專利名稱：提高3－0－乙酰基4”－0－異戊酰基泰樂菌素產量和降低生產成本的方法
在已公開的專利US4092473、US4522919中已對3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的生產過程及抗菌活性等做了描述。
3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素是多種泰樂菌素衍生物中的一種，該物質比泰樂菌素具有更強的抗菌活性。目前已被商品化，并在世界范圍內銷售。
3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的生產過程是鏈霉菌Streptomyces.Thermotolerans發酵2-3天后產生乙酰化酶及異戊酰化酶，在發酵液中加入提供乙酰基的前體物葡萄糖和提供異戊酰基的L-亮氨酸及泰樂菌素，經過乙酰化酶對泰樂菌素3位上進行乙酰化，異戊酰化酶對泰樂菌素4”位進行異戊酰化，經過約190小時的發酵過程，從而完成3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的生物合成過程。
3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的前體物泰樂菌素本身是一堿性物質，加入酸后變為與加入酸對應的泰樂菌素鹽，本說明如不特別指明則是指泰樂菌素堿或泰樂菌素鹽。
1、通過提高L-亮氨酸的濃度和泰樂菌素的濃度減少補入發酵內的料液的體積，從而達到提高每批發酵液提種后體積的目的。
以目前生產使用120立方米的發酵罐為例，培養基經高溫滅菌后接入Streptomyces.Thermotolerans菌種，接種后發酵液體積為約66立方米。3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的生物合成過程分為明顯的微生物菌體繁殖階段及產物的生物合成階段。向發酵罐培養基接種接后，微生物生長2-3天完成菌體繁殖階段。此時補入泰樂菌素與L-亮氨酸的混合液及葡萄糖溶液，開始3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的生物合成階段。由于泰樂菌素有強烈的抑制微生物生長的作用，發酵液中補入泰樂菌素后，微生物菌體基本停止生長。發酵液中補入無菌的1.8％(w/v)的L-亮氨酸溶液及約7.0％(w/v)泰樂菌素混合液約20立方米，同時補入約50％(w/v)的無菌葡萄糖溶液約10立方米。理論計算到發酵完畢后發酵液體積應為96立方米，但由于菌種發酵過程中需通入并排出大量無菌空氣，排出的空氣帶走發酵罐中約14立方米水份，所以到發酵完成后實際得到的發酵液體積約82立方米。
在該生物轉化過程中，在發酵液中的每克微生物菌體酶活力一定的情況下，影響每批發酵液總產量的因素主要是每批發酵液的微生物菌體總量。所以提高每批發酵液的微生物菌體總量會等比例提高3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的產量。
由于L-亮氨酸在常溫下在水中的溶解度為2.0-2.5％，如溫度降至10℃時其溶解度約為1.8％。所以實際應用中使用了1.4-1.8％濃度的L-亮氨酸。如L-亮氨酸濃度超過1.8％，則L-亮氨酸溶液在冬季氣溫低于10℃將會結晶析出，使補入發酵液中的L-亮氨酸計量不準確及堵塞補料管道，造成3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的產量降低和發生生產事故等結果。本發明將L亮氨酸的濃度提高到了2.1-20％，在此濃度下如不加入本發明權利要求書1中所述的增溶劑和表面活性劑，不能溶解的L-亮氨酸固體懸浮于水面上，使補入發酵罐中的亮氨酸計量不準確，甚至堵塞補料管道。加入增溶劑和表面活性劑后及懸浮劑后，不溶于水的L-亮氨酸固體細小顆粒均勻的懸浮于液體中成為流動性很好的懸浮液。
泰樂菌素鹽水溶液在含量低于10％時，長期放置也不會產生沉淀。如含量超過10％，底溫時長期放置會有部分泰樂菌素結晶出現，同樣造成補入發酵罐內的泰樂菌素鹽計量不準和堵塞管道的問題。加入本發明權利要求書2中所述的表面活性劑后，則泰樂菌素鹽溶液不會產生結晶。
泰樂菌素堿在水中難溶，本發明權利要求書中所述的助溶劑、表面活性劑及助懸劑后，便可使泰樂菌素堿均勻分布在水中，成為流動性良好的懸浮液。同時，由于泰樂菌素堿在水溶液中易分解，但以固體顆粒的形式存在于液體中則減少了這種分解現象。
更由于在酶的作用下，泰樂菌素、L-亮氨酸是等摩爾反應生成等摩爾的3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素。所以L-亮氨酸的低濃度也必須要求與L-亮氨酸在同一種溶液中的被補入發酵液中的泰樂菌素鹽溶液的低濃度。雖然泰樂菌素鹽在水中的溶解度可達到40％以上。
本發明就是將補入的1.4-1.8％L-亮氨酸溶液濃度提高到2.1-20％，同時將補入的原9.0％以下的泰樂菌素鹽溶液濃度提高到10-50％。由于每批發酵所補入的泰樂菌素及L-亮氨酸的重量是一定的，相應的補入的體積降低為原工藝過程的1/1.4到1/13。以總容積為120立方米發酵罐為例，如補入發酵罐中的L-亮氨酸和泰樂菌素溶液體積降低為原工藝的1/5，則同樣達到發酵完成后每批發酵液體積82立方米，該批發酵液接種后的體積便可達到82立方米，而不是現在使用的66立方米。即接種后體積比原工藝提高了24％，發酵罐的利用率為68.3％，而原工藝接種后體積只有66立方米，發酵罐的利用率只有55％。相應的在微生物菌體繁殖階段可以得到比原工藝多出24％的微生物菌體量，則每批發酵液3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的產量也可提高20％以上。
2、補液化淀粉說明原工藝中提供3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素生物合成菌代謝所需碳源及3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素生物合成所需乙酰基的前體由發酵過程中補入的葡萄糖提供。本發明改由經淀粉酶液化后的流動性很好的液化淀粉提供。實驗表明，在3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素生產過程中，如發酵液中葡萄糖濃度過高，會降低3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的產率。由于液化淀粉是由短鏈的葡萄糖的聚合體，而3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的生物合成菌可分泌糖化酶將液化淀粉緩慢水解成葡萄糖。因而，液化淀粉相當于葡萄糖的緩釋劑，既可起到葡萄糖應起的作用，又使發酵液中的糖濃度控制在較低的水平，更有利于3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的合成。
提供同樣數量的葡萄糖，液化淀粉的成本比葡萄糖的成本低約30％。使用液化淀粉代替葡萄糖，可降低3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素生產成本約1.0％。
3、補泰樂菌素堿或泰樂菌素鹽半成品或中間體的說明目前應用的3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的生產過程是使用含量高達75％以上的成品泰樂菌素酒石酸鹽，配制成泰樂菌素酒石酸鹽溶液補入發酵液中。該方法成本較高，現廣泛使用的生產成品泰樂菌素酒石酸鹽生產工藝過程可簡單描述為
泰樂菌素產生菌經液體發酵140-200小時后用酸調整發酵液pH5.0以下后固液分離得到發酵液濾液，該步加酸及固液分離得到發酵液濾液的收率為約95％。發酵液濾液用堿調pH8.0以上使發酵液濾液中的泰樂菌素成為易溶解于有機溶媒的泰樂菌素堿。用有機溶媒萃取發酵液濾液中所含泰樂菌素堿。該步有機溶媒萃取收率為約95％。該含有泰樂菌素堿的萃取液與酒石酸的水溶液充分混合，使其中的泰樂菌素堿轉化成為易溶于水的泰樂菌素鹽而轉移到水溶液中。該步泰樂菌素堿從有機溶媒中被轉移到水中的收率為約95％。該水溶液經用活性炭等脫去色素，并經過超濾膜濃縮后成為含量為3-30％的泰樂菌素的酒石酸鹽溶液。該超濾過程泰樂菌素收得率約為90％。該超濾濃縮后的泰樂菌素酒石酸鹽溶液經噴霧干燥得到成品泰樂菌素酒石酸鹽粉狀物。該噴霧干燥過程泰樂菌素酒石酸鹽的收得率約為90％。該經噴霧干燥得到的泰樂菌素酒石酸鹽粉狀物用于制備成生產3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的泰樂菌素酒石酸鹽補料液。經過以上三個主要過程，從泰樂菌素發酵液到制得成品泰樂菌素酒石酸鹽的總收得率低于70％。該工藝的缺點還表現在使用大量的有機溶媒，增加了生產成本，污染環境。
本發明采用與現行生產工藝或曾被公開工藝完全不同的方法得到可用于制備成生產3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的泰樂菌素酒石酸鹽補料液的泰樂菌素堿或泰樂菌素鹽的中間體。使用本發明的工藝過程，泰樂菌素酒石酸鹽的總收得率為85％以上。方法如下泰樂菌素產生菌經液體發酵140-200小時后用酸調整發酵液pH5.0以下，經固液分離得到發酵液濾液。該步加酸及固液分離得到發酵液濾液收率為約95％。該步驟與現在使用的工藝相同。但以下是本發明與現在使用工藝的不同點。得到的發酵液濾液用堿調pH7.5以上使發酵液濾液中的泰樂菌素成為易溶解于有機溶媒，但不易溶解于水的泰樂菌素堿，加熱到60-70℃，大量泰樂菌素堿沉淀產生，該步驟中加熱發酵液濾液是關鍵。如不將發酵液濾液加熱，則發酵液濾液中的泰樂菌素堿只有約40-70％的形成沉淀。將該沉淀物分離后用50-80℃熱水洗后得到水洗后的泰樂菌素堿一次沉淀物，該泰樂菌素堿一次沉淀物加入等當量或超過泰樂菌素堿當量的酒石酸溶液可得到含量為3-70％的泰樂菌素酒石酸鹽的溶液或半固體物。以上步驟從向泰樂菌素發酵液濾液中加入堿沉淀泰樂菌素堿一次沉淀物，后加酒石酸得到泰樂菌素酒石酸鹽的收率約為90％以上。以上從含泰樂菌素的發酵液始到得到泰樂菌素酒石酸鹽的收率可達到85％以上。即比目前使用的得到成品泰樂菌素酒石酸鹽的收得率提高15-20％，而且全部過程不使用有機溶媒，縮短了工藝過程，可使提取泰樂菌素的成本降低20％以上。該含量3-70％的泰樂菌素酒石酸鹽便可用于制備成生產3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的泰樂菌素補料液。
本發明經過以上三個主要過程的改進，可使3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素每批發酵液3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的產量提高20％以上。降低3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基生產成本的15％以上。本發明還通過向L-亮氨酸溶液或懸浮液加助溶劑，表面活性劑及助懸劑的方法，解決了在生3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素過程中L-亮氨酸在加熱溶解再冷卻后會產生較大體積的結晶，易堵塞管道，從而在生產上無法應用的問題。
下面實例予以說明本發明的方法，但實例不限制本發明的范圍，本發明的范圍與核心內容依據權利要求書加以確定。
實例一本實例是使用高濃度成品泰樂菌素鹽，高濃度L-亮氨酸，液化淀粉作為生產3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的補料物的生產方法。
將2份重量的吐溫40，1-2份重量的發酵工業生產中常用的消泡劑與15份的L-亮氨酸與81份的水混合，加熱到60-65℃，加入8N的NaOH溶液調pH10以下使之完全溶解，劇烈攪拌下緩慢加入等當量的鹽酸調pH6-8。此時有大量細小顆粒出現，并懸浮于液體中。120℃滅菌30分鐘，保持緩慢攪拌備用。
將5份重量的淀粉加5份水，加入淀粉重量0.2％的糖化酶，70-75℃攪拌20-30分鐘，此時淀粉液化成了流動性很好的液化淀粉溶液。120℃保溫30分鐘滅菌備用。
取市售成品泰樂菌素酒石酸鹽粉配制成30-50％的泰樂菌素酒石酸鹽。此溶液與本實例前述的L-亮氨酸溶液混合，加熱到70-75℃保溫10-20分鐘冷卻后備用。
使用鏈霉菌Streptomyces.Thermotolerans的變異株，經菌種培養后接種到容積120立方米并裝有82立方米發酵培養基的發酵罐中培養2-3天，完成微生物菌體的生產階段后開始按比例緩慢補加上述的L-亮氨酸與泰樂菌素的混合懸浮液、液化淀粉溶液。自補料開始計6-7天完成由泰樂菌素生物轉化為3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的發酵全過程。
應用此工藝可得到約與原工藝相同的82立方米的發酵液。但單位體積的發酵液中所含3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素比原工藝提高了15-20％。同時，由于使用液化淀粉和高濃度的L-亮氨酸及高濃度的成品泰樂菌素鹽作為補料液，使每批生產3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素產量提高了10-15，成本降低了5％以上。
實例二本實例是優化的使用普通濃度泰樂菌素中間體，普通濃度L-亮氨酸，液化淀粉與葡萄糖的混合液作為生產3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的補料液的生產方法。
將1份重量的吐溫40，1份重量的發酵工業生產中常用的消泡劑與4份重量的L-亮氨酸與94份的水混合，加熱到70-80℃溶解備用。
將4份重量的淀粉加5份水，加入淀粉重量0.2％的淀粉酶，70-75℃攪拌20-30分鐘，此時淀粉液化成了流動性很好的液化淀粉溶液。向該溶液中加入1份重量的葡萄糖配制成含10％(w/v)葡萄糖和40％(w/v)液化淀粉的混合液，120℃保溫30分鐘滅菌備用。
已發酵約8天的泰樂菌素發酵液加鹽酸調pH到3.3-3.9，固液分離。向得到的液體中加入9N的NaOH溶液調pH7.2-8.0，加熱到60-80℃出現沉淀。固液分離，如有必要將固體物水洗，再次固液分離，得到泰樂菌素堿一次沉淀物中間體。再加入含與泰樂菌素堿一次沉淀物中間體等當量的酒石酸溶液溶解。加入9N氫氧化鈉溶液調pH7.5-8.0，加熱70-75℃分離得到泰樂菌素堿二次沉淀物中間體，泰樂菌素二次沉淀物中間體加入等當量的酒石酸溶液配制成25％的酒石酸泰樂菌素水溶液溶液，該溶液與上述的L-亮氨酸溶液混合后加熱至70-80℃保溫10鐘冷卻備用。
使用鏈霉菌Streptomyces.Thermotolerans的變異株經菌種培養后接種到容積60立方米并裝有35立方米發酵培養基的發酵罐中培養2-3天，完成微生物菌體的生產階段后，按工藝要求開始按比例緩慢向發酵罐內補加上述的L-亮氨酸懸浮液、泰樂菌素鹽溶液，液化淀粉溶液，直至發酵結束。自補料開始計6-7天完成由泰樂菌素生物轉化為3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的發酵全過程。
應用此工藝發酵結束后可得到約與原工藝相同的42立方米的發酵液。由于使用液化淀粉與葡萄糖的混合液和泰樂菌素堿二次沉淀物中間體作為補料液，使生產3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素成本降低了7％以上。
實例三本實例是使用高濃度泰樂菌素鹽一次液中間體，高濃度L-亮氨酸，液化淀粉作為生產3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的補料物的生產方法。
將3份重量的吐溫20，0.5-1份重量的羧甲基纖維素鈉，1-2份重量的發酵工業生產中常用的消泡劑與15份的L-亮氨酸與79份的水混合，加熱到60-70℃溶解，加入8N的NaOH溶液調pH10以下使之完全溶解，劇烈攪拌下緩慢加入等當量的鹽酸調pH6-8。此時有大量細小顆粒出現，并均勻懸浮于液體中。120℃滅菌30分鐘，保持緩慢攪拌備用。
將5份重量的淀粉加5份水，加入淀粉重量0.2％的糖化酶，70-75℃攪拌20-30分鐘，此時淀粉液化成了流動性很好的液化淀粉溶液。120℃保溫30分鐘滅菌備用。
已發酵約8天的泰樂菌素發酵液加鹽酸調pH到3.3-3.9，固液分離。向得到的液體中加入9N的NaOH溶液調pH7.2-8.0，加熱到60-80℃出現沉淀。固液分離。如有必要將固體物用60-80℃水洗，再次固液分離，得到泰樂菌素堿一次沉淀物中間體。將該泰樂菌素堿一次沉淀物中間體加入等當量的酒石酸溶液或其它的酸溶液將該中間體溶解，配制成30-50％的泰樂菌素酒石酸鹽一次液。該泰樂菌素酒石酸鹽一次液與本實例所述L-亮氨酸懸浮液混合，加熱到65-75℃維持10-20分鐘備用。
使用鏈霉菌Streptomyces.Thermotolerans的變異株，經菌種培養后接種到容積120立方米并裝有42立方米發酵培養基的發酵罐中培養2-3天，完成微生物菌體的生產階段后開始按比例補加。上述的L-亮氨酸懸浮液、泰樂菌素溶液，葡萄糖液化淀粉溶液。自補料開始計6-7天完成由泰樂菌素生物轉化為3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的發酵全過程。
應用此工藝可得到約與原工藝相同的82立方米的發酵液。但單位體積的發酵液中所含3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素比原工藝提高了15-20％。同時，由于使用液化淀粉與葡萄糖的混合液和泰樂菌素的中間體作為補料液，使生產3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素成本降低了15％以上實例四本實例是使用泰樂菌素半成品生產3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素生產方法。
將L-亮氨酸配制成2-3％的溶液，120℃保溫滅菌30分鐘后備用。
將5份重量的淀粉加5份水，加入淀粉重量0.2％的淀粉酶，70-75℃攪拌20-30分鐘，此時淀粉液化成了流動性很好的液化淀粉溶液。含50％(w/v)液化淀粉的混合液，120℃保溫30分鐘滅菌備用。
泰樂菌素產生菌經液體發酵140-200小時后用酸調整發酵液pH3.0-4.0后后固液分離，濾液用堿調pH8.0以上使濾液中的泰樂菌素成為易溶解于有機溶媒的泰樂菌素堿。用有機溶媒萃取濾液中所含泰樂菌素堿，該含有泰樂菌素堿的萃取液與稀酸的水溶液充分混合，使其中的泰樂菌素堿轉化成為易溶于水的泰樂菌素鹽而轉移到水溶液中。該水溶液經超濾膜濃縮后成為含量為3-30％的泰樂菌素鹽即泰樂菌素半成品，該半成品與上述2-3％的滅菌后的L-亮氨酸溶液混合備用。
使用鏈霉菌Streptomyces.Thermotolerans的變異株經菌種培養后接種到容積120立方米并裝有70立方米發酵培養基的發酵罐中培養2-3天，完成微生物菌體的生產階段后開始按比例補加。上述的L-亮氨酸懸浮液、泰樂菌素鹽的溶液，液化淀粉溶液。自補料開始計6-7天完成由泰樂菌素生物轉化為3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的發酵全過程。
本實例中由于使用了制備精制泰樂菌素酒石酸鹽所需噴霧干燥步驟之前的泰樂菌素半成品替代精制泰樂菌素做為生產3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的補料原料，比使用精制泰樂菌素作為補料原料的成本降低了約5％以上。
參考資料Sebek et al.，Genetics of Industrial Microorganisms，Pub.by American Societyfor Microbiology，pp.117-122(1979).M.Tsuchiya et al.，″Studies on the Effects of 3-Acetyl-4″-Isovaleryltylosin AgainstMultiple-Drug Resistant Strains of Staphylococcus Aureus″，J.Antibiotics 34(3)，305-306(1981).M.Tsuchiya et al.，″Studies of Tylosin Derivatives Effective Against Macrolide-ResistantStrainsSynthesis and Structure-Activity Relationships″，J.Antibiotics 35(6)，661-671(1982).Derwent Abstract Nos.66634C/38，27592A/15 of Japanese Unexamined Patent Nos.J5 5043-013，J53021-182，3-26-80，2-27-78(Sanraku Ocean).Okamoto et al.，″The Activity of 4″-Acylated Tylosin Derivatives Against Macrolide-ResistantGram-Positive BacteriaJ.Antibiotics 32，542-544(1979).Okamoto et al.，″Biological Properties of New Acyl Derivatives of Tylosin″，J.Antibiotics 33，1309-1315(1980).
權利要求
1.一種提高3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素產量和降低生產成本的方法，其特征在于，發酵生產3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素過程中，使用高濃度的，加入助溶劑或表面活性劑的L-亮氨酸溶液或高濃度的，加入助溶劑、表面活性劑及助懸劑的L-亮氨酸固體懸浮液，作為補料物補入發酵液中。
2.一種提高3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素產量和降低生產成本的方法，其特征在于，加入表面活性劑的含泰樂菌素鹽成品9-70％的溶液或加入表面活性劑及助懸劑的含泰樂菌素堿成品9-70％固體懸浮液作為補料物補入發酵液；
3.一種提高3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素產量和降低生產成本的方法，其特征在于，發酵生產3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素的過程中，使用液化淀粉溶液或液化淀粉的固體懸浮液補料物補入發酵液中。
4.一種提高3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素產量和降低生產成本的方法，其特征在于，發酵生產3-O-乙酰基4”-O-異戊酰基泰樂菌素過程中，使用在發酵法生產泰樂菌素的鹽或泰樂菌素堿的提純生產過程中，得到的由泰樂菌素鹽半成品或泰樂菌素堿的中間體制備成含泰樂菌素鹽4-70％的溶液或含泰樂菌素堿4-70％的固體懸浮液作為補料物補入發酵液中。
5.根據權利要求書1和2所述的方法，其特征在于加入助溶劑的L-亮氨酸的濃度為2.0-20％(w/v)。L-亮氨酸的助溶劑濃度為0.1-30％，種類包括無機酸、有機酸、無機堿、有機堿、吡咯烷酮類化合物、酰胺類化合物、氮酮。優選的L-亮氨酸的助溶劑為無機酸、無機堿。特別優選的L-亮氨酸的助溶劑為硫酸、鹽酸、氫氧化鈉、氫氧化鉀。加入的表面活性劑濃度為0.1-40％，種類包括離子型和非離子型的表面活性劑，優選的表面活性劑為聚氧乙烯失水山梨醇脂肪酸酯、失水山醇脂肪酸酯、烷基酚聚氧乙烯醚、蓖麻油聚乙烯醚類和由油合成的酯類化合物，表面活性劑可以使用一種，也可兩種或兩種以上混合使用。加入的助懸劑濃度為0.1-20％，種類包括作為食品添加劑使用的及化工行業使用的親水性助懸劑。優選的助懸劑為瓊脂，羧甲基纖維素，羧甲基纖維素鈉，淀粉，明膠，海藻酸鈉，果膠，藻朊酸丙二脂，阿拉伯膠，酪朊酸鈉。
6.據權利要求書3所述的方法，其特征在于液化淀粉是淀粉加入糖化酶經酶解液化后的產物，濃度為20-80％(w/v)。
7.根據權利要求書4所述的方法，其特征在于泰樂菌素鹽的半成品為發酵法生產泰樂菌素堿或泰樂菌素鹽過程中，泰樂菌素經過提純得到的含泰樂菌素鹽或泰樂菌素堿3-70％的液體或固體物。
8.根據權利要求書4所述的方法，其特征還在于泰樂菌素堿中間體為泰樂菌素堿的一次沉淀物、泰樂菌素鹽一次溶液、泰樂菌素堿二次沉淀物、泰樂菌素鹽二次溶液和萃取后的泰樂菌素鹽溶液。泰樂菌素堿或泰樂菌素鹽中間體的制備方法為泰樂菌素產生菌經液體發酵后的發酵液經固液分離后，將得到的液體調pH＝7.0-14，加熱至50-100℃后產生泰樂菌素堿沉淀，經固液分離而得到的泰樂菌素堿的一次沉淀物；該泰樂菌素堿的一次沉淀物加入有機酸或無機酸溶解該沉淀得到的泰樂菌素一次鹽溶液。泰樂菌素一次鹽溶液再用堿調pH7.0-14，加熱到50-100℃經固液分離而得到的更純的泰樂菌素堿二次沉淀物，泰樂菌素二次該沉淀物加入有機酸或無機酸溶解得到泰樂菌素二次鹽溶液；泰樂菌素堿一次沉淀物加入疏水性有機溶媒萃取得到泰樂菌素堿萃取液，向泰樂菌素堿萃取液中加入無機酸，得到萃取后的泰樂菌素鹽溶液。優選的泰樂菌素中間體為泰樂菌素堿一次沉淀物、泰樂菌素鹽一次溶液和萃取后的泰樂菌素鹽溶液。優選的制備方法為泰樂菌素產生菌經液體發酵后的發酵液經固液分離后，將得到的濾液用氫氧化鈉溶液調pH7.5-9.0，加熱至60-75℃后經固液分離而得到的泰樂菌素堿一次沉淀物。向泰樂菌素堿一次沉淀物中加入酒石酸溶液得到的泰樂菌素一次鹽溶液。按泰樂菌素堿一次沉淀物∶乙酸丁脂＝1∶2的體積比將兩種物質混均萃取，分離得到乙酸丁酯萃取液，向乙酸丁酯萃取液中加入酒石酸溶液，攪拌分離得到萃取后的泰樂菌素鹽溶液。
全文摘要
本發明是在發酵法合成泰樂菌素衍生物3－O－乙酰基4”－O－異戊酰基泰樂菌素時，向發酵液中補入高濃度的L－亮氨酸溶液或固體懸浮液和高濃度的泰樂菌素溶液，及使用成本較低的液化淀粉液及成本較低的泰樂菌素半成品或中間體作為發酵過程中的補料物，比現有工藝過程顯著提高產量及降低生產成本。本發明通過向L－亮氨酸溶液或懸浮液加助溶劑，表面活性劑及助懸劑解決了高濃度L－亮氨酸溶液易結晶沉淀造成的計量不準的問題。本發明還提供了一種低成本的制備泰樂菌素中間體的方法。
文檔編號C12P17/18GK1427081SQ01144540
公開日2003年7月2日 申請日期2001年12月19日 優先權日2001年12月19日
發明者徐兵 申請人:徐兵