三角褐指藻和小新月菱形藻混合培養的培養基及培養方法
【專利摘要】本發明公開了一種三角褐指藻和小新月菱形藻混合培養高產方法；三角褐指藻和小新月菱形藻傳統上使用f／2培養基并使用開放水泥池且分開單獨培養，生長速度慢，產量低，易污染，操作麻煩。使用我發明的培養基并使用礦泉水桶混合培養三角褐指藻和小新月菱形藻，脂肪酸含量高、成本低，不易污染，易于操作，大大降低了工作量，而且在培養基中增加了蛋白胨、瓊脂、麥芽糖、山梨酸鉀、葡萄糖、海泥抽提液、土壤抽出液、人尿、牛糞和羊糞浸出液，營養更全面、均衡，藻生長速度大幅提高，產量提高180％。而且，混合培養，兩種藻互利共生，優勢互補，相互促進，充分利用營養鹽，提高了經濟效益。
【專利說明】三角褐指藻和小新月菱形藻混合培養的培養基及培養方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于微藻養殖領域，尤其涉及一種三角褐指藻和小新月菱形藻混合培養高產技術。
【背景技術】
[0002]三角褐指藻Phaeodactylum tricornutum Bohlin是一種海洋單細胞微藻,隸屬娃藻門，羽紋綱，褐指藻目，褐指藻科，褐指藻屬。細胞卵形、梭形或放射形，在不同環境條件下形狀可以轉變。卵形細胞長8微米，寬3微米，只有一個硅質殼面，中心有一細胞核，有黃褐色色素體1-3片。梭形細胞長20微米，兩臂末端較鈍。平行分裂成2個形態相同細胞進行繁殖。細胞無硅質殼，故在裂殖時出與硅藻不一樣，藻體不縮小。在9-92%。鹽度范圍內生活，最適鹽度為25-32%。。適溫范圍5-25°C，最適10_20°C，在0°C條件下仍能繁殖，超過25°C停止生長，隨溫度升高逐漸大量死亡。適宜光照強度1000-80001ux，最適3000-50001ux，小型培養時忌強烈陽光直射。pH7-10環境下均能生長、繁殖,最適7.5-8.5。該藻營養價值極聞，除富含蛋白質、脂類和多糖，可貴的是它含有EPA、DHA等被稱為“腦黃金”的多不飽和脂肪酸，且生長繁殖快，易培養。作為魚、蝦、貝等海洋動物最佳開口餌料，是最早進行人工培養的海洋微藻，已在櫛孔扇貝、馬糞海膽、日本對蝦、牡蠣、文蛤、貽貝、舌鰨、銀鮫、鮑魚、梭子蟹等多種名貴海產經濟動物苗種生產中應用。
[0003]小新月菱形藻Nitzschia closterium屬硅藻門，羽紋綱，雙菱形目，菱形藻科，菱形藻屬，細胞中央膨大成紡錘形，兩端漸尖，似月牙形。細胞長12-23微米，寬2-3微米，中央有一細胞核。色素體黃褐色，兩片，位于核兩側。分布于世界各海水、半咸和淡水水域，我國各海區均有。最適鹽度范圍25-32%。，適溫15-20°C，水溫超過28°C，停止生長；最適光照強度3000-80001ux，培養時忌直射陽光；適宜pH7-10，最適7.5-8.5。小新月菱形藻俗稱“小硅藻”，富含蛋白質、碳水化合物及多種高不飽和脂肪酸，是海洋經濟動物大菱鲆、中國對蝦、海灣扇貝、鮑魚、馬糞海膽和海參的良好餌料，能促進幼體和親體生長發育，增強幼苗抗病力，有重要培養價值。`
[0004]海水中無機碳的存在形式以HC03_為主(占90% )，而游離的CO2不足10A。過去人們一直認為，水體中游離CO2是藻類利用外源無機碳的唯一形式。張學成的工作表明，螺旋藻培養基中添加50-100mmol/L NaHCO3，不僅可以滿足螺旋藻生長的需要，而且有助于保持藻體生長的PH值。林惠民認為，NaHCO3可作為藻類生長的碳源。我的研究表明三角褐指藻和小新月菱形藻可以利用HCO3-作為碳源。
[0005]溫度、光照、鹽度、營養鹽等對三角褐指藻和小新月菱形藻生長都有重要影響。氮在細胞代謝中是形成氨基酸、嘌呤、嘧啶、葉啉、氨基糖和胺化合物等的基本元素，因而氮是三角褐指藻和小新月菱形藻生長最重要的營養元素。我的研究顯示，對三角褐指藻和小新月菱形藻來說，尿素用作氮源無論對細胞的生長繁殖、不飽和脂肪酸合成、色素積累等方面的效果均優于NaNO3和NH4Cl。人尿中95%是水，5%是可溶性無機鹽，其中2%是尿素。在藻細胞的氮代謝中，氮必須以NH4+的形式與細胞內的碳水化合物衍生的酮酸作用生成氨基酸，再合成蛋白質。已經證實許多藻含有尿素酶，在它的催化作用下，尿素分解出氨被微藻利用，酶功能的差異是造成各種微藻利用尿素能力差異的主要原因。孫凌毅指出，三角褐指藻對銨鹽和尿素的利用強于硝酸鹽。張貴杰等研究指出培養小新月菱形藻以尿素效果最好，硝酸鈉次之，氯化銨最差。張青田等認為以尿素為氮源培養三角褐指藻效果強于氯化銨。本人研究證實每升培養液中添加適量的的尿液對三角褐指藻和小新月菱形藻生長有較好促進作用。
[0006]三角褐指藻和小新月菱形藻的培養傳統上使用f / 2培養基并使用開放水泥池式培養，藻細胞倍增時間長，生長速度慢，投資大，產量低，容易污染，操作麻煩。使用本發明提供的培養基并使用礦泉水桶培養三角褐指藻和小新月菱形藻細胞不飽和脂肪酸含量高，成本低，不易污染，易于操作，大大降低了工作量，而且我在培養基中增加了碳酸氫鈉、山梨酸鉀、蛋白胨、瓊指、麥芽糖、蔗糖、葡萄糖、海泥抽提液、土壤抽出液、人尿、牛糞和羊糞浸出液等營養成分，有機肥和無機肥混合搭配使用，營養更加全面、均衡，三角褐指藻和小新月菱形藻生長速度大幅度提高，培養周期縮短，產量提高180%。而且，與傳統的單種培養相比，混合培養有利于發揮兩種微藻營養需求的差異和互利共生作用，優勢互補，相互促進，更加充分地利用營養鹽，更加高效地吸收光能，減少了營養鹽的損失，提高了經濟效益。
【發明內容】
[0007]為了克服目前技術的不足，本發明提供了一種三角褐指藻和小新月菱形藻混合培養高產技術的培養基，其配方如下:
[0008]NH4N0320 毫克，NaN036 毫克，尿素 3 毫克，KH2PO4L 5 毫克，Na2SiO3IO 毫克，NaHC03400毫克，九二 O植物生長刺激素7國際單位，蛋白胨6毫克，瓊脂5毫克，麥芽糖8毫克，蔗糖10毫克，山梨酸鉀12毫克，葡萄糖45毫克，海藻酸丙二醇酯20毫克，環己基氨基磺酸鈉13毫克，蜂膠6毫克，乳酸 鈉-L6毫克，麥芽糖醇10毫克，硬脂酰乳酸鈉5毫克，焦磷酸鐵3毫克，檸檬酸鉀5毫克，乙酸鈉6毫克，山梨糖醇液1.5毫升，三聚甘油單硬脂酸酯8毫克，人尿1.5毫升，海泥抽取液1.2毫升，土壤抽出液2.5毫升，牛糞浸出液2毫升，羊糞浸出液1.5毫升，f / 2微量元素溶液1.4毫升，f / 2維生素溶液1.2毫升，煮沸冷卻后的純凈海水1000毫升，其中f / 2微量元素溶液配方=ZnSO4.4H2023毫克，MnCl2.4H20178毫克，CuSO4.5H2010 毫克，FeC6H5O7.5Η203.9 克，Na2MoO4.2Η207.3 毫克，CoCl2.6Η2012 毫克，Na2EDTA4.35克，蒸餾水1000毫升，
[0009]f / 2維生素溶液配方:維生素B120.5毫克，維生素B1IOO毫克，維生素H0.5毫克，蒸餾水1000毫升。
[0010]一種三角褐指藻和小新月菱形藻混合高產培養方法，具體步驟如下:
[0011]培養容器為家庭用的礦泉水桶，容積20升，無色透明或淺天藍色，洗刷干凈，后用蒸餾水潤洗3遍，用漏斗裝入前述的培養基12升，充分搖勻5分鐘，選擇生命力旺盛、無污染的三角褐指藻和小新月菱形藻藻液分別進行接種，先接種三角褐指藻，接種密度6X IO4Cell / mL，再接種小新月菱形藻，接種密度SXlO4ceIl / mL，接種后輕輕搖動礦泉水桶5分鐘，使兩種藻混合均勻；瓶口插入兩根干凈玻璃管，一根較長，頂端露出瓶口 7-10厘米，下端插入較深，離瓶底5厘米，用以充氣；另一根較短，16厘米，兩端露出瓶口即可，用以排氣；兩根玻璃管同樣粗細，直徑6毫米；最后用酒精棉球擦拭瓶口，用干凈的透明膠帶封口并將兩根玻璃管固定；長的玻璃管上端用料管與充氣泵相連，充入混合氣體，混合氣體成分和體積比例是空氣:純二氧化碳:臭氧:一氧化氮=90%: 8%: 1%: 1% ;充氣量不宜太大，以藻細胞浮起不下沉即可；室內培養，空調控溫，最佳溫度23±2°C，日光燈照射，光照強度12000-150001UX，光/暗周期為16L / 8D，即光照16小時，黑暗8小時；培養至第6天，停止充氣，揭開透明膠帶，用漏斗從瓶口加入3升新鮮培養基，膠帶重新封口，充氣，繼續培養，至第9天，三角褐指藻和小新月菱形藻密度分別增加至3500X 104cell / mL和1000 X IO4Cell / mL,停止培養，從瓶口倒出藻液，將礦泉水桶洗刷干凈后，加入中藥消毒液消毒10-30分鐘，后進入下一輪培養；
[0012]所述中藥消毒液:由以下重量比的物質組成:黃芩7-10份、黃秋葵粉3-5份、魚腥草3-5份、丹參5-10份、牛黃5-10份；將上述藥材放入可加熱的容器中，加入3-5倍體積的純凈水，煮沸后持續煮30-50分鐘，后過濾，沉淀1-2小時，后取澄清液即可；所述黃秋葵粉是清洗干凈并烘干后的黃秋葵莖葉、花及籽粒經超微粉碎機粉碎至250目，然后攪勻、滅菌所得；
[0013]優選地，對選用的所述的礦泉水桶，洗刷干凈后進行消毒，使用紫外燈消毒，消毒10-20分鐘。
[0014]優選地，對選用的所述的礦泉水桶，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓氮氣噴射消毒，消毒5-10分鐘；
[0015]優選地，對選用的所述的礦泉水桶，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒5-6分鐘；
[0016]優選地，對選用的所述的礦泉水桶，洗刷干凈后分兩個階段消毒，先使用高壓氮氣噴射消毒，消毒2-3分鐘；使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒2-3分鐘；消毒完畢后再進行藻類培養。
[0017]有益效果:三角褐指藻和小新月菱形藻的培養傳統上是分開單獨培養，使用f /2培養基并使用開放水泥池式培養，不能發揮二種藻營養需求上優勢互補、相互促進的有利條件，生長速度慢，產量低，容易污染，操作麻煩。使用我發明的培養基并使用礦泉水桶混合培養三角褐指藻和小新月菱形藻，不但高不飽和脂肪酸含量高、成本低，不易污染，易于操作，大大降低了工作量，而且在培養基中增加了碳酸氫鈉、蛋白胨、瓊脂、麥芽糖、山梨酸鉀、葡萄糖、海泥抽提液、土壤抽出液、人尿、牛糞和羊糞浸出液等營養成分，有機肥和無機肥搭配使用，營養更加全面、均衡，三角褐指藻和小新月菱形藻生長速度大幅度提高，培養周期縮短，產量提高180%。而且,與傳統的單種培養相比,混合培養有利于發揮兩種微藻營養需求的差異和互利共生作用，優勢互補，相互促進，更加充分地利用營養鹽，更加高效地吸收光能，減少了營養鹽的損失，提高了經濟效益。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0018] 圖1 一種三角褐指藻和小新月菱形藻混合高產培養方法圖。
[0019]其中附圖標記為:1礦泉水桶；2充氣管；3排氣管；4藻液。
【具體實施方式】
[0020]I)接種用的三角褐指藻和小新月菱形藻預先進行提純(本領域常規方法，只要可實現提純即可，例如索氏提取法)，以確保接種時藻種處于指數生長期；
[0021]2)九二 O植物生長刺激素為白色結晶粉末，不易溶解于水，可先用酒精充分溶解(一般每克用50毫升酒精或60度白酒溶解I小時以上)，再按所需濃度兌水稀釋；
[0022]3)因檸檬酸鐵(FeC6H5O7.5H20)較難溶解，可加少量自來水在火爐上微熱至80-90°C，并不斷攪拌至全部融化；
[0023]4)各種營養鹽要按配方中提供的順序加入，以免發生化學反應；
[0024]5)各種營養鹽特別是f / 2微量元素溶液和f / 2維生素溶液均需預先配成母液且置于4°C冰箱冷藏保存備用，放置時間不要超過60天；
[0025]6)全部營養鹽加完后要搖動水桶15分鐘，使營養鹽混合均勻后即可接種；
[0026]7)人尿制備方法:取人尿1000毫升，燒瓶煮沸后冷卻備用；
[0027]8)羊糞浸出液制備方法:取新鮮羊糞10公斤，加入麩皮I公斤，玉米面0.5公斤，自來水I升，充分攪拌，裝入塑料袋發酵10天，后取2公斤放入盆中，加入6升蒸餾水，充分攪拌15分鐘，靜置，48小時后500目篩絹過濾，取濾液加熱煮沸30分鐘，以殺死其中的微生物，冷卻，靜置72小時，取上清液，即為羊糞浸出液，裝入磨口塞試劑瓶，密封，置于4°C冰箱備用;
[0028]9)牛糞浸出液制備方法:取牛糞50公斤，加入麩皮3公斤，玉米面I公斤，自來水4升，充分攪拌，堆成圓錐狀，自 然發酵15天，后攤成薄層，陽光下暴曬3天，后取3公斤放入水桶中，加入10升蒸餾水，充分攪勻，靜置，48小時后400目篩絹過濾，取濾液加熱，煮沸45分鐘，殺死其中的細菌、霉菌、病毒等，冷卻，沉淀48小時，取上清液，即得牛糞浸出液，裝入磨口塞試劑瓶，密封，置于4°C冰箱備用；
[0029]10)海泥抽取液制備方法:取比較肥沃又不於黑的海泥，以1份泥加2份淡水，充分攪拌均勻，靜置1-2分鐘，取上層泥漿于鋁鍋中，按每1000毫升泥漿加I克NaOH的量加入NaOH,煮沸25分鐘。煮時需不斷攪拌均勻，煮后靜置24小時取上清液備用；
[0030]11) 土壤抽出液制備方法:取草地上層松散且富含有機質的土壤I公斤，加蒸餾水4000毫升，再加入Na0H2-3克，煮沸60分鐘，冷卻后過濾，將清液置于暗處靜置48小時，取上清液備用；
[0031]12)所用化學藥品純度均需化學純級別；
[0032]13) 一種三角褐指藻和小新月菱形藻混合培養高產培養基，其配方如下:
[0033]NH4N0320 毫克，NaN036 毫克，尿素 3 毫克，KH2PO4L 5 毫克，Na2SiO3IO 毫克，NaHC03400毫克，九二 O植物生長刺激素7國際單位，蛋白胨6毫克，瓊脂5毫克，麥芽糖8毫克，蔗糖10毫克，山梨酸鉀12毫克，葡萄糖45毫克，海藻酸丙二醇酯20毫克，環己基氨基磺酸鈉13毫克，蜂膠6毫克，乳酸鈉-L6毫克，麥芽糖醇10毫克，硬脂酰乳酸鈉5毫克，焦磷酸鐵3毫克，檸檬酸鉀5毫克，乙酸鈉6毫克，山梨糖醇液1.5毫升，三聚甘油單硬脂酸酯8毫克，人尿1.5毫升，海泥抽取液1.2毫升，土壤抽出液2.5毫升，牛糞浸出液2毫升，羊糞浸出液
1.5毫升，f / 2微量元素溶液1.4毫升，f / 2維生素溶液1.2毫升，煮沸冷卻后的純凈海水1000毫升，
[0034]其中f / 2微量元素溶液配方=ZnSO4.4H2023毫克，MnCl2.4H20178毫克，CuSO4.5H2010 毫克，FeC6H5O7.5Η203.9 克，Na2MoO4.2Η207.3 毫克，CoCl2.6Η2012 毫克，Na2EDTA4.35克，蒸餾水1000毫升，[0035]f / 2維生素溶液配方:維生素B120.5毫克，維生素B1IOO毫克，維生素H0.5毫克，蒸餾水1000毫升。
[0036]14) 一種三角褐指藻和小新月菱形藻混合高產培養方法，具體步驟如下:
[0037]培養容器為家庭用的礦泉水桶，容積20升，無色透明或帶淺天藍色，洗刷干凈，后用蒸餾水潤洗3遍，用漏斗裝入所述的培養基12升，充分搖勻5分鐘，選擇生命力旺盛、無污染的三角褐指藻和小新月菱形藻藻液分別進行接種，先接種三角褐指藻，接種密度6X IO4Cell / mL，再接種小新月菱形藻，接種密度SXlO4ceIl / mL，接種后輕輕搖動礦泉水桶5分鐘，使兩種藻混合均勻；瓶口插入兩根干凈玻璃管，一根較長，頂端露出瓶口 7-10厘米，下端插入較深，離瓶底5厘米，用以充氣；另一根較短，16厘米，兩端露出瓶口即可，用以排氣；兩根玻璃管同樣粗細，直徑6毫米；最后用酒精棉球擦拭瓶口，用干凈的透明膠帶封口并將兩根玻璃管固定；長的玻璃管上端用料管與充氣泵相連，充入混合氣體，混合氣體成分和體積比例是空氣:純二氧化碳:臭氧:一氧化氮=90%: 8%: 1%: 1% ;充氣量不宜太大，以藻細胞浮起不下沉即可；室內培養，空調控溫，最佳溫度23±2°C，日光燈照射，光照強度12000-150001UX，光/暗周期為16L / 8D，即光照16小時，黑暗8小時；培養至第6天，停止充氣，揭開透明膠帶，用漏斗從瓶口加入3升新鮮培養基，膠帶重新封口，充氣，繼續培養，至第9天，三角褐指藻和小新月菱形藻密度分別增加至3500X 104cell / mL和1000 X IO4Cell / mL,停止培養，從瓶口倒出藻液，將礦泉水桶洗刷干凈后，加入中藥消毒液消毒10-30分鐘，后 進入下一輪培養；
[0038]15)所述中藥消毒液:由以下重量比的物質組成:黃芩7-10份、黃秋葵粉3-5份、魚腥草3-5份、丹參5-10份、牛黃5-10份；將上述藥材放入可加熱的容器中，加入3-5倍體積的純凈水，煮沸后持續煮30-50分鐘，后過濾，沉淀1-2小時，后取澄清液即可；所述黃秋葵粉是清洗干凈并烘干后的黃秋葵莖葉、花及籽粒經超微粉碎機粉碎至250目，然后攪勻、滅菌所得；
[0039]16)優選地，對選用的所述的礦泉水桶，洗刷干凈后進行消毒，使用紫外燈消毒，消毒10-20分鐘。
[0040]優選地，對選用的所述的礦泉水桶，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓氮氣噴射消毒，消毒5-10分鐘；
[0041]優選地，對選用的所述的礦泉水桶，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒5-6分鐘；
[0042]優選地，對選用的所述的礦泉水桶，洗刷干凈后分兩個階段消毒，先使用高壓氮氣噴射消毒，消毒2-3分鐘；使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒2-3分鐘；消毒完畢后再進行藻類培養。
[0043]最后應說明的是:以上實施例僅用以說明本發明的技術方案，而非對其限制；盡管參照前述實施例對本發明進行了詳細的說明，本領域的普通技術人員應當理解:其依然可以對前述實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換；而這些修改或者替換，并不使相應技術方案的本質脫離本發明實施例技術方案的精神和范圍。
【權利要求】
1.一種三角褐指藻和小新月菱形藻混合培養高產技術的培養基，其特征在于:其配方如下:NH4N0320 毫克，NaN036 毫克，尿素 3 毫克，KH2PO4L 5 毫克，Na2SiO3IO 毫克，NaHC03400毫克，九二 O植物生長刺激素7國際單位，蛋白胨6毫克，瓊脂5毫克，麥芽糖8毫克，蔗糖10毫克，山梨酸鉀12毫克，葡萄糖45毫克，海藻酸丙二醇酯20毫克，環己基氨基磺酸鈉13毫克，蜂膠6毫克，乳酸鈉-L6毫克，麥芽糖醇10毫克，硬脂酰乳酸鈉5毫克，焦磷酸鐵3毫克，檸檬酸鉀5毫克，乙酸鈉6毫克，山梨糖醇液1.5毫升，三聚甘油單硬脂酸酯8毫克，人尿1.5毫升，海泥抽取液1.2毫升，土壤抽出液2.5毫升，牛糞浸出液2毫升，羊糞浸出液1.5毫升，f / 2微量元素溶液1.4毫升，f / 2維生素溶液1.2毫升，煮沸冷卻后的純凈海水1000毫升； 其中 f / 2 微量元素溶液配方=ZnSO4.4Η2023 毫克，MnCl2.4Η20178 毫克，CuSO4.5Η2010毫克，FeC6H5O7.5Η203.9 克，Na2MoO4.2Η207.3 毫克，CoCl2.6Η2012 毫克，Na2EDTA4.35 克，蒸餾水1000毫升。 f / 2維生素溶液配方:維生素B120.5毫克，維生素B1IOO毫克，維生素H0.5毫克，蒸餾水1000毫升。
2.一種三角褐指藻和小新月菱形藻混合高產培養方法，其特征在于具體步驟如下: 培養容器為家庭用的礦泉水桶，容積20升，無色透明或淺天藍色，洗刷干凈，后用蒸餾水潤洗3遍，用漏斗裝入權利要求1所述的培養基12升，充分搖勻5分鐘，選擇生命力旺盛、無污染的三角褐指藻和小新月菱形藻藻液分別進行接種，先接種三角褐指藻，接種密度6X IO4Cell / mL，再接種小新月菱形藻，接種密度SXlO4ceIl / mL，接種后輕輕搖動礦泉水桶5分鐘，使兩種藻混合均勻；瓶口插入兩根干凈玻璃管，一根較長，頂端露出瓶口 7-10厘米，下端插 入較深，離瓶底5厘米，用以充氣；另一根較短，16厘米，兩端露出瓶口即可，用以排氣；兩根玻璃管同樣粗細，直徑6毫米；最后用酒精棉球擦拭瓶口，用干凈的透明膠帶封口并將兩根玻璃管固定；長的玻璃管上端用料管與充氣泵相連，充入混合氣體，混合氣體成分和體積比例是空氣:純二氧化碳:臭氧:一氧化氮=90%: 8%: 1%: 1% ;充氣量不宜太大，以藻細胞浮起不下沉即可；室內培養，空調控溫，最佳溫度23±2°C，日光燈照射，光照強度12000-150001UX，光/暗周期為16L / 8D，即光照16小時，黑暗8小時；培養至第6天，停止充氣，揭開透明膠帶，用漏斗從瓶口加入3升新鮮培養基，膠帶重新封口，充氣，繼續培養，至第9天，三角褐指藻和小新月菱形藻密度分別增加至3500X 104cell / mL和1000 X IO4Cell / mL,停止培養，從瓶口倒出藻液，將礦泉水桶洗刷干凈后，加入中藥消毒液消毒10-30分鐘，后進入下一輪培養； 所述中藥消毒液:由以下重量比的物質組成:黃芩7-10份、黃秋葵粉3-5份、魚腥草3-5份、丹參5-10份、牛黃5-10份；將上述藥材放入可加熱的容器中，加入3-5倍體積的純凈水，煮沸后持續煮30-50分鐘，后過濾，沉淀1-2小時，后取澄清液即可；所述黃秋葵粉是清洗干凈并烘干后的黃秋葵莖葉、花及籽粒經超微粉碎機粉碎至250目，然后攪勻、滅菌所得。
3.根據權利要求2所述的一種三角褐指藻和小新月菱形藻混合高產培養方法，其特征在于:對選用的所述的礦泉水桶，洗刷干凈后進行消毒，使用紫外燈消毒，消毒10-20分鐘。
4.根據權利要求2所述的一種三角褐指藻和小新月菱形藻混合高產培養方法，其特征在于:對選用的所述的礦泉水桶，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓氮氣噴射消毒，消毒5-10分鐘。
5.根據權利要求5所述的一種三角褐指藻和小新月菱形藻混合高產培養方法，其特征在于:對選用的所述的礦泉水桶，洗刷干凈后進行消毒，使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒5-6分鐘。
6.根據權利要求2所述的一種三角褐指藻和小新月菱形藻混合高產培養方法，其特征在于:對選用的所述的礦泉水桶，洗刷干凈后分兩個階段消毒，先使用高壓氮氣噴射消毒，消毒2-3分鐘；使用高壓二氧化碳噴射消毒，消毒2-3分鐘；消毒完畢后再進行藻類培養。
【文檔編號】C12R1/89GK103834570SQ201410083491
【公開日】2014年6月4日 申請日期:2014年3月10日 優先權日:2014年3月10日
【發明者】王培磊 申請人:臨沂大學