專利名稱：一株抗人血小板膜糖蛋白Ibα人鼠嵌合型單克隆抗體及其應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種具有與血小板膜糖蛋白的高特異性、高親合力結合并具有抗血栓生物活性的嵌合型單克隆抗體及其應用。
背景技術：
流行病學研究顯示，隨著生活條件的改善及人口的老齡化，近幾十年來血栓栓塞性疾病所引起或并發的病變，是當前嚴重危害人類健康的疾病。血小板在血栓的形成中起著關鍵性作用，血小板聚集是血栓形成的必要過程。正常生理情況下，血栓可以防止血細胞滲漏到血管外，然而在特定的疾病條件下，血栓可以抑制或者完全阻止血液流動從而導致細胞性壞死。發生在動脈粥樣硬化斑塊處的血小板聚集以及隨后的血栓形成，在心絞痛、急性心肌梗塞、溶栓以及血管成形術后的血栓再形成等疾病中起著重要的作用，對心梗患者進行經皮導管血管成形術(PTCA)及溶栓治療是挽救患者生命的重要手段。而這些治療方法的一個重要并發癥就是血小板在血管成形術造成的血管內皮損傷部位發生粘附和聚集，再次形成血栓，從而進一步加重對心臟的損傷。我們已經知道血小板通過GPrt α受體粘附于受損血管壁，是血小板血栓形成的開始步驟，因此封閉GP Iba受體的藥物可以從初始階段就阻止血栓形成，能減少甚至防止溶栓藥物治療后的血栓再形成，并且加快血栓溶解。這類藥物同樣在對其他血管阻塞以及血栓栓塞性疾病的治療中有應用前景。近年來，對血小板在血栓形成過程中分子機制研究促進了分子靶向藥物的發展， 其中以針對血小板糖蛋白(GP) nb a/IIIa的單克隆抗體阿昔單抗(abciximab，Reopro)為代表，臨床應用已取得了良好的抗血栓治療效果。然而，由于阿昔單抗也存在引起嚴重出血的潛在危險，所以在一定程度上阻礙了這類藥物的臨床應用。為了克服抗血栓藥物的缺陷，以抗血小板粘附為代表的尋找新的抗栓治療手段在國際上正方興未艾，人們試圖通過抑制膠原-血管性血友病因子(VWF)-血小板GPrta軸阻斷血小板與膠原的起始粘附，即在早期階段阻止血小板的黏附和活化，以達到阻止血栓形成的目的，并能減少出血的危險性。因此，研制和開發阻斷血小板GPrt α與受損血管壁之間相互作用的單抗，不僅能從血栓形成的早期階段阻斷血栓的形成，而且希望能夠利用該單抗探究血小板如何通過 GPIba與血管性血友病因子Al區結合后，發生構型改變，從而調節止血功能，從而進一步闡明動脈血栓形成和發展的機理，為預防和早期治療血栓性疾病開辟新的領域，從而開發成新型的抗動脈血栓新藥。制備針對血小板膜糖蛋白GPrta的特異性單克隆抗體，通過阻斷血管性血友病因子Al區與血小板GPrta之間相互作用，是一種抑制血栓形成的有效方法。由于鼠源抗體在人體內可能會誘導產生人抗鼠免疫反應，這種反應可能減弱或者破壞它的治療效果， 甚至可以在病人中引起變態反應或超敏反應，因此限制了在病人中的應用。另外，在治療血栓栓塞性疾病時，常常需要反復給藥，這樣更增加了這些免疫反應的發生概率。楊劍峰博士發表的學位論文《抗血小板膜糖蛋白Λ α單克隆抗體的人源化及基于膜糖蛋白結構的活性小分子化合物研究》公開了一種抗血小板膜糖蛋白單克隆抗體，但是該抗體只識別人血小板膜糖蛋白Λα，與比格犬，獼猴等常用模式動物血小板無交叉反應，限制了針對該抗體的各種成藥性評價研究。此外，鼠源抗體在人體內可能會誘導產生人抗鼠免疫反應，這種反應可能減弱或者破壞它的治療效果，甚至可以在病人中引起變態反應或超敏反應，因此限制了在病人中的應用。另外，在治療血栓栓塞性疾病時，常常需要持續用藥，這樣更增加了這些免疫反應的發生概率。
發明內容
本發明的發明目的是提供一種抗人血小板膜糖蛋白Λα人鼠嵌合型單克隆抗體及其應用。為達到上述發明目的，本發明采用的技術方案是一種抗人血小板膜糖蛋白Λα 人鼠嵌合型單克隆抗體，包括鼠源重鏈可變區、鼠源輕鏈可變區；所述鼠源重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID No. 1所示，所述鼠源輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID No. 2所示。上述技術方案中，所述抗人血小板膜糖蛋白Λα人鼠嵌合型單克隆抗體還包括人源重鏈恒定區、人源輕鏈恒定區；其中，所述人源重鏈恒定區選自IgG( Yheavy chains) ,IgM(U)^IgA(Q), IgE ( O、IgD(S)五種同種型中的一種；所述人源輕鏈恒定區選自kappa或lambda中的一種；上述技術方案中，所述嵌合型單克隆抗體分子中的抗原結合區來自小鼠抗體，嵌合型單克隆抗體的恒定區部分來源于人免疫球蛋白。上述技術方案中，由于重鏈的不同亞型(如IgG的重鏈亞型)跟不同的效應功能有關，因此要嵌合抗體產生所需的效應功能，就要選擇相應的重鏈恒定區，因此，所述人源重鏈恒定區優選為IgGl(Y 1 heavy chains)、IgG3 ( γ 3)、IgG4 ( γ 4)三種亞類中的一種； 更優選為IgGl的重鏈恒定區。上述技術方案中，所述人源輕鏈恒定區優選為kappa的輕鏈恒定區。上述技術方案中，SEQ ID No. 1所示的氨基酸序列具體為EVQLQQSGPELVKLGASVKI SCKASGYSFTAYLMNWVKQSHGKSLEWIGRITPYNGDTFYNQKFKDKATLTVDKSSNTAHMELLSLTSEDSAVYFCG RSRYGNLYYYAMDYffGQGTSVTVSS ；SEQ ID No. 2 所示的氨基酸序列具體為DIVMSQSPSSQAVSIGEKVTMSCKSSQSLLYSSNQ KNYLAWFQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTGSGSGTDFTLTISSVKAEDLAVYYCQQYYSYPYTFGGGTKLEI KR。上述抗人血小板膜糖蛋白Λα人鼠嵌合型單克隆抗體的制備方法包括以下步驟首先獲得嵌合抗體的重鏈和輕鏈可變區基因，具體做法為利用特異性引物，分別擴增出鼠源的抗血小板膜糖蛋白Λα的特異性的可變區序列(或者部分恒定區序列)。其次通過基因克隆的方法分別將擴增獲得的重鏈及輕鏈可變區基因片段與相應的人抗體的恒定區序列，正確連接，經測序確認后，成功構建嵌合抗體的重鏈及輕鏈表達載體。最后，將含有重鏈和輕鏈基因的表達載體共轉染到能夠高表達目的基因產物的表達細胞，經多輪特異性篩選后，獲得特異性表達目標嵌合抗體的高表達細胞株，收集細胞培養上清，經特異性純化后獲得目標嵌合抗體。上述技術方案中，抗膜糖蛋白Λα的輕鏈和重鏈可變區的基因來源于表達特異性表達膜糖蛋白Λα的鼠源性單克隆抗體雜交瘤細胞株。例如，抗GPrta的嵌合抗體的可變區基因可以從表達針對GPrt α抗體的雜交瘤細胞中得到。本發明所用的雜交瘤細胞株是用活化的人血小板免疫小鼠，將抗體產生細胞與骨髓瘤細胞融合產生雜交瘤細胞，亞克隆雜交瘤細胞，篩選表達抗血小板或GPrt α抗體的單克隆，獲得雜交瘤細胞株。上述技術方案中，恒定區基因可以用成熟的克隆技術從人抗體產生細胞中獲得。 另外，由于兩種輕鏈基因以及五種重鏈基因已經被成功克隆，因此從這些克隆中就可以很容易得到人源的恒定區。通過設計嵌合重鏈基因的截短形式可以制備嵌合抗體的抗原結合片段如F(ab，)2和Fab。如編碼F(ab，)2重鏈部分的嵌合基因包含有CHl及重鏈鉸鏈區的DNA序列。另外，這種片段可以用酶切嵌合抗體的方法得到。例如，用木瓜蛋白酶或胃蛋白酶酶切可以分別得到Fab或F(ab，)2片段。上述技術方案中，通常將編碼輕鏈和重鏈的嵌合基因分別裝入兩個不同的表達載體，然后共轉染受體細胞。通常使用的受體細胞為骨髓瘤細胞和CHO細胞，這些細胞可以合成，裝配和分泌轉染的Ig基因編碼的免疫球蛋白，同時還擁有免疫球蛋白糖基化的功能。 目前CHO dhfr缺陷型細胞為常用的細胞株之一，因為通過適當的篩選方法，可以使插入的基因片斷在基因組中擴增，從而提高抗體的表達量。每個載體含有兩個篩選基因(一個用于在細菌表達系統篩選，另一個用于在真核表達系統中篩選)，且兩個載體含有不同的一對基因。這些載體能在細菌中生產和擴增融合基因，隨后共轉染真核細胞，篩選陽性細胞克隆。在載體中通常還帶入一個二氫葉酸還原酶(dhfr)基因，該基因表達產物即可以作為篩選指標，又可以作為插入基因片斷擴增的指標。氨甲喋呤(MTX)是二氫葉酸還原酶(dhfr) 特異性抑制劑，細胞通過DHFR基因的擴增實現對MTX藥物的適應。更重要的是，擴增的區域要遠遠大于DHFR基因本身，即與DHFR基因鄰近的DNA也同時被擴增。CHO DHFR缺陷型變異株在轉染表達外源基因時，可通過DHFR/MTX擴增系統提高表達量。在含MTX的培養液中選擇培養，MTX的加壓作用使DHFR及其兩側基因序列擴增，抗體基因也得以擴增。因此， 通過MTX的濃度不斷增加，可以提高真核細胞中的免疫球蛋白基因的表達量。本發明同時要求保護一種高效表達該抗人血小板膜糖蛋白Λα人鼠嵌合型單克隆抗體的CHO細胞株，該CHO細胞株不同于普通貼壁生長的CHO細胞，具有可以懸浮培養的特性，該特性對于提高嵌合抗體的表達量具有重要意義。該CHO細胞株的保藏信息為保藏地址中國武漢武漢大學；保藏單位中國典型培養物保藏中心；保藏日期2011年11月10 日；保藏編號CCTCC No :C2011103 ；分類命名真核表達CHO細胞株SZ-138。上述技術方案中，所述抗人血小板膜糖蛋白Λα人鼠嵌合型單克隆抗體可作為抗血栓治療藥物應用。該嵌合抗體(以及相應的片段)可以在體外抑制血小板粘附和血栓形成，還可在實驗動物體內抑制由于血小板異常粘附，形成血小板血栓從而引起的循環血流改變。該抗體可以應用于防止各種原因導致的血小板血栓形成以及血管成形術后再形成血栓的情況，例如該抗體可用于哺乳動物或人體，可防止肺栓塞，短暫的缺血性中風，深部靜脈血栓，冠狀動脈搭橋術后，手術植入修復瓣膜或血管(自體來源的，異體來源的，或人工合成的)等情況下血栓的形成；該發明的抗體還可以用于預防球囊擴張術、冠狀動脈粥樣斑塊旋切、激光或者采用其他適當方法進行的血管成形術中的血小板聚集和血栓形成。 給藥時間可以在血管成形術前、術中和術后。這樣處理后可以防止血栓形成，因此相應減少了血管成形術后血栓形成導致的死亡、心肌梗死以及必須再次實施PTCA或冠狀動脈搭橋手術治療等并發癥的發生。血栓形成并發癥有。例如在改良的獼猴R)lts模型中，給予嵌合抗血小板抗體(嵌合SZ138Fab抗體片段)作為輔助治療可以有效地抑制血小板聚集，發揮抗血栓作用。體外血小板瑞斯托霉素誘導血小板聚集試驗結果顯示，可以呈劑量依賴的方式抑制特異性激動劑瑞斯托霉素誘導的血小板聚集。血小板聚集激活了凝血級聯反應，產生了更加穩定的纖維蛋白網狀組織和血凝塊，能夠被溶栓藥物溶解。為了預防和減輕溶栓治療后的血栓再形成以及加快血栓溶解， 該發明的抗體能單獨用于個體(如人)或者與其他溶栓藥物聯合用藥，如纖溶酶原激活劑 (組織型纖溶酶原激活劑，尿激酶，鏈激酶，重組組織型纖溶酶原激活劑)，抗凝或抗血小板藥物，如阿斯匹林、肝素、或香豆素類抗凝藥(如華法林)。聯合用藥時，該抗體或片段可以在溶栓藥物或抗凝藥物之前應用，或可以兩者同時給藥，也可以在使用溶栓藥物或抗凝藥物之后給藥。給藥劑量應足夠用來預防血小板聚集以及產生的血管再阻塞。抗體或抗體片段的有效劑量(能足夠抑制血小板聚集和血栓形成的劑量)可以溶于藥物接受的介質，如無菌鹽水，經胃腸外給藥，常用的是靜脈給藥。抗體配方可以含有添加劑，如穩定劑聚山梨醇酯80。抗體藥物可以用單一劑量，連續用完，或者分批輸入，如一次注射后再連續輸入。另外，抗體藥物還可以通過控制釋放(如使用多聚物或貼劑給藥系統)的方式或其他合適的方法給藥。給藥劑量受不同因素影響，視臨床癥狀、個體體重、是否使用其他藥物(如溶栓藥物)而定。Reopro為已在歐美臨床上廣泛使用的抗血小板膜糖蛋白GPUb α/IIIa親和抗體 Fab片段，該片段為完整抗體經木瓜蛋白酶消化后獲得，與親本鼠源性抗體相比，顯著減少了免疫反應(Mol Immunol 1995 ;32 :1271-1281)。然而，人體內不存在木瓜蛋白酶，所以 Reopro的C末段對人體為異種蛋白，74% (77/104)的正常人體內存在可與Fab片段的C末段的反應的 IgG 抗體(參見=Blood 2002 ；99 =2054-2059)。反復使用抗血小板抗體可以發生藥物誘導的血小板減少，這可能是由于抗體結合的血小板被人體視為外源蛋白，產生相應的抗體，通過網狀內皮系統被快速清除。由于血小板表面含有大量特異的GPnb α/IHa受體(約80000個受體每個血小板)以及血液循環中含有大量血小板(約0. 25-0. 5x 106/ml)，因此血小板減少是Reopro治療的重要并發癥。與GPIIb α/IIIa受體相比，血小板膜糖蛋白Λα作為抗栓治療的靶位點，理論上具有如下優勢1. VWF-GPIb/IX/V相互作用是血小板粘附，以及隨后形成血小板為主的血栓的第一步；此外，目前尚未觀察到替代途徑。因此，抑制該途徑可有很強的抗栓效果。 2.VWF-GPIb/IX/V相互作用僅在高剪切力條件下的血小板粘附中起重要作用，針對該作用軸能夠更特異地發揮抗動脈血栓作用，并保持靜脈系統的止血功能不受或少受影響，減少臨床出血危險的發生。3.阻斷血小板粘附到球囊擴張后血管暴露出的VWF，可阻斷血小板活化以及隨后的血小板內容物諸如血小板衍生的生長因子PDGF等的釋放。由于PDGF可影響平滑肌遷移和增殖，抑制血小板粘附到VWF可進一步減輕再狹窄的發生。
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因此，本發明要求保護所述抗人血小板膜糖蛋白Λα人鼠嵌合型單克隆抗體。本發明同時要求保護上述抗人血小板膜糖蛋白Λα人鼠嵌合型單克隆抗體的可變區序列，所述可變區序列的重鏈氨基酸序列如SEQ ID No. 1所示，所述可變區序列的輕鏈氨基酸序列如SEQ ID No. 2所示。本發明同時要求保護具上述可變區氨基酸序列的分子，所述分子包括但不限于 免疫球蛋白全分子、抗體的片段Fab或(Fab’)2或單鏈抗體、與其它成分的融合體。同時要求保護所述抗人血小板膜糖蛋白Λα人鼠嵌合型單克隆抗體在制備抗血栓治療藥物中的應用。血小板是血栓形成的關鍵成分，也是抗栓治療的重要靶位點。因此，基于本專利所涉及的抗人血小板膜糖蛋白Λα人鼠嵌合型單克隆抗體，可以開發出相應的抗栓藥物，通過靜脈推注或滴注的方式作用于人體，抑制血小板與受損血管內膜的異常粘附，從而阻斷血小板血栓形成，進而應用于用于PTCA(經皮冠狀動脈干預手術)和/或不穩定性心絞痛患者，防止急性血栓的形成，減少心臟缺血事件的發生。此外，基于本專利所涉及的抗人血小板膜糖蛋白Λα人鼠嵌合型單克隆抗體的高親和力，經放射性核素標記后，可以檢測體內或離體待測樣品中血栓。由于上述技術方案運用，本發明與現有技術相比具有下列優點1.由于抗體分子的免疫反應性主要由恒定區產生，因此含有人源性恒定區的嵌合抗體就不易在人體內產生抗鼠的免疫反應；2.本發明所述抗血小板GP Ib α單克隆抗體可以與人以及獼猴血小板膜糖蛋白 Iba (GP Iba)高特異性、高親合力結合，并且在獼猴體內利用經典的FOLTS模型證實了該單抗具有抗血栓作用；3.本發明所述抗血小板GP Iba嵌合單克隆抗體可以與血小板膜糖蛋白rt a (GP Ib a )高特異性、高親合力結合并具有抗血栓生物活性，因此可以用于PTCA(經皮冠狀動脈干預手術)和/或不穩定性心絞痛時，防止急性血栓的形成，減少心臟缺血事件的發生。
該CHO細胞株的保藏信息為保藏地址中國武漢武漢大學；保藏單位中國典型培養物保藏中心；保藏日期2011年11月10日；保藏編號CCTCC No :C2011103 ；分類命名真核表達CHO細胞株SZ-138 ；圖1為實施例一中5’ RACE產物電泳圖，其中1號為輕鏈結果，2號為重鏈結果，M 為 DL2000Marker (分子量從上到下依次為 2000bp、IOOObp、750bp、500bp、250bp、IOObp)；圖2為實施例一中嵌合型抗體表達質粒圖譜；圖3為實施例一中嵌合型抗體表達質粒圖譜；圖4為實施例三中抗血小板GPrt α人鼠嵌合型抗體SZ-138的SDS-PAGE電泳圖；圖5為實施例三中經木瓜蛋白酶消化后獲得Fab片段的SDS PAGE電泳圖；圖6為實施例四中流式細胞儀檢測鼠源性抗體與表達GPrt α的CHO細胞的結合比例；圖7為實施例四中流式細胞儀檢測嵌合型抗體與表達GPrt α的CHO細胞的結合比例；
圖8為實施例四中流式細胞儀檢測嵌合型抗體Fab片段體與表達GPrt α的CHO 細胞的結合比例；圖9為實施例五中SZ138及SZ138_Fab片段抑制瑞斯托霉素誘導的人血小板聚集
結果；圖10為實施例六中不同劑量chSZ138_Fab及生理鹽水對CFRs發生的抑制率。
具體實施例方式下面結合附圖及實施例對本發明作進一步描述實施例一嵌合型抗體真核表達質粒的構建1、單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區cDNA的構建抗人血小板糖蛋白GPrt α人鼠嵌合抗體SZ-138細胞株中抗體的可變區序列的克隆，采用 5’RACE(Rapid Amplification of cDNA Ends，快速擴增 cDNA 末端)技術，從分泌抗人血小板GPrt α鼠單抗的雜交瘤細胞株SZ-2A中克隆功能性抗體的可變區序列。其步驟可簡述為由一個反義的基因特異性引物(GSPl)來合成cDNA第一鏈，cDNA第一鏈純化后，利用末端脫氧核苷酸轉移酶(Terminal deoxynucleotidy transferase, TdT)在 cDNA 的3'末端加上一個合成的同聚核苷酸錨定序列。利用第二個巢式基因特異性引物(GSP2) 和一個與同聚核苷酸尾巴可以退火的錨定引物來擴增cDNA。(1)材料和方法-雜交瘤細胞株SZ-2A分泌抗人血小板GPrtα單克隆抗體-大腸桿菌菌株 ToplO (Invitrogen 公司，Cat. No. C4040-03)-克隆載體 pGEM-T-easy vector (Promega 公司，Cat. No. A1360)-引物設計根據免疫球蛋白基因的特點，設計兩套分別對應Ig和Kappa恒定區的基因特異性引物GSPl、GSP2，引物序列如下
SEQ ID No. 3 :pRace-H-GSPlGTCCACCKYGGTSYTGCTGGCYGGGTGSEQ ID No. 4 :pRace-H-GSP2GCACACYRCTGGACAGGGATCCAGAGTTCCSEQ ID No. 5 :pRace-K-GSPlACTTGACATTGATGTCTTTGSEQ ID No. 6 :pRace-K-GSP2CACGACTGAGGCACCTCCAGATG(2)結果1)5’ RACE產物電泳圖如圖1所示，其中1號為輕鏈結果，2號為重鏈結果。2)根據堿基序列與氨基酸編碼序列的相應關系，分析PCR產物的閱讀框架，確定相應可變區的氨基酸序列，其重鏈和輕鏈的序列分別如下所示SEQ ID No. 1，重鏈EVQLQQSGPELVKLGASVKISCKASGYSFTAYLMNWVKQSHGKSLEWIGRITPYNGDTFYNQKFKDKAT LTVDKSSNTAHMELLSLTSEDSAVYFCGRSRYGNLYYYAMDYWGQGTSVTVSS
SEQ ID No. 2，輕鏈IVMSQSPSSQAVSIGEKVTMSCKSSQSLLYSSNQKNYLAWFQQKPGQSPKLLIYWASTRESGVPDRFTG SGSGTDFTLTISSVKAEDLAVYYCQQYYSYPYTFGGGTKLEIKR ；根據免疫球蛋白基因的特點驗證其為抗體序列。2、單克隆抗體重鏈和輕鏈可變區基因片段克隆于表達載體引物設計以NCBI數據庫中人源抗體的IgGl和kappa鏈的恒定區序列為模板，設
計兩對引物，分別克隆人源輕鏈及重鏈的恒定區序列，引物序列如下
權利要求
1.一種抗人血小板膜糖蛋白Λα人鼠嵌合型單克隆抗體，其特征在于，包括鼠源重鏈可變區、鼠源輕鏈可變區；所述鼠源重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID No. 1所示，所述鼠源輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID No. 2所示。
2.根據權利要求1所述抗人血小板膜糖蛋白Λα人鼠嵌合型單克隆抗體，其特征在于，所述抗人血小板膜糖蛋白Λα人鼠嵌合型單克隆抗體還包括人源重鏈恒定區、人源輕鏈恒定區；其中，所述人源重鏈恒定區選自IgG(Y重鏈、IgM(y)、IgA(a)、IgE(0、 IgD( δ )五種同種型中的一種；所述人源輕鏈恒定區選自kappa或lambda中的一種。
3.根據權利要求2所述抗人血小板膜糖蛋白Λα人鼠嵌合型單克隆抗體，其特征在于，所述人源重鏈恒定區為:1861(^1重鏈)、1863(^；3)、1864(^4)三種亞類中的一種。
4.根據權利要求3所述抗人血小板膜糖蛋白Λα人鼠嵌合型單克隆抗體，其特征在于，所述人源重鏈恒定區為IgGl的重鏈恒定區。
5.根據權利要求1所述抗人血小板膜糖蛋白Λα人鼠嵌合型單克隆抗體，其特征在于，所述人源輕鏈恒定區為kappa的輕鏈恒定區。
6.一種高效表達權利要求1所述抗人血小板膜糖蛋白Λα人鼠嵌合型單克隆抗體的 CHO細胞株，該CHO細胞株的保藏號為CCTCC N0:C2011103。
7.抗人血小板膜糖蛋白Λα人鼠嵌合型單克隆抗體的可變區序列，所述可變區序列的重鏈氨基酸序列如SEQ ID No. 1所示，所述可變區序列的輕鏈氨基酸序列如SEQ ID No. 2 所示。
8.具有權利要求7所述可變區序列的分子，所述分子為免疫球蛋白全分子、抗體的片段Fab或(Fab，)2或單鏈抗體。
9.權利要求8所述具有權利要求7所述可變區序列的分子與放射性核素或熒光發射基團或與溶栓藥物以及與抑制血管內皮細胞生長的藥物的耦聯產物。
10.權利要求1所述抗人血小板膜糖蛋白Λα人鼠嵌合型單克隆抗體在制備抗血栓治療藥物中的應用。
全文摘要
本發明屬于生物技術領域，具體涉及一種具有與血小板膜糖蛋白的高特異性、高親合力結合并具有抗血栓生物活性的嵌合型單克隆抗體及其應用；一種抗人血小板膜糖蛋白Ibα人鼠嵌合型單克隆抗體，其特征在于，包括鼠源重鏈可變區、鼠源輕鏈可變區；所述鼠源重鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID No.1所示，所述鼠源輕鏈可變區的氨基酸序列如SEQ ID No.2所示。由于抗體分子的免疫反應性主要由恒定區產生，因此含有人源性恒定區的嵌合抗體就不易在人體內產生抗鼠的免疫反應；本發明所述抗血小板GP Ibα單克隆抗體可以與人以及獼猴血小板膜糖蛋白Ibα(GP Ibα)高特異性、高親合力結合，具有抗血栓作用。
文檔編號C12N5/10GK102558354SQ20111044197
公開日2012年7月11日 申請日期2011年12月26日 優先權日2011年12月26日
發明者季順東, 楊劍鋒, 江淼, 沈飛, 趙益明, 阮長耿 申請人:蘇州大學