一種治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法
【專利摘要】本發明公開了一種治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法，步驟包括：將原料經過食砜節桿菌發酵液發酵，原料中硫酸軟骨素經過酶解得到低分子硫酸軟骨素；所制備的低分子硫酸軟骨素素中硫酸軟骨素二糖含量在97%以上，其分子量在450-480之間，硫酸軟骨素A含量在70-95%之間，硫酸軟骨素C含量在5-25%之間。本發明制備方法操作方便、周期短，生產成本低，低分子硫酸軟骨素治療好，純度高，可用于大規模工業化生產，經過大鼠試驗，對心肌細胞損傷修復效果顯著。
【專利說明】—種治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法【技術領域】[0001]本發明涉及一種硫酸軟骨素的制備方法，尤其涉及一種治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法。【背景技術】[0002]硫酸軟骨素(Chondroitin Sulfate, CS)是存在于人和動物結締組織中的酸性黏多糖，主要分布于軟骨、骨、肌腱、肌膜和血管壁中，由D-葡糖醛酸和N-乙酰-D-氨基半乳糖以1，3苷鍵連接形成二糖，二糖之間以β_1，4苷鍵連接而成。CS的相對分子質量(Mr) 一般在20 X 103以上，當Mr降低小于IOX 103時，常被稱為低分子量硫酸軟骨素(LMWCS)。[0003]CS作為蛋白聚糖的組成部分，存在于細胞內顆粒、細胞膜、基底膜和細胞外基質中，通過糖鏈中特定的結構域與細胞因子、粘附因子或她們的受體特異性結合，發揮著重要的生理學功能，也與眾多病理過程息息相關。CS作為臨床藥物使用也近半個世紀之久，在歐、美、日等發達國家，因其具有抗關節炎、降血脂、抗凝血、抗動脈粥樣硬化、心臟病、抗病毒和抗腫瘤、減少鉬類藥物腎毒性等多種生物活性而得到廣泛應用。但由于CS分子量較大，親水集團多，脂溶性差，故體內吸收不完全，生物利用度低的不足也一直困擾著CS類藥品的大規模應用。而LMWCS相對普通CS而言，因Mr降低而更有利于被機體吸收和利用，在藥用、保健品和化妝品等方面有巨大的應用潛力。[0004]LMWCS 一般通過CS產品的降解來制備，主要有酸水解法和酶法。酸降解反應產物中雜質較多且不易除去，處理須耗費大量時間，反應過程中硫酸軟骨素分子上的硫酸基團也會不同程度的脫落，且造成環境污染。相比較之下，酶解法反應條件溫和，污染小且工藝簡單易控，亦不會造成CS分子上硫酸基團的破壞，更適合于LMWCS的工業化生產。[0005]但是酶解法對使用的酶有很高的要求，需要特異的軟骨素酶，但目前國內尚未開發出有自主知識產權的軟骨素酶產生菌，只能以高昂的價格從國外進口，從而大大增加了生產成本。
【發明內容】
[0006]本發明的目的在于克服現有技術的不足，提供一種治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法。[0007]為實現上述目的，本發明所采用的技術方案是:一種治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法，步驟包括:將原料經過食砜節桿菌發 酵液發酵，原料中硫酸軟骨素經過酶解得到低分子硫酸軟骨素；所制備的低分子硫酸軟骨素素中硫酸軟骨素二糖含量在97%以上，其分子量在450-480之間，硫酸軟骨素A含量在70-95%之間，硫酸軟骨素C含量在5-25% 之間。[0008]進一步的，所述原料指雞軟骨、豬軟骨或牛軟骨的一種或幾種混合。[0009]進一步的，所述硫酸軟骨素二糖分子結構如下:
【權利要求】
1.一種治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于，步驟包括:將原料經過食砜節桿菌發酵液發酵，原料中硫酸軟骨素經過酶解得到低分子硫酸軟骨素；所制備的低分子硫酸軟骨素素中硫酸軟骨素二糖含量在97%以上，其分子量在450-480之間，硫酸軟骨素A含量在70-95%之間，硫酸軟骨素C含量在5-25%之間。
2.根據權利要求1所述的治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于: 所述原料指雞軟骨、豬軟骨或牛軟骨的一種或幾種混合。
3.根據權利要求1所述的治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于: 所述硫酸軟骨素二糖分子結構如下:
4.根據權利要求1或3所述的治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于:所述硫酸軟骨素二糖含量在98.5%以上，分子量在455-460之間。
5.根據權利要求1所述的治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于: 所述硫酸軟骨素A含量在70-80%之間，硫酸軟骨素C含量在10-15%之間。
6.根據權利要求1所述的治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于: 所述食砜節桿菌發酵液培養基組分為w/v:硫酸軟骨素0.7-0.9%,KH2PO4 0.01-0.03%、酵母浸粉0.5-0.7%、MgSO4.7H20含量0.7-0.9%、pH值5_7 ;發酵條件為:按1.5% v/v接種量將種子菌液接入發酵罐中于20-35°C，100_300r/min振蕩通氣培養48_96h。
7.根據權利要求1所述的治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于: 所述發酵液酶解硫酸軟骨素的條件為每升發酵液酶解硫酸軟骨素0.1-0.6kg，酶解時間 5-8h,酶解溫度30-45 °C，酶解pH為6-8。
8.根據權利要求1所述的治療心肌炎的低分子硫酸軟骨素的制備方法，其特征在于: 所述低分子硫酸軟骨素促進H9c2心肌細胞的生長和增殖的作用濃度為200μg.mL-1，對治療心肌炎和心肌損傷修復具有重要的作用。
【文檔編號】C12R1/06GK103602711SQ201310550056
【公開日】2014年2月26日 申請日期:2013年11月8日 優先權日:2013年11月8日
【發明者】曹榮軍, 楊慶利, 劉萬順, 王鳳山, 張天民, 余玉奎, 臺文靜, 陳杰, 劉少芳 申請人:青島貝爾特生物科技有限公司