一種油茶籽多肽的制備方法
【專利摘要】本發明涉及一種油茶籽多肽的制備方法，具體如下：油茶籽蛋白經粉碎，過80~100目篩后按質量體積比3:100~120加水制成懸浮液，所述懸浮液于90~95℃熱處理10~20min，降溫后調pH值至中性，按4300~4400u/g底物的加酶量加入中性蛋白酶，于53~54℃酶解3.5~4.5h，酶解結束后滅酶，離心得上清液，所述上清液經過脫鹽、柱層析后洗脫液再次離心得上清液，所述上清液經過冷凍干燥得油茶籽多肽。本發明的提取工藝條件溫和，制得的油茶籽粕蛋白形態、色澤佳，油茶籽蛋白再經過中性蛋白酶的酶解、脫鹽和柱層析，柱層析的洗脫液經過冷凍干燥獲得油茶籽粕多肽，該多肽雜質含量低，氨基酸含量豐富，可以廣泛應用于食品添加劑。
【專利說明】一種油茶籽多肽的制備方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種多肽的制備方法，具體的說是涉及一種油茶籽多肽的制備方法。【背景技術】
[0002]油茶屬于常綠小喬木，是茶科山茶屬，是我國南方的一種優良的木本油料植物。我國油茶資源十分豐富，僅油茶林的種植面積就達400萬hm2，是世界上油茶品種最多、分布最廣、油茶籽產量最高的國家，年產油茶籽約54.98萬噸、茶油15萬噸、油茶籽副產品一油茶籽柏的年平均產量約為39.71萬噸。油茶籽柏中蛋白質含量約為12%~15%，其氨基酸組成為17種，其中8種為人體必需氨基酸。油茶籽柏的利用率相當低，造成資源的極大浪費，植物蛋白質在生物酶法條件下，水解生成的多肽及氨基酸等物質，具有很高的營養價值與功能特性，因此該法已成為研究熱點。很多種植物蛋白質酶解后產生的多肽除了具有易被人體消化吸收的特性外，還具有很強的抗氧化、降低膽固醇等功能特性。到目前為止，未見國內外有關油茶籽多肽的研究報道，因此，開展對油茶籽多肽保健功能活性的研究具有重要的現實意義。
【發明內容】
[0003]本發明的目的在于解決現有技術的不足，提供一種一種油茶籽多肽的制備方法。
[0004]本發明解決其技術問題所采用的技術方案是:
[0005]一種油茶籽多肽的制備方法，所述制備方法具體如下:
[0006]油茶籽蛋白經粉碎，過80~100目篩后按質量體積比3:100~120加水制成懸浮液，所述懸浮液于90~95°C熱處理10~20min，降溫后調pH值至中性，按4300~4400u/g底物的加酶量加入中性蛋白酶，`于53~54°C酶解3.5~4.5h，酶解結束后滅酶，離心得上清液，所述上清液經過脫鹽、柱層析后洗脫液再次離心得上清液，所述上清液經過冷凍干燥得油茶籽多肽。
[0007]作為優選，中性蛋白酶的加酶量為4364u/g底物，酶解溫度為53.5°C，酶解時間為4小時。
[0008]作為優選，所述油茶籽蛋白的制備方法如下:
[0009](I)酶解:將粉碎后過80~100目篩的油茶籽柏粉按料液比1:6~7與水混合均勻，調pH值至7.25~7.30，加入油茶籽柏粉質量0.04~0.05%的復合植物水解酶，于65~70°C酶解3~3.5h，酶解結束后滅酶，然后離心獲得油茶籽柏殘渣；
[0010](2)超聲輔助堿提:將步驟(1)獲得的油茶籽柏殘渣與適量水混合均勻，調pH值至
10.0~10.5，于40~45°C堿提80~90min，堿提過程中采用超聲波輔助，超聲波的功率為300~1000W，超聲時間為20min，堿提結束后離心分離得上清液；
[0011](3)酸沉:將步驟(2)獲得的上清液調pH值至4.6,于室溫靜置I~1.5h,然后離心得沉淀，所述沉淀經過冷凍干燥得油茶籽柏蛋白。
[0012]本發明通過復合植物水解酶先將油茶籽柏粉中的非蛋白質如糖類分解掉，然后再通過堿提、酸沉來獲得油茶籽柏蛋白，其中堿提通過超聲波強化，提取效果好，堿提的提取率高，由于本發明的提取工藝條件溫和，制得的油茶籽柏蛋白形態、色澤佳，油茶籽蛋白再經過中性蛋白酶的酶解、脫鹽和柱層析，柱層析的洗脫液經過冷凍干燥獲得油茶籽柏多肽，該多肽氨基酸含量豐富，可以廣泛應用于食品添加劑。
[0013]作為優選，步驟(1)中油茶籽柏粉的粒徑為80目，料液比為1: 6，pH值為7.28，復合植物水解酶的添加量為0.048%,酶解溫度為68°C，酶解時間為3.25h。此工藝參數系復合植物水解酶酶解的最佳工藝條件，非蛋白類雜質去除率高，后續堿提過程中可以節省堿的用量，堿的用量減少，對油茶籽柏蛋白的破壞減少，避免了堿性太強引起脫氨、脫羧、肽鍵斷裂，引起“胱賴反應”，將氨基酸轉變為有毒化合物。
[0014]作為優選，步驟(2)中油茶籽柏殘渣(以干基計)與水的質量比為1:25。
[0015]作為優選，步驟(2)中堿提的pH值為10.0，浸提溫度為40°C，浸提時間為80min。
[0016]作為優選，所述離心的轉速為3000~3200rpm,離心時間為10~20min。
[0017]本發明的有益效果是:
[0018](I)本發明通過復合植物水解酶先將油茶籽柏粉中的非蛋白質如糖類分解掉，然后再通過堿提、酸沉來獲得油茶籽柏蛋白，其中堿提通過超聲波強化，提取效果好，堿提的提取率高，由于本發明的提取工藝條件溫和，制得的油茶籽柏蛋白形態、色澤佳，油茶籽蛋白再經過中性蛋白酶的酶解、脫鹽和柱層析，柱層析的洗脫液經過冷凍干燥獲得油茶籽柏多肽，該多肽雜質含量低，氨基酸含量豐富，可以廣泛應用于食品添加劑。
[0019](2)本發明將利用率相當低的油茶籽柏制成油茶籽多肽，具有很高的營養價值，提高了資源的利用率，將油茶籽柏變廢為寶，增加了其經濟價值。
【具體實施方式】
[0020]下面通過具體實施例，對本發明的技術方案作進一步的具體說明，各實施例使用的儀器設備均系市購常規設備，各實施例所使用的試劑均系市購常規試劑。
[0021]復合植物水解酶:諾維信公司生產，酶活100FBG/g。
[0022]本發明制備的油茶籽多肽的氨基酸含量由中國農業科學院油料作物研究所測試中心檢測。
[0023]實施例1
[0024]一種油茶籽多肽的制備方法，所述制備方法具體如下:
[0025](I)酶解:將粉碎后過80目篩的油茶籽柏粉按料液比1:6與水混合均勻，調pH值至7.25，加入油茶籽柏粉質量0.04%的復合植物水解酶，于65°C酶解3.5h，酶解結束后于85°C滅酶lOmin，然后于3000rpm離心15min獲得油茶籽柏殘渣；
[0026](2)超聲輔助堿提:將步驟(1)獲得的油茶籽柏殘渣(以干基計)按質量比1:25與水混合均勻，調pH值至10.0，于40°C堿提90min，堿提過程中采用超聲波輔助，超聲波的功率為300W，超聲時間為20min，堿提結束后于3000rpm離心15min分離得上清液；
`[0027](3)酸沉:將步驟(2)獲得的上清液調pH值至4.6，于室溫靜置lh，然后于3000rpm離心15min得沉淀，所述沉淀經過冷凍干燥得油茶籽柏蛋白。
[0028](4)將步驟(3)獲得的油茶籽蛋白過80目篩后按質量體積比3:100 (g/ml)加水制成懸浮液，所述懸浮液于90°C熱處理20min，降溫后調pH值至7.0，按4300u/g底物的加酶量加入中性蛋白酶，于53°C酶解4.5h，酶解結束后于90°C滅酶lOmin，再在3000rpm轉速條件下離心20min得上清液，所述上清液經過脫鹽、SephadexG-25柱層析后洗脫液再次在3000rpm轉速條件下離心20min得上清液，所述上清液經過冷凍干燥得油茶籽多肽。
[0029]實施例2:
[0030]一種油茶籽多肽的制備方法，所述制備方法具體如下:
[0031](I)酶解:將粉碎后過100目篩的油茶籽柏粉按料液比1:7與水混合均勻，調pH值至7.30，加入油茶籽柏粉質量0.05%的復合植物水解酶，于70°C酶解3h，酶解結束后于85°C滅酶15min，然后于3200rpm離心IOmin獲得油茶籽柏殘渣；
[0032](2)超聲輔助堿提:將步驟(1)獲得的油茶籽柏殘渣(以干基計)按質量比1:25與水混合均勻，調pH值至10.5，于45°C堿提80min，堿提過程中采用超聲波輔助，超聲波的功率為1000W,超聲時間為20min,堿提結束后于3200rpm離心IOmin分離得上清液；
[0033](3)酸沉:將步驟(2)獲得的上清液調pH值至4.6，于室溫靜置1.5h，然后于3200rpm離心IOmin得沉淀,所述沉淀經過冷凍干燥得油茶籽柏蛋白。
[0034](4)將步驟(3)獲得的油茶籽蛋白過100目篩后按質量體積比3:120 (g/ml)加水制成懸浮液，所述懸浮液于95°C熱處理lOmin，降溫后調pH值至7.0，按4400u/g底物的加酶量加入中性蛋白酶，于54°C酶解3.5h，酶解結束后于95°C滅酶8min，再在3200rpm轉速條件下離心15min得上清液，所述上清液經過脫鹽、SephadexG-25柱層析后洗脫液再次在3200rpm轉速條件下離心15min得上清液,所述上清液經過冷凍干燥得油茶籽多肽。
[0035]實施例3:
[0036]一種油茶籽多肽的制備方法，所述制備方法具體如下:
[0037](I)酶解:將粉碎后過100目篩的油茶籽柏粉按料液比1:6與水混合均勻，調pH值至7.28，加入油茶籽柏粉質量0.048%的復合植物水解酶，于68°C酶解3.25h，酶解結束后于90°C滅酶5min，然后于3000rpm離心20min獲得油茶籽柏殘渣；
[0038](2)超聲輔助堿提:將步驟(1)獲得的油茶籽柏殘渣(以干基計)按質量比1:25與水混合均勻，調pH值至10.0，于40°C堿提80min，堿提過程中采用超聲波輔助，超聲波的功率為800W,超聲時間為20min,堿提結束后于3000rpm離心20min分離得上清液；
[0039](3)酸沉:將步驟(2)獲得的上清液調pH值至4.6，于室溫靜置1.5h，然后于3000rpm離心20min得沉淀,所述沉淀經過冷凍干燥得油茶籽柏蛋白。
[0040](4)將步驟(3)獲得的油茶籽蛋白過80目篩后按質量體積比3:100 (g/ml)加水制成懸浮液，所述懸浮液于95°C熱處理lOmin，降溫后調pH值至7.0，按4364u/g底物的加酶量加入中性蛋白酶，于53.5°C酶解4h，酶解結束后于95°C滅酶8min，再在3200rpm轉速條件下離心15min得上清液，所述上清液經過脫鹽、SephadexG-25柱層析后洗脫液再次在3200rpm轉速條件下離心15min得上清液,所述上清液經過冷凍干燥得油茶籽多肽。
[0041]實施例1~3獲得的油茶籽多肽的感官特性指標見表1，油茶籽多肽的質量指標見表2所示:
[0042]表1油茶籽柏多肽的感官特性指標
[0043]
【權利要求】
1.一種油茶籽多肽的制備方法，其特征在于:所述制備方法具體如下: 油茶籽蛋白經粉碎，過80~100目篩后按質量體積比3:100~120加水制成懸浮液，所述懸浮液于90~95°C熱處理10~20min,降溫后調pH值至中性,按4300~4400u/g底物的加酶量加入中性蛋白酶，于53~54°C酶解3.5~4.5h，酶解結束后滅酶，離心得上清液，所述上清液經過脫鹽、柱層析后洗脫液再次離心得上清液，所述上清液經過冷凍干燥得油茶籽多肽。
2.一種油茶籽多肽的制備方法，其特征在于:所述中性蛋白酶的加酶量為4364u/g底物，酶解溫度為53.5°C，酶解時間為4小時。
3.根據權利要求1或2所述的一種油茶籽多肽的制備方法，其特征在于:所述油茶籽蛋白的制備方法如下: (O酶解:將粉碎后過80~100目篩的油茶籽柏粉按料液比1:6~7與水混合均勻，調PH值至7.25~7.30，加入油茶籽柏粉質量0.04~0.05%的復合植物水解酶，于65~70°C酶解3~3.5h，酶解結束后滅酶，然后離心獲得油茶籽柏殘渣； (2)超聲輔助堿提:將步驟(1)獲得的油茶籽柏殘渣與適量水混合均勻，調pH值至10.0~10.5，于40~45°C堿提80~90min，堿提過程中采用超聲波輔助，超聲波的功率為300~1000W，超聲時間為20min，堿提結束后離心分離得上清液； (3)酸沉:將步驟(2)獲得的上清液調pH值至4.6，于室溫靜置I~1.5h，然后離心得沉淀，所述沉淀經過冷凍干燥得油茶籽柏蛋白。
4.根據權利要求3所述的一種油茶籽多肽的制備方法，其特征在于:步驟(1)中油茶籽柏粉的粒徑為80目，料液比為1: 6，pH值為7.28，復合植物水解酶的添加量為0.048%，酶解溫度為68°C，酶解時間為3.25h。
5.根據權利要求3所述的一種油茶籽多肽的制備方法，其特征在于:步驟(2)中油茶籽柏殘渣(以干基計)與水的質量比為1:25。
6.根據權利要求3所述的一種油茶籽多肽的制備方法，其特征在于:步驟(2)中堿提的pH值為10.0，浸提溫度為40°C，浸提時間為80min。
7.根據權利要求3所述的一種油茶籽多肽的制備方法，其特征在于:所述離心的轉速為3000~3200rpm，離心時間為10~20min。
【文檔編號】C12P21/06GK103627765SQ201310631391
【公開日】2014年3月12日 申請日期:2013年11月29日 優先權日:2013年11月29日
【發明者】何東平, 胡傳榮, 雙楊, 劉京偉 申請人:衢州劉家香食品有限公司