專利名稱：脆弱擬桿菌在制備防治高膽固醇血癥組合物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及脆弱擬桿菌的應用技術領域，具體涉及脆弱擬桿菌在制備防治高膽固醇血癥組合物中的應用。
背景技術：
高膽固醇血癥是引發動脈粥樣硬化及相關心血管疾病(例如冠心病)的主要危險因子之一，如何降低血清膽固醇已經成為現代營養學家及臨床醫生越來越關心的話題。高膽固醇血癥無明顯的臨床癥狀，往往在體檢時發現。目前的防治措施主要包括行為防治和藥物治療。在近幾十年來，人們發現長期飲用酸奶的人群發生心血管疾病的風險明顯降低，大量科學研究證實這與酸奶中所含的益生菌有關。在M生囷中，被廣泛關注的雙歧桿囷和乳Ife囷在攝入后對人和動物具有很好作用的菌株，它們的特定菌株能夠在腸粘膜上定居，在腸道內建群并且防止有害微生物在其上粘附，是能通過保持腸內自然微生物區系促進生物個體健康的可生長的微生物制劑，幫助維持人和動物的健康。雙歧桿菌、乳桿菌的微生態制劑，服后可使膽固醇轉化為人體不吸收的糞留醇類物質，從而降低膽固醇水平。脆弱擬桿菌(ifecieroiofes fragilis')作為一種革蘭氏染色陰性、桿狀、兩端鈍圓而濃染，有莢膜、無芽胞、無動力的專性厭氧細菌，分產腸毒素型和非產腸毒素型。脆弱擬桿菌作為人及動物腸道正常菌群的一部分，主要存于結腸中，此外，呼吸道、胃腸道及泌尿生殖道粘膜也可定植生長。目前研究較多的是脆弱擬桿菌作為一種條件致病菌，當宿主粘膜受損時，可侵犯粘膜下層，引起感染，也可經血液流動，引起身體其它器官如腸道、腹腔、肝、肺、腦組織化膿性感染并伴發膿腫和引起急慢性腹瀉等。此外，其對結腸、直腸癌的發生也有促進作用。然而，脆弱擬桿菌并非只是一種條件致病菌。1991年張季階發表了《一種無毒脆弱擬桿菌的分離鑒定》，報導了關于1983年9月從一個發育良好的嬰兒糞便中分離出量大而又較純的細菌，經以系列的鑒定、基礎試驗和臨床應用觀察，屬于脆弱擬桿菌群中的一株無毒菌，是人體的益生菌，定名為BF839菌株。由此，研究發現了，脆弱擬桿菌也是一種益生菌。但是，脆弱擬桿菌作為一種益生菌，并且在制備防治高膽固醇血癥組合物的相關應用，目前尚未有報道。
發明內容
本發明的目的在于提供脆弱擬桿菌在制備防治高膽固醇血癥組合物中的應用。為了解決上述問題，本發明所采用的技術方案是:
提供脆弱擬桿菌在制備防治高膽固醇血癥組合物中的應用，所述的脆弱擬桿菌保藏單位名稱為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏單位地址為北京市朝陽區北辰西路I號院3號，保藏日期為2013年3月12日，保藏編號為CGMCC N0.7280，分類命名為 Bac teroides fragiIiS0
其中，所述組合物為至少含有能防治高膽固醇血癥的脆弱擬桿菌的食品或藥物組合物。其中，所述組合物選自奶粉、干酪、凝乳、酸奶酪、冰激凌、奶基發酵食品、發酵谷類食品中的任意一種。其中，所述組合物為丸劑、片劑、顆粒制劑、膠囊、口服液或者管飼制劑。其中，所述組合物為含有所述脆弱擬桿菌的液體細菌懸浮液。其中，所述脆弱擬桿菌在所述組合物中的含量為KTlOiciCfu /mL。本發明的有益效果是:
本發明發掘了脆弱擬桿菌新的用途，開拓了一個新的應用領域。本發明通過實驗證明，脆弱擬桿菌安全無毒，藥理作用強，對于高膽固醇血癥有很好的預防和治療作用，從而預示了脆弱擬桿菌具有很好的食用和藥用前景。脆弱擬桿菌作為一種益生菌，可用于制備防治高膽固醇血癥的食品或藥物組合物，為臨床提供適合人體服食的保健及防治良品。
具體實施方式
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下面通過實施例對本發明做進一步詳細說明，這些實施例僅用來說明本發明，并不限制本發明的范圍。實施例1脆弱擬桿菌菌液的制備 (O由嬰兒糞便中分離脆弱擬桿菌
按“正常菌群檢查法”稱取0.5克大便，置于先裝有4.5ml生理鹽水的試管中，以此連續稀釋成10_卜10_6，由高稀積度向低稀積度滴到Bd培養基平板上，置于厭氧產氣盒中加厭氧產氣袋進行厭氧培養。置37°C，2 7天后開罐檢查。選取單一菌落進行純培養、染色鏡檢、培養特性、生理生化檢測。(2)脆弱擬桿菌的增菌培養及菌液制備
選取純化后的單個菌落接種于改良的胰蛋白胨肉湯中進行增菌培養，所得菌液離心沉淀，轉速3000r/min,離心15min,去上清,沉淀物用生理鹽水洗漆后,沉淀物用生理鹽水稀釋，用麥氏比濁管做菌數測定，稀釋至IO8 cfu /ml, IO9 cfu /ml, IO10 cfu /ml，保存備用。實施例2脆弱擬桿菌毒力實驗
采用實施例1制備的脆弱擬桿菌菌液進行以下實驗:
(O小鼠急性毒力實驗
取體重22±2克C57BR/C小鼠(雌雄各半)60只，分成高劑量組、低劑量組和對照組，各組20只。高劑量組每只小鼠每天灌胃IO12 cfu /ml菌液0.5ml，低劑量組每天灌胃IO9 cfu/ml菌液0.5ml，對照組每天灌胃0.5ml生理鹽水。連續觀察14天。實驗結果:小鼠正常生長，未見死亡，LD50測不出。(2)大鼠毒力實驗
取150±20克SD大鼠30只(雌雄各半)，分為3組:高低劑量組和對照組。高劑量組每只大鼠每天灌胃1012cfu/ml菌液2ml,低劑量組每天灌胃109cfu/ml菌液2ml,對照組每天灌胃2ml生理鹽水。連續觀察14天，14天后抽靜脈血測血象、肝腎功。取胃腸肝脾組織做病理切片電鏡觀察。實驗結果:均未見明顯異常。
(3)恒河猴毒力實驗取恒河猴10只(雌雄各半)，分為2組:高低劑量組和對照組。高劑量組每只恒河猴每天口服1012cfu/ml菌液100ml,低劑量組每天口服109cfu/ml菌液100ml。連續觀察60天。14天、30天、45天、60天后分別抽靜脈血測血象、肝腎功，測心電圖。取胃腸肝脾組織做病理切片電鏡觀察。實驗結果:均未見明顯異常。實施例3脆弱擬桿菌對于高膽固醇血癥的防治作用 采用實施例1制備的脆弱擬桿菌菌液進行以下實驗:
取SD大鼠，體重200 土 20克，適應環境一周后，尾靜脈取血，測定血脂水平，血脂不正常的大鼠剔除。隨機將SD大鼠分為3組:正常組、高脂組、治療組，每組10只。正常組給予正常飼料(蛋白質14%，脂肪10%，碳水化合物76%);高脂組和治療組給予高脂飼料(添加了 2%膽固醇、1%的膽酸、5%花生油)；治療組每天灌胃2ml 109CfU/ml的脆弱擬桿菌懸液。8周后，禁食過夜，乙醚麻醉后心臟取血測定血清總膽固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白膽固醇、低密度脂蛋白膽固醇。取主動脈、心、肝、腎做病理切片。實驗結果:治療組相比高脂組血清總膽固醇明顯降低，病理切片較正常組無明顯改變，而高脂組主動脈切片到局 部內膜細胞收縮及內膜下水腫病理改變，偶見單核細胞粘附于內膜上，內膜下偶見少量泡沫細胞侵潤。實驗結果表明，分離的脆弱擬桿菌對于高膽固醇血癥有很好的防治作用，對于動脈粥樣硬化的形成也有很好的預防和治療作用。
權利要求
1.脆弱擬桿菌在制備防治高膽固醇血癥組合物中的應用。
2.根據權利要求1所述的脆弱擬桿菌在制備治療炎癥性腸病組合物中的應用，其特征在于:所述組合物為至少含有能防治高膽固醇血癥的脆弱擬桿菌的食品或藥物組合物。
3.根據權利要求2所述的脆弱擬桿菌在制備治療炎癥性腸病組合物中的應用，其特征在于:所述組合物選自奶粉、干酪、凝乳、酸奶酪、冰激凌、奶基發酵食品、發酵谷類食品中的任意一種。
4.根據權利要求2所述的脆弱擬桿菌在制備治療炎癥性腸病組合物中的應用，其特征在于:所述組合物為丸劑、片劑、顆粒制劑、膠囊、口服液或者管飼制劑。
5.根據權利要求1所述的脆弱擬桿菌在制備治療炎癥性腸病組合物中的應用，其特征在于:所述組合物為含有所述脆弱擬桿菌的液體細菌懸浮液。
6.根據權利要求1所述的脆弱擬桿菌在制備治療炎癥性腸病組合物中的應用，其特征在于:所述脆弱擬桿菌在所述 組合物中的含量為IO8IOiciCfu /mL。
全文摘要
本發明涉及脆弱擬桿菌的應用技術領域，具體涉及脆弱擬桿菌在制備防治高膽固醇血癥組合物中的應用，實驗證明脆弱擬桿菌安全無毒，藥理作用強，對于高膽固醇血癥有很好的預防和治療作用，從而預示了脆弱擬桿菌具有很好的食用和藥用前景。本發明發掘了脆弱擬桿菌新的用途，開拓了一個新的應用領域，脆弱擬桿菌作為一種益生菌，可用于制備防治高膽固醇血癥的食品或藥物組合物，為臨床提供一種適合人體服食的保健及防治良品。
文檔編號A23C9/13GK103142657SQ20131008571
公開日2013年6月12日 申請日期2013年3月18日 優先權日2013年3月18日
發明者智發朝, 白楊, 劉洋洋 申請人:廣州知光生物科技有限公司