一種花生多肽及其制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種花生多肽及其制備方法，包括以下步驟：(1)淀粉酶蒸煮：取脫脂脫殼干燥花生粕，粉碎過40目篩后，按照料液比1：5-1:10加入純凈水，加入高溫淀粉酶10u/g，攪拌均勻后在溫度為110℃條件下蒸煮30min；(2)蛋白酶1次水解：蒸煮液冷卻，調整pH至8.0，按照花生粕重量的0.3%-0.9%加入中性蛋白酶，在50℃的條件下，酶解0.5-2h；(3)蛋白酶2次水解：酶解液在10000rpm條件下離心15min，殘渣繼續加入5-10倍的水，加入花生粕重量0.3%的中性蛋白酶，在溫度50℃、pH8.0、水解0.5-1h，離心，合并2次上清液，即得到粗制多肽溶液。本發明原料采用淀粉酶蒸煮進行預處理，可以打破花生粕中淀粉和蛋白質的網狀結構。
【專利說明】一種花生多肽及其制備方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于食品加工【技術領域】，涉及一種花生多肽及其制備方法。
【背景技術】
[0002]花生蛋白是一種營養價值較高的植物蛋白，其生物價(Bv)為58，效率值為117，含有人體所需的8種必需氨基酸，尤其富含精氨酸(9%)，而精氨酸具有免疫促進功能，對維護人體健康和幼兒發育具有重要作用。研究發現，蛋白質經水解得多肽比蛋白質更好的營養性能；實驗證實肽的吸收率比氨基酸高，且比氨基酸更易，更快地通過小腸黏膜被人體吸收利用。花生蛋白活性多肽在營養保健領域具有多種卓越的生理功能:一是多肽可由腸道不經降解直接吸收，其吸收速度和吸收率比蛋白質和氨基酸都高，因而可作為腸道營養劑和流質食物的形式提供給處于特殊身體狀況下的人群；二是它不僅提供人體必須的蛋白營養，還能有效降低血液中膽固醇和甘油三脂的含量，加快體內耗能，燃燒脂肪，抵抗肥胖；三是花生蛋白活性多肽能夠為人體內的自由基與重金屬，改善細胞代謝，為免疫系統制備與對抗細菌和感染的抗體。此外，在提高人體免疫功能方面，花生多肽與其它多肽有顯著不同，花生多肽含有白藜蘆醇，它對心血管疾病和動脈硬化有明顯的抑制作用，亦可藉此促進人類腫瘤細胞的凋亡，或是通過腫瘤抑制因子P53的表現來達到抗腫瘤活性。
[0003]目前，多肽的生產主要有合成與蛋白質體外水解兩種方法，合成法主要有化學合成，DNA重組技術合成，酶法合成三種方法。合成法雖然可按人們的意愿合成任意活性肽，但目前因為成本高，副反應物多及殘留物等問題制約其發展；而重組DNA技術如果有望成功，將會有廣闊前景。體外水解蛋白質為肽有三種方法:酸水解，堿水解及酶法水解，前兩種方法簡單易操作，但可能存在營養和毒理方面有害的效應，因此其應用收到了一定的限制；蛋白質酶法水解能在一定的條件下進行定位水解產生特定的肽，且易于控制水解進程，并且具有高度的專一性，一般不會導致營養方面的損失，也不會產生毒理上的問題；同時酶具有特異性，可在溫和條件下進行，能耗低，因而能較好的滿足肽的生產需要。在多肽生產中酶的選擇是關鍵，它不僅影響最后產品的得率，反應速度，而且直接影響產品的風味和理化特征。但是花生中蛋白、淀粉組成復雜的網絡結構，阻礙了水解的進程，因此目前酶水解花生多肽存在得率低、能耗大等缺陷。
【發明內容】
[0004]本發明的目的是提供一種淀粉酶蒸煮制備花生多肽的方法，其制備方法條件溫和、無污染、效率技高，不僅原料預處理步驟可以最大限度的將花生蛋白溶解釋放，而使后期蛋白酶水解速度快、水解度高、多肽得率高，從而進一步實現提高脫脂花生柏的附加值。
[0005]本發明另外提供一種由上述方法制備的花生多肽。
[0006]為了實現上述目的，通過大量試驗研究，本發明提出如下技術方案:
一種制備花生多肽的方法，包括以下步驟:
(I)淀粉酶蒸煮:取脫脂脫殼干燥花生柏，粉碎過40目篩后，花生柏和水按照料液比1:5-1:10加入純凈水，料液比單位為g/ml，以花生柏重量計，加入耐高溫a -淀粉酶10u/g，攪拌均勻后在溫度為110°C條件下蒸煮30min ；
(2)蛋白酶I次水解:蒸煮液冷卻，調整pH至8.0，按照花生柏重量的0.3%-0.9%加入中性蛋白酶，在50°C的條件下，酶解0.5-2h ；
(3)蛋白酶2次水解:酶解液在IOOOOrpm條件下離心15min，取下層殘渣，繼續加入殘渣重量5-10倍的水，加入花生柏重量0.3%的中性蛋白酶，在溫度50°C、pH8.0、水解
0.5-lh，離心，合并2次上清液，即得到粗制多肽溶液。
[0007]優選的，所述耐高溫a -淀粉酶規格為2000 u/g。
[0008]優選的，所述中性蛋白酶規格為20，000u/g。
[0009]本發明另外提供一種由上述方法制備的花生多肽。
[0010]本發明還包括提純分離步驟，如下:將粗制多肽溶液先后經濾紙過濾、IOOnm微濾膜過濾、IOKDa納濾膜過濾，納濾液在一 45°C真空冷凍干燥，得花生多肽。
[0011]本發明技術方案材料:脫脂脫殼干燥花生柏、中性蛋白酶(20，000u/g)，耐高溫a -淀粉酶(2000 u/g)。
[0012]本發明的有益效果在于:本發明提供了淀粉酶蒸煮制備花生多肽的方法，原料采用淀粉酶蒸煮進行預處理，可以打破花生柏中淀粉和蛋白質的網狀結構。
[0013]本發明的附加方面和優點將在下面的描述中部分給出，部分將從下面的描述中變得明顯，或通過本發明的實踐了解到。
【具體實施方式】
[0014]下面通過實施例對本發明的技術方案作進一步說明，但不能理解為對本發明的限制。
[0015]實施例1
取脫脂脫殼干燥花生柏500克，粉碎過40目篩后，按照料液比5L加入純凈水，加入耐高溫a -淀粉酶2.5g，攪拌均勻后在溫度為121°C條件下蒸煮30min ;蒸煮液冷卻，調整pH至8.0，加入中性蛋白酶1.5g，在50°C的條件下，酶解2h。酶解液在IOOOOrpm條件下離心15min，殘渣繼續加入2.5L的水，再次加入1.5g中性蛋白酶，在溫度50°C、pH8.0、水解Ih后，離心，合并2次上清液，即得到粗制多肽溶液，采用雙縮脲法檢測溶液中多肽的含量，計算脫脂脫殼花生多肽的轉化率為85%。
[0016]粗制多肽溶液超濾分離，截留分子量為IOKDa以下的多肽，將多肽溶液經過凝膠層析、離子交換層析和RT-HPLC后收集的活性組分進行醋酸纖維素薄膜電泳，電泳為一條單一條帶，說明收集的活性多肽純度較高，質譜測定其分子量為8251.2Da。
[0017]檢測方法:游離氨基酸采用甲醛滴定法；蛋白質采用凱氏定氮法。多肽采用雙縮脲法檢測。
[0018]多肽轉化率計算公式:轉化率=T2-T1/P1-P2。
[0019]式中:T2為酶解后多肽含量；T1為酶解前多肽含量；P1為酶解前總蛋白含量；P2為酶解前酸溶性蛋白含量。
[0020]盡管已經示出和描述了本發明的實施例，本領域的普通技術人員可以理解:在不脫離本發明的原理和宗旨的情況下可以對這些實施例進行多種變化、修改、替換和變型，本發明的范圍由權利要求及其等同物限定。
【權利要求】
1.一種制備花生多肽的方法，其特征在于，包括以下步驟: (1)淀粉酶蒸煮:取脫脂脫殼干燥花生柏，粉碎過40目篩后，花生柏和水按照料液比1:5-1:10加入純凈水，料液比單位為g/ml，以花生柏重量計，加入耐高溫α -淀粉酶10u/g，攪拌均勻后在溫度為110°C條件下蒸煮30min ； (2)蛋白酶I次水解:蒸煮液冷卻，調整pH至8.0,按照花生柏重量的0.3%-0.9%加入中性蛋白酶，在50°C的條件下，酶解0.5-2h ； (3)蛋白酶2次水解:酶解液在IOOOOrpm條件下離心15min，取下層殘渣，繼續加入殘渣重量5-10倍的水，加入花生柏重量0.3%的中性蛋白酶，在溫度50 V、pH8.0、水解0.5-lh，離心，合并2次上清液，即得到粗制多肽溶液。
2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，還包括提純分離步驟，如下:將粗制多肽溶液先后經濾紙過濾、IOOnm微濾膜過濾、IOKDa納濾膜過濾，納濾液在一 45°C真空冷凍干燥，得花生多肽。
3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述耐高溫α-淀粉酶規格為2000u/g。
4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，所述中性蛋白酶規格為20，OOOu/g。
5.權利要求1一 4任一項所述的方法制備的花生多肽。
【文檔編號】A23J3/34GK103478403SQ201310401169
【公開日】2014年1月1日 申請日期:2013年9月6日 優先權日:2013年9月6日
【發明者】莊義慶, 吳琴燕, 楊敬輝 申請人:江蘇丘陵地區鎮江農業科學研究所