專利名稱：預測晚期非小細胞肺癌鉑類化療療效的分子標記及其應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于醫學分子遺傳學和臨床醫學技術領域，具體涉及一種預測晚期非小細胞肺癌患者含鉬化療療效的分子標記及其應用。
背景技術：
肺癌是對人類健康和生命危害最大的惡性腫瘤之一，全球每年有一百多萬人死于肺癌，是目前腫瘤導致死亡的主要病因之一。非小細胞肺癌(non-small cell lung cancer, NSCLC)約占肺癌的80%，其中有三分之二的患者在確診時已經處在晚期，失去了手術機會。 晚期NSCLC的標準治療是以化療為主的綜合治療，而鉬類藥物因其較強的抗腫瘤作用成為臨床治療NSCLC的常用藥。目前，以鉬類藥物為主的聯合化療方案在晚期NSCLC的治療中取得了顯著的療效有效率30%左右，中位生存期8 10個月，2年生存率10% 15%。然而從臨床上來看，不同個體對化療藥物的敏感性存在明顯不同，療效差異顯著。因此，深入研究影響NSCLC化療療效的相關因素，從而提高藥物的有效率，具有重要的臨床意義，這也是當今肺癌個性化醫療的研究熱點。隨著分子生物學和基因組醫學的發展，針對肺癌個體化治療的研究已由傳統的基于體外藥敏實驗的研究方法逐步發展為建立在功能基因組學和蛋白質組學基礎上的高通量篩選腫瘤化療的生物標志物的研究方法，包括腫瘤組織表達譜、甲基化、miRNA以及單核苷酸多態性(single neucleotide polymorphism, SNP)等。其中，SNP因其存在的普遍性、 特異性、以及高通量檢測技術的成熟發展，逐漸成為在個體化治療研究中應用最為廣泛的生物遺傳標志。在肺癌療效評估方面，雖然肺癌組織的基因組、轉錄組和蛋白質組的變化和化療療效最直接相關，最有可能篩選得到有效的生物標志物，然而大半的晚期肺癌患者不能手術，腫瘤組織不易獲取，因此常用比較容易獲得的外周血進行基因組SNP等多態性檢測，探索SNP與藥物療效的關系。總之，通過外周血細胞檢測DNA的基因多態性，成為肺癌療效評估常用的研究方法。核酸剪切通路(Nucleotide excision repair, NER)是哺乳動物細胞中修復鉬類導致的DNA損傷的主要途徑。XPD基因編碼了一個ATP依賴的解旋酶，它介導了 NER起始所需的DNA解旋過程。多項研究表明XPD上的多態可能通過改變其蛋白質產物的功能而影響DNA修復能力。XPD的多個常見多態都與降低癌癥風險相關。臨床和流行病學證據證實， Z/刃的位點與化療效果相關。但是，Z/刃上的另外兩個多態位點^and Asp312Asn與亞洲NSCLC患者的生存期的相關數據則未見報道。而對于位點也暫無其與生存期關系的流行病學研究。Asp312Asn (rsl799793) ^XPD基因第十外顯子上一個造成天冬氨酸突變為天冬酰胺的G到J的突變。而A1SpmA1Sp (rsl052555)則是同義突變位點。本發明研究了 Z/刃基因的多態位點與晚期NSCLC患者含鉬化療后生存期的相關性，發現3個SNP位點與NSCLC鉬類化療后生存期顯著相關，該分子標記可用于預測晚期 NSCLC患者含鉬化療后生存期，為此類病人的個體化醫療提供依據。
發明內容
本發明的目的在于提供一種能夠預測晚期非小細胞肺癌患者含鉬化療療效(療后生存期)的分子標記及其應用。本發明提供的預測晚期NSCLC患者含鉬化療療效的分子標記，該預測功能可通過對患者外周血基因組DNA的分子標記進行檢測而實現。上述分子標記包括與晚期非小細胞肺癌鉬類化療療效相關的萬刃基因，及該基因上單核苷酸多態位點As/^^S/7，AS//nASp。作為上述分子標記的應用，本發明還提供用以預測NSCLC患者含鉬化療療效的 XPD基因多態性檢測試劑盒。該試劑盒包括
(1)檢測萬刃基因上As/力· ，As/7’577多態位點基因型的特異性引物對。所述的特異性引物對是指針對萬刃基因As/Am，Asp7nAsp多態位點而設計，能特異性擴增出包含這2個SNP位點的DNA片段的引物對以及分別檢測出這2個SNP位點不同等位基因型的特異性引物序列。引物序列如表1所示，特異性引物對可用常規的合成技術進行合成。
權利要求
1.一種預測晚期非小細胞肺癌鉬類化療療效的分子標記，其特征在于包括與晚期非小細胞肺癌鉬類化療后生存期相關的萬刃基因，及該基因上單核苷酸多態位點As/^^S/7， Asp711Asp o
2.一種預測晚期非小細胞肺癌鉬類化療療效的試劑盒，其特征在于包括檢測Z/刃基因上Asp312Asn,多態位點基因型的特異性引物對、1 U Taq酶ΙΟΟμΙ以及10 χ Taq 緩沖液lml,2 mM dNTP混合液ImlUU蝦堿性磷酸酶100μ1、 υ核酸外切酶ΙΟΟμΙ、BigDye v3. 1測序試劑及其配套緩沖液lml、120mM乙二胺四乙酸lml、95%甲酰胺1ml、無水乙醇和超純水。
3.根據權利要求2所述的試劑盒，其特征在于所述的特異性引物對為對如/力仰，正向引物SEQ ID NO. 1，反向引物SEQ ID NO. 2 ；對 AspniAsp,正向引物SEQ ID NO. 3，反向引物SEQ ID NO. 4。
全文摘要
本發明屬于醫學分子遺傳學和臨床醫學技術領域，具體為一種預測晚期非小細胞肺癌鉑類化療療效的分子標記及其應用。所述分子標記包括與晚期非小細胞肺癌(NSCLC)鉑類化療后生存期相關的XPD基因，及該基因上單核苷酸多態位點Asp312Asn,Asp711Asp。作為上述分子標記的應用，本發明還提供用以預測NSCLC患者含鉑化療后生存期的XPD基因多態性檢測試劑盒。本發明可用于預測晚期非小細胞肺癌患者鉑類化療后生存期，為此類病患個體化治療的實現提供依據。
文檔編號C12N15/11GK102337281SQ20111031366
公開日2012年2月1日 申請日期2011年10月17日 優先權日2011年10月17日
發明者盧大儒, 李歡, 范薇薇, 陳紅巖 申請人:復旦大學