專利名稱：一種輔助鑒定早熟禾屬植物的方法
技術領域：
本發明涉及一種輔助鑒定早熟禾屬植物的方法。
背景技術：
草坪草是一種城市綠化植物，也廣泛應用于體育場地、高速公路及河岸提坡防護、消除污染等方面，體現了巨大的生態效益。草坪草種類繁多，生長環境迥異，按氣候條件分類可分為暖季型草坪草和冷季型草坪草，按不同科屬分類可分為禾本科虎尾草亞科 Poaceae (Gramineae) (7 個屬)、黍亞科 Panicoideae (6 個屬)、早熟禾亞科 Pooideae (12 個屬)，以及莎草科Cyeraceae O個屬)和豆科及旋花科的一些品種等。早熟禾屬(Poa L)植物為禾本科早熟禾亞科多年生草本，喜光、耐陰性差、具有很強的耐寒能力、抗旱性差，夏季炎熱時生長停滯、春秋季生長繁茂，喜冷涼濕潤的環境，根莖繁殖力強、再生性好、形成草皮的能力極強、耐踐踏、綠期長。早熟禾屬(Poa L)植物是北方建植各類綠地的主要草種，也是建植運動場草坪的主要草種。在草坪草雜交育種工作中，為了提高雜交育種的效率和成功率，需要選用親緣關系較近且品質優良的兩個品種進行雜交。因此雜交育種的前期工作，就是要明確每個品種的親緣關聯、隸屬關系等。長期以來，生物學家主要通過形態學和解剖學證據劃分不同的物種，但這些表型特征種類有限，且容易受到環境因素和發育階段的影響，加之自然選擇導致的普遍趨同效應和平行進化因素等，使得物種系統發育關系的判斷困難重重。草坪草基因組復雜，長期自然或人工選擇的結果，產生了各種各樣的草坪草種類，包括各種各樣的生態類型、豐富多彩的野生資源等。如果不能高效準確的鑒別草坪草不同的基因型，確認它們之間的親緣關系，雜交育種的親本選擇就存在一定的盲目性，多樣化草坪草基因資源的利用就會受到極大的限制。基因作為遺傳信息的載體，保留了很多進化的痕跡，同一基因在不同物種中的序列差異可以作為分類鑒定的分子標記，具有信息量大、能夠穩定遺傳等優點。
發明內容
本發明的目的是提供一種輔助鑒定早熟禾屬植物的方法。本發明提供了輔助鑒定早熟禾屬(Poa L)植物的引物對，由序列表的序列1所示 DNA(DNA區段)和序列表的序列2所示(DNA區段)區段組成。所述早熟禾屬植物具體可為Nuglade(中文名稱為新哥求德，英文名稱為 NuGlade)、America (中文名稱為美洲王，英文名稱為America)、Award (中文名稱為獎品，英文名稱為award)、Youmei (中文名稱為優美，英文名稱為Euromyth)、Carbenet、 Freedom3(中文名稱為自由3，英文名稱為Freedom 3)、Dayue jin (中文名稱為大躍進，英文名稱為Quantum Leap)或Siufeng(中文名稱為珠峰，英文名稱為Everest)。所述引物對可用于制備輔助鑒定早熟禾屬植物的試劑盒。所述早熟禾屬植物具體可為Nuglade(中文名稱為新哥求德，英文名稱為NuGlade)、America (中文名稱為美洲王，英文名稱為America)、Award (中文名稱為獎品，英文名稱為award)、Youmei (中文名稱為優美，英文名稱為Euromyth)、Carbenet、 Freedom3(中文名稱為自由3，英文名稱為Freedom 3)、Dayuejin (中文名稱為大躍進，英文名稱為Quantum Leap)或Zhufeng (中文名稱為珠峰，英文名稱為Everest)。
所述弓ι物對可用于輔助鑒定早熟禾屬植物。所述早熟禾屬植物具體可為Nuglade(中文名稱為新哥求德，英文名稱為 NuGlade)、America (中文名稱為美洲王，英文名稱為America)、Award (中文名稱為獎品，英文名稱為award)、Youmei (中文名稱為優美，英文名稱為Euromyth)、Carbenet、 Freedom3(中文名稱為自由3，英文名稱為Freedom 3)、Dayuejin (中文名稱為大躍進，英文名稱為Quantum Leap)或Siufeng (中文名稱為珠峰，英文名稱為Everest)。本發明還保護一種輔助鑒定早熟禾屬植物的方法，包括如下步驟以待測植物的基因組DNA為模板，用所述引物對進行PCR擴增，如果得到PCR擴增產物待測植物為候選的早熟禾屬植物，如果沒有得到PCR擴增產物待測植物為候選的非早熟禾屬植物。所述PCR擴增產物具體可為180bp。所述待測植物具體可為剪股穎屬(Agrostis)植物、早熟禾屬(Poa)植物、羊茅屬 (Festuca)植物、結縷草屬(Zoysia)植物、黑麥草屬(Lolium)植物或狗牙根屬(Cynodon) 植物。所述剪股穎屬植物具體可為A4(中英文名稱均為PennA4)、Century、Putter、 hcbpendence、Declaration、L93、Shark、NTAS、FTAS 或 Backspin。所述早熟禾屬植物具體可為Nuglade (中文名稱為新哥求德，英文名稱為NuGlade)、America (中文名稱為美洲王， 英文名稱為America)、Award (中文名稱為獎品，英文名稱為award) Joumei (中文名稱為優美,英文名稱為Euromyth)、Carbenet, Freedom3 (中文名稱為自由3，英文名稱為Freedom 3) ,Dayuejin (中文名稱為大躍進，英文名稱為Quantum Leap)或Siufeng (中文名稱為珠峰，英文名稱為Everest)。所述羊茅屬植物具體可為PicasscKQiangjin (中文名稱為強勁， 英文名稱為hferno)、Dynasty (中文名稱為王朝，英文名稱為Dyansty)、Starlet (中文名稱為新秀，英文名稱為Marlet)、Day (中文名稱為帝王，英文名稱為Diva)、Arid3 (中文名稱為愛瑞3，英文名稱為Arid 3)或Hoimdog (中文名稱為獵狗5，英文名稱為Hoimdog 5)。 所述結縷草屬植物具體可為結縷草(英文名稱為Lawngrass)或青島結縷草(英文名稱為 Qingdao Lawngrass)。所述黑麥草屬植物具體可為LeishenIV(中文名稱為雷神4號，英文名稱為Blazer 4) ,Cutter或Qi jian。所述狗牙根屬植物具體可為狗牙根不脫殼包衣(中文名稱為狗亞根(不脫殼，包衣)，英文名稱為Common Burmudagrass)或狗牙根脫殼(中文名稱為狗亞根(脫殼)，英文名稱為Unhulled Burmudagrass)。本發明還保護輔助鑒定早熟禾屬植物的試劑盒，包括引物對甲；所述引物對甲由序列表的序列1所示DNA (DNA區段)和序列表的序列2所示DNA (DNA區段)組成。所述試劑盒還可包括引物對乙；所述引物對乙由序列表的序列3所示DNA (DNA區段)和序列表的序列4所示DNA(DNA區段)組成。所述試劑盒可用于輔助鑒定早熟禾屬植物。所述早熟禾屬植物具體可為Nuglade(中文名稱為新哥求德，英文名稱為 NuGlade)、America (中文名稱為美洲王，英文名稱為America)、Award (中文名稱為獎品，英文名稱為award)、Youmei (中文名稱為優美，英文名稱為Euromyth)、Carbenet、 Freedom3(中文名稱為自由3，英文名稱為Freedom 3)、Dayue jin (中文名稱為大躍進，英文名稱為Quantum Leap)或Siufeng(中文名稱為珠峰，英文名稱為Everest)。本發明還保護輔助鑒定早熟禾屬植物的方法，包括如下步驟以待測植物的基因組DNA為模板，分別用所述引物對甲和所述引物對乙進行PCR擴增；如果用所述引物對甲能得到PCR擴增產物且用所述引物對乙能得到PCR擴增產物，待測植物為候選的早熟禾屬植物；如果用所述引物對甲不能得到PCR擴增產物且用所述引物對乙能得到PCR擴增產物，待測植物為候選的非早熟禾屬植物。用所述引物對甲得到的PCR擴增產物具體可為180bp (180bp左右)。用所述引物對乙得到的PCR擴增產物具體可為221bp (221bp左右)。所述待測植物具體可為剪股穎屬(Agrostis)植物、早熟禾屬(Poa)植物、羊茅屬 (Festuca)植物、結縷草屬(Zoysia)植物、黑麥草屬(Lolium)植物或狗牙根屬(Cynodon) 植物。所述剪股穎屬植物具體可為A4(中英文名稱均為PennA4)、Century、Putter、 hcbpendence、Declaration、L93、Shark、NTAS、FTAS 或 Backspin。所述早熟禾屬植物具體可為Nuglade (中文名稱為新哥求德，英文名稱為NuGlade)、America (中文名稱為美洲王， 英文名稱為America)、Award (中文名稱為獎品，英文名稱為award) Joumei (中文名稱為優美,英文名稱為Euromyth)、Carbenet, Freedom3 (中文名稱為自由3，英文名稱為Freedom 3) ,Dayuejin (中文名稱為大躍進，英文名稱為Quantum Leap)或Siufeng (中文名稱為珠峰，英文名稱為Everest)。所述羊茅屬植物具體可為PicasscKQiangjin (中文名稱為強勁， 英文名稱為hferno)、Dynasty (中文名稱為王朝，英文名稱為Dyansty)、Starlet (中文名稱為新秀，英文名稱為Marlet)、Day (中文名稱為帝王，英文名稱為Diva)、Arid3 (中文名稱為愛瑞3，英文名稱為Arid 3)或Hoimdog (中文名稱為獵狗5，英文名稱為Hoimdog 5)。 所述結縷草屬植物具體可為結縷草(英文名稱為Lawngrass)或青島結縷草(英文名稱為 Qingdao Lawngrass)。所述黑麥草屬植物具體可為LeishenIV(中文名稱為雷神4號，英文名稱為Blazer 4)、Cutter或Qi jian。所述狗牙根屬植物具體可為狗牙根不脫殼包衣(中文名稱為狗亞根(不脫殼，包衣)，英文名稱為Common Burmudagrass)或狗牙根脫殼(中文名稱為狗亞根(脫殼)，英文名稱為Unhulled Burmudagrass)。本發明通過對不同草坪草種屬品種抗逆性基因AsEXPl的克隆，分析其序列位點差異，了解該基因在不同種屬間的變異規律，并通過種屬間序列特征分析，篩選得到了早熟禾屬草坪草特異性的分子標記，以及用于鑒定所述分子標記的特異引物對。本發明提供的特異引物對(CAs4F/CAs4R)可以輔助鑒定早熟禾屬(Poa)植物，可以用于草坪草種屬品種的鑒定、親緣關系分析及進化路徑分析等，并為草坪草的分子標記輔助育種和品種遺傳改良工作提供理論基礎和技術支持。
圖1為利用cAslF/cAslR對不同草坪草品種基因組DNA的PCR擴增結果；泳道1_6 依次為 A4、Century、Carbenet、Award、Starlet、Arid3 ；Μ, DL2000 ladder。圖2為基于AsEXPl基因片段序列多態性建立的草坪草不同種屬間系統進化樹。
圖3為3個屬6個草坪草品種AsEXPl基因片段序列比對結果。圖4為2種引物組合對草坪草3個屬6個品種的PCR擴增結果；A 采用cAs4F和 cAs4R組成的引物對；B 采用cAs2F和cAs2R組成的引物對；泳道1_6依次為草坪草品種 A4、Century>Carbenent>Award>Starlet、Arid3。圖5為2種引物組合對草坪草6個屬32個品種的PCR擴增結果；A 采用cAs4F和 cAs4R組成的引物對；B 采用cAs2F和cAs2R組成的引物對；1 :A4 ；2 =Century ；3 =Putter ； 4 Independence ；5 !Declaration ；6 :Nuglade ；7 America ；8 Award ；9 Youmei ； 10 結縷草；11 =Picasso ；12 =Qiangjin ；13 =Dynasty ；14 =Starlet ；15 =Day ；16 狗牙根不脫殼包衣；17 :L93 ；18 =Shark ；19 =NTAS ；20 =FTAS ；21 =Backspin ；22 =Carbenet ；23 :Freedom3 ； 24 =Dayuejin ；25 =Zhufeng ；26 青島結縷草；27 :Arid3 ；28 =Houndog ；29 =LeishenIV ；30 Cutter ；31 =Qijian ；32 狗牙根脫殼。
具體實施例方式以下的實施例便于更好地理解本發明，但并不限定本發明。下述實施例中的實驗方法，如無特殊說明，均為常規方法。下述實施例中所用的試驗材料，如無特殊說明，均為自常規生化試劑商店購買得到的。以下實施例中的定量試驗，均設置三次重復實驗，結果取平均值。實施例1、草坪草種屬特異性分子標記的篩選和特異引物對的設計一、AsEXPl基因片段克隆及序列分析從草坪草剪股穎屬、早熟禾屬、羊茅屬中隨機選取各2個品種(A4、CentrUy為剪股穎屬，Carbenet, Award為早熟禾屬，Marlet、Arid3為羊茅屬)，以基因組DNA為模板，用 cAslF和cAslR組成的引物對進行AsEXPl基因的同源片段擴增。見圖1。結果顯示，所有檢測品種在460bp左右均有一特異性條帶，不同品種草坪草的同源片段大小相近，在1. 5% 的瓊脂膠上無法分辨。二、AsEXPl基因片段的同源性比較分析將上述擴增的條帶切割、回收并克隆，測序后去除內含子部分并進行序列比對。圖 3為多重序列比對結果(所注堿基位置均以統一序列為準)，可以看出不同品種間序列呈現多態性，并顯示出很好的屬間特異性。其中，剪股穎屬的2個品種AsEXPl基因同源片段長度為368bp，早熟禾屬為359bp，羊茅屬為371bp。與剪股穎屬相比，早熟禾兩個品種在261 到270bp處有9bp的缺失，羊茅屬兩品種在40到43bp處有一個!3bp的插入。在核苷酸替換方面，剪股穎屬的兩個品種在30bp和31bp處為GG，而其它2個屬的品種為CT ；在240bp 處，剪股穎屬為G，其他屬為C ；早熟禾在116、117、119bp處分別為G、T、G，而另外2個屬的品種皆為A、G、C ；在處，早熟禾屬品種堿基分別為G、T、C，而其他屬品種堿基為C、Gλ G0表1為同源性比對結果，同屬內不同品種間同源性很高，同為剪股穎屬的Α4和 Century的同源性為99. 46%，同為早熟禾屬的Carbenet和Award為99. 72%，同為羊茅屬的Marlet和和Arid3的同源性為97. 04%；不同屬的品種間的差異相對較大，如Carbenet 和Century同源性僅為91. 92%。表1 不同品種間AsEXPl基因片段序列兩兩同源率比較結果(DNAMAN比對結果)
品種A4CenturyCarbenetAwardStarletCentury99. 46%Carbenet91. 92%91. 92%Award92. 20%92. 20%99. 72%Starlet93. 21%93. 21%93. 59%93. 31%Arid393. 75%93. 21%93. 31%93. 04%97. 04%圖2為進化樹分析結果，同屬的兩個品種均聚在一個分支上，3個屬分屬兩個大的分支，其中早熟禾屬單獨一個分支，剪股穎屬和羊茅屬隸屬同一分支，顯示這兩個屬具有較近的親緣關系。三、草坪草種屬特異性分子標記的篩選上述分析結果顯示，AsEXPl基因片段在不同草坪草中呈現DNA序列的種屬特異性。設計cAs4F和cAs4R組成的特異性引物，設計cAs2F和cAs2R組成的保守引物。cAs4F(上游引物)5，-GCCACGTTCTACGGCGGTGG-3，(序列表的序列 1)；cAs4R(下游引物)5，-CGGCACGCAGTAGCTCCCCT-3，(序列表的序列 2)。cAs4F和cAs4R的靶序列為序列表的序列5自5，末端第97-276位核苷酸，180bp。cAs2F(上游引物)5，-CGACGCGTCCGGCACAATGG-3，(序列表的序列 3)；cAs2R(下游引物):5，-CGTCGTTGGGCAGCGCGTAG-3，(序列表的序列 4)。cAs2F和cAs2R的靶序列為序列表的序列5自5’末端第117-337位核苷酸，221bp。用cAs4F和cAs4R組成的引物對對6個品種的基因組DNA進行擴增，只在早熟禾屬中有特異性擴增，在其他2個屬中均無條帶。用cAs2F和cAs2R組成的引物對對6個品種的基因組DNA進行擴增，在所有6個品種中均有條帶顯示(圖4)。實施例2、特異引物對的應用(草坪草種屬特異分子標記的驗證)實驗樣本如下剪股穎屬(10個品種):A4(中英文名稱均為 PennA4)參考文獻Journal of Experimental Botany ； 2007,58(13) :3789-3796。Century 參考文獻Journal of Experimental Botany ；2007,58 (13) 3789-3796。Putter 參考文獻 Journal of Experimental Botany ；2007, 58 (13) :3789_3796。Independence 參考文獻Journal of Experimental Botany ；2007, 58 (13) 3789-3796。Declaration 參考文 Journal of Experimental Botany ；2007,58(13) 3789-3796。L93 參考文獻Journal of Experimental Botany ；2007, 58 (13) :3789_3796。
Shark 參考文獻Journal of Experimental Botany ；2007, 58 (13) :3789_3796。NTAS 參考文獻Journal of Experimental Botany ；2007, 58 (13) :3789_3796。FTAS 參考文獻Journal of Experimental Botany ；2007, 58 (13) :3789_3796。Backspin 參考文 Journal of Experimental Botany ；2007,58 (13) 3789-3796。早熟禾屬(8個品種)Nuglade (中文名稱為新哥求德，英文名稱為NuGlade)購自中種公司，產品目錄號為 70-76-0;3B。America(中文名稱為美洲王，英文名稱為America)購自中種公司，產品目錄號為 69-19-03。Award(中文名稱為獎品，英文名稱為award)購自中種公司，產品目錄號為 70-557-00A。^umei (中文名稱為優美，英文名稱為Euromyth)購自中種公司，產品目錄號為 70-557-00A。Carbenet 購自北京北方杰士生物科技有限責任公司。Freedom3(中文名稱為自由3，英文名稱為Freedom 3)購自中種公司，產品目錄號為 70-94-04B。Dayuejin (中文名稱為大躍進，英文名稱為Quantum Leap)購自中種公司，產品目錄號為68-441-00。amfeng(中文名稱為珠峰，英文名稱為Everest)購自中種公司，產品目錄號為 70-88-03。羊茅屬(7個品種)Picasso 購自北京北方杰士生物科技有限責任公司。Qiangjin (中文名稱為強勁，英文名稱為hferno)購自中種公司，產品目錄號為 B18-5-30TF。Dynasty (中文名稱為王朝，英文名稱為Dyansty)購自中種公司，產品目錄號為 LA18-5-57。Marlet (中文名稱為新秀，英文名稱為Marlet)購自中種公司，產品目錄號為 L5-5-TF46。Day(中文名稱為帝王，英文名稱為Diva)購自中種公司，產品目錄號為 M146-GBS-BD5-453-3。Arid3(中文名稱為愛瑞3，英文名稱為Arid 3)購自北京北方杰士生物科技有限
責任公司。Houndog(中文名稱為獵狗5，英文名稱為Houndog 5)購自中種公司，產品目錄號為 Y41-6-HD5-41-1。結縷草屬O個品種)結縷草(英文名稱為Lawngrass)購自中種公司。青島結縷草(英文名稱為Qingdao Lawngrass)購自中種公司，產品目錄號為 L30-5-7。
8
黑麥草屬(3個品種)LeishenIV(中文名稱為雷神4號，英文名稱為Blazer 4)購自中種公司，產品目錄號為Y21-5-70。Cutter 購自北京北方杰士生物科技有限責任公司。Qijian(中文名稱為旗艦，英文名稱為Flagship)購自中種公司。狗牙根屬O個品種)狗牙根不脫殼包衣(中文名稱為狗亞根(不脫殼，包衣)，英文名稱為Common Burmudagrass)購自中種公司。狗牙根脫殼(中文名稱為狗亞根(脫殼)，英文名稱為Unhulled Burmudagrass) 購自中種公司。分別提取各個實驗樣本的葉片的基因組DNA，將每個樣本的基因組DNA分別用引物對甲(cAs4F和cAs4R組成的引物對)和引物對乙(cAs2F和cAs2R組成的引物對)進行 PCR擴增，用引物對甲PCR擴增得到的PCR擴增產物命名為PCR擴增產物甲，用引物對乙PCR 擴增得到的PCR擴增產物命名為PCR擴增產物乙。PCR 擴增體系 QO 微升)10XPCR buffer 2 μ l,5mmol/L dNTPs 1 μ 1, Mg2+I μ 1, 5口11101/1上游引物和5“11101/1下游引物各1μ l,40ng/y 1基因組DNA 1μ 1， υ/μ 1高保真 DNA 聚合酶 0. 5μ 1，ddH20 12. 5μ1。PCR擴增參數為95°C預變性IOmin ；95°C變性lmin，60°C退火lmin，72°C延伸 lmin，共35個循環；最后72°C延伸IOmin0將各個實驗樣本得到的PCR擴增產物甲和PCR擴增產物乙進行1. 5%瓊脂糖凝膠電泳，電泳結果見圖5。結果顯示，cAs4F和cAs4R組成的特異性引物只在早熟禾屬品種(8個品種)中有擴增條帶，而其他5個屬的品種中均不見明顯條帶，而cAs2F和cAs2R組成的保守引物在6 個屬的32個品種均有擴增。
權利要求
1.輔助鑒定早熟禾屬植物的引物對，由序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA組成。
2.權利要求1所述引物對在制備輔助鑒定早熟禾屬植物的試劑盒中的應用。
3.權利要求1所述引物對在輔助鑒定早熟禾屬植物中的應用。
4.一種輔助鑒定早熟禾屬植物的方法，包括如下步驟以待測植物的基因組DNA為模板，用權利要求1所述引物對進行PCR擴增，如果得到PCR擴增產物待測植物為候選的早熟禾屬植物，如果沒有得到PCR擴增產物待測植物為候選的非早熟禾屬植物。
5.如權利要求4所述的方法，其特征在于所述PCR擴增產物為ISObp；所述待測植物為剪股穎屬(Agrostis)植物、早熟禾屬(Poa)植物、羊茅屬O^estuca)植物、結縷草屬 (Zoysia)植物、黑麥草屬(Lolium)植物或狗牙根屬(Cynodon)植物。
6.輔助鑒定早熟禾屬植物的試劑盒，包括引物對甲；所述引物對甲由序列表的序列1 所示DNA和序列表的序列2所示DNA組成。
7.如權利要求6所述的試劑盒，其特征在于所述試劑盒還包括引物對乙；所述引物對乙由序列表的序列3所示DNA和序列表的序列4所示DNA組成。
8.權利要求6或7所述試劑盒在輔助鑒定早熟禾屬植物中的應用。
9.一種用權利要求7所述試劑盒輔助鑒定早熟禾屬植物的方法，包括如下步驟以待測植物的基因組DNA為模板，分別用所述引物對甲和所述引物對乙進行PCR擴增；如果用所述引物對甲能得到PCR擴增產物且用所述引物對乙能得到PCR擴增產物，待測植物為候選的早熟禾屬植物；如果用所述引物對甲不能得到PCR擴增產物且用所述引物對乙能得到 PCR擴增產物，待測植物為候選的非早熟禾屬植物。
10.如權利要求9所述的方法，其特征在于用所述引物對甲得到的PCR擴增產物為ISObp ；用所述引物對乙得到的PCR擴增產物為221bp ；所述待測植物為剪股穎屬 (Agrostis)植物、早熟禾屬(Poa)植物、羊茅屬O^estuca)植物、結縷草屬(Zoysia)植物、 黑麥草屬(Lolium)植物或狗牙根屬(Cynodon)植物。
全文摘要
本發明公開了一種輔助鑒定早熟禾屬植物的方法。本發明提供的方法，包括如下步驟以待測植物的基因DNA為模板，用序列表的序列1所示DNA和序列表的序列2所示DNA組成的引物對進行PCR擴增，如果得到PCR擴增產物，待測植物為早熟禾屬植物。本發明通過對不同草坪草種屬品種抗逆性基因AsEXP1的克隆，分析其序列位點差異，了解該基因在不同種屬間的變異規律，并通過種屬間序列特征分析，篩選得到了早熟禾屬草坪草特異性分子標記。本發明提供的特異引物對(cAs4F/cAs4R)可以輔助鑒定早熟禾屬品種，可以用于草坪草種屬品種的鑒定、親緣關系分析及進化路徑分析等，并為草坪草的分子標記輔助育種和品種遺傳改良工作提供理論基礎和技術支持。
文檔編號C12N15/11GK102304577SQ201110248309
公開日2012年1月4日 申請日期2011年8月26日 優先權日2011年8月26日
發明者代亮, 徐倩, 徐吉臣, 徐筱 申請人:北京林業大學