一種露地菊花瓣組織培養的培養基及方法與流程

本發明涉及植物組織培養技術領域，具體是一種露地菊花瓣組織培養的培養基及方法。

背景技術：

露地栽培菊是東北林業大學的張敩方教授在引種地被菊和北京小菊的基礎上，經過天然雜交、衛星搭載后選育的一個新的地栽小菊品種群。露地菊因花多而密，花期較長，植株低矮，容易繁殖而廣泛應用于北方城市秋季綠化。自問世以來，就以其獨特的植株低矮，開花繁密，耐粗放管理，兼具環境、社會、經濟效益等優勢而備受關注。

長期以來菊花通常采用分株、扦插等無性繁殖方法進行擴繁。但傳統的繁殖方法周期長，占地面積大，勞動成本高，且繁殖系數低。隨著市場需求的急劇增加，傳統的繁殖方法已不能滿足人們的需要。植物組織培養技術具有繁殖速度快、增殖效率高等特點，可以在較短的時間和空間上生產出大量的試管苗。而在外植體的選擇上花瓣不僅病毒量少，而且其組織培養具有取材容易、易消毒、繁殖系數高的優點。因此，研發以露地菊花瓣為材料的組培快繁試驗技術，對露地菊的工廠化生產具有重要意義。

技術實現要素：

有鑒于此，本發明提供了一種露地菊花瓣組織培養的培養基及方法。該培養基配方可顯著提高露地菊的誘導率、分化率和生根率。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種露地菊組織培養的培養基，該培養基包括誘導培養基、分化培養基和生根培養基；

本發明菊花離體育種方法按下列步驟實現

取露地菊‘粉翎’的花瓣為外植體，經流水清洗1h。在無菌的條件下，將花瓣剪成長8mm的小塊，接種在誘導培養基上。

誘導培養基為0.5～2.0mg/l6-ba，1.0mg/lnaa，30g/l蔗糖和8g/l瓊脂的ms培養基,ph值為5.8。

將經過誘導形成的愈傷組織接種到分化培養基中。分化培養基為0～1.5mg/l6-ba，0.2mg/lnaa，30g/l蔗糖和8g/l瓊脂的ms培養基，ph值為5.8。

將經過分化培養后的幼苗接種到生根培養基中進行生根培養。生根培養基為0.05～0.20mg/lnaa，30g/l蔗糖和8g/l瓊脂的1/2ms培養基,ph值為5.8。

6-ba是6-芐基腺嘌呤,為人工合成細胞分裂素，具有抑制植物葉內葉綠素、核酸、蛋白質分解，保綠防老；氨基酸、生長素、無機鹽等向處理部位調運等多種效能，廣泛用農林和園藝作物從發芽到收獲各階段。

萘乙酸，簡稱naa，是一種植物生長調節劑中的生長素類似物，常用于扦插法繁殖時使用的發根粉或發根劑中。它也可用于植物組織培養。其作用是促進細胞分裂與擴大，誘導形成不定根增加座果，防止落果，改變雌、雄花比率等。可經葉片、樹枝的嫩表皮，種子進入到植株內，隨營養流輸導到全株。

本發明將上述2種激素以特定比例添加到培養基中，制得誘導培養基、分化培養基和生根培養基，對露地菊花瓣外植體進行組織培養時，可顯著提高露地菊‘粉翎’的誘導分化率、生根率，效果好于現有報道的培養基種類。

通過對以上技術方案進行實驗找出最佳一種方法，用于權利要求。

附圖說明

圖1露地菊花瓣接種3d后的生長狀況；

圖2接種10d后形成的愈傷組織；

圖3接種25d后形成的不定芽；

圖4接種35d后不定芽分化的苗；

圖5露地菊分化苗生根培養；

圖6生根苗上盆培養。

具體實施方式

以下對本發明結合具體的實例作進一步的詳細說明，并介紹本發明的相關研究結果。

1.以東北林業大學園林學院苗圃實驗基地的露地菊‘粉翎’花瓣為例對本發明作進一步的詳細說明。

以露地菊花瓣作為外植體，將選取的花瓣經流水清洗1h后，用濾紙將多余的水分吸干。用2％的次氯酸鈉滅菌5min后，用無菌水沖洗6次，將花瓣剪成長約8mm的小塊，接種在不同配比的誘導培養基上，每種處理接種30個外植體，20d后統計愈傷組織誘導情況。

1)以ms培養基為基本培養基，加入生長素naa0.2mg·l^-1，因6-ba濃度的不同設計了4組試驗。

表1不同6-ba濃度對露地菊‘粉翎’愈傷誘導率的影響

2)以ms培養基為基本培養基，將上步得到的愈傷組織轉接在誘導叢生芽的分化培養基上(每個處理接種30瓶)，因激素濃度和種類的不同設計了4組實驗。培養2周左右,觀察到愈傷組織表面陸續長出不定芽(見圖3)。

表2不同6-ba濃度對露地菊‘粉翎’的愈傷組織出芽率的影響

3)以1/2ms培養基為基本培養基，因生長素濃度的不同設計了3種不同的生根培養基。將4cm高的苗切下來，轉移到生根培養基(每個處理接種30瓶)，7d左右觀察發現大部分試管苗根部開始分化出小根突，再過7d后看到約3～4cm長的根(見圖5)。

表3不同naa濃度對露地菊‘粉翎’的試管苗生根率的影響

培養條件：培養基均以ms為基本培養，培養基含蔗糖30mg·l^-1，瓊脂8mg·l^-1，培養基在高壓滅菌前將ph值調至5.8；培養溫度為25℃，光照強度為2000lx，光照時間為12h/d。

在試管苗高4cm，且長出根時將瓶口打開，煉苗3d后取出，洗凈根部的培養基，移栽到土壤：蛭石：珍珠巖＝4：1：1的培養基質中。放置背光處，溫度保持在20℃。

2.實驗結果

1)由表1可知，4號培養基，即ms+2.0mg/l6-ba+0.2mg/lnaa，愈傷組織誘導率最高，且愈傷組織結構松散，生長狀況良好。

2)從表2可以看出，2號培養基，即ms+0.5mg/l6-ba+0.2mg/lnaa，分化率最高，是誘導叢生芽的最佳培養基。

3)從表3可以看出，3號培養基，即1/2ms+0.05mg/lnaa，生根狀況最好，生根率達100％，且根系發達、粗壯。

技術特征：

技術總結
本發明涉及組織培養技術領域，特別涉及一種露地菊花瓣組織培養的培養基及方法。該露地菊組織培養的培養基包括誘導培養基、分化培養基和生根培養基。誘導培養基為：2.0mg/L?6?BA+1mg/L?NAA+30g/L蔗糖+8g/L瓊脂的MS培養基；分化培養基為0.5mg/L?6?BA+0.2mg/L?NAA+30g/L蔗糖+8g/L瓊脂的MS培養基；生根培養基為0.05mg/L?NAA+30g/L蔗糖+8g/L瓊脂的1/2MS培養基。采用本發明提供的培養基配方及方法可顯著提高露地菊愈傷組織誘導率、分化率及試管苗生根率。

技術研發人員：吳建慧;蘭鳳;牛喆;祁金洋
受保護的技術使用者：東北林業大學
技術研發日：2017.07.27
技術公布日：2017.09.29