本發明涉及梓葉槭領域，尤其涉及梓葉槭種子發芽領域，具體地，涉及一種提高梓葉槭種子發芽率的方法。
背景技術：
梓葉槭(aceramplumsubsp.catalpifolium(rehder)y.s.chen)別名梓葉楓、興安梓葉槭、梓木槭，是槭樹科槭屬植物，國家二級保護植物，為我國特有珍稀瀕危樹種，國家二級重點保護植物，零星分布于四川中部平原和貴州北部，散生在海拔500-1300m的亞熱帶常綠闊葉林中，分布區氣候溫暖濕潤、霧期長、雨水多、其花期4月上旬，果期8-9月份，其樹形優美，樹干高大，材質堅硬、致密，為優良的綠化和用材樹種。梓葉槭作為一種極小種群植物由于砍伐及毀林耕種，目前各產區極為罕見，已陷于瀕危狀態，而梓葉槭由于其發芽率較低而影響其種植，因此，提高梓葉槭發芽率具有重要的科研和保護價值。
有關梓葉槭的研究較少，在現有公開發表的文獻中，余道平等人發表在《中國野生植物資源》上的《梓葉槭種子生物學特性》和馬文寶等人發表在《種子》上的《珍稀植物梓葉槭種子萌發特性的初步研究》對梓葉槭的發芽進行研究，但發芽率都在50％以下，發芽率較低。
目前，對于梓葉槭發芽的研究僅限于科研實驗，尚無針對其規模化繁育的發芽方法，嚴重限制了瀕危植物梓葉槭的保護和繁育工作。因此，開發梓葉槭的種子萌發處理方法，提高梓葉槭的發芽速率尤為重要。
技術實現要素：
為了解決上述問題，本發明人進行了銳意研究，通過低溫催芽和物理剝除處理相結合，打破種子的生理休眠，大大提高種子的發芽率，從而完成本發明。
本發明一方面提供了一種提高梓葉槭種子發芽率的方法，具體體現在以下方面：
(1)一種提高梓葉槭種子發芽率的方法，其中，在種子外部包裹有果翅，所述果翅及其內部的種子形成翅果，其中，所述方法包括步驟1：
步驟1、采集翅果，進行處理，并于0～8℃下保存。
(2)根據上述(1)所述的方法，其中，在步驟1中，
采集果翅開始發黃的翅果；和/或
所述處理依次為清洗和風干。
(3)根據上述(1)或(2)所述的方法，其中，所述風干進行1～3h，優選進行1.5～2.5h，更優選進行2h。
(4)根據上述(1)至(3)之一所述的方法，其中，在步驟1中，
所述保存于帶有孔洞的自封袋或塑料袋中進行；和/或
將處理后的翅果于0～8℃下保存20～40d，優選于2～6℃下保存20～40d，更優選于4℃下保存30d。
(5)根據上述(1)至(4)之一所述的方法，其中，所述方法還包括以下步驟：
步驟2、獲得翅果內部的種子；
步驟3、獲得種仁，并對其進行發芽培養。
(6)根據上述(1)至(5)之一所述的方法，其中，步驟2包括以下子步驟：
步驟2-1、取出步驟1保存的翅果，剝離去掉果翅，得到果翅內部的飽滿度不一的種子；
步驟2-2、對飽滿度不一的種子進行篩選和清洗，獲得飽滿的種子。
(7)根據上述(1)至(6)之一所述的方法，其中，在步驟2-2中，所述篩選如下進行：將步驟2-1得到的飽滿度不一的種子浸泡于水中，去掉漂浮在水表面的種子，而選取沉底的種子，從而獲得飽滿的種子。
(8)根據上述(1)至(7)之一所述的方法，其中，步驟3包括以下子步驟：
步驟3-1、取步驟2獲得的飽滿的種子，剝離種皮，獲得種仁；
步驟3-2、對步驟3-1獲得的種仁進行發芽培養。
(9)根據上述(1)至(8)之一所述的方法，其中，在步驟3-2中，將種仁浸泡于水中進行發芽培養，優選地，水沒過種仁厚度的1/6～5/6處，更優選地，水沒過種仁厚度的1/3～2/3處，例如2/3處。
(10)根據上述(1)至(9)之一所述的方法，其中，步驟3-2中，于18～28℃下進行發芽培養，優選于20～25℃下進行發芽培養，更優選于21～24℃下進行發芽培養。
具體實施方式
下面通過對本發明進行詳細說明，本發明的特點和優點將隨著這些說明而變得更為清楚、明確。
本發明提供了一種提高梓葉槭種子發芽率的方法，其中，通過低溫催芽和物理剝除處理相結合，打破種子的生理休眠，提高種子的發芽率。
根據本發明一種優選的實施方式，所述方法包括步驟1：
步驟1、采集翅果，進行處理，并于2～6℃下保存。
其中，在本發明中，所述翅果包括果翅以及果翅內部的種子。
根據本發明一種優選的實施方式，在步驟1中，采集果翅開始發黃的翅果。
其中，在果翅開始發黃時，梓葉槭種子的成熟度最高，且種子尚未失水，種子活力較高，后期發芽成活率較高。
根據本發明一種優選的實施方式，在步驟1中，所述處理依次為清洗和風干。
其中，清洗的目的是去除翅果表面的雜質，風干的目的是風干果翅表面水分，同時要保持種子本身水分。
根據本發明一種優選的實施方式，所述風干進行1～3h。
在進一步優選的實施方式中，所述風干進行1.5～2.5h。
在更進一步優選的實施方式中，所述風干進行2h。
其中，風干時間不宜太短也不宜太長，如果風干時間過短，導致果翅表面的水分揮發不完全，如果風干時間過長，使種子本身水分流失。
根據本發明一種優選的實施方式，在步驟1中，將處理后的翅果于0～8℃下保存20～40d。
在進一步優選的實施方式中，在步驟1中，將處理后的翅果于2～6℃下保存20～40d。
在更進一步優選的實施方式中，在步驟1中，將處理后的翅果于4℃下保存30d。
其中，在低溫下打破種子(位于翅果內部)休眠，低溫環境對種子而言是一個春化作用，在通氣濕潤的條件下，種子內部發生一系列的生理生化反應，原生質的滲透性以及酶活性提高，復雜的有機物逐漸轉化為分子質量小的化合物，最后種子開始萌動，發芽率高。
根據本發明一種優選的實施方式，在步驟1中，所述保存于帶有孔洞的自封袋或塑料袋中進行。
在進一步優選的實施方式中，在步驟1中，所述保存于帶有孔洞的自封袋中進行。
在更進一步優選的實施方式中，將翅果裝入自封袋，減去自封袋四角以及在中間留1×1cm2大小孔。
其中，采用帶有孔洞的自封袋或塑料袋的目的是在保存過程中利于種子呼吸。
根據本發明一種優選的實施方式，所述方法還包括以下步驟：
步驟2、獲得翅果內部的種子；
步驟3、獲得種仁，并對其進行發芽培養。
根據本發明一種優選的實施方式，步驟2包括以下子步驟：
步驟2-1、取出步驟1保存的翅果，剝離去掉果翅，得到果翅內部的飽滿度不一的種子；
步驟2-2、對飽滿度不一的種子進行篩選和清洗，獲得飽滿的種子。
其中，去掉翅果外部的果翅，即可得到位于翅果內部的種子，但是，得到的種子的質量不一，為了提高后期的發芽率，選用質量良好的種子，即飽滿的種子。篩選后進行清洗的目的，一方面是洗掉種子上可能存在的雜質有利于種子保存，同時清洗掉可能存在與果翅內的發芽抑制物質，以提高種子的發芽率；另一方面是增加種子表面水分，使種子在一個較為濕潤的環境中保存，以提高種子保存環境的濕度。
在進一步優選的實施方式中，在步驟2-1中，所述果翅包括對稱的兩部分，在剝離時，將果翅從中間分成兩半，從結合處剝離果翅，取出中間的種子。
在更進一步優選的實施方式中，在步驟2-2中，所述篩選如下進行：步驟2-1得到的飽滿度不一的種子浸泡于水中，去掉漂浮在水表面的種子，而選取沉底的種子，從而獲得飽滿的種子。
其中，飽滿的種子會沉于水底，不飽滿的種子會漂浮于水面上，因此，取沉于水底的種子即得到飽滿的種子。
根據本發明一種優選的實施方式，如果在進行步驟2后不直接進行步驟3，而是需要在之后進行，那么可以將步驟2得到的翅果內部的種子于低溫下保存，備用。
在進一步優選的實施方式中，于2～6℃下保存。
在更進一步優選的實施方式中，于4℃下保存。
其中，如果在步驟2后不直接進行步驟3，那么步驟2得到的種子不能在室溫下任意放置，這樣會使種子變質，因此，在本發明中，采用低溫儲存，以使種子保鮮。當然，如果步驟2之后直接進行步驟3，則無需在步驟2之后進行低溫保存。
根據本發明一種優選的實施方式，步驟3包括以下子步驟：
步驟3-1、取步驟2獲得的飽滿的種子，剝離種皮，獲得種仁；
步驟3-2、對步驟3-1獲得的種仁進行發芽培養。
根據本發明一種優選的實施方式，在步驟3-1中，在剝離種皮時，應該從遠離胚根一處進行種皮的剝離。
其中，剝離種皮是最為關鍵的一步，梓葉槭種子寬約為0.3-0.4cm，長約為0.8-1.1cm。剝離種皮時，應該從寬處遠離胚根一處剝離，這樣對種子損傷程度最小，并且易于剝離。
在進一步優選的實施方式，在步驟3-1中，在剝離種皮時，采用尖嘴鑷子為剝離工具。
其中，鑷子從種子寬處遠離胚根一處對種皮進行分離，分離開之后，用鑷子從種皮下輕微剝離種皮，逐漸剝離整個種皮。
根據本發明一種優選的實施方式，在步驟3-2中，將種仁浸泡于水中進行發芽培養。
其中，種子發芽為吸水過程，因此，其必須在水環境下進行培養。當將種仁浸泡于水中時，種仁為平躺狀態，優選地，應該控制種仁間距，使相鄰種仁之間具有一定距離，以防后期發芽時相互之間受到阻礙。
根據本發明一種優選的實施方式，在水中進行發芽培養時，水沒過種仁厚度的1/6～5/6。
在進一步優選的實施方式中，在水中進行發芽培養時，水沒過種仁厚度的1/3～2/3。
在更進一步優選的實施方式中，在水中進行發芽培養時，水沒過種仁厚度的2/3。
其中，在發芽培養時，種仁平躺放置于水中，使水的最高水面抵于種仁高度(種仁平躺時的高度即為種仁的厚度)的1/6～5/6處、優選1/3～2/3處，例如2/3處。如果水分太多(沒過種仁的大部分)，種仁會由于接觸不到空氣而不能發芽，甚至會無氧呼吸產生酒精使自身腐爛。
根據本發明一種優選的實施方式，在發芽培養的第三天補充少量水分，且在之后的每一天均補充少量水分。
根據本發明一種優選的實施方式中，步驟3-2如下進行：在培養皿中鋪兩層濾紙，加入水，將種仁平鋪于濾紙之上，蓋上培養皿，進行發芽培養。
其中，濾紙能充分吸收水分，并保持住水分，這樣濾紙可以保證發芽過程中能有足夠的水分而又不影響空氣的通透。
根據本發明一種優選的實施方式，在步驟3-2中，于18～28℃下進行發芽培養。
在進一步優選的實施方式中，于20～25℃下進行發芽培養。
在更進一步優選的實施方式中，于21～24℃下進行發芽培養。
采用本發明所述方法進行梓葉槭種子的發芽培養，其發芽率可以高達90％以上，遠高于現有技術中的發芽率。
其中，種子發芽的判斷標準為胚根伸長至2～3cm。
根據本發明一種優選的實施方式，采用本發明所述方法進行梓葉槭種子的發芽培養時，其萌發速率為1cm/周～2cm/周(萌發速率以梓葉槭胚根生長長度衡量)。
其中，萌發速率的測定以胚芽生長長度為標準，具體操作為：待種仁浸入水中時，在隨后的的培養日中，每日用游標卡尺測量胚根伸展長度，胚根的生長量即為梓葉槭的發芽速率。
本發明所具有的有益效果：
(1)本發明所述方法操作簡單、重復性強；
(2)本發明所述方法無需加入赤霉素等激素類藥物；
(3)本發明所述方法通過低溫催芽和物理剝除處理相結合，打破種子的生理休眠，明顯提高了梓葉槭種子的發芽率，其發芽率可以高達90％以上。
實施例
以下通過具體實施例進一步描述本發明。不過這些實施例僅僅是范例性的，并不對本發明的保護范圍構成任何限制。
在本發明的實施例中，梓葉槭翅果采集于四川省峨眉山市峨眉山植物園。
實施例1
(1)在梓葉槭翅果的果翅開始發黃時采集翅果，用清水清洗干凈，然后風干2小時，去除果翅表面的水分、同時保持種子本身的水分。將風干后的翅果裝入自封袋中，減去自封袋四角以及在中間留1×1cm2大小孔，以利于種子的呼吸，置于4℃下低溫保存30天。
(2)30天后，取出100顆低溫保存的翅果，將果翅從中間分成2半，從結合處剝離果翅，取出中間的種子，用清水浸泡種子，去掉漂浮在水面的種子，接著清洗沉底的種子，即獲得飽滿的種子。
(3)取出獲得的飽滿的種子，用手術刀從種子子葉處，輕輕剝離種皮，獲得種仁。在直徑為9cm的培養皿中鋪兩層濾紙，加10ml蒸餾水，將種仁平鋪于濾紙之上，蓋上培養皿，其中，室溫為21-25℃之間。每日進行觀察，到種仁放置到培養皿的第三日，往培養皿中補充一次水分，之后每日補充少量水分。
其中，萌發速率為1.6cm/周，到種仁放置于培養皿中的第六天，種子胚芽伸長至2～3cm，發芽率為93％。
實施例2
重復實施例1的過程，區別在于：在步驟(1)中，將翅果風干1.5h，并于2℃下保存40d；在步驟(3)中，在水中進行發芽培養時，水沒過種仁厚度的1/3處。
其中，平均萌發速率為1.4cm/周，到種仁放置于培養皿中的種子胚芽伸長至2～3cm，平均發芽率為92％。
實施例3
重復實施例1的過程，區別在于：在步驟(1)中，將翅果風干2.5h，并于6℃下保存20d；在步驟(3)中，在水中進行發芽培養時，水沒過種仁厚度的1/2處。
其中，平均萌發速率為1.5cm/周，到種仁放置于培養皿中的種子胚芽伸長至2～3cm，發芽率為91％。
對比例
對比例1
重復實施例1的過程，區別在于：在步驟(1)中，將翅果風干后即結束步驟(1)，即不進行低溫保存過程。
其中，平均萌發速率為1.1cm/周，到種仁放置于培養皿中的第六天，種子胚芽伸長至2～3cm，發芽率為88％。
對比例2
重復實施例1的過程，區別在于：不進行步驟(2)，且步驟(3)不進行種皮的去除。
其中，平均萌發速率為0.3cm/周，到種仁放置于培養皿中的種子胚芽伸長至2～3cm，發芽率為15％。
對比例3
重復實施例1的過程，區別在于：步驟(3)不進行種皮的去除。
其中，平均萌發速率為0.35cm/周，到種仁放置于培養皿中的種子胚芽伸長至2-3cm，發芽率為29％。
以上結合具體實施方式和范例性實例對本發明進行了詳細說明，不過這些說明并不能理解為對本發明的限制。本領域技術人員理解，在不偏離本發明精神和范圍的情況下，可以對本發明技術方案及其實施方式進行多種等價替換、修飾或改進，這些均落入本發明的范圍內。本發明的保護范圍以所附權利要求為準。