一種養心菜的組織培養一步成苗快速繁殖方法
【專利摘要】一種養心菜的組織培養一步成苗快速繁殖方法，屬于植物組織培養【技術領域】。本發明解決養心菜常規繁殖方法系數低，生長緩慢，難以形成規模化生產的問題。所述方法是按下述步驟進行的：步驟一、消毒滅菌；步驟二、一步成苗培養；步驟三、試管苗的馴化與移栽：將生根苗取出，放到光照充足的煉苗室內，3至5天后將瓶口打開繼續煉苗2至3天；然后取出試管苗，洗凈根部培養基，移栽基質中，基質由泥炭土與蛭石構成，其中泥炭土與蛭石的重量份數比為1:1，起初7天保證每天給小苗噴霧2-3次。本發明用于養心菜的組織培養。
【專利說明】一種養心菜的組織培養一步成苗快速繁殖方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種養心菜的組織培養一步成苗快速繁殖方法，屬于植物組織培養技 術領域。
【背景技術】
[0002] 目前養心菜的生產繁殖以分株繁殖和扦插繁殖為主。具體如下：1、扦插繁殖選取 當年生長健壯枝條，切成10-15cm長的莖段，去掉基部葉片，每莖段留3. 4葉，打頂，插人畦 內，人土 3 - 5cm，澆一次透水，一般7-10天生根成活，枝條最好隨剪隨種，20天后即可移栽 定植。也可在大田直接扦插，定植密度為行距25cm，穴距15cm，每穴2-3株。2、分株繁殖 將要分株的養心菜連根挖起，按每一段帶有2個以上根芽的標準進行分株，然后按株行距 15cm x25cm進行分植。挖苗時謹慎操作，盡量不破壞母株，切下的每一段根盡量多帶根芽， 以縮短緩苗時間。定植后鋪好滴灌帶，并滴適量的壓根水。
[0003] 上述養心菜常規繁殖方法系數低，生長緩慢，難以形成規模化生產。用組織培養技 術，既可保持它的優良特性，又能在短期內獲得大量的試管苗，且移栽成活率高，生長迅速， 可克服常規繁殖方法的不足，對緩解人們對費菜的需求可能有一定的參考價值。
[0004] 常規的植物組織培養再生途徑主要為外植體完全脫分化形成愈傷組織，然后將愈 傷組織轉移到分化培養基上分化出芽，再將其轉移到生根培養基上誘導生根。但該途徑較 煩瑣，種質易產生變異，再生頻率不高。
【發明內容】
[0005] 本發明為了解決問題，進而提供了一種養心菜的組織培養一步成苗快速繁殖方 法。
[0006] 本發明為解決上述技術問題采取的技術方案是：所述方法是按下述步驟進行的：
[0007] 步驟一、取無病蟲害、生長健壯的養心菜葉片作外植體，然后消毒滅菌；
[0008] 步驟二、一步成苗培養：將消毒滅完菌的葉片切成面積為0. 4-0. 6cm2塊狀后接種 到培養基上，接種后培養基置于溫度為25 士 2°C條件下，全黑暗培養，7至10天后進行光照 培養至生根；
[0009] 步驟三、試管苗的馴化與移栽：將生根苗取出，放到光照充足的煉苗室內，3至5天 后將瓶口打開繼續煉苗2至3天；然后取出試管苗，洗凈根部培養基，移栽基質中，基質由 泥炭土與蛭石構成，其中泥炭土與蛭石的重量份數比為1:1，起初7天保證每天給小苗噴霧 2-3 次。
[0010] 進一步的，步驟一外植體的消毒滅菌方法如下：在洗潔精水中清洗IOmin后，除去 葉片表面污物，流水中沖洗30min ;在無菌條件下，用70%酒精浸泡45s，無菌水沖洗3次， 再在0. 1 %升汞溶液浸泡4min，然后用無菌水沖洗5次，無菌濾紙吸干表面水分。
[0011] 進一步的，步驟二的光強為20001x，14h/d的光照。
[0012] 進一步的，步驟二中以MS培養基為基礎的培養基，在ILMS培養基中，添加不同濃 度的6-芐基腺嘌呤、萘乙酸、2, 4-二氯苯氧乙酸、糖和瓊脂組合，糖為蔗糖或者葡萄糖，其 中6-芐基腺嘌呤濃度為I. 0mg/L、2. Omg/L或3. Omg/L，萘乙酸濃度為0? lmg/L、0. 2mg/L或 0? 4mg/L，2, 4-二氯苯氧乙酸濃度為 0? 0mg/L、0. lmg/L 或 0? 2mg/L。
[0013] 進一步的，步驟二的培養基配方為 MS+6-BA 2. 0mg/L、2, 4-D 0? 2mg/L、NAA 0? 2mg/ L、蔗糖25g/L和瓊脂7. Og/L，培養基的pH值為5. 8。
[0014] 進一步的，步驟二中培養基為 MS+6-BA I. 0mg/L、2, 4-D 0? 2mg/L、NAA 0? 2mg/L、葡 萄糖25g/L和瓊脂7. Og/L，培養基的pH值為5. 8。
[0015] 本發明的有益效果是：養心菜以葉片作為外植體一步成苗法是外植體在形成愈傷 組織后，不需要轉移到分化培養基上，而是直接在原培養基上分化，分化的順序通常是先根 后芽，直止形成健壯的全苗。再生周期短，繁殖系數和再生頻率高，易操作，培養程序簡單， 不影響增殖率，能保持原種特性，便于大規模生產。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0016] 圖1是養心菜葉片接種后，愈傷組織分化出的小芽照片；圖2是一步培養成的組培 苗照片；圖3是馴化移栽成功的組培苗。
【具體實施方式】
【具體實施方式】 [0017] 一：本實施方式以下結合具體實施例對本發明做進一步描述和說 明。所述方法是按下述步驟進行的：
[0018] 步驟一、取無病蟲害、生長健壯的養心菜葉片作外植體，然后消毒滅菌；
[0019] 步驟二、葉片愈傷組織的誘導：將消毒滅完菌的葉片切成面積為0. 4-0. 6cm2塊狀 后接種到培養基上，接種后培養基置于溫度為25 士 2°C條件下，全黑暗培養，7至10天后進 行光照培養至生根；
[0020] 步驟三、試管苗的馴化與移栽：將生根苗取出，放到光照充足的煉苗室內，3至5天 后將瓶口打開繼續煉苗2至3天；然后取出試管苗，洗凈根部培養基，移栽基質中，基質由 泥炭土與蛭石構成，其中泥炭土與蛭石的重量份數比為1:1，起初7天保證每天給小苗噴霧 2-3 次。
[0021] 作為優選，步驟一外植體的消毒滅菌方法如下：在洗潔精水中清洗IOmin后，除去 葉片表面污物，流水中沖洗30min ;在無菌條件下，用70%酒精浸泡45s，無菌水沖洗3次， 再在0. 1 %升汞溶液浸泡4min，然后用無菌水沖洗5次，無菌濾紙吸干表面水分。
[0022] 作為優選，步驟二的光強為20001x，14h/d的光照。
[0023] 作為優選，步驟二中以MS培養基為基礎的培養基，在ILMS培養基中，添加不同濃 度的6-芐基腺嘌呤、萘乙酸、2, 4-二氯苯氧乙酸、糖和瓊脂組合，糖為蔗糖或者葡萄糖，其 中6-芐基腺嘌呤濃度為I. 0mg/L、2. Omg/L或3. Omg/L，萘乙酸濃度為0? lmg/L、0. 2mg/L或 0? 4mg/L，2, 4-二氯苯氧乙酸濃度為 0? 0mg/L、0. lmg/L 或 0? 2mg/L。
[0024] 作為優選，步驟二的培養基配方為 MS+6-BA 2. 0mg/L、2, 4-D 0? 2mg/L、NAA 0? 2mg/ L、蔗糖25g/L和瓊脂7. 0g/L，培養基的pH值為5. 8。
[0025] 作為優選，步驟二中培養基為 MS+6-BA I. 0mg/L、2, 4-D 0? 2mg/L、NAA 0? 2mg/L、葡 萄糖25g/L和瓊脂7. 0g/L，培養基的pH值為5. 8。其中6-芐基腺嘌呤、萘乙酸和2, 4-二 氯苯氧乙酸均為市售分析純化學試劑。所需激素的配制方法：6-芐基腺嘌呤出-BA):配 制濃度為lmg/ml，稱取0. Ig6-芐基腺嘌呤用少許0. lmol/L HCl溶解后用蒸餾水定容至 IOOml容量瓶中待用；萘乙酸（NAA):配制濃度為0. 5mg/ml，稱取0. 05g萘乙酸用少許無水 乙醇溶解后用蒸餾水定容至IOOml容量瓶中待用；2, 4-二氯苯氧乙酸（2, 4-D):配制濃度 為0. 5mg/ml，稱取0.05g萘乙酸用少許0. lmol/L HCl乙醇溶解后用蒸餾水定容至IOOml容 量瓶中待用；
[0026] 采用下述試驗驗證本實施方式的效果：
[0027] 以MS培養基為基礎培養基，并在ILMS培養基中，添加不同濃度的6-芐基腺嘌 呤、萘乙酸和2,4_二氯苯氧乙酸的不同組合，采用三因素三水平L 9(34)正交試驗設計設 計，配制成養心菜組織培養一步成苗培養基，其中6-芐基腺嘌呤濃度為I. 0mg/L、2. Omg/L、 3. Omg/L，萘乙酸濃度為 0? lmg/L、0. 2mg/L、0. 4mg/L，2,4-二氯苯氧乙酸濃度為 0? Omg/L、 0? lmg/L、0. 2mg/L，見表一。
[0028] 表一
【權利要求】
1. 一種養心菜的組織培養一步成苗快速繁殖方法，其特征在于：所述方法是按下述步 驟進行的： 步驟一、取無病蟲害、生長健壯的養心菜葉片作外植體，然后消毒滅菌； 步驟二、一步成苗培養：將消毒滅完菌的葉片切成面積為0. 4-0. 6cm2塊狀后接種到培 養基上，接種后培養基置于溫度為25 士 2°C條件下，全黑暗培養，7至10天后進行光照培養 至生根； 步驟三、試管苗的馴化與移栽：將生根苗取出，放到光照充足的煉苗室內，3至5天后將 瓶口打開繼續煉苗2至3天；然后取出試管苗，洗凈根部培養基，移栽基質中，基質由泥炭土 與蛭石構成，其中泥炭土與蛭石的重量份數比為1: 1，起初7天保證每天給小苗噴霧2-3次。
2. 根據權利要求1所述一種養心菜的組織培養一步成苗快速繁殖方法，其特征在于步 驟一外植體的消毒滅菌方法如下：在洗潔精水中清洗lOmin后，除去葉片表面污物，流水中 沖洗30min ;在無菌條件下，用70%酒精浸泡45s，無菌水沖洗3次，再在0. 1 %升汞溶液浸 泡4min，然后用無菌水沖洗5次，無菌濾紙吸干表面水分。
3. 根據權利要求1所述一種養心菜的組織培養一步成苗快速繁殖方法，其特征在于步 驟二的光強為20001x，14h/d的光照。
4. 根據權利要求1所述一種養心菜的組織培養一步成苗快速繁殖方法，其特征在于步 驟二中以MS培養基為基礎的培養基，在1LMS培養基中，添加不同濃度的6-芐基腺嘌呤、萘 乙酸、2, 4-二氯苯氧乙酸、糖和瓊脂組合，糖為蔗糖或者葡萄糖，其中6-芐基腺嘌呤濃度為 1. 0mg/L、2. Omg/L 或 3. Omg/L，萘乙酸濃度為 0· lmg/L、0. 2mg/L 或 0· 4mg/L，2, 4-二氯苯氧 乙酸濃度為 〇. 〇mg/L、0. lmg/L 或 0. 2mg/L。
5. 根據權利要求1所述一種養心菜的組織培養一步成苗快速繁殖方法，其特征在于步 驟二的培養基配方為 MS+6-BA 2. 0mg/L、2, 4-D 0· 2mg/L、NAA 0· 2mg/L、蔗糖 25g/L 和瓊脂 7. Og/L，培養基的pH值為5.8。
6. 根據權利要求1所述一種養心菜的組織培養一步成苗快速繁殖方法，其特征在于： 步驟二中培養基為 MS+6-BA L 0mg/L、2, 4-D 0· 2mg/L、NAA 0· 2mg/L、葡萄糖 25g/L 和瓊脂 7. Og/L，培養基的pH值為5.8。
【文檔編號】A01H4/00GK104255532SQ201410570569
【公開日】2015年1月7日 申請日期:2014年10月22日 優先權日:2014年10月22日
【發明者】李媛, 侯可雷 申請人:李媛, 侯可雷