專利名稱：低溫酶解牡蠣提取多肽的方法
技術領域：
本發明涉及一種活性多肽的提取方法，特別涉及在低溫條件下酶解提取牡蠣活性多肽的方法。
背景技術：
當前海洋生物活性物質的研究是開發海洋生物資源的一個熱點，海洋生物的多樣 性和特異性，為人類提供了種類繁多、生理活性特異的海洋生物天然產物，它是藥物、保健 品、食品、生物材料的巨大寶庫。我國是牡蠣養殖的大國，牡蠣產量占養貝類的40%左右，資 源極為豐富。然而，隨著牡蠣養殖技術的快速發展，牡蠣產業已出現供過于求和價格下跌趨 勢，實現牡蠣高值化利用是牡蠣養殖業健康持續發展的先決條件之一。牡蠣作為一味珍貴的補品，在我國已有二千多年的食用歷史，俗稱礪黃、礪子、海 礪等，是一種肉嫩味鮮營養價值極高的海產食品，素有“海底牛奶”之美稱，是一種重要的海 洋經濟貝類。牡蠣除食用外，也是一種傳統醫學中的藥材，祖國傳統醫學認為牡蠣具有“復 脈固脫，補腎益脾，生津，安神”的作用，在我國醫藥史籍中，如《湯液本草》、《傷寒論》、《本草 拾遺》、《本草綱目》均有牡蠣作為藥用的記載。牡蠣含有豐富的維生素及礦物質，特別是硒、 鋅等微量元素；富含的優質蛋白質，具有良好的營養保健功能。牡蠣含又大量的營養活性物 質，以牡蠣為主要原料，加工制取富含生物活性肽、活性多糖、優質蛋白質、氨基酸及多種維 生素、礦物質等營養成分的海洋保健功能制品，具有誘人的發展前景。近年來，美國、歐洲、 日本等采用現代生物技術及食品加工高新技術研制生產成了膠囊劑、片劑等多種劑型的功 能食品。在日本，牡蠣功能食品和療效品達70多種，年產值在200億日元以上。目前國內 對于牡蠣食用還是以清蒸、鮮炸、生灼等加工方法為主進行食用，牡蠣還可進行初加工，主 要采用曬干、鹽漬、制罐等方法，以牡蠣為原料的最普遍產品是蠔油，雖有采用現代酶技術 生產蠔油，但目前國內生產蠔油還主要是采用傳統提取濃縮方法，相對技術含量低，不能達 到實現牡蠣高值化利用牡蠣的目的。研究表明，蛋白質在人體消化中必須降解成小肽才能被人體吸收和利用。大部分 水解成2 3個氨基酸殘基組成的小肽，然后在小腸中以完整的形式被人體吸收，進入循環 系統，被人體組織利用，或轉換合成人體蛋白，發揮生理作用。肽的吸收機制與氨基酸完全 不同，它是一個H+濃度或Ca2+離子濃度電導而進行的消耗能量的轉運過程，它完全不同于 腸細胞游離氨基酸的主動運轉。1995年科學家在動物的小腸刷狀緣上發現小肽的運轉系 統，這說明人體吸收蛋白質主要是小肽的形式吸收，而不是主要以氨基酸形式吸收。近十年 來，科學家還發現，小分子活性多肽運轉系統具有耗能低而不易飽和的特點。人體對肽中氨 基酸殘基組成的小腸的吸收速度大于對氨基酸的吸收速度。大量試驗證明這就是小肽與 氨基酸的吸收機制的不同之處。動物對腸道中氨基酸殘基組成的小肽的吸收比游離氨基酸 的吸收更迅速更有效。動物試驗表明，動物對酪蛋白、白蛋白在溶酶菌作用下的水解產物和 乳清蛋白在膚酶作用下的水解物小肽吸收率都高于相應游離氨基酸的混合物。試驗表明動 物對蛋白酶酶解產物氨基酸殘基吸收強度比相應的氨基酸高70% 80%。在對動物十二指腸中注入小分子肽的試驗中發現，除蛋氨酸外，它出現在肝門靜脈的氨基酸都比灌注相應游離氨基酸混合物的時間要早，吸收峰更高。肽載體吸收能力高于各種載體吸收能力的 總和，小分子肽迅速被吸收的原因除了肽吸收本身的機制外，另一方面小肽本身對氨基酸 或氨基酸殘基的吸收有促進作用。研究表明小肽為底物時，腸腔刷狀緣膜的氨肽酶活性增 力口，二肽酶和氨基酸載體的活性和數目有所增加。研究表明，存在于空腸中酪蛋白的水解物 (酪內啡肽)能使L-亮氨酸進入腸細胞的動力學常數增大。肽載體存在可減少單個氨基酸 在吸收上的競爭，從而降低氨基酸間的頡頑作用。當粒氨酸與精氨酸以游離形式存在時，兩 者相互競爭吸收位點，游離精氨酸有降低肝門靜脈粒氨酸水解的傾向，而精氨酸以肽形式 存在時則對其吸收無影響。這一點也可以用肽和游離氨基酸吸收機制不同而得到解釋。小 肽和游離氨基酸的不同吸收特點一是小肽與游離氨基酸的吸收是相互獨立的完全不同的 機制。二是肽中氨基酸殘基吸收速度大于等量游離氨基酸吸收速度。三是肽吸收可避免氨 基酸之間的吸收競爭。有關小肽的上述吸收特點能使底物對不同生理狀態日糧變化具有較 大的適應性。同時也能說明小肽吸收機制的潛在營養作用巨大。所以將牡蠣蛋白水解成小 分子多肽而又不失去生物活性是非常又必要的。大量相關文獻表明，牡蠣蛋白的水解溫度一般為40 60°C范圍，在此溫度范圍內 酶的生理活性最強，但小分子的多肽在此溫度范圍內容易失去其生物活性。因此如何能夠 最達限度地水解牡蠣蛋白而又不影響水解產物小肽的生物活性就是一項非常重要的有實 用意義的工作。
發明內容
本發明的目的在于提供一種實用、可行的在低溫條件下提取牡蠣蛋白的方法，該 方法能有效地將我國豐富的牡蠣資源進行深加工，將牡蠣蛋白水解成更利于人體吸收并具 有一定生物活性的小肽，開拓其在醫藥、保健品、化妝品等方面的應用，實現牡蠣高值化利 用的目的。為了實現上述目的，本發明的技術解決方案是本發明是一種低溫酶解牡蠣提取多肽的方法，它包括一下步驟(1)牡蠣混合液的制備將經過清洗處理的牡蠣加入純凈水，用膠體磨進行粗粉 碎，得牡蠣混合液；(2)、低溫酶解將牡蠣混合液加入蛋白酶，調節PH7. 0，保持一定溫度件，反復水 解多次，收集濾液；(3)殘渣提取將酶解后的牡蠣殘渣加入乙醇在低溫條件浸提，收集濾液；(4)提取液濃縮將兩次提取液合并放入真空罐中進行真空濃縮，得到多肽提取 濃縮液。所述的蛋白酶為0. 3 0. 8%濃度的胰蛋白酶溶液。所述酶解溫度為4 10°C。所述酶解提取次數為提取24次，每次20 40分鐘。所述殘渣提取溫度為4 10°C。所述乙醇為60 80%食用級酒精。所述殘渣浸提時間為24 48小時。
所述多肽提取濃縮液多肽含量約5 %。采用上述方案后，由于本發明中采用的酶解溫度為低溫條件，能夠最大限度地水 解牡蠣蛋白成小分子的多肽，而又不影響小肽的生物活性；殘渣再次浸提，能夠更充分地提 取牡蠣蛋白中的活性物質。因而，本發明是酶解牡蠣蛋白的一種科學而有效方法。
具體實施例方式實施例1 取牡蠣可食用部分20kg，加入4倍體積的純凈水，初混合后過膠體磨 進行初破碎成混懸液。向混懸液中加入胰蛋白酶使終濃度0. 5%，調節PH 7. 0，保持溫度 在4°C條件下水解，反復提取3次，每次20分鐘，過濾，合并各次提取液Ia，向殘渣中加入 2倍體積70%乙醇10°C浸提24小時，過濾，收集醇提取液Ib，棄渣，合并提取液Ia和提取 液Ib，放入真空濃縮罐中進行真空濃縮，控制濃縮條件為40°C 70°C，真空度0. OSmpa 0. 09mpa，得提取濃縮液I，其固形物為58. 0%，多肽5. 2%。實施例2 取牡蠣可食用部分20kg，加入4倍體積的純凈水，初混合后過膠體磨 進行初破碎成混懸液。向混懸液中加入胰蛋白酶使終濃度0. 5%，調節PH 7. 0，保持溫度 在10°C條件下水解，反復提取3次，每次20分鐘，過濾，合并各次提取液Ia，向殘渣中加入 2倍體積70%乙醇10°C浸提24小時，過濾，收集醇提取液Ib，棄渣，合并提取液Ia和提取 液Ib，放入真空濃縮罐中進行真空濃縮，控制濃縮條件為40°C 70°C，真空度0. OSmpa 0. 09mpa，得提取濃縮液I，其固形物為56.0%，多肽5. 1%.實施例3 取牡蠣可食用部分20kg，加入4倍體積的純凈水，初混合后過膠體磨 進行初破碎成混懸液。向混懸液中加入胰蛋白酶使終濃度0. 5%，調節PH 7. 0，保持溫度 在10°C條件下水解，反復提取3次，每次40分鐘，過濾，合并各次提取液Ia，向殘渣中加入 2倍體積70%乙醇10°C浸提24小時，過濾，收集醇提取液Ib，棄渣，合并提取液Ia和提取 液Ib，放入真空濃縮罐中進行真空濃縮，控制濃縮條件為40°C 70°C，真空度0. OSmpa 0. 09mpa，得提取濃縮液I，其固形物為56. 0%，多肽5. 3%。實施例4 取牡蠣可食用部分20kg，加入4倍體積的純凈水，初混合后過膠體磨 進行初破碎成混懸液。向混懸液中加入胰蛋白酶使終濃度0. 5%，調節PH 7. 0，保持溫度 在10°C條件下水解，反復提取3次，每次30分鐘，過濾，合并各次提取液Ia，向殘渣中加入 2倍體積70%乙醇10°C浸提24小時，過濾，收集醇提取液Ib，棄渣，合并提取液Ia和提取 液Ib，放入真空濃縮罐中進行真空濃縮，控制濃縮條件為40°C 70°C，真空度0. OSmpa 0. 09mpa，得提取濃縮液I，其固形物為56. 0%，多肽5. 0%。本發明原理牡蠣蛋白酶解經胰蛋白酶在低溫條件下水解成小分子多肽，水解產物殘渣再次經乙醇在低溫條件下浸提，合并兩次提取液，經真空濃縮后得到含又一定活性的小分子肽。
權利要求
一種低溫酶解牡蠣提取多肽的方法，其特征在于它包括以下步驟，(1)、牡蠣混合液的制備將經過清洗處理的牡蠣加入純凈水，用膠體磨進行粗粉碎，得牡蠣混合液；(2)、低溫酶解將牡蠣混合液加入蛋白酶，調節PH7.0，保持一定溫度件，反復水解多次，收集濾液；(3)殘渣提取將酶解后的牡蠣殘渣加入乙醇在低溫條件浸提，收集濾液；(4)提取液濃縮將兩次提取液合并放入真空罐中進行真空濃縮，得到多肽提取濃縮液。
2.根據權利要求1所述的低溫酶解牡蠣提取多肽的方法，其特征在于所述的蛋白酶 為0.3 0. 8%濃度的胰蛋白酶溶液。
3.根據權利要求1所述的低溫酶解牡蠣提取多肽的方法，其特征在于所述酶解溫度 為4 10°C。
4.根據權利要求1所述的低溫酶解牡蠣提取多肽的方法，其特征在于所述酶解提取 次數為提取2 4次，每次20 40分鐘。
5.根據權利要求1所述的低溫酶解牡蠣提取多肽的方法，其特征在于所述殘渣提取 溫度為4 10°C。
6.根據權利要求1所述的低溫酶解牡蠣提取多肽的方法，其特征在于所述乙醇為 60 80%食用級酒精。
7.根據權利要求1所述的低溫酶解牡蠣提取多肽的方法，其特征在于所述殘渣浸提 時間為24 48小時。
8.根據權利要求1所述的低溫酶解牡蠣提取多肽的方法，其特征在于所述多肽提取 濃縮液多肽含量約5%。
全文摘要
本發明公開了一種低溫條件下酶解牡蠣提取多肽的方法，是以鮮活牡蠣可食用部分為原料，在低溫條件下，用胰蛋白酶進行酶解，濾渣用在低溫下再次提取，合并兩次濾液，真空濃縮得到含有多肽的濃縮液。該方法解決了在高溫條件下酶解蛋白質易使產物小分子多肽失活的問題，拓寬了牡蠣在保健食品中的應用范圍。
文檔編號A23L1/33GK101836746SQ20091003791
公開日2010年9月22日 申請日期2009年3月16日 優先權日2009年3月16日
發明者任政華, 盧煉鋼, 周靖宇, 徐安龍, 梁東 申請人:廣東中大南海海洋生物技術工程中心有限公司