專利名稱：轉人內皮抑素基因雙歧桿菌雙層微囊包埋技術的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種轉人內皮抑素基因雙歧桿菌雙層微囊包埋技術。包括用奶蛋白及特殊膠體對轉人內皮抑素基因雙歧桿菌菌體進行雙層包埋。屬于生物技術領域。
背景技術：
有關益生菌的有益功能的研究已經有近百年歷史了，而近幾年來，市場上的益生菌產品(微生態制劑)也層出不窮，但這些產品要真正實現其功能，前提是益生菌必須具有足夠的活性，而且能夠進入人體內定植，才能對人體產生作用。益生菌有“三怕”(怕水、怕氧、怕胃酸)，在2003年通過對歐洲市場上55種益生菌產品的調查產品僅有13%活性合格，而我國目前微生態制劑行業更是存在明顯質量問題菌種差，品種少，活菌含量少，活菌 存活率低，活菌存活期短，制劑水平低下。雙歧桿菌易受外界環境因素如氧氣、溫度的影響.常常要求在低溫下保存銷售，從而嚴重影響了該類制劑的銷售和應用。而且，未進行保護處理的雙歧桿菌極易被胃酸滅活，難以保障進入腸道存活。因此，針對雙歧桿菌的保護技術的研究(制劑工藝)成為雙歧桿菌的功能應用及產業化推廣的技術屏障。雙歧桿囷制品王要有液態和固態廣品。液態廣品活囷保存很不理想。如在不米取任何技術措施的條件下，活菌保藏期只有7天左右；加了保護劑的菌液7°C冷藏8天殘存率僅僅為37. 5%。所以目前活菌保護研究主要集中在固態制劑上，如微膠囊技術、冷凍干燥和涂膜技術的應用。冷凍干燥是先將被干燥物料中的水凍成冰，然后使冰升華而除去水的一種干燥方法。由于其對細胞損傷小，而且保護劑的使用會進一步減小損失，目前雙歧桿菌主要采用此法制備活菌粉。甘油聚乙烯吡咯烷酮、海藻糖和脫脂奶粉被證明是良好的保護劑，對雙歧桿菌存活力有較高的保護作用。經凍干的雙歧桿菌活菌的存活率為40% 70%。保存期存活率還與制品的含水量、保存方式有關。微膠囊技術是近年來新興的一門技術，是指采用特殊手段將固、液、氣物質包埋成微小致密膠囊，在特殊條件下，其內含物可被控制釋放，對保護生物活性分子、組織或細胞以對抗不利環境有較好的效果。制備微膠囊化雙歧桿菌，一般采用對人或菌體無毒副作用的食用凝膠(如海藻酸鈉、卡拉膠、阿拉伯膠、果膠、明膠等)作為包埋載體，并與一定比例的增塑劑和交聯劑配成膠液，然后與分離收集的菌泥混和均勻，噴入到一定濃度的鹽溶液中，經攪拌固化形成一定直徑大小的固定化細胞微膠囊。
發明內容
本發明開發了一種轉人內皮抑素基因雙歧桿菌雙層微囊包埋技術，具體內容包括以下幾個方面
其一，將轉人內皮抑素雙歧桿菌發酵完成后以微過濾方式濃縮菌體。其二，利用奶蛋白等做第一層包覆，再利用阿拉伯膠及纖維寡糖等做第二層包埋，采用工藝條件為進液速度4-6mL/min，進口溫度25. 5-34. 5°C，出口溫度20. 5-29. 5°C，噴嘴霧化壓力0. 3-0. 5MPa，干燥空氣流量350-450m3/h的特殊包埋技術將轉人內皮抑素基因雙歧桿菌進行雙層包埋，制成微囊菌粉。其三，該技術擬利用奶蛋白及最外層的膠體對雙氣桿菌的保護作用，開發耐久存、耐胃酸、耐膽鹽、到達小腸立即溶解釋放、吸附腸道黏膜定殖的轉基因雙歧桿菌抗腫瘤制劑。
具體實施例方式具體工藝原理如下
(1)預制備腸溶膠包膜液變性淀粉40%、阿拉伯膠15%，聚乙二醇20%，海藻酸鈉15%，殼聚糖10% ；
(2)將轉基因雙歧桿菌濃縮液75%、奶蛋白15%、囊芯輔料(聚乙烯吡咯烷酮PVPK30、 纖維寡糖)10%在溫度28 V以下、濕度57%以下、潔凈度10萬級的環境中進行攪拌混合25_35min,均質 15_25min ；
實施例一
將均質后的菌液與腸溶膠包膜液按I: I比例進入流化噴霧，工藝條件進液速度4mL/min，進口溫度20. 5°C，出口溫度20. 5°C，噴嘴霧化壓力0. 3MPa，干燥空氣流量350m3/h。包被率為95%。在低倍鏡下觀察，可見微膠囊呈小球形，直徑10 30 ym，活菌聚集在微膠囊核心部位，每個微膠囊含90 180個活菌菌體。
實施例二
將均質后的菌液與腸溶膠包膜液按I: I比例進入流化噴霧，工藝條件進液速度5mL/min,進口溫度30. 5°C，出口溫度25. 5°C，噴嘴霧化壓力0. 4MPa，干燥空氣流量400m3/h。包被率為94%。在低倍鏡下觀察，可見微膠囊呈小球形，直徑10 30 ym，活菌聚集在微膠囊核心部位，每個微膠囊含110 190個活菌菌體。
實施例三
將均質后的菌液與腸溶膠包膜液按I: I比例進入流化噴霧，工藝條件進液速度6mL/min，進口溫度34. 5°C，出口溫度29. 5°C，噴嘴霧化壓力0. 5MPa，干燥空氣流量450m3/h。包被率為98%。在低倍鏡下觀察，可見微膠囊呈小球形，直徑10 30 ym，活菌聚集在微膠囊核心部位，每個微膠囊含100 200個活菌菌體。
權利要求
1.一種轉人內皮抑素基因雙歧桿菌雙層微囊包埋技術，其特征在于利用特殊的包埋技術將轉人內皮抑素基因雙歧桿菌進行雙層包埋，制成微囊菌粉。
2.將轉人內皮抑素雙歧桿菌發酵完成后以微過濾方式濃縮菌體，利用奶蛋白等做第一層包覆，再利用阿拉伯膠及纖維寡糖等做第二層包埋。
全文摘要
本發明公開了一種轉人內皮抑素基因雙歧桿菌雙層微囊包埋技術，解決了長久以來一直無法突破的轉基因雙歧桿菌工程菌株不易保存與不耐胃酸的問題。利用奶蛋白等做第一層包覆，再利用阿拉伯膠及纖維寡糖等做第二層包埋，采用流化噴霧法轉人內皮抑素基因雙歧桿菌制成微囊菌粉。該項目的開發成功對轉基因雙歧桿菌工程菌株的保存、制劑、抗胃酸、定植都具有非常理想的效果，為微生態制劑劑型開發做了鋪墊。
文檔編號C12N11/02GK102766619SQ20111011611
公開日2012年11月7日 申請日期2011年5月6日 優先權日2011年5月6日
發明者肖宏, 蘇小平 申請人:湖南科爾生物技術有限公司