一種豬舍發酵床復合微生物菌劑及其制備方法

專利名稱：一種豬舍發酵床復合微生物菌劑及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種復合微生物菌劑，特別涉及一種用于豬舍發酵床的復合微生物菌劑。本
發明還涉及這種復合微生物菌劑的制備方法。背景技術：
我國養殖規模和產值每年的遞增速度超過10%，但與此同時，由養殖業帶來的環境污染越來越嚴重。現階段農村、農業以存在著以家庭分散式為主的經濟組織與經營方式，雖然規模化養殖是養殖業的發展方向，但在相當長時間內，家庭或小型分散式養殖的方式不會根本改變，同時，由于小型或分散養殖方式，其污染防治的管理面廣量大，由此造成的糞便污染問題比規模養殆場更為嚴重與突出。國家環保總局在全國23個省市進行的調查發現，全國的90%規模化畜禽養殖場未經過環境影響評價，60%的養殖場缺乏必要的污染防治措施。未經處理的畜禽糞便任意堆積，污水糞便隨意排放，從而帶來一系列的環境問題如占用和污染農ffl、水體，產生惡臭和造成生物污染。因此，如何合理處置與利用畜禽糞便，是全社會必需面對的一個重大問題。
發酵床養豬法的原理是利用發酵床中各種微生物進行自然生物發酵；通過微生物耗氧發酵分解豬的糞尿，避免臭味、異味的產生；再通過微生物厭氧發酵產生豬可食用的菌體蛋白飼料和益生菌活菌體，既給豬提供了大量的高營養飼料，促進了豬對飼料的消化吸收，又增強了豬的抗病能力。目前國內發酵床養豬使用的菌劑大多是手工作方式采集的，并通過自然培養的方式進行增值，缺乏科學有效的調控手段，產品的質量無法保證。
我國目前已有一些單位相繼推出不同組合的發酵床養豬用復合微生物制劑，但普遍的問
題是在復合微生物篩選培養過程中，缺乏基本的理論指導以及成熟的生產工藝，對復合培養
的發酵過程及其個菌群之間的互相作用及其機理較為生疏，導致產品活菌總數不能保持一定
水平，產品質量不穩定，影響了其在使用過程中的效果。本發明的復合菌劑能夠較好地解決
不同微生物之間的協同、共生關系，從而保證穩定的作用效果。
發明內容
本發明目的在于提供一種能夠快速分解豬的糞尿，避免臭味、異味的產生并能產生大量益生菌菌體蛋白的復合菌劑。本發明的目的還在于提供一種豬舍發酵床復合微生物菌劑的制備方法。
本發明的目的是這樣實現的本發明中所涉及的百分比除另有注明之外為質量比，本發明的產品采用這樣的方法來制備的
1.發酵菌株的選擇及培養基的制備
3A菌——枯草芽孢桿菌(CICC 10088)，培養基為牛肉浸液1000毫升蛋白胨10克，氯化鈉—5克，PH 7. 2 7. 4。
B菌——植物乳桿菌(CICC 6026)，培養基為5。 B6麥芽汁中加入酵母膏0. 5，無菌碳酸鈣O. 6。
C菌——產朊假絲酵母(CICC 31170)，培養基為5。 B6麥芽汁。D菌——白地霉 (CICC 1315)，培養基為5° B6麥芽汁。E菌——米曲霉(CICC 2011)，.培養基為5。 B6米曲汁。2.復合菌劑的制備過程2. 1凍干菌粉末的活化
分別量取0. 9%的生理鹽水10ml于5只試管內，經12rC滅菌20分鐘冷卻至30°C ，將5株菌安瓶內的凍干菌粉末在無菌狀態下分別倒入0.9%的生理鹽水中，震蕩使其溶解，在30。C恒溫箱中靜止活化30分鐘，備用。
2. 2擴大培養
2.2. l母發酵劑的制備
分別量取5株菌培養基各200ml于5只500ml三角瓶內，121。C滅菌20分鐘冷卻至30°C ，,按培養基體積的10%接種2. l步驟中已經活化的菌種，在28-30'C搖床培養24小時，作為母發酵劑。
2. 2. 2生產發酵劑的制備
首先配置10%的脫脂奶乳濁液，向脫脂乳中加入2%的液態甘油、2%低聚木糖、2%葡萄糖，121"C滅菌20分鐘冷卻至30°C，分別按2%體積比例接種母發酵劑，30。C搖床培養30——36小時，檢測5株菌生產發酵劑活菌數，各生產發酵劑活菌數》109cfu/rnl，視同為發酵成熟，如果活菌數〈10、fu/ral，繼續培養，直至達到1(fcfu/ml。
2.3粉末凍干菌種的制備
將成熟的生產發酵劑在無菌條件下導入玻璃安瓶中，液面高度低于lcm，加蓋瓶塞后放入-3(TC冰柜速凍，凍結后將玻璃安瓶用托盤乘裝，放入凍干機進行冷凍干燥。2.4復合菌劑的制備
按凍干菌粉末重量，取A菌粉末2-4份，B菌粉末3-5份，C菌粉末3-5份，D菌粉末2_4份，E菌粉末3-5份，充分混勻后真空包裝即可得到復合菌劑。
3. 使用方法
將本發明產品按發酵床的面積5-20g/nr'的比例，少許溫水溶解后添加到發酵床中，自然條件下成熟。4.應用效果
下面通過具體實驗來證明本發明專利的應用效果
選擇斷乳的仔豬50頭，分成5組，每組10頭，分別飼養在不同的圈舍中。將復合菌劑按5g/nr'、 10g/m2、 15g/ni2、 20g/ra2分別應用于四個試驗組，另外一組作為對照，同時保持5組圈舍的其它條件相同，各組豬出欄時各項指標如下表
生長情況記錄表
復合園用更 (g/m"圏舍狀況生病次 數生長情況出欄平均重量 (斤)
實驗1組5無較大臭味，無蚊 蟲場滋生3毛色較光亮，清 潔干凈205
實驗2組10無較大明顯臭味， 無蚊蠅滋生2毛色較光亮，清 潔干凈208
實驗3組15無明顯臭味，無蚊 蠅滋生1毛色光亮，清潔 干凈220
實驗4組20無明顯臭味，無蚊 蠅滋生0毛色光亮，清潔 干凈235
對照組0惡臭、滋生蚊蠅6毛色暗淡，軀體 較臟185
由上表可以看出，使用復合菌劑的4組試驗，豬的生病率明顯降低，并且圈舍干凈整》
毛色光亮，平均體重超過對照組20斤以上；試驗組隨復合菌用量的增大，生病次數逐漸減少，
出欄體重逐漸增加。具體實施例方式
下面結合具體實施例對本發明作更詳細的描述本發明采用的5株菌名稱及菌種來源如下
枯草芽孢桿菌(CICC 10088)、植物乳桿菌(CICC6026)、產朊假絲酵母(CICC 31170)白地霉 (CICC 1315)、米曲霉(CICC2011)五株菌種均購于中國工業微生物菌種保藏中心；本發明中將上述菌株簡稱為A菌、B菌、C菌、D菌、E菌。
實施例一
1.發酵菌株的選擇及培養基的制備
A菌——枯草芽孢桿菌(CICC 10088)，培養基為牛肉浸液1000毫升蛋白胨10克，氯化鈉5克，PH 7. 2 7. 4。B菌——植物乳桿菌(CICC 6026)，培養基為5。 B6麥芽汁中加入酵母膏0. 5，無菌碳酸鈣0. 6。
C菌——產朊假絲酵母(CICC 31170)，培養基為5。 B6麥芽汁。D菌——白地霉 (CICC 1315)，培養基為5。 B6麥芽汁。E菌——米曲霉(CICC 2011),培養基為5。 B6米曲汁。2.復合菌劑的制備過程2. 1凍干菌粉末的活化
分別量取0. 9%的生理鹽水10ml于5只試管內，經12rC滅菌20分鐘冷卻至30°C，將5株菌安瓶內的凍干菌粉末在無菌狀態下全部倒入0.9%的生理鹽水中，震蕩使其溶解，在30'C恒溫箱中靜止活化30分鐘，備用。
2. 2發酵菌擴大培養
2.2. l母發酵劑的制備
分別量取5株菌培養基各200ml于5只500ml三角瓶內，121'C滅菌20分鐘冷卻至3(TC,按培養基體積的10%接種2. 1歩驟中已經活化的菌種，在3(TC搖床培養24小時，作為母發酵劑。
2.2.2生產發酵劑的制備
首先配置10%的脫脂奶乳濁液，向脫脂乳中加入2%的液態甘油、2%低聚木糖、2%葡萄糖，121。C滅菌20分鐘冷卻至3CTC，分別按2%體積比例接種母發酵劑，30。C搖床培養30——36小時，檢測5株菌生產發酵劑活菌數，各生產發酵劑活菌數》109cfu/ml，視同為發酵成熟，如果活菌數〈10^fu/ml，繼續培養，直至達到109cfu/ml。
2.3粉末凍干菌種的制備
將成熟的生產發酵劑在無菌條件下導入玻璃安瓶中，液面高度低于lcm，加蓋瓶塞后放入-3(TC冰柜速凍，凍結后將玻璃安瓶用托盤乘裝，放入凍干機進行冷凍干燥。
2. 4發酵菌復配
按凍干菌粉末重量，取A菌粉末20克，B菌粉末30克，C菌粉末30克，D菌粉末20克，E菌粉末30克，充分混勻后真空包裝即可得到復合菌劑。
3. 使用方法
將本發明產品按發酵床的面積5-20g/m2的比例，少許溫水溶解后添加到發酵床中，自然條件下成熟。實施例二
1.發酵菌株的選擇及培養基的制備A菌——枯草芽孢桿菌(CICC 10088)，培養基為牛肉浸液1000毫升蛋白胨10克，氯化鈉5克，PH 7. 2 7. 4。
B菌——植物乳桿菌(CICC 6026)，培養基為5° B6麥芽汁中加入酵母膏0. 5，無菌碳酸鈣。.6。
C菌——產朊假絲酵母(CICC 31170)，培養基為5。 B6麥芽汁。D菌——白地霉 (CICC 1315)，培養基為5。 B6麥芽汁。E菌——米曲霉(CICC 2011)，培養基為5° B6米曲汁。2.復合菌劑的制備過程2. 1凍干菌粉末的活化
分別量取0. 9%的生理鹽水10ml于5只試管內，經121'C滅菌20分鐘冷卻至30°C ，將5株菌安瓶內的凍干菌粉末在無菌狀態下全部倒入0.9%的生理鹽水中，震蕩使其溶解，在30"C恒溫箱中靜止活化30分鐘，備用。
2. 2發酵菌擴大培養
2.2.1母發酵劑的制備
分別量取5株菌培養基各200ml于5只500ml三角瓶內，121。C滅菌20分鐘冷卻至30°C，按培養基體積的10%接種2. 1歩驟中已經活化的菌種，在3(TC搖床培養24小時，作為母發酵劑。
2. 2.2生產發酵劑的制備
首先配置10%的脫脂奶乳濁液，向脫脂乳中加入2%的液態甘油、2%低聚木糖、2%葡萄糖，121。C滅菌20分鐘冷卻至30°C，分別按2%體積比例接種母發酵劑，30。C搖床培養30——36小時，檢測5株菌生產發酵劑活菌數，各生產發酵劑活菌數^109cfu/ml，視同為發酵成熟，如果活菌數〈l(fcfu/ml，繼續培養，直至達到109cfu/ml。
2.3粉末凍干菌種的制備
將成熟的生產發酵劑在無菌條件下導入玻璃安瓶中，液面高度低于lcm，加蓋瓶塞后放入-3(TC冰柜速凍，凍結后將玻璃安瓶用托盤乘裝，放入凍干機進行冷凍干燥。
2. 4發酵菌復配
按凍干菌粉末重量，取A菌粉末40克，B菌粉末50克，C菌粉末50克，D菌粉末40克，E菌粉末50克，充分混勻后真空包裝即可得到復合菌劑。
3. 使用方法
將本發明產品按發酵床的面積5-20g/m2的比例，少許溫水溶解后添加到發酵床中，自然條件下成熟。
權利要求
1、一種豬舍發酵床復合微生物菌劑及其制備方法，其特征是枯草芽孢桿菌，植物乳桿菌，產朊假絲酵母，白地霉，米曲霉，5株菌生產發酵劑，各生產發酵劑活菌數≥109cfu/ml，然后對5株菌生產發酵劑酌量添加保護劑進行凍干，按凍干菌粉末重量，取枯草芽孢桿菌粉末2-4份，植物乳桿菌粉末3-5份，產朊假絲酵母粉末3-5份，白地霉粉末2-4份，米曲霉菌粉末3-5份，充分混勻后真空包裝即可得到微生物復合菌劑。
2、根據權利要求1所述一種豬舍發酵床復合微生物菌劑及其制備方法，其特征是復合菌 劑按發酵床面積5-20g/W的比例，少許溫水溶解后添加到發酵床中，自然條件下成熟。
全文摘要
本發明提供了一種豬舍發酵床復合微生物菌劑及其制備方法。首先制備枯草芽孢桿菌，植物乳桿菌，產朊假絲酵母，白地霉，米曲霉，5株菌生產發酵劑，各生產發酵劑活菌數≥10⁹cfu/ml，然后對5株菌生產發酵劑酌量添加保護劑進行凍干，按凍干菌粉末重量，取枯草芽孢桿菌粉末2-4份，植物乳桿菌粉末3-5份，產朊假絲酵母粉末3-5份，白地霉粉末2-4份，米曲霉菌粉末3-5份，充分混勻后真空包裝即可得到復合菌劑。在豬舍發酵床中使用本發明產品5-20g/m²可以明顯降低豬圈舍的臭味，減少蚊蠅滋生機會，降低豬的生病次數，使豬能夠健康成長，保護環境的同時為人類提供綠色豬肉。
文檔編號C12N1/20GK101463335SQ200910071279
公開日2009年6月24日 申請日期2009年1月16日 優先權日2009年1月16日
發明者超 張, 娜 李, 李澤奇, 趙云財, 鄒東恢 申請人:黑龍江澤農寒地生物工程有限公司