一種用精胺快速繁殖甘蔗組培苗的方法
【專利摘要】一種用精胺快速繁殖甘蔗組培苗的方法，將甘蔗幼葉切片作外植體，接種到MS+Spm.1.5mg·L-1-3.0mg·L-1的改良型MS固體培養基中，調pH 5.8-6.0，連續培養10d-25d誘導并獲得甘蔗愈傷組織團塊；再轉移到新鮮的同一種培養基繼續培養15d后，將所得愈傷組織分切成小塊再轉接到新鮮的同一種培養基。繼續培養20d至30d，將再生苗轉移到新鮮的同一種培養基培養20d，得到株高5-6cm、根苗齊全的試管苗。本發明從外植體培養啟動到完整再生植株的建成，只用1種培養基，顯著簡化了甘蔗組培苗的生產程序，同時擺脫了2,4-D誘導愈傷組織的毒害作用，使用的精胺價格低廉，更利于推廣。
【專利說明】-種用精胺快速繁殖甘薦組培苗的方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬植物生物技術的組織培養【技術領域】，尤其是一種用精胺快速繁殖甘藏組 培苗的方法。 技術背景
[0002] "組培苗"亦稱"試管苗"、"無菌苗"和"克隆（Clone)苗"，是根據細胞的全能性理 論，利用外植體，在無菌和適宜的培養基及光溫條件下，快速繁育獲得的根、苗齊全的完整 再生植株。在同一時間段里，組培苗的擴繁速度可W數十倍、甚至數百倍于植物的自然繁殖 速度，而且無病無毒（Virus)，群體整齊，最適合作物良種的大規模產業化種植。組培苗生產 技術是現代化農業的支撐技術之一，是"試管農業"的重要組成部分。甘藏良種組培苗的生 產與推廣，近20年使我國的甘藏種植業發生了翻天覆地的變化。建立甘藏組培苗生產技術 的研究報道亦從未間斷。但是，其卡喉魄的關鍵仍然是發生在外植體誘導愈傷組織和胚狀 體2個環節。一直W來，既有必須使用2, 4-D，又無法擺脫2, 4-D毒性的負面危害【甘藏組 織培養研究綜述[J]廣西熱作科技黃惠芳1998,（2) :33-37】;【甘藏組織培養研究進展[J] 安徽農業科學楊柳等2007,35(12) ;3490-3492】。李松和許鴻源等雖用LFS(靈發素）建立 了高效優質生產甘藏組培苗的技術體系【一種用靈發素進行甘藏組織培養快速繁殖的方法 中國專利號化201010216192. 1】，但是，LFS在國內沒有生產廠家，進口價格十分昂貴，難W 推廣應用。精胺（Spermine,，Spm.)是一種廣泛存在于高等植物界，純天然的植物生長調節 物質【多胺是植物生長發育的調節物[J]植物生理學通訊潘瑞識1985化)63-68】，而且價格 便宜，方便推廣。人們對其促進植物生長、延緩衰老、增強抗逆能力等生理活性的研究，已經 有不少報導。但是，還未能檢索到精胺用于甘藏組培苗快速繁殖的研究資料。
【發明內容】
[0003] 本發明要解決的技術問題是提供一種用精胺快速繁殖甘藏組培苗的方法
[0004] 本發明W如下技術方案解決上述技術問題：
[0005] -種用精胺快速繁殖甘藏組培苗的方法，包括如下步驟：
[000引1. W常規方法獲得的甘藏幼葉切片作外植體，常規消毒，接種到 MS+Spm. 1. 5mg ? L-1-3. Omg ?。的改良型MS固體培養基中，調抑5. 8-6. 0。在常規培養條 件下連續培養l0d-25d誘導并獲得甘藏愈傷組織團塊。
[0007] 2.將上述愈傷組織團塊小也地轉移到新鮮的MS+Spml. 5mg ? L-1-3. Omg ? L-1培養 基，在常規培養條件下繼續培養15d，陸續有形態各異胚狀體發生。
[0008] 3.將上述已經分化出胚狀體的愈傷組織團塊分切成黃豆大小的小塊（其胚狀體 已有轉綠更好）轉接到新鮮的MS+Spm. 1. 5mg '。-3. Omg ?。培養基。每瓶接種5個小塊。 每批接種10瓶W上，在常規培養條件下繼續培養20d和30d，在此過程中，原有胚狀體陸續 萌發成苗的同時，愈傷組織小塊也會繼續長大，并有新的胚狀體形成和萌發成苗。
[0009] 4.將株高達2cm左右的再生苗，統一選出轉移到新鮮的 MS+Spm. 1. 5mg ? L-1-3. Omg ? L-1培養基。每瓶15株。常規培養20d，便得到株高5-6cm，根 (root)苗（shoot)齊全的試管苗。
[0010] 5.按照常規煉苗，出瓶，洗苗分株，移栽至裝有育苗基質的育苗杯或育苗床中，常 規管理，成活率>90%。
[0011] 本發明用精胺快速繁殖甘藏組培苗的突出優點是：
[0012] (1)完全不同于傳統的方法，從外植體培養啟動到完整再生植株的建成，只用1種 培養基MS+Spm. 1. 5mg ? L-1-3. Omg ? L-1即可完成，無需傳統技術那樣另配"繼代培養基"和 "生根培養基"。也無需在培養基中添加NAA(蔡己酸）、IBA(剛巧了酸）等專用生根促進劑。 顯著簡化了甘藏組培苗的生產程序。
[0013] (2)完全擺脫了傳統方法中，既必須用2, 4-D誘導愈傷組織，又不能避免其毒害作 用的無奈局面。
[0014] (3)也不同于用LR5建立起來的快速繁殖甘藏組培苗的新方法，精胺的價格相比 LR5十分低廉，更容易推廣應用。
【具體實施方式】
[0015] W下通過實施案例對本發明的技術方案作進一步說明。
[0016] 本發明所述用精胺誘導甘藏組培苗的方法包括W下步驟：
[0017] 1.愈傷組織的獲得；依常規方法取得甘藏幼葉切片作外植體，常規消毒后接種于 含有Spm. 1. 5mg ? L-1-3. Omg ? L-1的改良型MS固體培養基中，每批試驗不少于10瓶，每瓶5 個切片。在常規培養條件下培養l〇d-25d。隨機取3瓶統計出愈率、快速稱量鮮重，記3瓶 平均值（見表1)。
[0018] 表1.不同濃度Spm.誘導甘藏幼葉形成愈傷組織的實施案例
[0019]
【權利要求】
1. 一種用精胺快速繁殖甘蔗組培苗的方法，其特征是包括如下步驟： (1)以常規方法獲得的甘蔗幼葉切片作外植體，常規消毒，接種到 MS+Spm. 1. 5mg ? d. Omg ? I71的改良型MS固體培養基中，調pH5. 8-6. 0 ;在常規培養條件 下連續培養l〇d-25d誘導并獲得甘蔗愈傷組織團塊； ⑵將上述愈傷組織團塊小心地轉移到新鮮的MS+Spm. 1. 5mg Omg噸4培養基，在 常規培養條件下繼續培養15d，陸續有形態各異胚狀體發生； ⑶將上述已經分化出胚狀體的愈傷組織團塊分切成黃豆大小的小塊轉接到新鮮的 MS+Spm. 1. 5mg ? d. Omg ? I71培養基；每瓶接種5個小塊；每批接種10瓶以上，在常規培 養條件下繼續培養20d和30d，在此過程中，原有胚狀體陸續萌發成苗的同時，愈傷組織小 塊也會繼續長大，并有新的胚狀體形成和萌發成苗； ⑷將株高達2cm左右的再生苗統一選出轉移到新鮮的MS+Spm. 1. 5mg ? d. Omg ? I71培養基；每瓶15株；常規培養20d，便得到株高5-6cm，根（root)苗（shoot)齊全的試管苗； (5)按照常規煉苗，出瓶，洗苗分株，移栽至裝有育苗基質的育苗杯或育苗床中，常規管 理，成活率> 90%。
2. 如權利要求1所述的用精胺快速繁殖甘蔗組培苗的方法，其特征是改良型MS固體培 養基以MS+Spm. 2. 5mg ? I71為最適合于精胺快速繁殖甘蔗組培苗的培養基。
【文檔編號】A01H4/00GK104396753SQ201410681991
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2014年11月24日 優先權日:2014年11月24日
【發明者】許鴻源, 周鳳玨, 藍桃菊, 龔銀花, 梁瓊月, 許皓翔 申請人:廣西大學