專利名稱：一種海水弧菌培養基的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種用于海水弧菌培養的培養基，適用于生物工程中海水弧菌發酵等領域。
背景技術：
由于海水弧菌的營養要求較高，用于海水弧菌培養的培養基主要有胰大豆蛋白胨培養基(TSB)，2216E等，以前者胰大豆蛋白胨培養基的培養效果為佳，由胰蛋白胨17g/L、大豆蛋白胨3g/L、葡萄糖2.5g/L、磷酸氫二鉀2.5g/L、氯化鈉15g/L組成。由于此培養基中作為氮源的胰蛋白胨用量大，培養基制備成本相對較高，規模化培養的成本高。因此，對于提供一種成本較低的培養基用于海水弧菌的規模化培養是十分必要。
蛋白胨在微生物培養基中被廣泛使用，來源豐富，成本比胰蛋白胨低得多，用蛋白胨代替胰蛋白胨可明顯地降低培養基的制備成本。
發明內容
本發明的目的在于改進胰大豆蛋白胨培養基，降低海水弧菌的培養基制備成本，提高海水弧菌液體培養的生物得率。
本發明目的的技術方案是，以蛋白胨部分代替胰蛋白胨，添加少量酵母膏，提高葡萄糖和磷酸氫二鉀的組分含量。培養基配方為胰蛋白胨5g/L、蛋白胨15g/L、大豆蛋白胨3g/L、酵母膏1g/L、葡萄糖4g/L、磷酸氫二鉀5g/L、氯化鈉15g/L。
采用本發明所述的培養基具有以下明顯的特點與有益效果1、大大降低胰蛋白胨的使用量，降低了培養基制備成本，該培養基成本為胰大豆蛋白胨(TSB)培養基的70％；2、提高了海水弧菌培養的生物得率，該培養基培養海水弧菌的生物得率比胰大豆蛋白胨培養基(TSB)高30％以上；具體實施方式
以下通過實施例對本發明作進一步詳細說明。
實施例一胰大豆蛋白胨培養基組成的優化1、取胰蛋白胨20、17、14 g/L，大豆蛋白胨9、6、3g/L、葡萄糖7.5、5、2.5g/L，磷酸氫二鉀7.5、5、2.5g/L，4個因素，高、中、低3水平設計正交實驗；2、按表1(正交實驗要求)所列，以常規方法配制9種不同濃度的液體培養基，所有培養基pH7.5，氯化鈉為15g/L，水為自來水，分裝于250mL的三角瓶，每瓶50mL液體培養基，121℃，20分鐘滅菌；3、挑取海水弧菌哈維氏菌(Vibrio harveyi)菌株(EpGY020401)新鮮斜面種，接種已滅菌的胰大豆蛋白胨液體培養基(100mL/500mL三角瓶)中，28℃，180r/m，搖瓶培養16小時；4、將培養好的菌液以5mL/瓶接種于步驟2所配制的9種培養基中，28℃，180r/m，搖瓶培養24小時；5、將步驟4所培養好的菌液以平板計數的方法，測定菌液的活菌數，結果如表1所示，通過各種水平的極差計算，確定胰蛋白胨20g/L、大豆蛋白胨3g/L、葡萄糖5g/L、磷酸氫二鉀5g/L、氯化鈉15g/L為較優；表1胰大豆蛋白胨培養基成分優化正交實驗
0為平板計數時，在稀釋107倍的平板上沒有檢出菌落；
實施例二改進后胰大豆蛋白胨培養基同TSB培養基的培養效果比較1、分別配制實施例一所確定的培養基和TSB培養基，方法同實施例一；2、將兩種培養基接種海水弧菌(哈維氏菌EpGY020401菌株)，進行培養效果的比較，培養好的菌液以平板計數的方法，測定菌液的活菌數，方法同實施例一；3、如表2所示，改進后的TSB培養基的菌液活菌數可達2.88×1010cfu/mL，而原TSB培養基為1.61×1010cfu/mL，生物得率提高79％；表2TSB培養基同改良TSB培養基比較
實施例三降低改良培養基的原料成本實驗1、取胰蛋白胨+蛋白胨15+5、10+10、5+15g/L(即用蛋白胨代替部分胰蛋白胨)，大豆蛋白胨3、2、1g/L、葡萄糖4、3、2g/L，酵母膏3、2、1g/L(添加少量酵母膏)，4個因素，高、中、低3水平設計正交實驗；2、按表3-1、3-2(正交實驗要求)所列，以常規方法配制9種不同濃度的液體培養基，所有培養基磷酸氫二鉀5g/L，pH7.5，氯化鈉為15g/L，水為自來水，分裝于250mL的三角瓶，每瓶50mL液體培養基，121℃，20分鐘滅菌；3、分別挑取海水弧菌哈維氏菌菌株(EpGY020401)和溶藻弧菌(Vibrioalginoluticus)菌株(SpGY020601菌株)新鮮斜面種，接種已滅菌的胰大豆蛋白胨液體培養基(100mL/500mL三角瓶)中，28℃，180r/m，搖瓶培養16小時；4、將培養好的菌液以5mL/瓶接種于步驟2所配制的9種培養基中，28℃，180r/m，搖瓶培養24小時；5、將步驟4所培養好的菌液以平板計數的方法，測定菌液的活菌數，結果如表3-1、3-2所示，通過各種水平的極差計算，綜合兩次實驗結果，胰蛋白胨5g/L+蛋白胨15g/L、大豆蛋白胨3g/L、葡萄糖4g/L、酵母膏1g/L為較優；確定培養基的優化配比為胰蛋白胨5g/L、蛋白胨15g/L、大豆蛋白胨3g/L、酵母膏1g/L、葡萄糖4g/L、磷酸氫二鉀5g/L、氯化鈉15g/L、pH7.5。
表3-1培養基成分優化(溶藻弧菌SpGY020601菌株)
磷酸氫二鉀5g/L、氯化鈉15g/L，pH7.5。
表3-2培養基成分優化(哈維氏菌EpGY020401菌株)
磷酸氫二鉀5g/L、氯化鈉15g/L 15g/L，pH7.5。
實施例四改進后胰大豆蛋白胨培養基同TSB培養基的培養效果比較1、分別配制實施例三所確定的培養基和TSB培養基，方法同實施例一；優化培養基胰蛋白胨5g/L、蛋白胨15g/L、大豆蛋白胨3g/L、酵母膏1g/L、葡萄糖4g/L、磷酸氫二鉀5g/L、氯化鈉15g/L、pH7.5；TSB培養基胰蛋白胨17g/L、大豆蛋白胨3g/L、葡萄糖2.5g/L、磷酸氫二鉀2.5g/L、氯化鈉15g/L、pH7.5；2、兩種培養基接種海水弧菌(哈維氏菌EpGY020401菌株、溶藻弧菌SpGY020601菌株)，進行培養效果的比較，培養好的菌液以平板計數的方法，測定菌液的活菌數，方法同實施例一；3、如表4所示，改進后的培養基的菌液活菌數均比TSB培養基高，哈維氏菌EpGY020401菌株可達2.95×1010cfu/mL，比TSB培養基(2.28×1010cfu/mL)，生物得率提高29.4％；溶藻弧菌SpGY020601菌株可達2.71×1010cfu/mL，比TSB培養基(2.02×1010cfu/mL)，生物得率提高34.2％；表4優化培養基同TSB培養基比較
權利要求
1.一種海水弧菌的液體培養基，主要成分組成為胰蛋白胨、蛋白胨、大豆蛋白胨、葡萄糖、磷酸氫二鉀、氯化鈉，其特征在于以蛋白胨部分代替胰蛋白胨。
2.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于胰蛋白胨5g/L、蛋白胨15g/L。
3.根據權利要求1所述的培養基，其特征在于添加少量酵母膏促進海水弧菌的快速生長。
4.根據權利要求1至3所述的培養基，其特征在于葡萄糖含量為4g/L、磷酸氫二鉀含量為5g/L。
全文摘要
本發明涉及一種用于海水弧菌培養的培養基，它是以胰蛋白胨、蛋白胨、大豆蛋白胨、酵母膏、氯化納、葡萄糖、磷酸氫二鉀和水以一定的比例配制而成的溶液，該培養基不僅具有胰蛋白胨用量少的特點，而且能促進海水弧菌的快速生長和增殖，效果明顯，適用于生物工程中海水弧菌發酵等領域。
文檔編號C12N1/20GK1590534SQ20031011186
公開日2005年3月9日 申請日期2003年10月22日 優先權日2003年10月22日
發明者陶家發, 吳淑勤, 潘厚軍, 石存斌 申請人:中國水產科學研究院珠江水產研究所