一種可溶性抗體表達的方法
【專利摘要】本發明公開了一種可溶性抗體表達的方法。首先將抗原淘選后從噬菌體抗體庫中淘選出陽性克隆，測序鑒定后同時酶切，以去除噬菌體外殼蛋白基因，純化回收片段在ＤＮＡ連接酶的作用下自身環化轉化入，并涂布平板，過夜培養。所述過夜培養過程中，溫度要保持在３６攝氏度；其后，隨機挑取單個克隆，過夜震蕩培養提取質粒，單酶切鑒定；以ＩＰＴＧ有道的空載體烈菌上清和未加ＩＰＴＧ誘導表達的克隆菌裂菌上清為陰性對照，誘導重組蛋白的表達。本發明的有益效果是，實驗數據準確，可以定性、定量分析，同時為后續展開的人源化提供依據和支持。
【專利說明】一種可溶性抗體表達的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種生化的檢測方法，具體來說，是指一種可溶性抗體表達的方法。
【背景技術】
[0002]化療是人民目前治療腫瘤尤其是惡性腫瘤的主要方法，在化療過程中出現的多藥耐藥是腫瘤化療的最主要障礙，其中可溶性抗體的過表達是引發腫瘤細胞的最主要原因。 目前用于腫瘤多藥耐藥性檢測和治療的大多為完整抗體，組織穿透能力差，在血液和非瘤組織的清除速度比較慢。本發明試圖探究一種構建大腸癌抗體的原核表達載體，制備純化處具有一定生物活性的抗體，該抗體的篩選有望為大腸癌等腫瘤細胞的多藥耐藥性的檢測和治療提供新的選擇。
【發明內容】
[0003]為克服上述技術問題，我們提出了以下技術方案:
一種可溶性抗體表達的方法，首先將抗原淘選后從噬菌體抗體庫中淘選出陽性克隆， 測序鑒定后同時酶切，以去除噬菌體外殼蛋白基因，純化回收片段在D N A連接酶的作用下自身環化轉化入，并涂布平板，過夜培養。
[0004]本發明中，所述過夜培養過程中，溫度要保持在3 6攝氏度。
[0005]本發明中，其后，隨機挑取單個克隆，過夜震蕩培養提取質粒，單酶切鑒定。
[0006]本發明的有益效果是，實驗數據準確，可以定性、定量分析，同時為后續展開的人源化提供依據和支持。
【具體實施方式】
[0007]首先將抗原淘選后從噬菌體抗體庫中淘選出陽性克隆，測序鑒定后同時酶切，以去除噬菌體外殼蛋白基因，純化回收片段在D N A連接酶的作用下自身環化轉化入，并涂布平板，過夜培養。所述過夜培養過程中，溫度要保持在3 6攝氏度；其后，隨機挑取單個克隆，過夜震蕩培養提取質粒，單酶切鑒定；以I P T G有道的空載體烈菌上清和未加I P T G誘導表達的克隆菌裂菌上清為陰性對照，誘導重組蛋白的表達。
[0008]以上所述，僅為本發明較佳的【具體實施方式】，但本發明的保護范圍并不局限于此， 任何熟悉本【技術領域】的技術人員在本發明披露的技術范圍內，根據本發明的技術方案及其發明構思加以等同替換或改變，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種可溶性抗體表達的方法，其特征在于，首先將抗原淘選后從噬菌體抗體庫中淘選出陽性克隆，測序鑒定后同時酶切，以去除噬菌體外殼蛋白基因，純化回收片段在D N A 連接酶的作用下自身環化轉化入，并涂布平板，過夜培養。
2.如權利要求1所述的一種可溶性抗體表達的方法，其特征在于，所述過夜培養過程中，溫度要保持在3 6攝氏度。
3.如權利要求1所述的一種可溶性抗體表達的方法，其特征在于，其后，隨機挑取單個克隆，過夜震蕩培養提取質粒，單酶切鑒定。
4.如權利要求1所述的一種可溶性抗體表達的方法，其特征在于，以IP T G有道的空載體烈菌上清和未加I P T G誘導表達的克隆菌裂菌上清為陰性對照，誘導重組蛋白的表達。
【文檔編號】C12N15/70GK103589747SQ201310519820
【公開日】2014年2月19日 申請日期:2013年10月30日 優先權日:2013年10月30日
【發明者】王景文 申請人:王景文