一種微生物組合殺蟲劑及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種微生物殺蟲劑，尤其涉及一種微生物組合殺蟲劑及其制備方法。
【背景技術】
[0002] 二十世紀以來世界人口增長較快，對食物的需求總量要求也越來越大。人們發明 的"石油化學農業"，化肥和農藥幫助人類獲取了大量食物資源，促進了人類的發展和進步。
[0003] 目前，全世界有75億人口，2050年后將達到90億，本世紀末接近105億人口的頂 峰。所以人類對食品的要求會大幅度增加。人類對"石油農業"的依靠也在不斷加強。
[0004] 據世界權威部門統計，目前全世界人工合成的化學物質有1100多萬種，近年來還 以每年增加100萬種及3~4億噸的數量不斷增長。造成具有大量有毒的物質和有害物 質危害著全球的環境、海洋和空氣，化學有毒物質的廣譜特點和化學品復合化技術發展，也 增加了清除、降解、分解的難度，成為人類長期有害環境污染災難的原頭。我國現有農藥廠 1700多家，每年生產約35萬噸原藥，加工制劑80~100萬噸，農藥有效成分品種40多個， 產品約7000多個，而且還進口大量的國外已不再使用的劇毒農藥，施入國內土地。大量的 農藥生產出來，在為人類利用的同時，又在毒害著人類自己。特別是大部分農藥是具有內吸 性的毒素農藥，毒性被直接吸收到農作物莖、葉、根的組織細胞內，并進入果實、種子內部， 造成毒害的長久性、頑固性非常警人。
[0005] 農藥的使用與環境保護的關系，許多科學家都在激烈地辯論著關于現實和潛在的 損害問題，但有一個事實是顯而易見的，即使是按推薦使用量使用，有些農藥，特別是殺蟲 劑，在使用后確實能存留相當長的時間而構成了對土壤和水體的污染。在某些實例中，雖然 使用濃度不大，但也是一個嚴重的威脅。例如，鵪鶉每日定量的食物中有lmg/kg的艾氏劑 也能導致100%的死亡。
[0006] 半個世紀以來，人們對化學合成農藥的使用已習以為常，并由此帶來了眾所周知 的難題：食品、土壤、地下水、江河湖泊、海洋、空氣都受到了化學殘留的嚴重污染，同時對非 靶標昆蟲和其他生物產生了副作用，導致生態系統的破壞。對化學農藥產生抗性和復蘇能 力的昆蟲品種和數量不斷增加。此外，由于合成劇毒農藥的使用和處理不當，許多非致死事 件頗頗發生。
[0007] 鑒于許多化學合成農藥會產生諸多的副作用，許多發達和發展中國家都不斷意識 到化學合成農藥所造成的環境污染和某些毒理效應的危害。由此，微生物和天然植物在發 展新型農藥方面，已逐漸成為人們關注的重要角色。
[0008]由于以上種種原因，化學有毒物質，農藥殘留毒素對人類生存環境造成極大影響， 所以本發明涉及利用微生物來殺死害蟲，代替化學農藥，對人畜無毒無害，不破壞環境，是 一種安全的生物方法。
【發明內容】
[0009] 本發明所要解決的技術問題是提供一種微生物組合殺蟲劑及其制備方法，克服了 現有技術的問題，具有能毒殺不同的昆蟲和昆蟲種類的特性，對金龜子、蚊蟲、線蟲、鱗翅 目，鞘翅目和膜翅目等幾百種害蟲具有毒殺作用強、速度快、范圍廣和毒殺徹底的優點。
[0010] 本發明所要解決的技術問題是通過以下技術方案來實現的：
[0011] -種微生物組合殺蟲劑，是由選自真菌、放線菌和/或細菌的2類或3類菌種制備 成的濃縮菌團制劑；所述重量份組分比例是：真菌40-60、放線菌15-25、和/或細菌20-40; 所述重量份組分比例優選是：真菌50、放線菌20、和/或細菌30。
[0012] 所述菌類，分別選自以下之2種或2種以上菌種：
[0013]真菌：（l)metarhiziumaunisopliae(metschn)sorok金龜子緣僵ACCC-30101 - 中國農業科學院土肥所一中國科學院微生物研究所AS3. 3675 -陜西楡林地區治沙 所，從白楊透翅蛾幼蟲上分離；用于防玉米螟、金龜子、透翅蛾等。（2)PaeCil〇myceS farinosus(Dicks.)Brown粉擬青霉ACCC-30190 -中國農業科學院土肥所一北京林業大學 武覲文贈送；原始編號：8601，防治油松毛蟲。
[0014] (3Paecilomyces lilacinus (Thom) Samson淡紫色擬青霉ACCC-30677-云南省煙 草科學研究院祝明亮贈；原始編號：ZML086 ;采集地：云南；分離源：根結線蟲卵；用作生物 防治研究。
[0015]
[0016] 放線菌：
[0017] (1)Streptomycesanulatus(Beijingrinckl912)wdksmanl953 園環圈鏈霉菌 ACCC-41456 -湖北省生物農藥工程研究中心；原始編號：HBERC00797 ;代謝產物具有殺蟲 活性；分離源：土壤；分離地點：河南盧氏五里川。
[0018] (2) "Streptomyces culicidicuslan et al?滅蚊鏈霉菌ACCC-41132-廣東省 廣州微生物研究所一上海植生所；原始編號：G頂4. 12MIK4. 1 ;殺蚊蟲幼蟲；分離源：土壤； 分離地點：廣州。
[0019] (3)StreptomycesgriseolussubsphangzhouensisACCC-40075-浙江農業科學 院；原始編號：S26;產殺蚜素，對蚜蟲、紅蜘蛛及某些鱗翅目幼蟲毒殺作用很強。
[0020](4) Streptomyces calvus Backus et al.，1957秀裸鏈霉菌ACCC-41451-湖北 省生物農藥工程研究中心；原始編號：HBERC00743 ;代謝產物具有殺蟲活性；分離源：土壤； 分離地點：浙江龍游。
[0021]
[0022] 細菌：
[0023] (l)Bacillussubtilis(Enrenbergl835)cohnl872 枯草芽抱桿菌ACCC-11088 - 中國科學院微生物研究所；AS1. 0933;防治花生線蟲病。
[0024](2) Bacillus Sphaericus meyer and Neidel904球形芽抱桿菌ACCC-11096-中 國科學院微生物研究所一美國；=AS1. 1672 ;原始編號：2115 ;殺蚊子。
[0025](3)Bacillus laterosporus Laubach側抱芽抱桿菌ACCC-11079-中國農科院土 肥所一中國科學院微生物所AS1. 0864 ;能殺死蚊子幼蟲；產溶菌酶。
[0026](4)Bacillus thuringienis subsp. Aisawai ACCC-10016-武漢微生物農藥廠； 原始編號：〇96 ;制備抗原標準菌株，毒殺鱗翅目昆蟲。
[0027] (5)Bacillusthuringienissubsp.merrisoniACCC-10031 -武漢微生物農藥 廠；原始編號：〇12;毒殺鱗翅目昆蟲。
[0028] (6)Bacillusthuringiensissubsp.galleriae蘇云金桿菌錯螺亞種 ACCC-10027 -中國科學院微生物所；毒殺菜青蟲。
[0029] (7)Bacillusthuringiensissubsp.Israelensis蘇云金桿菌以色列亞種 ACCC-10038 -成都華宏實業公司一山東泰安生物研究所一世界衛生組織（WHO);殺滅蚊子 幼蟲、I子效果較好。
[0030] (8)Bacillusthuringienissubsp.thuringienisACCC-10035 -中國農業科學 院土壤肥料研究所；原始編號：D25;抗噬菌體毒殺玉米螟；分離源：從HD-187菌株中自然 選育而得。
[0031] (9)Bacillusthuringiensissuhsp.berliner蘇云金桿菌柏氏變種 ACCC-10022 -中國農業科學院土壤肥料研究所；原始編號：D26 ;防治鱗翅目昆蟲；分離源： 菌粉。
[0032] (10)Bacillusthuringiensissubsp.Dendrolimus蘇云金桿菌松蜀亞種 ACCC-10062 -蘇聯；毒殺松毛蟲。
[0033] (ll)Bacillusthuringienissubsp.sottoACCC-10033 -武漢微生物農藥廠- 英國；原始編號：〇16 ;制備抗原標準菌株，毒殺鱗翅目昆蟲。
[0034] 所選取的每類菌種的每個菌種培養純液之間按照（0.5-1. 5) : (0.5-1. 5)比例混 合。
[0035] 所選取的每類菌種的每個菌種培養純液之間按照1:1比例混合。
[0036] 所述制劑為每20億/毫升高濃度產品，并進一步得到液體產品和固體產品。
[0037] 本發明還提供了所述微生物組合殺蟲劑的制備方法，包括以下步驟：
[0038] (1)將各種菌種分別常規培養為菌種培養純液：
[0039] (2)菌液的擴大培養：將每類真菌、放線菌和/或細菌的每個菌種培養純液之間按 照所述比例進行混合制成每類混合菌液；再將所述每類混合菌按所述重量份組分比例進行 混合；培養液培養，發酵得到成品制劑。
[0040] 所述步驟（2)是將混合菌液與培養液按1 : (8-10)的比例培養，所述培養液配料 組分重量份比例為：黃豆粉1-1. 5,糊精0. 3-0. 9,蛋白胨0. 2-0. 4,磷酸氫二鉀0. 1-0. 3,碳 酸鈣 0? 3-0. 7,硫酸鎂 0? 2-0. 6,硫酸銨 0? 03-0. 07,豆油 0? 1-0. 3;PH值為 7. 2。
[0041] 優選所述混合菌液與培養液按1 : 9的比例培養，所述培養液配料組分重量份比 例為：黃豆粉1. 2,糊精0. 6,蛋白胨0. 3,磷酸氫二鉀0. 2,碳酸鈣0. 5,硫酸鎂0. 4,硫酸銨 〇? 05,豆油 0? 2。
[0042] 所述混合菌液加入經過凈化后的培養基液內；放入種子罐內，在溫度3〇°c±rc 下，每小時攪拌200次，培養36-48小時；鏡檢每克含菌量達到20億/克時，停止培養，檢 查無雜菌即為合格種子菌液。將合格的菌液按5%的比例，加入發酵罐內培養基液，培養 30-45小時，經檢查無雜菌，菌液明顯成芽孢和晶體，含量達20億/克，即可為成品發酵物。
[0043] 所述方法還包括步驟（3)固體菌劑的制備：在成品菌液中加入8-10%的碳酸鈣， 攪拌30分鐘；板框過濾；攪拌30分鐘，調成漿狀；噴霧干燥；粉碎混合均勻，即得。
[0044] 本發明首先是構建殺蟲劑菌株體系，其中球形芽胞桿菌Bacillus sphaericus TS-1與蘇云金芽孢桿菌Bacillus thuringiensis H4是兩種重要的昆蟲病原菌，前者對淡 色庫蚊的毒性與國外159