本發明涉及一種組織培養技術,具體是矮珍珠的組織培養方法。
背景技術:
矮珍珠雖屬有莖水草,但莖部卻不是直立的,而是爬行在底部生長。由于爬行生長的匍匐枝會呈擴散狀蔓延開來,最后鋪滿整個底部,而匍匐枝上的葉片又是濃密地生長,感覺起來宛如草坪一般。一般在種植矮珍珠時了避免柔軟的細根無法頤利攀附在底砂之中,因此在底砂的選擇上應盡量使用較細的砂子。矮珍珠,幾乎不到1cm高,綠色匍匐嫩枝附有短根組織,對稱生長的匙型葉片長0.8cm寬0.3cm,葉尖較鈍,稍呈鋸齒狀,葉柄幾乎與葉片等長。氣生葉腺可長出短莖的白色單瓣花,直徑0.3cm,有5片花瓣、4株雄蕊。雖然生長蔓延頗為緩慢,但是,可以長得很濃密,其一旦長好后的密植度,猶如碧綠的草原,是一種裝飾性非常強的前景草。然而,矮珍珠傳統的育苗繁殖方法產量降低,病毒積累嚴重,品種退化,品質和產量大幅度下降,種植效益下降。組培快繁技術已在很多植物上作為經濟、高效的繁殖方法應用,周期短、繁殖系數高、成本低,并不受時間和空間的制約。
技術實現要素:
本發明針對現有技術的不足,滿足人工快速繁育、大面積豐產栽培的需要,提供一種矮珍珠的組織培養方法。
為了實現上述目的,本發明采用了以下技術方案:
矮珍珠的組織培養方法,包括如下步驟:
(1)獲取外植體并消毒
選取健壯植株新生的幼嫩枝芽,自來水洗滌枝芽表面污垢塵土,先酒精浸泡,再升汞消毒,最后無菌水沖洗干凈后得到消毒外植體,
(2)初代培養
將消毒外植體分割成帶芽莖段,然后接入初代培養基中培養32~36天獲得不定芽,
初代培養條件為:溫度為24±2℃,濕度為63~68%,光照時間為8~10小時/天,光照強度為2200~25001x,初代培養第1~7天,每天施加超聲場1~2小時,超聲場功率為8~12W/cm2,超聲場頻率為20~22KHz,初代培養第8~15天,每天施加超聲場4~5小時,超聲場功率為15~18W/cm2,超聲場頻率為25~26KHz;
初代培養基為:在ER培養基基礎上,再添加碘酸鉀0.1~0.5mg/L,添加2,4-D 0.6~0.8mg/L,添加多效唑1.2~1.3mg/L;
(3)繼代培養
將不定芽轉移至繼代培養基中培養40~45天獲得繼代培養苗,
繼代培養條件為:溫度為24±2℃,濕度為70~75%,光照時間為10~12小時/天,光照強度為2800~32001x,
繼代培養基為:在MS培養基基礎上,先將硝酸銨的濃度調整為1200~1300mg/L,另外再添加尿素100~120mg/L,添加ABA3~3.5mg/L,添加吲哚乙酸0.5~0.8mg/L,添加谷氨酰胺5.0~5.5mg/L,添加活性炭200~300mg/L;
(4)生根培養
將繼代培養苗轉移至生根培養基中培養20~25天得到矮珍珠幼苗,
生根培養條件為:溫度為30±2℃,濕度為40~50%,光照時間為12~15小時/天,光照強度為3500~42001x,
生根培養基為:在N6培養基基礎上,另外再添加鉬酸銨0.01~0.02mg/L,添加TDZ 1.5~2.0mg/L,添加支鏈淀粉130~150mg/L,用氫氧化鈉調節pH為7.0~7.2;
(5)煉苗和移栽
生根培養結束后,打開培養瓶蓋,在自然光下進行開瓶練苗5~7天,然后將矮珍珠幼苗用清水多次沖洗去除殘留培養基,移栽至自然水體中。
與現有技術相比較,本發明具備的有益效果:
有效地提高矮珍珠的繁殖系數,為矮珍珠商業化生產提供充足的種苗源。與播種繁殖相比,組織培養法能有效縮短育苗周期,能夠在室內大量連續地生產,實現工廠化、專業化和規模化,不受季節、溫度、地域影響,獲得大量的無菌苗,提高種苗的載培成活率,提高產量和品質。
具體實施方式
下面通過實施例對本發明的技術方案作進一步闡述。
實施例1
矮珍珠的組織培養方法,包括如下步驟:
(1)獲取外植體并消毒
選取健壯植株新生的幼嫩枝芽,自來水洗滌枝芽表面污垢塵土,先酒精浸泡,再升汞消毒,最后無菌水沖洗干凈后得到消毒外植體,
(2)初代培養
將消毒外植體分割成帶芽莖段,然后接入初代培養基中培養32天獲得不定芽,
初代培養條件為:溫度為22℃,濕度為63%,光照時間為8小時/天,光照強度為22001x,初代培養第1~7天,每天施加超聲場1小時,超聲場功率為8W/cm2,超聲場頻率為20KHz,初代培養第8~15天,每天施加超聲場4小時,超聲場功率為15W/cm2,超聲場頻率為25KHz;
初代培養基為:在ER培養基基礎上,再添加碘酸鉀0.1mg/L,添加2,4-D 0.6mg/L,添加多效唑1.2mg/L;
(3)繼代培養
將不定芽轉移至繼代培養基中培養40~45天獲得繼代培養苗,
繼代培養條件為:溫度為26℃,濕度為70%,光照時間為10小時/天,光照強度為28001x,
繼代培養基為:在MS培養基基礎上,先將硝酸銨的濃度調整為1200mg/L,另外再添加尿素100mg/L,添加ABA3mg/L,添加吲哚乙酸0.5mg/L,添加谷氨酰胺5.0mg/L,添加活性炭200mg/L;
(4)生根培養
將繼代培養苗轉移至生根培養基中培養20~25天得到矮珍珠幼苗,
生根培養條件為:溫度為28℃,濕度為40%,光照時間為12小時/天,光照強度為35001x,
生根培養基為:在N6培養基基礎上,另外再添加鉬酸銨0.01mg/L,添加TDZ 1.5mg/L,添加支鏈淀粉130mg/L,用氫氧化鈉調節pH為7.0;
(5)煉苗和移栽
生根培養結束后,打開培養瓶蓋,在自然光下進行開瓶練苗5~7天,然后將矮珍珠幼苗用清水多次沖洗去除殘留培養基,移栽至自然水體中。
實施例2
矮珍珠的組織培養方法,包括如下步驟:
(1)獲取外植體并消毒
選取健壯植株新生的幼嫩枝芽,自來水洗滌枝芽表面污垢塵土,先酒精浸泡,再升汞消毒,最后無菌水沖洗干凈后得到消毒外植體,
(2)初代培養
將消毒外植體分割成帶芽莖段,然后接入初代培養基中培養36天獲得不定芽,
初代培養條件為:溫度為26℃,濕度為68%,光照時間為10小時/天,光照強度為25001x,初代培養第1~7天,每天施加超聲場2小時,超聲場功率為12W/cm2,超聲場頻率為22KHz,初代培養第8~15天,每天施加超聲場5小時,超聲場功率為18W/cm2,超聲場頻率為26KHz;
初代培養基為:在ER培養基基礎上,再添加碘酸鉀0.5mg/L,添加2,4-D 0.8mg/L,添加多效唑1.3mg/L;
(3)繼代培養
將不定芽轉移至繼代培養基中培養45天獲得繼代培養苗,
繼代培養條件為:溫度為26℃,濕度為75%,光照時間為12小時/天,光照強度為32001x,
繼代培養基為:在MS培養基基礎上,先將硝酸銨的濃度調整為1300mg/L,另外再添加尿素120mg/L,添加ABA3.5mg/L,添加吲哚乙酸0.8mg/L,添加谷氨酰胺5.5mg/L,添加活性炭300mg/L;
(4)生根培養
將繼代培養苗轉移至生根培養基中培養20~25天得到矮珍珠幼苗,
生根培養條件為:溫度為32℃,濕度為50%,光照時間為15小時/天,光照強度為42001x,
生根培養基為:在N6培養基基礎上,另外再添加鉬酸銨0.02mg/L,添加TDZ 2.0mg/L,添加支鏈淀粉150mg/L,用氫氧化鈉調節pH為7.2;
(5)煉苗和移栽
生根培養結束后,打開培養瓶蓋,在自然光下進行開瓶練苗5~7天,然后將矮珍珠幼苗用清水多次沖洗去除殘留培養基,移栽至自然水體中。