廣泛使用的抗生素以及化學合成飼料添加劑相比，可以在一定程度上妥善解決我國禽類生產上長期沿用以化藥抗生素為主體配合疫苗防疫體系所帶來的化藥、激素、抗菌素殘留等問題。因此，中藥制劑已成為當前飼料添加劑研究的一大熱點。
[0004]腸道菌群對中藥有效成分的代謝處置主要是以水解和還原反應為主。目前已經發現許多種中藥有效成分被腸道菌群代謝后，發生轉化，產生出具有較強藥理活性的代謝產物，尤其是具有水溶性糖部分的葡糖苷成分，這類化合物在腸道內難以吸收，生物利用度低，腸內滯留時間較長而易受到腸道菌群的作用。它們以原形物顯示藥理活性的可能性較小，經腸菌代謝后被水解，生成苷元而發揮其藥理作用。腸道菌群會產生許多藥物代謝酶，不同種類的細菌產生不同的代謝酶，不同的藥物代謝酶又參與到不同類型的藥物代謝中這些細菌可通過“藥物活化”使無活性的藥物轉化為有活性的藥物，同時使有害的物質無毒化，反之亦然。中藥和腸道菌群的相互作用對研究中藥藥效的發揮以及胃腸道消化系統疾病具有重要的意義。
[0005]烏骨雞(學名Gallus domesticlus brisson),又名烏雞(White SilkieBantams),是聞名中外的藥用家禽，具有特殊的藥用、營養及觀賞價值。在唐朝，烏雞被當作丹藥的主要成份來治療所有婦科疾病。《本草綱目》認為烏骨雞有補虛勞羸弱，制消渴，益產婦，治婦人崩中帶下及一些虛損諸病的功用。現代醫學研究，烏雞內含豐富的黑色素，蛋白質，B族維生素等18種氨基酸和18種微量元素，其中煙酸、維生素E、磷、鐵、鉀、鈉的含量均高于普通雞肉，膽固醇和脂肪含量卻很低。烏雞的血清總蛋白和球蛋白質含量均明顯高于普通雞。烏雞肉中含氨基酸高于普通雞，而且含鐵元素也比普通雞高很多，是營養價值極高的滋補品，被人們稱烏雞是“黑了心的寶貝”，所以，烏雞是補虛勞、養身體的上好佳品。加強對烏骨雞飼用抗生素替代品的研究，生產出質量上乘的藥用家禽，是制備良好的中成藥和保健食品的重要任務。
【發明內容】
[0006]本發明的目的是為解決上述技術問題的不足，提供一種用于烏雞雛雞的微生態復合添加劑及其制備方法，制得的微生態復合添加劑能夠提高烏雞雛雞生長以及免疫性能。
[0007]本發明為解決上述技術問題的不足，所采用的技術方案是:一種用于烏雞雛雞的微生態復合添加劑，由以下重量份數的原料組成:枯草芽孢桿菌制劑2-4份、黨參10-20份、黃芪10-20份、茯苓10-20份、神曲5-10份、麥芽5_10份、山楂5_10份、甘草2.5-5份組成。
[0008]一種用于烏雞雛雞的微生態復合添加劑的制備方法，其特征在于:包括以下步驟:
(1)、取中藥原料黨參、黃芪、茯苓、神曲、麥芽、山楂和甘草，分別粉碎后過80目篩，備用；
(2)、將所篩選自烏雞的枯草芽孢桿菌菌種先放在恒溫培養箱活化37°C、12h，冷卻后得一級種子液，后按照二級種子液體積的2%-4%接種，在pH為6.0-8.0，溫度為37°C，以及轉速為140r/min的條件下恒溫培養12h，進入對數期的二級種子液按照發酵培養基體積的2%進行接種，在溫度為37°C，轉速為200r/min以及pH為6.5，通氣量為1.33VVm(0_12h)，
2.77VVm(12-36h)的條件下進行發酵，發酵結束后的發酵液加入體積百分比10%的硅藻土制成母液，再經噴霧干燥機干燥制得枯草芽孢桿菌制劑；
所述種子液的配方為:葡萄糖3.8%、蛋白胨3.8%、牛肉浸膏3.8%、淀粉2.3%、氯化鈉
3.3%, KH2PO4 3.3%，余量為蒸餾水；
所述發酵培養基的配方為:豆餅粉5.6%，玉米粉7.2%，Na2HPO4 0.8%，(NH4)2SO4 0.4%，NH4Cl 0.13%, CaCl20.13%，余量為蒸餾水；
(3 )、按重量份數取枯草芽孢桿菌制劑2-4份、黨參10-20份、黃芪10-20份、茯苓10-20份、神曲5-10份、麥芽5-10份、山楂5-10份、甘草2.5-5份，混合后攪拌均勻，得到微生態復合添加劑。
[0009]所述微生態復合添加劑，每克微生態復合添加劑中益生菌孢子數約為100億個。
[0010]本發明的微生態復合添加劑的用量為:每一噸飼料加入IKg復合添加劑。
[0011]有益效果
本發明的用于烏雞雛雞的微生態復合添加劑，每克微生態復合添加劑中益生菌孢子數約為100億個，能夠提高烏雞雛雞生長以及免疫性能。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0012]圖1為本發明的復合添加劑不同配比對平均日增重影響的示意圖；
圖2為本發明的復合添加劑不同配比對不同時期料重比影響的示意圖； 圖3為本發明的復合添加劑不同配比對對脾臟指數影響的示意圖；
圖4為本發明的復合添加劑不同配比對法式囊指數影響的示意圖；
圖5為本發明的復合添加劑不同配比對ND效價影響的示意圖。
【具體實施方式】
[0013]實施例1
一種用于烏雞雛雞的微生態復合添加劑的制備方法，包括以下步驟:
(1)、取中藥原料黨參、黃芪、茯苓、神曲、麥芽、山楂和甘草，分別粉碎后過80目篩，備用；
(2)、將所篩選自烏雞的枯草芽孢桿菌菌種先放在恒溫培養箱活化37°C、12h，冷卻后得一級種子液，后按照二級種子液體積的2%%接種，在pH為6.0，溫度為37°C，以及轉速為140r/min的條件下恒溫培養12h，進入對數期的二級種子液按照發酵培養基體積的2%進行接種，在溫度為37°C，轉速為200r/min以及pH為6.5，通氣量為1.33VVm(0_12h)，
2.77VVm(12-36h)的條件下進行發酵，發酵結束后的發酵液加入體積百分比10%的硅藻土制成母液，再經噴霧干燥機干燥制得枯草芽孢桿菌制劑；
所述種子液的配方為:葡萄糖3.8%、蛋白胨3.8%、牛肉浸膏3.8%、淀粉2.3%、氯化鈉
3.3%, KH2PO4 3.3%，余量為蒸餾水；
所述發酵培養基的配方為:豆餅粉5.6%，玉米粉7.2%，Na2HPO4 0.8%，(NH4)2SO4 0.4%，NH4Cl 0.13%, CaCl20.13%，余量為蒸餾水；
烏雞源枯草芽孢桿菌的篩選:將購買的健康泰和烏雞無菌操作進行解剖，分別取胃腸數段，迅速刮取胃腸粘液于無菌試管中80°C水浴20分鐘。梯度稀釋涂平板。挑取生長良好、菌落較大的單菌落再進行劃線培養分離，將培養分離純化的菌落接種于營養瓊脂培養基斜面上，培養24?48 h后，保存于4°C冰箱中待用。對所挑選的單菌落進行革蘭氏染色及改良的Schaeffer和Fulton氏芽孢染色,鏡檢,選擇所需菌落進一步分離純化培養。所用培養基為LB培養基:蛋白胨lg，牛肉膏0.5g，氯化鈉0.5g，蒸餾水lOOmL，pH7.2，若為固體培養基則加入2g的瓊脂，121°C滅菌20min。
[0014]將分離到的芽孢桿菌進行下述生理生化鑒定:淀粉水解試驗；酪素水解試驗；明膠液化試驗；過氧化氫酶試驗；L-酪氨酸水解試驗甲基紅試驗；v-p試驗；吲哚試驗；葡萄糖產酸產氣。生理生化試驗及判別標準參照《伯杰細菌鑒定手冊第8版》進行操作。
[0015]菌種在液體培養基中過夜，取1.5ml菌液于EP管中，8000 r/min離心Imin獲得菌體然后用細菌基因組DNA提取試劑盒提取細菌總DNA。細菌基因組DNA提取試劑盒(購自北京艾德萊生物技術有限公司)。詳細操作步驟見試劑盒說明書。
[0016]對菌株16S rDNA 進行擴增。擴增引物 27F: 5’ -AGAGTTTGATCCTGGCTCAG-3’，1492R:5’ -GGTTACCTTGTTACGACTT-3’。PCR 反應條件:30 個循環，94°C變性 5min，94°C 40s,54°C 50s，72°C 60s，72°C延伸10min，4°C保存。取3 μ IPCR產物于1.0%瓊脂糖凝膠電泳后在凝膠成像儀中觀察條帶。將PCR產物送至上海生工測序。
[0017]根據測序結果以及生理生化鑒定可以推斷該菌種為枯草芽孢桿菌。對該菌種進行聞廣酶聞耐受:篩選后,進行動物實驗,發現該菌種具有促生長、提聞機體免疫力等多種益生作用。
[0018](3)、按重量份數取枯草芽孢桿菌制劑2份、黨參10份、黃芪10份、茯苓10份、神曲5份、麥芽5份、山楂5份、甘草2.5份,混合后攪拌均勻,得到微生態復合添加劑。
[0019]所述微生態復合添加劑，每克微生態復合添加劑中益生菌孢子數約為100億個。
[0020]實施例2
一種用于烏雞雛雞的微生態復合添加劑的制備方法，包括以下步驟:
(1)、取中藥原料黨參、黃芪、茯苓、神曲、麥芽、山楂和甘草，分別粉碎后過80目篩，備用；
(2)、將所篩選自烏雞的枯草芽孢桿菌菌種先放在恒溫培養箱活化37°C、12h，冷卻后得一級種子液，后按照二級種子液體積的4%接種，在pH為8.0，溫度為37°C，以及轉速為140r/min的條件下恒溫培養12h，進入對數期的二級種子液按照發酵培養基體積的2%進行接種，在溫度為37°C，轉速為200r/min以及pH為6.5，通氣量為1.33VVm(0_12h)，
2.77VVm(12-36h)的條件下進行發酵，發酵結束后的發酵液加入體積百分比10%的硅藻土制成母液，再經噴霧干燥機干燥制得枯草芽孢桿菌制劑；
所述種子液的配方為:葡萄糖3.8%、蛋白胨3.8%、牛肉浸膏3.8%、淀粉2.3%、氯化鈉
3.3%, KH2PO4 3.3%，余量為蒸餾水；
所述發酵培養基的配方為:豆餅粉5.6%，玉米粉7.2%，Na2HPO4 0.8%，(NH4)2SO4 0.4%，NH4Cl 0.13%, CaCl20.13%，余量為蒸餾水；
(3)、按重量份數取枯草芽孢桿菌制劑2份、黨參15份、黃芪15份、茯苓15份、神曲
7.5份、麥芽7.5份、山楂7.5份、甘草3.5份，混合后攪拌均勻，得到微生態復合添加劑。
[0021]實施例3
一種用于烏雞雛雞的微生態復合添加劑的制備方法，包括以下步驟:
(1)、取中藥原料黨參、黃芪、茯苓、神曲、麥芽、山楂和甘草，分別粉碎后過80目篩，備用；
(2)、將所篩選自烏雞的枯草芽孢桿菌菌種先放在恒溫培養箱活化37°C、12h，冷卻后得一級種子液，后按照二級種子液體積的3%接種，在pH為7.0，溫度為37°C，以及轉速為140r/min的條件下恒溫培養12h，進入對數期的二級種子液按照發酵培養基體積的2%進行接種，在溫度為37°C，轉速為200r/min以及pH為6.5，通氣量為1.33VVm(0_12h)，
2.77VVm(12-36h)的條件下進行發酵，發酵結束后的發酵液加入體積百分比10%的硅藻土制成母液，再經噴霧干燥機干燥制得枯草芽孢桿菌制劑；
所述種子液的配方為:葡萄糖3.8%、蛋白胨3.8%、牛肉浸膏3.8%、淀粉2.3%、氯化鈉
3.3%, KH2PO4 3.3%，余量為蒸餾水；
所述發酵培養基的配方為:豆餅粉5.6%，玉米粉7.2%，Na2HPO4 0.8%，(NH4)2SO4 0.4%，NH4Cl 0.13%, CaCl20.13%，余量為蒸餾水；
(3)、按重量份數取枯草芽孢桿菌制劑2份、黨參20份、黃芪20份、茯苓20份、神曲10份、麥芽10份、山楂10份、甘草5份，混合后攪拌均勻，得到微生態復合添加劑。
[0022]不同配比的飼料添加劑對烏雞不同時期生長性能的影響以及不同時期免疫性能的影響
取一日齡泰和烏雞200只分四組，分別為普通日糧組(不添加本發明的添加劑)、低劑量中草藥配方組(加入實施例1制得的飼料添加劑)、中劑量中草藥配方組(加入實施例2制得的飼料添加劑)以及高劑量中草藥配方組(加入實施例3制得的飼料添加劑)，實驗結果如附圖所示。
【權利要求】
1.一種用于烏雞雛雞的微生態復合添加劑，其特征在于:由以下重量份數的原料組成:枯草芽孢桿菌制劑2-4份、黨參10-20份、黃芪10-20份、茯苓10-20份、神曲5_10份、麥芽5-10份、山楂5-10份、甘草2.5-5份組成。
2.如權利要求1所述的一種用于烏雞雛雞的微生態復合添加劑的制備方法，其特征在于:包括以下步驟: (1)、取中藥原料黨參、黃芪、茯苓、神曲、麥芽、山楂和甘草，分別粉碎后過80目篩，備用； (2)、將所篩選自烏雞的枯草芽孢桿菌菌種先放在恒溫培養箱活化37°C、12h，冷卻后得一級種子液，后按照二級種子液體積的2%-4%接種，在pH為6.0-8.0，溫度為37°C，以及轉速為140r/min的條件下恒溫培養12h，進入對數期的二級種子液按照發酵培養基體積的2%進行接種，在溫度為37°C，轉速為200r/min以及pH為6.5，通氣量為1.33VVm(0_12h)，2.77VVm(12-36h)的條件下進行發酵，發酵結束后的發酵液加入體積百分比10%的硅藻土制成母液，再經噴霧干燥機干燥制得枯草芽孢桿菌制劑； 所述種子液的配方為:葡萄糖3.8%、蛋白胨3.8%、牛肉浸膏3.8%、淀粉2.3%、氯化鈉3.3%, KH2PO4 3.3%，余量為蒸餾水； 所述發酵培養基的配方為:豆餅粉5.6%，玉米粉7.2%，Na2HPO4 0.8%，(NH4)2SO4 0.4%，NH4Cl 0.13%, CaCl20.13%，余量為蒸餾水； 、按重量份數取枯草芽孢桿菌制劑2-4份、黨參10-20份、黃芪10-20份、茯苓10-20份、神曲5-10份、麥芽5-10份、山楂5-10份、甘草2.5-5份，混合后攪拌均勻,得到微生態復合添加劑。
3.如權利要求2所述的一種用于烏雞雛雞的微生態復合添加劑的制備方法制得的微生態復合添加劑，其特征在于:每克微生態復合添加劑中益生菌孢子數約為100億個。
【文檔編號】A23K1/18GK104171426SQ201410394145
【公開日】2014年12月3日 申請日期:2014年8月12日 優先權日:2014年8月12日
【發明者】秦翠麗, 楊若嵐, 李松彪, 侯穎, 曹力, 李云飛, 王忠澤 申請人:河南科技大學