用于治療補體-相關失調的適體治療的制作方法

用于治療補體-相關失調的適體治療的制作方法
【專利摘要】本發明提供了核酸治療及在補體-相關失調的治療中使用這些核酸治療的方法。
【專利說明】用于治療補體-相關失調的適體治療 本申請是2006年2月14日遞交的申請號為201310253256. 9,發明名稱為"用于治療 補體-相關失調的適體治療"的分案申請。 發明領域 本發明通常涉及核酸的領域并且尤其涉及能夠結合補體系統的C5蛋白的適體，用于 補體-相關的心臟，炎癥，和自身免疫失調，缺血再灌注損傷和/或其它C5介導的補體活性 相關的疾病或失調的治療。本發明進一步涉及能夠結合C5補體系統蛋白的適體給藥的材 料和方法。 技術背景 適體是通過經典的Watson-Crick堿基對之外作用的具有與分子特異結合親合力的核 酸分子。 適體，正如通過噬菌體顯示或單克隆抗體（"Mabs"）產生的多肽，可以特異的結合選擇 靶標和調控靶標的活性，如，適體通過結合可以阻止其靶標的功能。由源于任意序列寡核苷 酸集的體外選擇方法制備，已經制備超過100種蛋白的適體，包括生長因子，轉錄因子，酶， 免疫球蛋白，和受體。典型的適體是10_15kDa大小（30-45核酸），通過亞-納摩爾親合力結 合其靶標，并且區分密切相關的靶標（例如，適體將典型的不結合來源于相同基因家族的 其它蛋白）。一系列結構研究已經說明了適體能夠使用在抗體-抗原復合物中產生親合力 和特異性的相同種類的結合作用（例如，氫鍵結合，靜電相互作用，疏水作用，空間排阻）。 適體具有許多的希望的用于治療和診斷的特征，包括高特異性和親合力，生物活性，和 良好的藥代動力學特征。此外，他們提供優于抗體和其它蛋白生物制劑的特異性競爭優勢， 例如： 1) 速度和控制通過體外方法制備的適體，允許快速制備初始引導序列，包括治療引導 序列。體外選擇允許適體的特異性和親合力被嚴格地控制并允許制備引導序列，包括針對 毒性和非-免疫原靶標的引導序列。 2) 毒件和免疫原件已經證明適體作為一種類型具有極少或無毒件或免疫原件。在用 高劑量的適體（每天l〇mg/kg，連續90天）慢性給藥的大鼠或土撥鼠中，通過任何臨床，細 胞，或生化測定沒有發現毒性。盡管通過自身抗體的免疫反應，許多單克隆抗體的功效能被 嚴格受限，但是引發針對適體的抗體是十分困難的，最可能是因為適體不能被由MHC介導 的T-細胞表達并且通常免疫反應不識別核酸片斷。 3) 給藥盡管當前大多數認可抗體治療是通過靜脈注射給藥(典型地，大于2-4小 時），但是適體能通過皮下注射給藥（在猴體試驗中通過皮下注射的適體生物活性> 80% (Tucker et al.，J. Chromatography Β·732:203_212，1999))。這種不同主要歸因于較低溶 解性及由此大多數治療Mbs需要的大體積。具有良好的溶解性（> 150mg/mL)和較低分 子量（適體；10_15kDa;抗體：150kDa)，周劑量適體可以以小于0.5mL的體積注射。此外，小 尺寸的適體被允許滲透進入構象縊痕區域，而抗體或抗體片斷不被允許，表明了適體-基 礎治療或預防的另一優勢。 4) 可量測件和成本治療適體是化學合成的從而ιΗ如需要，能容易地被量化以適合牛產 的要求。但是在量化生產中的困難目前限制了某些生物制劑的有效性并且大量蛋白產品制 備的資金成本是巨大的，單一的大量寡核苷酸合成器每年能生產IOOkg以上且需要相關合 適的起動資金。目前在千克數量上適體合成的成本大約是$500/g，比得上高度優化的抗體 的成本。在未來5年中，工藝發展上的繼續改善是希望將適體合成的成本降低至< $100/g。 5) 穩定性治療適體具化學穩定性。本質上在暴露如加熱和變性劑的因素下之后他們適 合恢復活性并且以凍干粉的形式在室溫被儲存較長時期（>1年）。 補體系統 補體系統包括在級聯調控系統中攻擊病原菌（如，細菌）細胞外形式的起作用的一組 至少20種漿和膜蛋白。補體系統包括兩種不同的酶激活級聯，經典的和可選擇的路徑（圖 1)，和膜攻擊路徑的非-酶路徑。 第一種酶激活級聯，即經典路徑，包括一些組合物，Cl，C4, C2, C3和C5(以路徑中的次 序排列）。通過免疫和非-免疫催化劑，隨著第一補體組合物（Cl)的結合和激活，補體系統 的經典路徑開始出現。Cl包括Clq，Clr和Cls組合物的鈣-依賴性復合物，且通過Clq組 合物的結合被激活。Clq包括六個相同的亞單位并且每一亞單位包括三條鏈（A，B和C鏈）。 每一鏈具有一個球狀的頭部區域與膠原質狀尾部連接。抗原-抗體復合物引發的Clq的結 合和激活發生在Clq的頭部區域。大量非抗體Clq催化劑，包括蛋白，脂質和核酸，在膠原 質狀的莖部區域的不同位點結合和激活Clq。Clqrs復合物隨即催化補體組合物C4和C2 的激活，形成作為C3轉化酶的C4bC2a復合物。 第二條酶聯激活，即可選擇的路徑，對補體系統的激活和擴大是一條快速的，抗體-依 賴的路徑。可選擇路徑包括一些組合物，C3,因子B，和因子D (在路徑的中以次序排列）。 當C3b，C3的一種蛋白裂解形式，被綁定到一種催化表面試劑如細菌時，發生可選擇路徑的 激活。然后因子B被綁定到C3b，且由因子D裂解產生活性酶，Ba。然后酶Ba裂解更多C3 產生更多C3b，在催化表面產生C3b-Ba復合物的廣泛的沉積。 因此，經典的和可選擇的補體路徑都產生分裂因子C3為C3a和C3b的C3轉化酶。與 此同時，兩種C3轉化酶進一步裝配成C5轉化酶（C4b2a3b和C3b3Bb)。隨后這些復合物分 裂補體組合物C5形成兩種組合物：C5a多肽（9kDa)和C5b多肽（170kDa)。C5a多肽結合 7重跨膜G-蛋白偶聯受體，其起初與白細胞相關而現在認為在各種組織，包括肝細胞和神 經細胞中表達。C5a分子是人類補體系統的主要的趨化性組合物并且能夠引發各種生物反 應，包括白細胞趨化性，平滑肌收縮，胞內信號轉換路徑的激活，嗜中性粒細胞-內皮細胞 粘連，細胞因子和脂質調節子的釋放和氧化劑的形成。 隨后，較大的C5b片斷結合補體級聯的較大組合物，C6，C7，C8和C9以形成C5B-9膜攻 擊復合物（"MAC"）。C5b-9MAC能直接溶解紅細胞，并且在更大數量上，它是白細胞溶解酶 并且破壞如肌肉，上皮和內皮細胞等組織。在亞溶破數量上，MAC能刺激粘附分子的上調作 用，并增加細胞內鈣濃度和細胞因子釋放。此外，C5b-9MAC能刺激細胞，如內皮細胞和血小 板，而不引發細胞裂解。C5a和C5b-9MAC的非-裂解作用有時非常相似。 盡管補體系統在維持健康中起了重要的角色，但是它也具有引發疾病的潛能。例如，補 體系統的副作用涉及心臟冠狀動脈旁路術（"CABG")，眾多腎，風濕性的，神經的，皮膚病學 的，血液系統的，血管/肺部，敏感癥，感染和生物適應性/休克的疾病和/或狀況，和糖尿 病視網膜病變。補體系統不是疾病的必要唯一原因，而是引發發病機理的多因子之一。 在Fitch et al.，Circ. 100 :2499-506(1999)中，測試了心臟冠狀動脈旁路術體外循環 ("CPB"）病人的抗-C5單鏈抗體片斷Pexeliz μ Mab的作用。在CPB之前，病人在十分鐘之 內分別以〇· 5mg/kg，I. Omg/kg和2. Omg/kg施用單-丸劑量的Pexeliz μ Mab。在給藥前，給 藥5分鐘后，28°C 5分鐘后，在復溫開始后，在37°C下5分鐘后，和在CPB后7天，提取血液 樣本并測試補體的活性。藥效分析表明，補體溶血活性的抑制作用具有重要的劑量-依賴 性，在2mg/kg的劑量下大于14小時，并且促炎癥補體副產品（sC5b-9)的產生以劑量-依 賴性形式有效地被抑制。如上所述，但是，抗體治療具有一定的限制性。 因此，在補體-相關疾病治療的治療和診斷中，使用補體系統的新型抑制劑是有益的。 【專利附圖】

【附圖說明】 圖1是描述補體系統的經典和可選擇路徑的圖表。 圖2是來源于隨機序列寡核苷酸集落的體外適體選擇（SELEXtm)方法的示意性說明。 圖3A是描述抗-C5適體（序列號：1)的核酸序列和二級結構的圖表，下劃線殘基可以 是2' -H嘧啶殘基或2' -氟嘧啶殘基，加框的殘基可以是2' -氟嘧啶殘基或2' -OMe嘧啶 殘基，由箭頭（一）表示的殘基代表包擴2' -氟修飾的殘基。 圖3B是描述AR330抗-C5適體（序列號：2)的核酸序列和二級結構的圖表，圓圈殘基 是2' -H殘基，嘧啶殘基是2' -氟替代，大多數嘌呤殘基是2' -OMe替代，此外三個2' -OH 嘌呤殘基突出顯示。 圖3C是描述述ARC186抗-C5適體（序列號：4)的核酸序列和二級結構的圖表，所有 21個嘧啶殘基有2' -氟修飾且大多數嘌呤（14個殘基）有2' -OMe修飾，此外，三個2' -OH 嘌呤殘基突出顯示。 圖4是40kD的分支PEG(1，3-雙（mPEG-[20kDa])_丙基-2(4' - 丁酰胺）示意圖。 圖5是適體5'末端帶有40kD分支PEG(1，3-雙（mPEG-[20kDa])_丙基-2(4'- 丁酰 胺）的示意圖。 圖6是描述合成高分子量PEG-核酸共軛物的各種方法的示意圖。 圖7A是一張比較了 PEG化抗-C5適體（ARC657 (序列號：61)，ARC658 (序列號：62)和 ARC187(序列號：5))與非-PEG化抗-C5適體（ARC186(序列號：4))的溶血抑制的劑量依 賴性的圖表；圖7B是一張根據圖7A的描述，用于溶血分析的適體IC 5tl值的表格；圖7C是 一張比較了 PEG化抗-C5適體（ARC187(序列號：5)，ARC1537(序列號：65)和ARC1730(序 列號：66))和ARC1905(序列號：67)的溶血抑制的劑量依賴性的圖表；圖7D是一張根據圖 7C的描述，用于溶血分析的適體IC 5tl值的表格。 圖8是食蟹猴血清補體與人血清補體的，抗-C5適體，ARC658 (序列號：62)的溶血抑制 百分數的圖表。 圖9是描述經15分鐘孵育后，在37°C和室溫（23°C )下，ARC186(序列號：4)與純化的 C5蛋白結合的圖表。 圖10是描述經4小時孵育后，在37°C和室溫（23°C )下，ARC186(序列號：4)與純化的 C5蛋白結合的另一圖表。 圖11是顯示在23°C下，C5 · ARC186復合物溶解時間的圖表。 圖12是顯示在23°C下，C5 · ARC186復合物形成平衡時間的圖表。 圖13是描述在補體級聯上游和下游，ARC186(序列號：4)與C5蛋白或蛋白補體結合的 圖表。 圖14是描述在未標記的競爭者ARC186(序列號：4)，ARC657(序列號：61)，ARC658(序 列號：62)或ARC187(序列號：5)存在時，放射性標記的ARC186(序列號：4)與C5結合的百 分數。 圖15是描述在不同濃度的ARC186(序列號：4)適體存在時，在25°C和37°C下，孵育5 小時后，在血樣本中產生C5b補體蛋白數量的圖表。 圖16是描述在未稀釋的人血清，檸檬酸化的人全血或食蟹猴血清中的酵母聚糖存在 時，ARC187的（序列號：5)補體抑制百分數圖表。 圖17是顯不在實施例ID描述的管環模型中，ARC658(序列號：62)對補體活性（C5a) 的完全抑制。 圖18是描述C5選擇集落Round 10分裂常數的圖表。通過將合適的數據填入等式：RNA 片斷結合=振幅XKd/(Kd+[C5])評估分裂常數（Kds)。"ARC520"（序列號：70)指天然的未 選擇的dRmY集落且" + "表示競爭者的存在（0· lmg/ml tRNA，0. lmg/ml鮭魚精液DNA)。 圖19是描述C5克隆的分裂常數曲線的圖表。通過將合適的數據填入等式：RNA片斷 結合=振幅XKd/(Kd+[C5])評估分裂常數（Kds)。 圖20是描述對比ARC186(序列號：4)，不同濃度的抗-C5適體克隆ARC913(序列號： 75)對溶血活性抑制作用的IC5tl曲線的圖表。 圖21是描述ARC187(序列號：5)結構的不意圖。 圖22是描述ARC1905序列號：67)結構的示意圖。 圖23是描述第一個分離灌注心臟研究的試驗設計的圖表。 圖24是暴露于人血漿（A)的分離心臟左心室（LV)心室內壓力軌跡與暴露于對照適體 溶液⑶的分離心臟LVP壓力軌跡的比較圖。 圖25是暴露于等摩爾，IOX和50X適體/C5溶液（其中假設C5在正常，未稀釋的人 類血漿中的濃度大約為500nM)的分離心臟左心室（LV)心室內壓力軌跡比較圖。 圖26是暴露于人血漿和各種血漿/適體溶液的分離的小鼠心臟間每分鐘心跳（bpm) 改變比較圖。 圖27是暴露于包括0-1 X摩爾比例ARC186 (序列號：4)(衰竭心臟），或10-50 X摩爾 比例（C5適體保護的心臟）的人血漿之前和之后的分離小鼠心臟重量改變比較圖。 圖28是灌注分離小鼠心臟后，含有不同適體濃度的人血漿中相關C5a產生的比較圖。 相對C5a濃度以吸收單位（Abs)作圖，其中高讀數反應存在高C5a水平。 圖29是灌注分離小鼠心臟后，含有不同適體濃度的人血漿中相關可溶性C5b-9產生的 比較圖。 圖30是顯示在小鼠心臟流出物中ARC186(序列號：4)對C3分裂作用的圖表。 圖31是顯示分離灌注小鼠心臟研究中免疫組化染色結果表。 圖32是顯示人類或靈長類血清中，保護心臟免受C5b-介導損害所需的ARC658 (序列 號：62)的摩爾比例表。 圖33是顯示大鼠和食蟹猴血漿中作為孵育時間函數的全長ARC186剩余百分數的對 數-線性圖。 圖34是顯示實施例5描述的Sprague-Dawley大鼠中藥代動力學研究試驗設計的表。 圖35顯不Sprague-Dawley大鼠中相對于時間的ARC657 (序列號：61), ARC658 (序列 號：62)或ARC187(序列號：5)的平均血漿濃度表。 圖36是描述在大鼠中靜脈施用適體后ARC657 (序列號：61)，ARC658 (序列號：62)或 ARC187(序列號：5)的平均血漿濃度圖。 圖37是顯示圖35和36描述的濃度相對于時間數據的非室分析表。 圖38A是顯示小鼠中ARC187(序列號：5)和ARC1905(序列號：67)藥代動力學設計表； 圖38B是顯示⑶-1小鼠中ARC187(序列號：5)和ARC1905(序列號：67)靜脈內推注給藥后 的藥代動力學特征；圖38C是顯示圖38描述的濃度相對于時間數據的非室分析表。 圖39是顯示靜脈給藥后小鼠心臟中所列適體的測定表。 圖40是顯示實施例5E中描述的動物研究1的試驗設計表。 圖41是顯示食蟹猴靜脈推注給藥后適體血漿濃度相對于時間的表。 圖42是研究1中對食蟹猴靜脈內施用ARC657 (序列號：61)，ARC658 (序列號：62)和 ARC187(序列號：5)后藥代動力學參數羅列表。 圖43(&)和43(〇)是描述對食蟹猴靜脈內施用抗-05適體4此657(序列號：61)， ARC658(序列號：62)和ARC187(序列號：5)后的sC5b-9和C5a血漿濃度圖；圖43(b)和 43 (d)是描述sC5b-9和C5a血漿濃度相對于抗-C5適體ARC657 (序列號：61)，ARC658 (序 列號：62)和ARC187(序列號：5)濃度的圖。 圖44是顯示實施例5F描述的研究2的試驗設計圖。 圖45是顯不對食蟹猴靜脈內施用抗-C5適體ARC657 (序列號：61)，ARC658 (序列號： 62)和ARC187(序列號：5)后不同時間點的平均血漿適體濃度圖。 圖46是顯示對食蟹猴靜脈內推注適體后對濃度相對于時間數據的兩室分析表。 圖47是存在酵母聚糖時食蟹猴血漿中C5b-9濃度相對于ARC187(序列號：5)或 ARC658(序列號：62)濃度描述圖。 圖48是存在酵母聚糖時食蟹猴血漿中C5a濃度相對于ARC187(序列號：5)或 ARC658(序列號：62)濃度描述圖。 圖49是概述食蟹猴靜脈內推注加上灌注給藥期間和之后ARC187 (序列號：5) PK-H)研 究表。 圖50是概述食蟹猴靜脈內推注ARC187(序列號：5)后藥代動力學參數表。 圖51是描述食蟹猴靜脈內推注加上灌注給藥期間和之后ARC187(序列號：5)藥代動 力學特征的計算和實際測定值圖。 圖52描述食蟹猴靜脈內推注加上灌注給藥期間和之后活性ARC187(序列號：5)血漿 剩余恒量水平圖。 圖53是顯示CABG手術所需抗-C5適體的人類劑量預測表。 圖54是通過凝血時間（PT)和活性部分凝血時間（APTT)測定ARC187(序列號：5)對 于凝結沒有體外效應的顯示圖。 圖55是ARC187 (序列號：5)對于肝素抗-凝結活性，和魚精蛋白促凝活性體外效應的 概述表。 圖56是ARC187(序列號：5)在體內不影響肝素抗凝結逆轉的顯示圖。 圖57是通過測定對酵母聚糖補體活性的抑制，肝素和魚精蛋白不影響ARC187(序列 號：5)的抗-補體功能顯示圖。 圖58是作為抗-C5適體ARC187(序列號：5)或ARC658(序列號：62)濃度的函數，在存 在人血清時綿羊紅細胞溶血抑制百分率的顯示圖。 圖59A是在存在人類，食蟹猴和大鼠血清時ARC1905(序列號：67)對于溶血抑制百分 數的描述圖；圖59B是抗-C5適體ARC1905或不結合C5的非相關適體（陰性對照）對于人 類，食蟹猴和大鼠血清的補體活性抑制平均IC 5tl值的概述表。 圖60是在競爭結合試驗中，作為未標記的競爭ARC1905 (序列號：67)或ARC672 (序列 號：63)(水平軸）的函數，放射標記ARC186 (序列號：4)(垂直軸）抑制IC5tl值的顯示圖。 圖61是在競爭結合試驗中，作為未標記的競爭ARC1905(序列號：67)(水平軸）的函 數，放射標記ARC186(序列號：4)(垂直軸）在37°C和25°C抑制IC5tl值的顯示圖。 圖62是描述人類C5a(hC5a)和食蟹猴C5a(hC5a eq)標準曲線顯示圖。 圖63是酵母聚糖-誘導的補體激活試驗中測定的，ARC1905 (序列號：67)在人類和食 蟹猴血清中抑制C5活性的IC5tl, IC9tl和IC99值的概述表。 圖64是酵母聚糖-誘導的補體激活試驗中測定的，作為人類和食蟹猴血清中 ARC1905(序列號：67)函數的C5a產生抑制百分數的描述圖。 圖65是酵母聚糖-誘導的補體激活試驗中測定的，ARC1905 (序列號：67)對于人類或 食蟹猴血清中C3a產生的效應描述圖。 圖66是補體活性管環模型中測定的，5位自愿者中ARC1905抑制補體活性的IC5tl, IC9q 和IC99平均值概述表。 圖67在補體活性管環模型中，作為ARC1905, 一種抗-C5適體，或ARC127, 一種不結合 C非相關適體（陰性對照）的函數，C5a和C3a產生抑制百分數的顯示圖。
【發明內容】
本發明提供了治療，預防和改善補體相關疾病的材料和方法。在某一實施方案中，提供 了包括與PEG亞基共軛的ARC186(序列號：4)核酸序列的適體。在特定的實施方案中，這種 ARC186適體/PEG共軛物與由序列號：4組成但缺乏PEG亞基的適體具有與C5補體蛋白完 全相同的結合親合力。這里所述的完全相同的親合力指通過印跡雜交分析測得的分裂常數 差異不超過大約2-10倍，尤其不超過2-5倍。在某一實施方案中，正如實施例IA所述，分 裂常數由競爭性印跡雜交分析測定。在某一實施方案中，聚乙二醇亞基的分子量大于10kD， 甚至有20kD，更甚至有30kD和40kD。在某一實施方案中，PEG亞基與ARC186(序列號：4) 的5'末端共軛。在某一實施方案中，通過實施例5E描述的方法測定的靈長類中，適體/PEG 共軛物兩室模型的半衰期，尤其末端半衰期為至少15,尤其至少24小時，最合適地為至少 48小時。在某一實施方案中，在大鼠中，適體/PEG共軛物兩室模型的半衰期，尤其末端半衰 期為至少10,尤其至少15小時。在某一實施方案中，與ARC186(序列號：4) 5'末端共軛的 PEG是40kD的PEG。在特定的實施方案中，40kD PEG是分支PEG。在某一實施方案中，分支 的40kDPEG是l，3-雙（mPEG-[20kDa])-丙基-2-(4'-丁酰胺）。在另一實施方案中，分 支的40kD PEG是2,3_雙（mPEG-[20kDa])_丙基-1-氨基甲酰。 在分支的40kDPEG是l，3-雙（mPEG-[20kDa])-丙基-2-(4'-丁酰胺）的實施方案 中，提供的適體結構見下面所列：
【權利要求】
1. 一種適體或其鹽，其中適體的核酸序列為序列號：4。
2. 根據權利要求1所述的適體/聚乙二醇（PEG)共軛物或其鹽，其中所述適體/PEG共 軛物的適體指的是權利要求1所述的適體。
3. 根據權利要求1所述的適體/PEG共軛物或其鹽，其中聚乙二醇基團的分子量為 10kDA、20kDA、30kDA或 40kDA。
4. 根據權利要求3所述的適體/PEG共軛物或其鹽，其中聚乙二醇基團包含40kDA的分 子量，并且所述40kDA聚乙二醇基團是帶有支鏈的。
5. 根據權利要求2所述的適體/PEG共軛物或其鹽，其中所述適體/PEG共軛物的序列 為：序列號：5、序列號：61、序列號：62、序列號：64、序列號：65或者序列號：67。
6. 權利要求1所述的適體或其鹽或權利要求2-5任意一項所述的適體/PEG共軛物或 其鹽在制備用于治療C5補體蛋白、C5a和/或C5b-9介導的疾病的藥物中的應用。
7. 根據權利要求6所述的應用，其中所治療的疾病是與CABG外科手術相關的心肌損 傷，與球囊血管成形術相關的心肌損傷、與再狹窄相關的心肌損傷、與CABG外科手術相關 的補體蛋白介導的并發癥、與經皮冠狀動脈介入治療術相關的補體蛋白介導的并發癥、陣 發性血紅蛋白尿、急性移植排斥，超急性移植排斥，亞急性移植排斥或慢性移植排斥。
8. -種具有下述所示結構的適體/聚乙二醇（PEG)共軛物或其鹽：
其中， .....表示C6烷基連接子 適體=fCmGfCfCGfCmGmGfUfCfUfCmAmGmGfCGfCfUmGmAmGfUfCfUmGmAmGfUfUfUAfCfCfU mGfCmG-3T(SEQ ID NO：4), 其中fC和fU= 2'-氟核酸，并且mG和mA= 2'-0Me核酸而所有其它的核酸是2'-0H且3T表示反向的脫氧胸腺嘧啶。
9. 根據權利要求8所述的適體/PEG共軛物或其鹽，其中所述適體/PEG共軛物或其鹽 具有下述所示的結構：
其中適體=f CmGf Cf CGf CmGmGf Uf Cf Uf CmAmGmGf CGf Cf UmGmAmGf Uf Cf UmGmAmGf Uf Uf UAfC fCfUmGfCmG-3T(SEQ ID NO：4) 其中fC和fU= 2'-氟核酸，并且mG和mA= 2'-0Me核酸而所有其它的核酸是2'-0H且3T表示反向的脫氧胸腺嘧啶。
10. 權利要求8或9所述的適體/PEG共軛物或其鹽在制備用于治療C5補體蛋白，C5a 和/或C5b-9介導的疾病的藥物中的應用。
11. 根據權利要求10所述的應用，其中所治療的疾病是與CABG外科手術相關的心肌損 傷，與球囊血管成形術相關的心肌損傷以及與再狹窄相關的心肌損傷、與CABG外科手術相 關的補體蛋白介導的并發癥、與經皮冠狀動脈介入治療術相關的并發癥、陣發性血紅蛋白 尿、急性移植排斥，超急性移植排斥，亞急性移植排斥或慢性移植排斥。
12. -種適體或其鹽，其中，所述適體包括序列號：75、76、95或者96的核酸序列。
13. 根據權利要求12所述的適體或其鹽，其中，所述適體在糖位點、磷酸位點或者堿基 位點包括一種化學取代物。
14. 根據權利要求12所述的適體或其鹽，其中，所述適體包括修飾的核苷。
15. 根據權利要求12所述的適體或其鹽，其中所述適體進一步包括3'封端。
16. 根據權利要求12所述的適體或其鹽，其中，所述適體與一種高分子量部分共軛。
17. 根據權利要求12所述的適體或其鹽，其中，所述高分子量部分是聚乙二醇基團。
18. 根據權利要求17所述的適體或其鹽，其中聚乙二醇基團的大小是至少10、20、30、 40、50、60 或80KD。
19. 根據權利要求17所述的適體或其鹽，其中，所述聚乙二醇基團是線性的。
20. 根據權利要求17所述的適體或其鹽，其中，所述聚乙二醇基團是帶有支鏈的。
21. -種組合物，包括權利要求12-20中任意一項所述的適體或其鹽、以及一種藥學上 可接受的載體或者稀釋劑。
22. 權利要求12-20中任意一項所述的適體或其鹽在制備用于治療C5補體蛋白、C5a 和/或C5b-9-介導的失調的藥物中的應用。
23. 根據權利要求22所述的應用，其中治療的疾病是與CABG外科手術相關的心肌損 傷，與球囊血管成形術相關的心肌損傷、與再狹窄相關的心肌損傷、與CABG外科手術相關 的補體蛋白介導的并發癥、與經皮冠狀動脈介入治療術相關的補體蛋白介導的并發癥、陣 發性血紅蛋白尿、急性移植排斥，超急性移植排斥，亞急性移植排斥或慢性移植排斥。
【文檔編號】C12N15/115GK104404046SQ201410685384
【公開日】2015年3月11日 申請日期:2006年2月14日 優先權日:2005年2月14日
【發明者】克勞德·本尼蒂特, 大衛·愛潑斯坦, 查爾斯·威爾遜, 迪拉爾·格拉特, 杰弗里·庫爾茲, 馬克斯·庫爾茲, 托馬斯·格瑞恩·卡尤利, 詹姆斯·羅特曼 申請人:阿切埃米克斯股份有限公司