專利名稱：：一種打破苜蓿種子硬實休眠的方法
技術領域：
：本發明屬于農業畜牧領域，涉及苜蓿種子生產方法，具體涉及一種打破苜蓿種子硬實休眠的方法。
背景技術：
：苜蓿(iW—^fcagoL.)，豆目，蝶形花科，苜蓿屬，廣泛分布于歐洲、亞洲、美洲和非洲，全世界共有60多種，我國有16種，分布頗廣，野生和栽培均有。苜蓿是世界上栽培最早、種植最廣的多年生牧草，經"絲綢之路"傳入我國之后，栽培己有2000多年的歷史，其種植范圍西到新疆，北至黑龍江，南到江蘇長江中下游地區，甚至在世界屋脊青藏高原也有種植。苜蓿以"牧草之王"著稱，不僅產量高，而且草質優良，各種畜禽均喜食。隨著商品經濟的發展，近年來苜蓿產業化規模發展較快，苜蓿的種植面積正在擴大。特別是在我國農業結構調整政策、退耕還林還草工程和奶業為首的畜牧業大發展的帶動下，各地牧草種子需求量也因此穩步上升；但是，由于我國在牧草種子生產理論和關鍵技術研究上的投入較少，種子生產水平普遍較低，牧草種子產業技術基礎薄弱在國內生產無法滿足市場需求。同時，由于國內草種市場前景看好，國內不少企業也已開始涉足草種業，紫花苜蓿等牧草種子生產很有可能成為未來幾年我國農業領域內新的經濟增長點。但是，苜蓿種子具有硬實性休眠，新鮮苜蓿種子硬實性休眠約在10-30%之間，影響了苜蓿種子生產田建植的出苗率，特別是包衣苜蓿種子。目前我國對打破苜蓿種子硬實休眠的研究尚處于起步階段，采用微生物方法打破苜蓿種子硬實休眠的研究未見報道。經對現有技術的文獻檢索發現，對打破蝶形花科牧草種子硬實的常用方法有陽光暴曬，熱水浸泡、物理碾磨、藥劑處理(濃硫酸或鉬酸銨浸種)等。但是，采用以上方法打破蝶形花科牧草種子硬實休眠，對于不同種、品種、不同成熟度和保存不同年限的種子，處理時間(陽光暴曬)、處理溫度和濃度(熱水浸泡、藥劑處理)以及處理壓力(物理碾磨)等差異均很大，不易掌控，同時化學方法對種子還有危害性；生產實踐中處理效果往往不盡人意;由于苜蓿種子較小，對于打破苜蓿種子的硬實休眠，目前還沒有理想的解決方法。
發明內容針對上述
背景技術：
中打破苜蓿種子硬實休眠方法存在的不足和缺陷，本發明的目的在于，提供一種打破苜蓿種子硬實休眠的方法，該方法采用接種青霉、米曲霉或者綠色木霉，或者上述菌種的組合處理苜蓿種子，徹底解決了打破苜蓿種子硬實休眠方法的關鍵，能夠提高其種子的發芽率和出苗率；所使用的微生物霉菌，可制成苜蓿種子包衣劑或拌種菌劑，直接用于生產實踐中，減少了播種前的一些打破種子硬實的環節，節省了人力物力，而且生產成本低，效益大，使用方便，在我國退化草地的植被恢復，生態建設和草地畜牧業生產中有很好的市場前景。本發明是通過以下技術方案實現的一種打破苜蓿種子硬實休眠的方法，其特征在于，包括下列步驟步驟一，羧甲基纖維素培養基配制取按以下原料按重量比配制培養基:羧甲基纖維素酵母膏:MgS(V7恥K跳:瓊脂蒸餾水=30:2:1:2:30:2000;將羧甲基纖維素、酵母膏、MgS(V7H20、KH2P(U衣次溶于蒸餾水中，邊加邊搖勻，12rC滅菌15分鐘，待培養基冷凝后，待用；步驟二，接種霉菌在上述羧甲基纖維素培養基上接種霉菌，所述的霉菌為綠色木霉Wc力oote27a37_z'r_z.ofe、青霉尸e//cj77iiffl7或者米曲霉Aspei^7JiAsar7zse其中之一，或者上述菌種的兩兩混合、或者上述菌種的三者混合；于25。C3(TC條件下培養27天，以霉菌生長充分為度。步驟三，處理苜蓿種子(a)、將苜蓿種子用70-75%酒精浸種510分鐘消毒，用無菌水洗滌23次；(b)待培養基上長滿微生物時，在其中撒入苜蓿種子，密度以每平方厘米2832粒，于25'C3(TC條件下保持2496小時即可。本發明帶來的技術效果是采用霉菌綠色木霉、青霉或者米曲霉中任何單一菌種，或三者中兩兩混合、或者三者混合的菌種處理苜蓿種子，都能有效地打破了苜蓿種子硬實休眠，提高發芽率1030%;上述3個霉菌的菌種或其混合菌易于獲得和培養，且成本低廉，制成苜蓿種子包衣劑或拌種菌劑，在苜蓿種子生產實踐中有較大市場前景。圖1是本發明的技術流程以下結合附圖和發明人給出的實施例對本發明作進一步的詳細說明。具體實施方式依照本發明的技術方案，申請人提供以下實施例本發明的打破苜蓿種子硬實休眠的方法，具體步驟流程參見圖1。步驟一，羧甲基纖維素培養基配制取按以下原料按重量比配制培養基羧甲基纖維素酵母膏MgS(V7H20:KH2P04:瓊脂蒸餾水=30:2:1:2:30:2000;將羧甲基纖維素、酵母膏、MgS(V7H力、Kiy^依次溶于蒸餾水中，邊5加邊搖勻，12rc滅菌i5分鐘，待培養基冷凝后，待用；步驟二，接種霉菌在上述羧甲基纖維素培養基上接種霉菌，所述的霉菌為綠色木霉71rj'c/oc/er鵬pa'"'ote、青霉尸e/7j'"7力.風米曲霉爿spe2^777i;5"orjzae其中之一，或者上述菌種的兩兩混合、或者上述菌種的三者混合；于25°C3(TC條件下培養27天，以霉菌生長充分為度。上述綠色木霉ric力oofejyi7akj'2^/e、青霉尸e/7^^'7h'"7z7或者米曲霉A9/^/^77m02rzse是本領域公知的霉菌，可以從土壤溶液中分離與純化培養。綠色木霉廣泛存在于各種有機物質和土壤中，常以分生孢子的形式漂浮在空氣中，青霉(Pe/7/c/7//L/m)為分布很廣的半知菌綱中的一屬，青霉通常在柑桔及其他水果上，冷藏的干酪及被它們的孢子污染的其他食物上均可找到，其分生孢子在土壤內，空氣中及腐爛的物質上到處存在，從土壤或空氣中很易分離，是一類雜食性真菌，可生長在任何含有機物的基質上。米曲霉通常用于釀造。經申請人的研究小組證明，在有纖維素誘導的情況下，綠色木霉、青霉、米曲霉可以消化纖維素，其分泌的纖維素酶對苜蓿種子種皮有降解消化作用。步驟三，處理苜蓿種子(a)、將苜蓿種子用70-75%酒精浸種510分鐘消毒，用無菌水洗滌23次；(b)待培養基上長滿微生物時，在其中撒入苜蓿種子，密度以每平方厘米2832粒，于25'C30'C條件下保持2496小時即可。以下是發明人給出的具體實施例實施例一，采用青霉處理步驟1、按照比例配制羧甲基纖維素培養基羧甲基纖維素(g):酵母膏(g):MgS04*7H20(g):KH2P04(g):瓊脂(g):蒸餾水(ml)=30:2:1:2:30:2000。各成分依次溶于蒸餾水中，邊加邊搖勻，12rC滅菌15分鐘，待培養基冷凝后，待用。步驟2、在上述羧甲基纖維素培養基上接種青霉(&m'"7",)菌種(由西北農林科技大學生命科學學院微生物實驗室菌種保藏室提供)；對照組接無菌水；于25-C30'C培養25天，以生長充分為度。步驟3、當年收獲的新鮮苜蓿種子(產自甘肅酒泉，品種為甘農3號)，用70-75%酒精浸種510分鐘消毒，用無菌水洗滌23次；待培養基(對照組除外)上長滿微生物時，撒入苜蓿種子，同時也撒入對照組(未接種任何菌種)，密度為每平方厘米2832粒；于26-C保持72小時，然后隨機取出種子200粒，用無菌水洗滌l-3次，分4組重復，每組50粒；同時從對照組(未接種任何菌種，只將種子按照同樣密度撒在羧甲基纖維素培養基上，和接種菌的苜蓿種子采取同樣的保持和洗滌處理)隨機取出種子200粒，用無菌水洗滌l-3次，分4組重復，每組50粒，按照GB/T2930.4—2001牧草種子檢驗規程，同時進行發芽對比試驗，結果如下表l。表1采用青霉處理打破苜蓿種子硬實休眠的發芽結果<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table>從表1看出，采用青霉處理打破苜蓿種子硬實休眠，標準發芽率達到93%，比對照組(未接任何菌種)提高20%，差異達極顯著水平。實施例二，采用米曲霉處理步驟1、按照比例配制羧甲基纖維素培養基羧甲基纖維素(g):酵母膏(g):MgSOWH20(g):KH2P04(g):瓊脂(g):蒸餾水(ml)=30:2:1:2:30:2000。各成分依次溶于蒸餾水中，邊加邊搖勻，12rC滅菌15分鐘，待培養基冷凝后，待用。步驟2、接種米曲霉菌種(由西北農林科技大學生命科學學院微生物實驗室菌種保藏室提供)；對照組接無菌水；于25"C30'C培養37天，以生長充分為度。步驟3、當年收獲的新鮮苜蓿種子(產自甘肅酒泉，品種為甘農3號)，用70-75%酒精浸種510分鐘消毒，用無菌水洗滌23次；待培養基(對照組除外)上長滿微生物時，撒入苜蓿種子，同時也撒入對照組(未接種任何菌種)，密度為每平方厘米2832粒；于28t:保持24小時，然后隨機取出種子200粒，用無菌水洗滌l-3次，分4組重復，每組50粒，同時從對照組(未接種任何菌種，只將種子按照同樣密度撒在羧甲基纖維素培養基上，和接種菌的苜蓿種子采取同樣的保持和洗滌處理)隨機取出種子200粒，用無菌水洗滌l-3次，分4組重復，每組50粒，按照GB/T2930.4—2001牧草種子檢驗規程，同時進行發芽對比試驗，結果如下表2。表2采用米曲霉處理打破苜蓿種子硬實休眠的發芽結果<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>從表2看出，采用米曲霉處理打破苜蓿種子硬實休眠，標準發芽率達到97%，比對照組(未接任何菌種)提高28%，差異達極顯著水平。實施例三，采用青霉+綠色木霉處理步驟1、按照比例配制羧基纖維素培養基羧甲基纖維素(g):酵母膏(g):MgS04'7H20(g):KH2P04(g):瓊脂(g):蒸餾水(ml)=30:2:1:2:30:2000。各成分依次溶于蒸餾水中，邊加邊搖勻，121'C滅菌15分鐘，待培養基冷凝后，待用。步驟2、接種青霉Pem'cz7/Zwm+綠色木霉7Hc/2ocfermflvzWofe(由西北農林科技大學生命科學學院微生物實驗室菌種保藏室提供)，按l:1比例；對照組接無菌水；于25'C3(TC培養27天，以生長充分為度。步驟3、當年收獲的新鮮苜蓿種子(產自甘肅酒泉，品種為甘農3號)，用70-75%酒精浸種510分鐘消毒，用無菌水洗滌23次；待培養基(對照組除外)上長滿微生物時，撒入苜蓿種子，同時也撒入對照組(未接種任何菌種)，密度為每平方厘米2832粒；于30'C保持24小時，然后隨機取出種子200粒，用無菌水洗滌l-3次，分4組重復，每組50粒，同時從對照組(未接種任何菌種，只將種子按照同樣密度撒在培養基上，和接種菌的苜蓿種子采取同樣的保持和洗滌處理)隨機取出種子200粒，用無菌水洗滌1-3次，分4組重復，每組50粒，按照GB/T2930.4—2001牧草種子檢驗規程，同時進行發芽對比試驗，結果如下表3。表3采用青霉和綠色木霉處理打破苜蓿種子硬實休眠的發芽結果<table>tableseeoriginaldocumentpage9</column></row><table>從表3看出，采用青霉和綠色木霉組合處理，打破苜蓿種子硬實休眠，標準發芽率達到95%，比對照組(未接任何菌種)提高25%，差異達極顯著水平。以上為本發明的最佳實施例，本發明不限于上述實施例，依據本發明公開的內容，本領域的技術人員應當意識到在不脫離本發明技術方案所給出的技術特征和范圍的情況下，對技術特征所作的增加、或以本領域一些同樣內容的替換，均應屬本發明的保護范圍。權利要求1.一種打破苜蓿種子硬實休眠的方法，其特征在于，包括下列步驟步驟一，羧甲基纖維素培養基配制取按以下原料按重量比配制培養基羧甲基纖維素∶酵母膏∶MgSO4·7H2O∶KH2PO4∶瓊脂∶蒸餾水＝30∶2∶1∶2∶30∶2000；將羧甲基纖維素、酵母膏、MgSO4·7H2O、KH2PO4依次溶于蒸餾水中，邊加邊搖勻，121℃滅菌15分鐘，待培養基冷凝后，待用；步驟二，接種霉菌在上述羧甲基纖維素培養基上接種霉菌，所述的霉菌為綠色木霉Trichodermaviride、青霉Penicillium、米曲霉Aspergillusoryzae其中之一，或者上述菌種的兩兩混合、或者上述菌種的三者混合；于25℃～30℃條件下培養2～7天，以霉菌生長充分為度。步驟三，處理苜蓿種子(a)、將苜蓿種子用70-75％酒精浸種5～10分鐘消毒，用無菌水洗滌2～3次；(b)待培養基上長滿微生物時，在其中撒入苜蓿種子，密度以每平方厘米28～32粒，于25℃～30℃條件下保持24～96小時即可。全文摘要本發明公開了一種打破苜蓿種子硬實休眠的方法，該方法采用接種青霉、米曲霉或者綠色木霉，或者上述菌種的組合處理苜蓿種子，徹底解決了打破苜蓿種子硬實休眠方法的關鍵，能夠提高其種子的發芽率和出苗率；所使用的微生物霉菌，可制成苜蓿種子包衣劑或拌種菌劑，直接用于生產實踐中，減少了播種前的一些打破種子硬實的環節，節省了人力物力，而且生產成本低，效益大，使用方便，在我國退化草地的植被恢復，生態建設和草地畜牧業生產中有很好的市場前景。文檔編號C12R1/80GK101288359SQ200810017529公開日2008年10月22日申請日期2008年2月20日優先權日2008年2月20日發明者吳春會,健崔,王佺珍,苗彥軍,邊巴卓瑪,韓建國申請人:西北農林科技大學