一種將質粒片段膠回收的方法
【專利摘要】本發明公開了一種將質粒片段膠回收的方法，其特征在于，步驟如下：首先將具有單一目的ＤＮＡ的目的片段條從瓊脂糖凝膠上切下，并放入事先消毒殺菌的離心管中；向吸附柱中加入平衡液中；高速離心，１－２分；然后向膠塊中注入300ul稀釋溶液以及BL；待凝膠溶液溫度降至室溫后，靜置；將上一步得到的溶液導入漂洗液中，再加入純無水乙醇，至少30毫升；徹底晾干；向吸附膜中間懸空遞進緩沖液；最后注入緩沖液之前，需要在零下二十度的環境下冷藏至少12小時；,所述無水乙醇倒入之前，需要反復沖洗吸附柱。本發明的有益效果是，成本較低、重復性好，轉化效率低，而且可以比較完全的對比目的片段。
【專利說明】一種將質粒片段膠回收的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種生化實驗室的試驗方法，具體來說一種將質粒片段膠回收的方法。
【背景技術】
[0002]質粒(Plasmid)是附加到細胞中的非細胞的染色體或核區DNA原有的能夠自主復制的較小的DNA分子(即細胞附殖粒、又胞附殖粒)。大部分的質粒雖然都是環狀構形，然而目前也發現有少數的質粒屬于線性構形，它存在于許多細菌以及酵母菌等生物中，乃至于植物的線粒體等胞器中。天然質粒的DNA長度從數千堿基對至數十萬堿基對都有。質粒天然存在于這些生物里面，有時候一個細胞里面可以同時有一種乃至于數種的質粒同時存在。質粒的套數(copy number)在細胞里從單一到數千都有可能。有時有些質粒含有某種抗藥基因(如大腸桿菌中就有含有抗四環素基因的質粒)。有一些質粒攜帶的基因則可以賦予細胞額外的生理代謝能力，乃至于在一些細菌中提高它的致病力。一般來說，質粒的存在與否對宿主細胞生存沒有決定性的作用。它是基因工程最常見的運載體。
【發明內容】
[0003]為克服上述技術問題，我們提出了以下技術方案:
一種將質粒片段膠回收的方法，步驟如下:首先將具有單一目的D N A的目的片段條從瓊脂糖凝膠上切下，并放入事先消毒殺菌的離心管中；向吸附柱中加入平衡液中；高速離心，I 一 2分；然后向膠塊中注入300ul稀釋溶液以及BL ;待凝膠溶液溫度降至室溫后，靜置；將上一步得到的溶液導入漂洗液中，再加入純無水乙醇，至少30毫升；徹底晾干；向吸附膜中間懸空遞進緩沖液。
[0004]本發明中，最后注入緩沖液之前，需要在零下二十度的環境下冷藏至少12小時。
[0005]本發明中，所述無水乙醇倒入之前，需要反復沖洗吸附柱。
[0006]本發明的有益效果是，成本較低、重復性好，轉化效率低，而且可以比較完全的對比目的片段。
【具體實施方式】
[0007]一種將質粒片段膠回收的方法，步驟如下:首先將具有單一目的D N A的目的片段條從瓊脂糖凝膠上切下，并放入事先消毒殺菌的離心管中；向吸附柱中加入平衡液中；高速離心，I 一 2分；然后向膠塊中注入300ul稀釋溶液以及BL;待凝膠溶液溫度降至室溫后，靜置；將上一步得到的溶液導入漂洗液中，再加入純無水乙醇，至少30毫升；徹底晾干；向吸附膜中間懸空遞進緩沖液；最后注入緩沖液之前，需要在零下二十度的環境下冷藏至少12小時；所述無水乙醇倒入之前，需要反復沖洗吸附柱。
[0008]以上所述，僅為本發明較佳的【具體實施方式】，但本發明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本【技術領域】的技術人員在本發明披露的技術范圍內，根據本發明的技術方案及其發明構思加以等同替換或 改變，都應涵蓋在本發明的保護范圍之內。
【權利要求】
1.一種將質粒片段膠回收的方法，其特征在于，步驟如下:首先將具有單一目的D NA的目的片段條從瓊脂糖凝膠上切下，并放入事先消毒殺菌的離心管中；向吸附柱中加入平衡液中；高速離心，I 一 2分；然后向膠塊中注入300ul稀釋溶液以及BL ;待凝膠溶液溫度降至室溫后，靜置；將上一步得到的溶液導入漂洗液中，再加入純無水乙醇，至少30毫升；徹底晾干；向吸附膜中間懸空遞進緩沖液。
2.如權利要求1所述的一種將質粒片段膠回收的方法，其特征在于，最后注入緩沖液之前，需要在零下二十度的環境下冷藏至少12小時。
3.如權利要求1所述的一種將質粒片段膠回收的方法，其特征在于，所述無水乙醇倒入之前，需要反復沖洗吸附柱。
【文檔編號】C12N15/10GK103602666SQ201310534998
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年11月4日 優先權日:2013年11月4日
【發明者】劉軍 申請人:劉軍