本發明涉及一種利用酒精廢液和作物秸稈制備飼料蛋白的方法，屬于飼料技術加工領域。
背景技術：
目前隨著人們生活水平的提高和對生活質量的重視，對肉、蛋、奶、水產品的需求日益增多，糧食和飼料生產面臨嚴峻考驗，飼料蛋白資源將日益匱乏，
因此提高糧食向畜牧產品的轉化效率和飼料的利用率，拓展飼料資源，開發非常規飼料已迫在眉睫，蛋白質原料是飼料工業發展的基礎，我國蛋白質原料的緊缺和價格高漲已經成為制約畜牧業發展的瓶頸之一，為此所采用的策略就是針對現有蛋白源，提高其利用率，盡可能地挖掘飼料的可利用營養成分，從根本上緩解飼料原料供應緊張的局面，據研究，通過利用酒精廢液和作物秸稈，將兩者添加到飼料中，可以增強飼料中的蛋白含量，秸稈是一種非常規性飼料資源，其質地粗糙堅硬、適口性較差、消化利用率低、營養價值不高，但經合理加工后，可提高采食量、消化率和營養價值，飼喂草食動物或作為配制全價飼料的基料，對動物生長、發育和增重、提高飼料報酬和經濟效益有良好的作用。因此利用秸稈纖維素生產營養價值較高的飼料具有廣闊前景。同時，酒精燕餾廢液中含有大量未被利用的營養成分一一蛋白質、脂肪、糖類、礦物質等,因此設法將蒸餾廢液回收用以制取蛋白飼料,就成為科技人員的努力方向。目前酒精廢液轉變為飼料多采用固液分離、濃縮干燥的工藝，產生大量的污水，能耗嚴重，利用酒精廢液開發節能型飼料化全利用成為酒精行業發展最具應用價值的利用途徑，因此有必要發明一種一種利用酒精廢液和作物秸稈制備飼料蛋白的方法。
技術實現要素：
本發明針對作物秸稈飼料化利用度不高、酒精廢液污染嚴重的現狀，提供一種利用酒精廢液和作物秸稈制備飼料蛋白的方法，以滿足秸稈綜合利用、畜牧業飼料蛋白需求、酒精廢液無害化處理及利用的客觀需求。為此，本發明上述目的是通過以下技術方案予以實現的：
本發明提供一種利用酒精廢液和作物秸稈制備飼料蛋白的方法，其特征在于具體包括以下步驟：
（1）飼料原料的基本處理：首先將秸稈粉碎：選取無霉變的秸稈，清除泥土等雜志，粉碎過60目篩子。
（2）固液分離：酒精廢液自然沉降固液分離，得上清液和發酵酒糟。
（3）秸稈的在處理：
將秸稈氨化：加入秸稈3~6%的氨水，加入酒精廢液上清液，調整含水率至50~65%，混合均勻，置于密閉環境下氨化2~6天。
秸稈酶解：調整氨化后的秸稈pH必需保證為在4.0~5.0之間,加入纖維素酶、木聚糖酶、果膠酶，加酶量分別為2~3%、4~5%、2~4%，混合均勻，酶解10~15h，酶解溫度控制在35~40℃。
（4）配制固體培養基：將酶解后的秸稈與發酵酒糟混合，并添加玉米漿、麩皮、豆餅粉、尿素、硫酸銨等，用上清液調整培養基，保證其含水量100~120%，調整初始pH為7.0左右.
（5）霉菌處理即曲霉活化：取新鮮麩皮，用40目篩子篩去細粉，將麩皮：水按照1：2的比例進行，充分拌勻到既沒有干粉又不出現成團狀的現象。分裝在2000mL三角瓶中，每只2000mL三角瓶裝濕麩皮約100g，在0.1MPa表壓下滅菌45~65min，冷卻至30~35℃，每一個三角瓶中接入2~3環已活化好的斜面米曲霉cv-8、黑曲霉sp-1孢子，培養基品溫控制在(35±1)℃．每隔10~15h搖瓶一次，使其充分的接觸，直至孢子長出后停止制備孢子懸浮液。
（6）一次固體發酵：將米曲霉3~4%、黑曲霉8~12%、異硬脂酸0.05-0.08%, 異十八酸0.02-0.05%按比例接種到混合配料中，拌勻，在30~37℃溫度下進行培養，通風培養2~4天。
（7）產朊假絲酵母活化：將產朊假絲酵母接到YPD培養基中，30℃，180r/min轉速下恒溫搖瓶24小時；然后以1:100比例，將種子液接到YPD培養基中，得到釀酒酵母和產朊假絲酵母液體種子；
（8）枯草芽孢桿菌活化：采用LB培養基在30~35℃條件下培養24h，制得液體種子。
（9）二次固體發酵：將產朊假絲酵母、枯草芽孢桿菌按4~6%、3~4%接種比例接種至培養基，30℃左右培養3~4天。
（10）三次固體發酵：將固體乳酸菌粉按4~6%的接種比例接種至培養基，29~35℃厭氧培養24h。
（11）干燥：發酵結束后低溫通風干燥。
（13）粉碎：將干燥后的發酵飼料粉碎即得成品。
上述秸稈可以是小麥秸稈、玉米秸稈、稻草秸稈中的一種或幾種。
上述步驟（4）中固態發酵培養基組分為：秸稈降解產物30~35%、酒糟20~25%、玉米漿8~20%、麩皮2.5~3.5%、豆餅粉9~11%、尿素4~6%、硫酸銨7~11%。
上述步驟（6）中固體培養基無需滅菌。
本發明提供一種利用酒精廢液和作物秸稈制備飼料蛋白的方法，其優點在于：通過秸稈的氨化處理和復合酶解，將微生物不易利用的纖維素、木聚糖等降解為還原糖，經測定復合酶解后作物秸稈中的還原糖含量超過40%，最高達到42.56%，比目前報道的單純氨化處理或復合酶解處理法提高20%以上，還原糖含量提高為微生物的生長繁殖提供了充足的碳源，應用黑曲霉和米曲霉將秸稈中的菌進行降解，霉菌與酒糟中的酵母菌混合培養的互惠共生關系使秸稈蛋白含量有較大提高，利用在多菌混合發酵,酶促作用生成的糖立即被發酵糖的微生物所利用，這樣就維持了降解物的濃度，消除了酶合成作用受到的降解物的阻遏作用，也解除了反應終產物對酶的反饋抑制，縮短了發酵過程，采用分段發酵，發酵菌株對溫度、pH、通氧等要求不同，不同的反應控制條件，提高了菌體的生長速率，縮短了發酵時間，第一次固體發酵過程中加入少量異硬脂酸和異十八酸，令米曲霉、黑曲霉酶活性產生協同作用，進一步提高蛋白含量，本發明采用的是固態發酵，生產工藝簡單，無環境污染。
具體實施方式
一、具體實施例
實施例1
一種利用酒精廢液和作物秸稈制備飼料蛋白的方法，具體制備步驟如下：
（1）飼料原料的基本處理：首先將秸稈粉碎：選取無霉變的秸稈，清除泥土等雜志，粉碎過60目篩子。
（2）固液分離：酒精廢液自然沉降固液分離，得上清液和發酵酒糟。
（3）秸稈的在處理：
將秸稈氨化：加入秸稈3%的氨水，加入酒精廢液上清液，調整含水率至50~65%，混合均勻，置于密閉環境下氨化2天。
秸稈酶解：調整氨化后的秸稈pH為 4.0,加入纖維素酶、木聚糖酶、果膠酶，加酶量分別為%、4%、2%，混合均勻，酶解10h，酶解溫度控制在35℃。
（4）配制固體培養基：將酶解后的秸稈與發酵酒糟混合，并添加玉米漿、麩皮、豆餅粉、尿素、硫酸銨等，用上清液調整培養基，保證其含水量100%，調整初始pH為7.0。
（5）霉菌處理即曲霉活化：取新鮮麩皮，用40目篩子篩去細粉，將麩皮：水按照1：2的比例進行，充分拌勻到既沒有干粉又不出現成團狀的現象。分裝在2000mL三角瓶中，每只2000mL三角瓶裝濕麩皮約100g，在0.1MPa表壓下滅菌45min，冷卻至30℃，每一個三角瓶中接入2環已活化好的斜面米曲霉cv-8、黑曲霉sp-1孢子，培養基品溫控制在(35±1)℃．每隔10~15h搖瓶一次，使其充分的接觸，直至孢子長出后停止制備孢子懸浮液。
（6）一次固體發酵：將米曲霉3%、黑曲霉82%、異硬脂酸0.05%, 異十八酸0.02%接種到混合配料中，拌勻，在30℃溫度下進行培養，通風培養2天。
（7）產朊假絲酵母活化：將產朊假絲酵母接到YPD培養基中，30℃，180r/min轉速下恒溫搖瓶24小時；然后以1:100比例，將種子液接到YPD培養基中，得到釀酒酵母和產朊假絲酵母液體種子；
（8）枯草芽孢桿菌活化：采用LB培養基在30℃條件下培養24h，制得液體種子。
（9）二次固體發酵：將產朊假絲酵母、枯草芽孢桿菌按4%、3%接種比例接種至培養基，30℃左右培養3天。
（10）三次固體發酵：將固體乳酸菌粉按4%的接種比例接種至培養基，29℃厭氧培養24h。
（11）干燥：發酵結束后低溫通風干燥。
（12）粉碎：將干燥后的發酵飼料粉碎即得成品。
上述秸稈可以是小麥秸稈、稻草秸稈。
上述步驟（4）中固態發酵培養基組分為：秸稈降解產物30%、酒糟20%、玉米漿8%、麩皮2.5%、豆餅粉9%、尿素4%、硫酸銨7%。
上述步驟（6）中固體培養基無需滅菌。
實施例2
一種利用酒精廢液和作物秸稈制備飼料蛋白的方法，其特征在于具體包括以下步驟：
（1）飼料原料的基本處理：首先將秸稈粉碎：選取無霉變的秸稈，清除泥土等雜志，粉碎過60目篩子。
（2）固液分離：酒精廢液自然沉降固液分離，得上清液和發酵酒糟。
（3）秸稈的在處理：
將秸稈氨化：加入秸稈4%的氨水，加入酒精廢液上清液，調整含水率至58%，混合均勻，置于密閉環境下氨化5天。
秸稈酶解：調整氨化后的秸稈pH調制4.5,加入纖維素酶、木聚糖酶、果膠酶，加酶量分別為2.5%、3.5%、3%，混合均勻，酶解12h，酶解溫度控制在38℃。
（4）配制固體培養基：將酶解后的秸稈與發酵酒糟混合，并添加玉米漿、麩皮、豆餅粉、尿素、硫酸銨等，用上清液調整培養基，保證其含水量110%，調整初始pH為7.0。
（5）霉菌處理即曲霉活化：取新鮮麩皮，用40目篩子篩去細粉，將麩皮：水按照1：2的比例進行，充分拌勻到既沒有干粉又不出現成團狀的現象。分裝在2000mL三角瓶中，每只2000mL三角瓶裝濕麩皮約100g，在0.1MPa表壓下滅菌50min，冷卻至32℃，每一個三角瓶中接入3環已活化好的斜面米曲霉cv-8、黑曲霉sp-1孢子，培養基品溫控制在(35±1)℃．每隔12h搖瓶一次，使其充分的接觸，直至孢子長出后停止制備孢子懸浮液。
（6）一次固體發酵：將米曲霉4%、黑曲霉10%、異硬脂酸0.05%, 異十八酸0.02%接種到混合配料中，拌勻，在35℃溫度下進行培養，通風培養3天。
（7）產朊假絲酵母活化：將產朊假絲酵母接到YPD培養基中，30℃，180r/min轉速下恒溫搖瓶24小時；然后以1:100比例，將種子液接到YPD培養基中，得到釀酒酵母和產朊假絲酵母液體種子；
（8）枯草芽孢桿菌活化：采用LB培養基在34℃條件下培養24h，制得液體種子。
（9）二次固體發酵：將產朊假絲酵母、枯草芽孢桿菌按5%、4%接種比例接種至培養基，30℃左右培養4天。
（10）三次固體發酵：將固體乳酸菌粉按6%的接種比例接種至培養基，35℃厭氧培養24h。
（11）干燥：發酵結束后低溫通風干燥。
（12）粉碎：將干燥后的發酵飼料粉碎即得成品。
上述秸稈可以是小麥秸稈、玉米秸稈。
上述步驟（4）中固態發酵培養基組分為：秸稈降解產物33%、酒糟24%、玉米漿15%、麩皮3.2%、豆餅粉10%、尿素5%、硫酸銨9%。
上述步驟（6）中固體培養基無需滅菌。
實施例3
本發明提供一種利用酒精廢液和作物秸稈制備飼料蛋白的方法，其特征在于具體包括以下步驟：
（1）飼料原料的基本處理：首先將秸稈粉碎：選取無霉變的秸稈，清除泥土等雜志，粉碎過60目篩子。
（2）固液分離：酒精廢液自然沉降固液分離，得上清液和發酵酒糟。
（3）秸稈的在處理：
將秸稈氨化：加入秸稈6%的氨水，加入酒精廢液上清液，調整含水率至65%，混合均勻，置于密閉環境下氨化6天。
秸稈酶解：調整氨化后的秸稈pH 5.0,加入纖維素酶、木聚糖酶、果膠酶，加酶量分別為3%、5%、4%，混合均勻，酶解15h，酶解溫度控制在40℃。
（4）配制固體培養基：將酶解后的秸稈與發酵酒糟混合，并添加玉米漿、麩皮、豆餅粉、尿素、硫酸銨等，用上清液調整培養基，保證其含水量120%，調整初始pH為7.0左右.
（5）霉菌處理即曲霉活化：取新鮮麩皮，用40目篩子篩去細粉，將麩皮：水按照1：2的比例進行，充分拌勻到既沒有干粉又不出現成團狀的現象。分裝在2000mL三角瓶中，每只2000mL三角瓶裝濕麩皮約100g，在0.1MPa表壓下滅菌65min，冷卻至30~35℃，每一個三角瓶中接入3環已活化好的斜面米曲霉cv-8、黑曲霉sp-1孢子，培養基品溫控制在(35±1)℃．每隔15h搖瓶一次，使其充分的接觸，直至孢子長出后停止制備孢子懸浮液。
（6）一次固體發酵：將米曲霉4%、黑曲霉12%、異硬脂酸0.08%, 異十八酸0.02%接種到混合配料中，拌勻，在37℃溫度下進行培養，通風培養4天。
（7）產朊假絲酵母活化：將產朊假絲酵母接到YPD培養基中，30℃，180r/min轉速下恒溫搖瓶24小時；然后以1:100比例，將種子液接到YPD培養基中，得到釀酒酵母和產朊假絲酵母液體種子；
（8）枯草芽孢桿菌活化：采用LB培養基在35℃條件下培養24h，制得液體種子。
（9）二次固體發酵：將產朊假絲酵母、枯草芽孢桿菌按6%、3~4%接種比例接種至培養基，30℃左右培養4天。
（10）三次固體發酵：將固體乳酸菌粉按4~6%的接種比例接種至培養基， 35℃厭氧培養24h。
（11）干燥：發酵結束后低溫通風干燥。
（12）粉碎：將干燥后的發酵飼料粉碎即得成品。
上述秸稈可以是小麥秸稈、玉米秸稈。
上述步驟（4）中固態發酵培養基組分為：秸稈降解產物35%、酒糟25%、玉米漿20%、麩皮3.5%、豆餅粉11%、尿素6%、硫酸銨11%。
上述步驟（6）中固體培養基無需滅菌。
以上實施例僅用于說明本發明的技術方案，而非對其進行限制；盡管參照前述實施例對被發明進行了詳細的說明，但對于本領域的普通技術人員來說，依然可以對前述實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換；而對這些修改或者替換，并不使相應技術方案的本質脫離本發明所要求保護的技術方案的精神和范圍。
上述說明并非對本發明的限制，本發明也并不限于上述舉例。本技術領域的普通技術人員在本發明的實質范圍內，作出的變化、改型、添加或替換，也應屬于本發明的保護范圍。