激酶活性探針及治療相關疾病的方法
【專利摘要】本發明提供一種激酶活性探針及治療相關疾病的方法，其不僅可以很好的抑制布魯頓酪氨基酸激酶（Bruton’s?tyrosine?kinase,Btk）的活性，并且能夠與Btk的激酶結構域中ATP結合口袋處的半胱氨酸殘基形成共價結合。其不僅可以體外標記Btk酶，也可以體外標記表達Btk酶的細胞或組織，也可以評估一種Btk抑制劑在動物體內的藥效。
【專利說明】激酶活性探針及治療相關疾病的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及激酶活性探針及治療相關疾病的方法。
【背景技術】
[0002]蛋白激酶是真核生物中最大的基因家族之一，正被廣泛研究。目前已經有超過500多種激酶被發現，占人類基因的2%。它通過催化轉移ATP Y位的一個帶負電磷酸基團至其底物蛋白上，修飾其生物活性，從而調節著真核細胞中大多數的信號轉導。激酶控制著很多細胞進程，如新陳代謝、轉錄、細胞周期、細胞支架重排以及細胞的活動、凋亡和分化等，從而與人類疾病如癌癥、慢性炎癥有著密切關系，在過去的幾十年中成為人們競相追逐的熱門藥物靶點。大多數激酶靶點與癌癥相關，激酶功能的失調也與諸如免疫、神經、代謝、傳染方面的疾病有關聯，因而人們燃起了發展小分子激酶抑制劑治療此系列疾病的興趣。
[0003]布魯頓酪氨酸激酶(Bruton’s tyrosine kinase,Btk)是屬于Tec家族的一類非受體酪氨酸激酶，在除了 T細胞、自然殺手細胞和漿細胞外的所有造血細胞中都有表達。Btk對B細胞的生長、分化和信號轉導有非常重要的作用。Btk的表達被認為是B細胞增殖和存活的關鍵條件。人體內的Btk的基因變異可以導致循環系統B淋巴細胞的缺失，因為不能產生全部種類的免疫球蛋白，故不能增加人的體液免疫反應。這種基本的免疫缺陷被稱為X相關的丙血球缺乏癥(XLA)。
[0004]Btk在細胞內被活化的分子機理目前還沒有被完全闡明。一般認為，翻譯后修飾和亞細胞的定位在其中發揮了重要作用。在穩定狀態，Btk主要處于胞質中，B細胞受體一旦參與信號啟動，Btk就會轉移至細胞膜被上游Src家族激酶Blk、Lyn和Fyn激活，它的位于激酶結構域的Tyr551會被上游激酶Lyn磷酸化,隨后Btk會發生一個包含SH3結構域上的Tyr223的自磷酸化過程。隨后，Btk通過與其銜接蛋白B細胞鏈接蛋白(BLNK)的緊密協作，磷酸化底物蛋白磷脂酶C Y2 (PLC Y 2)，從而引發鈣離子的調動，轉錄因子NF-κ B的活化和MAP激酶信號通路。
[0005]B細胞抗原受體(BCR)信號通道的活化對于B細胞惡性腫瘤和自身免疫疾病的激活和維持其著重要作用。在人和鼠的突變實驗中，已經證實Btk對于BCR信號通道非常關鍵。因此，Btk對于B細胞的選擇性抑制來講是一個特別有吸引力的激酶靶點。另有證據證實BCR信號通路在非霍奇金淋巴瘤(NHL)腫瘤細胞的生長方面扮演重要角色。最近，Btk被確定是子型的彌散大B細胞淋巴瘤存活的信號激酶。
[0006]B淋巴酪氨酸激酶(B lymphoid tyrosine kinase, Blk)是與B淋巴細胞發育、分化以及信號有關的非受體酪氨酸激酶。B細胞受體信號通道(BCR)需要幾種酪氨酸激酶、磷酸酯酶以及相應的共同受體之間的緊密配合。抗原結合在B細胞抗原受體(BCR)上可以觸發信號，最終導致B細胞活化。Blk在通過表面免疫球蛋白的信號轉遞中以及幫助pro-B到 pre-B的過渡中扮演了重要角色，并在B細胞受體的生長阻滯以及凋亡中起著相應作用。Blk聯同Fyn和Lyn對于前B細 胞受體(pre-BCR)介導的NF- κ B的活化起著關鍵作用。
[0007]表皮生長因子受體(Epidermal Growth Factor Receptor, EGFR)是上皮生長因子(EGF)細胞增殖和信號轉導的受體。EGFR屬于ErbB受體家族的一種，也被稱作HER1、ErbBl,突變或過表達一般會引發腫瘤。EGFR 二聚后可以激活它位于細胞內的激酶通路，包括Tyr992、Tyrl045、Tyrl068、Tyrll48和Tyrll73等激活位點。這個自磷酸化可以引導下游的磷酸化，包括MPAK、Akt和JNK通路，誘發細胞增殖。
[0008]研究表明在許多實體腫瘤中存在EGFR的高表達或異常表達。EGFR與腫瘤細胞的增殖、血管生成、腫瘤侵襲、轉移及細胞凋亡的抑制有關。其可能機制有=EGFR的高表達引起下游信號傳導的增強；突變型EGFR受體或配體表達的增加導致EGFR的持續活化；自分泌環的作用增強；受體下調機制的破壞；異常信號傳導通路的激活等。EGFR的過表達在惡性腫瘤的演進中起重要作用，膠質細胞、腎癌、肺癌、前列腺癌、胰腺癌、乳腺癌等組織中都有EGFR的過表達。
【發明內容】
[0009]本發明提供了一種式(I)的化合物，或其藥用可接受的鹽:
[0010]
【權利要求】
1.一種式(I)的化合物，或其藥用可接受的鹽:
2.根據權利要求1的化合物，或可藥用可接受的鹽，其中 X選自甲基，三氟甲基，和氯，R為三氟甲基或氯， W選自哌嗪，哌啶，和-N (CH3) (CH2) 2NH-，
L 選自-(CH2) mNHC (O) (CH2) n-，- (CH2) mNHC (O) NH (CH2) n-，
-(CH2)mOC(O) (CH2)n-, -NHC(O) (CH2)mNHC(O) (CH2)n-,和
-C(O)NH(CH2)mNHC(O) (CH2)n-, 其中 m, η彼此獨立地、相同地或不同地選自整數0-10， Y選自 B0DIPY493/503， BODIPY FL, BODIPY R6G, B0DIPY530/550, BODIPY TMR,B0DIPY558/568, B0DIPY564/570, B0DIPY576/589, B0DIPY581/591, BODIPY TR。
3.根據權利要求1的化合物，或可藥用接受的鹽，其中 X為甲基或氯， R為三氟甲基或氯， W為哌嗪或哌啶，
L 為-(CH2) mNHC (O) (CH2) n-或-NHC (O) (CH2) mNHC (O) (CH2) n-
其中 m，η彼此獨立地、相同地或不同地選自整數1-4，
Y為 BODIPY FL0
4.一種化合物:
5.一種藥物組合物，其中包括權利要求1-4中任一項的化合物和藥用可接受的賦形劑。
6.權利要求1-4中任一項的化合物或權利要求5中的藥用組合物用于體外標記、分離包含Btk, Blk，或EGFR的蛋白。
7.權利要求1-4中任一項的化合物或權利要求5中的藥用組合物用于體外標記表達Btk，Blk，或EGFR的細胞或組織。
8.權利要求1-4中任一項的化合物或權利要求5中的藥用組合物用于評估一種Btk抑制劑，或一種Blk抑制劑，或一種EGFR抑制劑在哺乳動物中的藥效。
【文檔編號】C12Q1/48GK103694268SQ201310689503
【公開日】2014年4月2日 申請日期:2013年12月16日 優先權日:2013年12月16日
【發明者】李錫濤 申請人:李錫濤