專利名稱：人乳頭瘤病毒hpv基因芯片的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種基因芯片，特別是涉及人乳頭瘤病毒HPV基因芯片。
背景技術：
眾所周知，婦女占全人類的一半，婦女健康不僅關系到婦女自身切身利益，同時也關系到人類后代的繁衍生殖。人乳頭瘤病毒(human papillomavirus HPV)作為婦女致病微生物，可感染婦女的皮膚與黏膜上皮細胞，引起婦女生殖器官多種良性、惡性腫瘤病變，嚴重威脅婦女健康。各國的許多婦產科專家普遍認為，人乳頭瘤病毒HPV感染，已被流行病學和生物學證明是引起婦女宮頸癌及其癌前病變的重要因素。在全世界范圍內幾乎所有宮頸癌組織中均可檢測到HPV-DNA，同時HPV型別與它不同部位的組織的親嗜性密切相關，所導致的疾病不盡相同。現已發現至少有58種不同型別的HPV與其特殊解剖部位有關。所以HPV-DNA的檢測及分型在對其相關疾病的診斷、防治、判斷預后，深入研究HPV致癌機理等方面具有重要意義。
1、HPV病毒形態。HPV病毒是一類雙鏈環狀小分子DNA病毒，屬乳多空病毒科乳頭瘤病毒屬。毒粒直徑約45～55nm，呈二十面對稱體，有72個殼體，毒粒有含有DNA和蛋白質，無包膜。
2、HPV-DNA結構。HPV-DNA約7.9kbp，所有開放讀碼框架由一條DNA鏈編碼，并有基因重疊。按功能分為三個區E區為早期轉錄區，L區為晚期轉錄區，URR區為上游調節區。E區約占4kbp，編碼8個開放讀碼框架，依次為E6，E7，E1，E8，E2，E4，E3，E5。E區的功能涉及DNA復制，轉錄調節和細胞轉化；L區長約3kbp，有兩個開放讀碼框架L1，L2，分別編碼病毒的主要和次要衣殼蛋白；URR區位于L1和E6之間，長約1kbp，為非編碼區，在基因的轉錄和翻譯中起調節作用。
由于HPV體外增殖非常困難，到目前為止尚無可靠的血清學分型方法。對HPV感染的診斷，傳統的方法是通過形態學和免疫學方法對其進行檢測，如巴氏涂片法，液基薄層細胞學檢查，陰道鏡檢查，組織病理學檢查，電鏡直接觀察HPV病毒顆粒，放射免疫沉淀法檢測患者血清中HPV16抗體水平，酶聯免疫吸附法(ELISA)檢測患者血清中HPV-E6，E7特異性抗體等。這些傳統的HPV檢測方法靈敏度和特異性均不夠理想，存在較高的假陽性率和假陰性率，并且不能對HPV進行分型。
最近十幾年來，許多科學工作者為了克服傳統檢測方法的不足，采用現代分子生物學技術方法對HPV進行檢測，這些方法主要包括核酸雜交法，聚合酶鏈反應PCR法。這些方法有的靈敏度不高，有的特異性差，有的比較費時間，有的易發生交叉感染，假陽性率高，有的操作繁瑣且不能分型。
隨著分子生物學技術的飛速發展，上世紀九十年代出現了基因芯片技術，美國Affymetrix公司于二十世紀八十年代末至九十年代初，率先開展基因芯片研究。1992年該公司運用半導體照相平板技術，在1cm2左右的玻璃片上原位合成寡核苷酸片段，誕生了世界上第一塊基因芯片。基因芯片最早是由于高通量，大規模研究基因功能的需求而產生，但隨著基因芯片技術上的日漸成熟，人們驚喜的發現基因芯片在傳染病和遺傳病的診斷上有獨特的應用前景和巨大商業市場。
發明內容
本發明所要解決的技術問題是克服已知技術的缺陷，運用分子生物學的前沿技術，生產出人乳頭瘤病毒檢測及分型基因芯片。
本發明的技術方案是一種人乳頭瘤病毒(HPV)基因芯片，含有固相載體基片，在芯片上固化有監控顯示點樣，HPV檢測探針點樣，監控顯示點樣含有陽性對照顯示點樣，陰性對照顯示點樣，空白對照顯示點樣，HPV檢測探針包括HPV通用性探針和HPV各類型特異性探針。
陽性對照顯示點樣是一任選的與HPV不同源的寡核苷酸片段，其序列為5’-NH2-T10-CGAGTCCAGTGCATGGACAG-3’，陰性對照顯示點樣為與HPV沒有同源性的一任選寡核苷酸片段，其序列為5’-NH2-TTAATTATTACAAGCGCAACAG-3’，空白對照顯示為不含任何基因的點樣，HPV通用探針是人工合成的一寡核苷酸片段，與HPV L1區內一段保守基因段完全互補，其序列為5’-NH2-T8-GTRYTNCGDGTDGTATCHACHACNGT-3’，各類型HPV特異性探針為人工合成的多條寡核苷酸片段，分別與該類型HPV L1區內特異性較高的一段基因片段互補。
HPV特異性探針為
HPV特異性探針為
HPV特異性探針為
HPV特異性探針為
HPV特異性探針為
HPV特異性探針為
HPV特異性探針為
固相載體基片可為玻璃片，或硅片，或尼龍膜，或硝酸纖維膜，或凝膠，或雜交膜，陽性顯示點樣為每一排的第一列點樣，陰性顯示和空白顯示為最后兩排點樣，另外各排點樣依次為HPV通用探針，HPV特異性探針。
本發明的有益積極效果基因芯片技術是二十世紀九十年代初期發展起來的一門由分子生物學、微電子學、物理學、化學、計算機科學等多門學科交叉融合而成的高新技術，它是將大量探針固化于固相支持物上，然后與標記的樣品雜交，通過對雜交信號的檢測分析，得出樣品的遺傳信息。該技術具有高通量，大規模，高度并行性，快速高效，高靈敏度等優點，不僅可以節約試劑和樣品，而且將節省大量的人力、物力和時間，使基因檢測更為快速、敏感和精確。基因芯片技術已被廣泛應用于病原微生物的檢測中，并發揮著巨大的作用。
人乳頭瘤病毒作為人類致病微生物嚴重威脅著人類的健康，目前已有100多種不同型別的HPV被鑒定，不同型別的HPV可導致不同的疾病。HPV感染已被流行病學和生物學證明是引起宮頸癌及其癌前病變的首要原因，對HPV進行檢測及分型是一種有效的、可靠的宮頸癌篩查手段。然而，傳統的HPV檢測方法主要是通過形態學和免疫組化法對其進行檢測，這些檢測方法的靈敏度和特異性均不夠理想，存在較高的假陽性率和假陰性率，且不能對HPV進行分型。常用的分型方法有PCR、原位雜交、線樣探針分析、等，它們存在易污染、假陽性率高、靈敏度不高、操作繁瑣、對混合感染難以判斷、價格昂貴等缺點，難以推廣應用。
目前尚無有關HPV檢測分型芯片的研究，我們將基因芯片技術應用于HPV的檢測及分型。本研究制備的HPV檢測及分型基因芯片是采用點樣法制作的低密度芯片，可以根據實際需要設計芯片探針數量。
1、人乳頭瘤病毒基因芯片，能一次檢測多種常見類型HPV，大大提高了HPV的檢測效率，縮短檢測時間。
2、HPV基因芯片檢測分型操作簡單，通過一次雜交檢測不僅可以判斷樣品中是否存在HPV感染，而且可以鑒別出屬于哪種型別的感染，便于臨床推廣應用。
3、HPV基因芯片針對性強，對樣品中的HPV-DNA直接進行檢測，可以檢測出HPV的潛伏期感染，克服了血清學和免疫組化檢測法對潛伏感染會產生漏檢的缺陷，從而實現對HPV疾病的早期快速診斷。
4、HPV基因芯片，敏感性高，特異性強。通過基因序列比對設計了HPV特異性寡核苷酸探針，同時在芯片上設計陽性對照、陰性對照和空白對照，對芯片的質量進行監控，排除假陽性、假陰性，使檢測結果更加可靠。
5、HPV基因芯片能同時檢測多種HPV型別，對多重HPV感染的判斷一目了然，克服了其它HPV檢測方法難以判斷混合感染或操作繁瑣的缺點。
6、檢測結果客觀性強，運用計算機軟件對雜交結果進行掃描分析和數據處理，大大降低了分析結果判斷過程中人為的主觀因素。
四、說明書附圖
圖1HPV基因芯片結構示意圖之一圖2HPV基因芯片結構示意圖之二圖3HPV基因芯片結構示意圖之三圖4HPV基因芯片結構示意圖之四圖5HPV基因芯片結構示意圖之五圖6HPV基因芯片結構示意圖之六圖7HPV基因芯片結構示意圖之七圖8HPV6感染陽性顯示掃描9HPV11感染陽性顯示掃描10HPV16感染陽性顯示掃描11HPV18感染陽性顯示掃描12HPV6，16混合感染陽性顯示掃描13HPV6，11混合感染陽性顯示掃描14HPV6，18混合感染陽性顯示掃描15HPV陰性顯示掃描圖五具體實施例方式實施例一參見圖3，圖中1為陽性顯示點樣，2為陰性顯示點樣，3為空白對照點樣，4為HPV通用性探針，5為HPV特異性探針，6為固相載體基片采用玻璃片，在本實施例中，有4條HPV特異性探針，分別是HPV6，HPV11，HPV16，HPV18。
一.HPV的基因芯片的制作方法如下1.將有關陽性、陰性對照顯示和人工合成的HPV通用探針和HPV特異性探針(TAKARA公司合成)溶于點樣液(上海博星基因芯片有限公司配制)，濃度為50μMMOL/L，取適量轉移至96孔板。
2.開機打開Prosys 5510A點樣儀(Cartesian Technologie公司)，真空泵與計算機電源連接。
3.準備將微孔板以及預處理玻片放入點樣儀的工作平臺，裝上點樣針，將真空裝置上不用的孔密封上。
4.打開軟件，點樣儀與電腦聯機。選擇編制好的程序，按“GO”開始打印。
1).清洗打印針，并干燥3次。
2).點樣針移到微孔板，浸入待打印的探針液中上樣。
3).點樣針移到預點樣玻片上，打印數個樣品點，直到打印的樣品點的大小均勻。
4).點樣針移到待點樣玻片上，根據所編制的微陣列設計，打印樣品點。
5).點樣針移到同一批待點玻片，繼續打印6).點樣針回到洗滌槽中清洗，抽真空吸去洗滌液7).載下一個樣品重復上述過程，直到打印完所有探針5.退出軟件，關機，超聲波清洗點樣針
6.將打印好的芯片水合30分鐘7.室溫干燥8.0.2％SDS洗10分鐘9.ddH2O洗10分鐘10.室溫干燥11.4℃度保存或立即使用。
二.芯片的使用操作(一)提取待檢組織標本DNA1.取新鮮組織標本約30mg，液氮研碎2.加DNA抽提液0.3ml(配制方法參照《分子克隆實驗指南》98版)，混勻；加蛋白酶K7.6ul，混勻3.60℃過夜4.95℃10min5.離心13000rpm 5min6.取上清，加0.3ml酚∶氯仿∶異戊醇(25∶24∶1)，混勻7.離心13000rpm 5min8.重復6.7步兩次9.取上清，加0.3ml氯仿∶異戊醇(24∶1)，混勻10.離心13000rpm 1min11.取上清，加1/10體積的PH5.2，3mmol/l的醋酸鈉溶液和2.5倍體積的預冷無水乙醇，混勻12.20℃ 30min13.離心13000rpm 15min14.棄上清，用70％乙醇1ml洗1次15.干燥，用50ul MilliQ水溶解16.4℃保存(二)待檢樣品的擴增與標記(避光操作)
1.取0.2mlEP管一只，在冰浴條件下向管中依次加入ddH2O17.1ul，10×Buffer2.5ul，dNTP2ul(2.5ummol/l)，帶熒光標記(CY5)的上游引物5’-CY5-GCHCARGGHCAHAAYAATGG-3’和下游引物5’-CY5-RCGWCCMARRGGRWAYTGATG-3’各1ul(10ummol/l)，(引物由上海生工生物工程公司合成，要求純度為PAGE級)，模板DNA1ul，Taq酶0.4ul(5U/ul)2.混勻后，放入PCREXPRESS 2400PCR儀(德HYBAID)進行擴增，反應條件為a)94℃3mini.94℃30secii.53℃30sec 35循環iii.72℃60secb)72℃5minc)4℃避光保存(三)雜交(避光操作)1.取0.2mlEP管，依次加入雜交液6ul，陽性對照5’-CY5-CTGTCCATGCACTGGACTCG-3’(10uM)1ul，標記產物5ul，混勻2.放入PCREXPRESS 2400PCR儀中于94℃下變性2.5min后，立即放入冰盒內防止復性，至少1分鐘3.將變性后的產物12ul點于芯片點樣區，蓋上蓋玻片，趕走氣泡，置于濕雜交盒內，在47℃下雜交60min4.用ddH2O沖掉蓋玻片，將芯片放入02.％SDS液中洗脫5分鐘后，用ddH2O沖洗干凈5.室溫干燥(四)掃描檢測將雜交后干燥的芯片插入GMS418 Array Scanner掃描儀(美AFFYMETRIX)中進行掃描，掃描圖片以Tiff格式保存利用實施例一生產的HPV基因芯片，對有關病人進行臨床檢測，獲得圖8至圖14的各種類型HPV感染與混合型感染的陽性顯示掃描圖。
圖8-圖14為HPV芯片檢測幾種HPV感染陽性顯示掃描圖，其中，圖8-圖11分別為HPV6，HPV11，HPV16，HPV18單純感染的檢測結果，而圖12-圖14分別為HPV6+HPV16，HPV6+HPV11，HPV6+HPV18混合感染的檢測結果。對于上述通過HPV基因芯片檢測結果病例，我又用DNA序列測定法對上述檢測結果進行驗證，兩者是吻合的。
圖8為HPV基因芯片檢測結果HPV6感染陽性顯示掃描圖。為驗證HPV基因芯片檢測結果的準確性，我們又采用HPV通用引物對圖8所對應樣品的PCR產物在3700測序儀(PE公司)上進行DNA序列測定，結果為ACTGGGGGACCTCACGCAGTACAAATATGACATAATGTGCTGCCATATTTACTTCAGAAACTACATATAAAAATACTAACTTTAAGGAGTACCTACGACATGGGGAGGAATATGATTTACAGTTTATTTTTCAACTGTGCAAAATAACCTTAACTGCAGACGTTATGACATACATACATTCTATGAATTCCACTATTTTGGAGGACTGGAATTTTGGTCTACAACCTCCCCCAGGAGGCACACTAGAAGATACTTATAGGTTTGTAACATCCCATGCAATTGCTTGTCAAAAACATACACCTTCAGCACCTAAAGGAAGATCCTTTAAAAAAATACACCTTTTTGGGGAAGTAAATTAAGGGAAAGGGTTTTTGCCACCTAGATCAAATTNNNGNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGNNNNNNNNNNNTNNNNNNNCNTNNNNNNNNNNNNAGTGGNNNNNNNNNNNNNNANNNNNNNNNNNNNNNTNNNATTTANGNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNTTTNNTTTTGTTTTTNNNNNNNNNNNNNNNAN，經過檢索GeneBank，也證實該樣品為HPV6感染，說明我們研制的HPV基因芯片是成功的。
圖9為HPV基因芯片檢測結果HPV11感染陽性顯示掃描圖。為驗證HPV基因芯片檢測結果的準確性，我們又采用HPV通用引物對圖9所對應樣品的PCR產物在3700測序儀(PE公司)上進行DNA序列測定，結果為CCACACGCAGTACCCAACATGACATTATGTGCATCCGTAACACATCTTCCACATACACCAATTCTGATTATAAAGAGTACATGCGTCATGTGGAAGAGTATGATTTACAATTTATTTTTCAATTATGTAGCATTACATTGTCTGCTGAAGTAATGGCCTATATTCACACAATGAATCCCTCTGTTTTGGAAGACTGGAACTTTGGGTTATCGCCTCCCCCAAATGGTACATTAGAAGATACCTATAGGTATGTGCAGTCACAGGCCATTACCTGTCAAAAGCCCACTCCTGAAAAGGAAAAGCCAGATCCCTATAAAAACCCTTAGTTTTTGGGAGGTTAATTTAAAAGAAAAGGTTTCTAGTGATTGGGGTCANTTNCGNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNTTTTTNNNNNNNNNNNNNN，經過檢索GeneBank，也證實該樣品為HPV11感染，說明我們研制的HPV基因芯片是成功的。
圖10為HPV基因芯片檢測結果HPV16感染陽性顯示掃描圖。為驗證HPV基因芯片檢測結果的準確性，我們又采用HPV通用引物對圖10所對應樣品的PCR產物在3700測序儀(PE公司)上進行DNA序列測定，結果為ATTTACTTCCCAAAAAGTGTATTTTTTAAGGGGATCTTCTTTAGGTGCTGGAGGTGTATGTTTTTGACAAGCAATTGCCTGGGATGTTACAAACCTATAAGTATCTTCTAGTGTGCCTCCTGGGGGAGGTTGTAGACCAAAATTCCAGTCCTCCAAAATAGTGGAATTCATAGAATGTATGTATGTCATAACGTCTGCAGTTAAGGTTATTTTGCACAGTTGAAAAATAAACTGTAAATCATATTCCTCCCCATGTCGTAGGTACTCCTTAAAGTTAGTATTTTTATATGTAGTTTCTGAAGTAGGATATGGCAGCACATAATGACATATTTTGTACTGCGTGTAGTATCAACAACAGTAACAAATAGTTGGTTACCCCAACAAATGCCATTNTTTGNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGNNNNNNTNNATNNNNGGATTGNNNNNNNNNNNTTNNCCTNNNTNTTTNTNNNN
NNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNTNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNTNNNNNNNNNNNNNTNNN，經過檢索GeneBank，也證實該樣品為HPV16感染，說明我們研制的HPV基因芯片是成功的。
圖11為HPV基因芯片檢測結果HPV18感染陽性顯示掃描圖。為驗證HPV基因芯片檢測結果的準確性，我們又采用HPV通用引物對圖11所對應樣品的PCR產物在3700測序儀(PE公司)上進行DNA序列測定，結果為ACCAAATTTAAGCAGTATAGCAGACATGTTGAGGAATATGATTTGCAGTTTATTTTTCAGTTGTGTACTATTACTTTAACTGCAGATGTTTTGTCCTATATTCATAGTATGAATAGCAGTATTTTAGAGGATTGGAACTTTGGTGTTCCCCCCCCGCCAACTACTAGTTTGGTGGATACATATCGTTTTGTACAATCTGTTGCTATTACCTGTCAAAAGGATGCTGCACCGGCTGAAAATAAGGATCCCTATGATAAGTTAAAGTTTTGGAATGTGGATTTAAAGGAAAAGTTTTCTTTAGACTTAGATCAATTCCCTCTTGGTCGTAATCACTAGTGCGGCCGCCTGCAGGTCGACCATATGGGAGAGCTCCCAACGCGTTGGATGCATAGCTTGAGTATTCTATAGTGTCACCTNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNN，經過檢索GeneBank，也證實該樣品為HPV18感染，說明我們研制的HPV基因芯片是成功的。
圖14為HPV基因芯片檢測結果HPV6和HPV18混合感染陽性顯示掃描圖。為驗證HPV基因芯片檢測結果的準確性，我們又采用HPV通用引物對圖14所對應樣品的PCR產物在3700測序儀(PE公司)上進行DNA序列測定，結果為ACTGGGGGACCTCACGCAGTACAAATATGACATAATGTGCTGCCATATTTACTTCAGAA
ACTACATATAAAAATACTAACTTTAAGGAGTACCTAGGACATGGGGAGGAATATGATTTACAGTTTATTTTTCAACTGTGCAAAATAACCTTAACTGCAGACGTTATGACATACATACATTCTATGAATTCCACTATTTTGGAGGACTGGAATTTTGGTCTACAACCTCCCCCAGGAGGCACACTAGAAGATACTTATAGGTTTGTAACATCCCATGCAATTGCTTGTCAAAAACATACACCTTCAGCACCTAAAGGAAGATCCTTTAAAAAAATACACCTTTTTGGGGAAGTAAATTAAGGGAAAGGGTTTTTGCCACCTAGATCAAATTNNNGNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNGNNNNNNNNNNNTNNNNNNNCNTNNNNNNNNNNNNAGTGGNNNNNNNNNNNNNNANNNNNNNNNNNNNNNTNNNATTTANGNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNNTTTNNTTTTGTTTTTNNNNNNNNNNNNNNNAN，經過檢索GeneBank，證實該樣品為HPV6感染。DNA測序結果與HPV基因芯片檢測結果有所不同，這是因為對于HPV混合感染，DNA序列測定法只能檢測出樣品中占優勢的HPV型別，不能顯示混合感染型別，這更說明了我們研制的HPV基因芯片檢測靈敏度更高，結果更可靠，能顯示出混合感染型別。說明我們研制的HPV基因芯片是成功的。
對照檢測結果表明，本實施例的HPV基因芯片的檢測結果準確，靈敏度高，檢測快速敏捷。
實施例二參見圖1，圖中編號與實施例一相同的代表意義相同，芯片的制作方法同實施例一相同，不重述。不同之處在于本實施例亞型特異性探針只有兩條，HPV16，HPV18。
實施例三參見圖2，圖中編號與實施例一相同的代表意義相同，芯片的制作方法同實施例一相同，不重述。不同之處在于本實施例亞型特異性探針只有兩條，HPV6，HPV11。
實施例四參見圖4，圖中編號與實施例一相同的代表意義相同，芯片的制作方法同實施例一相同，不重述。不同之處在于本實施例亞型特異性探針有8條，HPV6，HPV11，HPV31，HPV33，HPV35，HPV45，HPV16，HPV18。
實施例五參見圖5，圖中編號與實施例一相同的代表意義相同，芯片的制作方法同實施例一相同，不重述。不同之處在于本實施例亞型特異性探針有10條，HPV6，HPV11，HPV40，HPV42，HPV44，HPV31，HPV33，HPV45，HPV16，HPV18。
實施例六參見圖6，圖中編號與實施例一相同的代表意義相同，芯片的制作方法同實施例一相同，不重述。不同之處在于本實施例亞型特異性探針有11條，HPV39，HPV51，HPV52，HPV56，HPV58，HPV31，HPV33，HPV35，HPV45，HPV16，HPV18。
實施例七參見圖7，圖中編號與實施例一相同的代表意義相同，芯片的制作方法同實施例一相同，不重述。不同之處在于本實施例亞型特異性探針有28條，HPV6，HPV11，HPV13，HPV32，HPV34，HPV40，HPV41，HPV42，HPV44，HPV53，HPV54，HPV55，HPV74，HPV16，HPV18，HPV31，HPV33，HPV35，HPV38，HPV39，HPV45，HPV51，HPV52，HPV56，HPV58，HPV59，HPV66，HPV69。
權利要求
1.一種人乳頭瘤病毒(HPV)基因芯片，含有固相載體基片，在芯片上固化有監控顯示點樣，HPV檢測探針點樣，其特征是監控顯示點樣含有陽性對照顯示點樣，陰性對照顯示點樣，空白對照顯示點樣，HPV檢測探針包括HPV通用性探針和HPV各類型特異性探針。
2.根據權利要求1所述的HPV基因芯片，其特征是陽性對照顯示點樣是一任選的與HPV不同源的寡核苷酸片段，其序列為5’-NH2-T10-CGAGTCCAGTGCATGGACAG-3’，陰性對照顯示點樣為與HPV沒有同源性的一任選寡核苷酸片段，其序列為5’-NH2-TTAATTATTACAAGCGCAACAG-3’，空白對照顯示為不含任何基因的點樣，HPV通用探針是人工合成的一寡核苷酸片段，與HPV L1區內一段保守基因段完全互補，其序列為5’-NH2-T8-GTRYTNCGDGTDGTATCHACHACNGT-3’，各類型HPV特異性探針為人工合成的多條寡核苷酸片段，分別與該類型HPV L1區內特異性較高的一段基因片段互補。
3.根據權利要求1所述的HPV基因芯片，其特征是HPV特異性探針為
4.根據權利要求1所述的HPV基因芯片，其特征是HPV特異性探針為
5.根據權利要求1所述的HPV基因探針，其特征是HPV特異性探針為
6.根據權利要求1所述的HPV基因芯片，其特征是HPV特異性探針為
7.根據權利要求1所述的HPV基因芯片，其特征是HPV特異性探針為
8.根據權利要求1所述的HPV基因芯片，其特征是HPV特異性探針為
9.根據權利要求1所述的HPV基因芯片，其特征是HPV特異性探針為
10.根據權利要求1～9任一所述的HPV基因芯片，其特征是固相載體基片可為玻璃片，或硅片，或尼龍膜，或硝酸纖維膜，或凝膠，或雜交膜，陽性顯示點樣為每一排的第一列點樣，陰性顯示和空白顯示為最后兩排點樣，另外各排點樣依次為HPV通用探針，HPV特異性探針。
全文摘要
本發明涉及一種基因芯片，特別是涉及人乳頭瘤病毒HPV基因芯片。含有固相載體基片，監控顯示，檢測探針，監控顯示含有陽性對照顯示，陰性對照顯示，空白對照顯示，檢測探針包括人乳頭瘤病毒HPV通用性探針和HPV各類型特異性探針。該基因芯片具有高通量、高速高效、高靈敏度等優點，通過一次檢測即可判斷出待檢樣品中各種常見HPV類型的感染，可節約大量的人力、物力和時間，將廣泛應用于HPV病原微生物的檢測，為保證婦女的健康發揮巨大的作用。
文檔編號C12Q1/68GK1544654SQ20031011018
公開日2004年11月10日 申請日期2003年11月27日 優先權日2003年11月27日
發明者劉玉玲, 鄭英, 張振香, 趙虎, 譚麗 申請人:劉玉玲