專利名稱：抑制癌細胞的增殖和誘導其凋亡的方法
技術領域：
本發明總的涉及減少癌細胞的增殖，或者誘導癌細胞的凋亡，或者誘導癌細胞分化成非癌細胞的方法，本發明還涉及治療患者的腺癌的方法。
背景技術：
胰腺癌是是腫瘤學家面對的最神秘和最富侵襲性的惡性腫瘤之一〔Parker等人，《癌癥統計，1996》(Cancer Statistics)，CA Cancer J.Clin.，465-27(1996)(“Parker”)〕。該病現在是導致美國男性和女性的癌癥死亡的第四大殺手，它的發病率在過去20年明顯增加〔Parker；Trede等人，《胰管十二指腸吻合術后的生存無操作性死亡的118例連續的切除術》(Survival AfterPancreaticoduodenectomy118 Consecutive Resections Without an OperativeMortality)，Ann.Surg.，211447-458(1990)；Cameron等人，《沒有死亡的145例連續的胰管十二指腸吻合術》(One Hundrand and Forty-five ConsecutivePancreaticoduodenectomies Without Mortality)，Ann.Surg.，217430-438(1993)；Horward，《胰腺的腺癌》(Pancreatic Adenocarcinoma)，Curr.Prob.in Cancer，20286-293(1996)(“Horward”)；Poston等人，Gut.Biology of Pancreatic Cancer，32800-812(1991)(“Poston”)；以及Black等人，《胰腺癌的治療目前的限制，將來的可能性》(Treatment of Pancreatic CancerCurrent Limitations，FuturePossibilities)，Oncology，10301-307(1996)(“Black”)〕。胰腺癌導致美國每年有27,000位患者死亡。因為缺乏早期的診斷和對胰腺癌的治療響應性差，所有生存超過5年的患者少于2％，診斷出胰腺癌后的平均壽命期望值少于6個月(Horward、Poston和Black)。
結腸癌是美國第二種最常見的癌癥〔Doll等人，《相對于吸煙的死亡率對英國男性醫生的20年觀察》(Mortality in relation to Smoking20 years′Observation onMale British Doctors)，BMJ，21525-1536(1976)；Hruban等人，《癌癥和微小轉移的分子診斷》(Molecular Diagnosis of Cancer and Micrometastases)，Adv.Anat.Pathol.，5175-178(1998)(Hruban“)；Figueredo等人，《完全切除后II期結腸癌的輔助治療地方性胃腸道疾病定位組》(Adjuvant Therapy for Stage II Colon CancerAfter Complete ResectionProvincial Gastrointestinal Disease Site Group)，Cancer Prev.Control，1379-92(1997)(“Figueredo”)；Ness等人，《結腸直腸癌癥的結果描述使用患者病灶組進行的鑒別和描述》(Outcome States of Colorectal CancerIdentification and Description Using Patient Focus Groups)，Am.J.Gastroenterol.，931491-7(1998)(“Ness”)；Trehu等人，《篩選結腸直腸癌的價值團體質量篩選程序的結果和文獻的綜述》(Cost of Screening for Colorectal CancerResults of aCommunity Mass Screening Program and Review of Literature)，South Med.J.，85248-253(1992)；和Wingo等人，《癌癥統計》(Cancer Statistics》，CA Cancer J.Clin.，458-30(1995)(“Wingo”)〕。在美國每年大約有138,000人罹患結腸癌，并且有55,000位患者死亡(Wingo)。達到70％的結腸癌患者在死亡時發展了肝轉移，這表明不可檢測的微小轉移在進行外科手術時即存在(Hruban；Figueredo；和Ness)。此外，轉移癌常常對標準的化療方案無應答，結果導致治療失敗(Figueredo和Ness)。晚期或者不可切除的結腸直腸癌患者對化療劑的總應答在26-44％之間變化。例如，具有肝轉移的結腸直腸癌患者中有少于1/3對諸如5-FU和亞葉酸之類的藥物有響應(Id.)。
乳腺癌是女性所患任何癌癥中發病率最高的癌癥，診斷結果是在美國每年有275,000以上的人患此癌癥(Richards等人，《延遲對乳腺癌患者的生存的影響系統的綜述》(Influenee of Delay on Survival in Patients with Breast CancerASystemic Review)，Lancet，3531119-26(1999)；Norton，《輔助性乳腺癌治療目前的狀況和將來的策略——乳腺癌的生長動力學和改進的藥物治療》(AdjuvantBreast Cancer TherapyCurrent Status and future Stratefies——Growth Kinetics andthe Improved Drug Therapy of Breast Cancer)，Semin.Oncol.，261-4(1999)；Morrow等人，《目前在乳腺癌處理中的爭議》(Current Controversies in Breast CancerManagement)，Curr.Probl.Surg.，36163-216(1999)；和Ruppert等人，《乳腺癌的基因治療策略》(Gene Therapy Strategies for Carcinoma of the Breast)，BreastCancer Res.Treatment，4493-114(1997))。即使5年的生存時間已增加到80％以上，但是每年還是有77,000位以上的女性死于這種疾病(Id.)。
因此，其它的用于胰腺癌、結腸癌和乳腺癌的化療劑的方向將是非常有利的，尤其是在控制轉移和不可切除性疾病方面。
發明概要本發明涉及減少腺癌細胞增殖、或誘導腺癌細胞凋亡、或者誘導腺癌細胞分化成非癌細胞的方法。使含有腺癌細胞的樣品在有效抑制白三烯B4與白三烯B4受體結合的條件下與一種化合物接觸。
本發明還涉及一種治療患者的腺癌的方法。該方法包括向患者給予有效抑制白三烯B4與白三烯B4受體結合的一定量的化合物。
本發明還涉及一種減少腺癌細胞增殖、或誘導腺癌細胞凋亡、或誘導腺癌細胞分化成非癌細胞的方法。該方法包括使含有腺癌細胞的樣品與具有下式(式I)的化合物或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物接觸 式中，R1是C1-C5烷基、C2-C5鏈烯基、C2-C5炔基、C1-C4烷氧基、(C1-C4烷基)硫代、鹵素或R2取代的苯基；每個R2和R3獨立地是氫、鹵素、羥基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、(C1-C4烷基)-S(O)q-、三氟甲基，或者二-(C1-C3烷基)氨基；X是-O-、-S-、-C(＝O)-，或者是-CH2-；Y是-O-或-CH2-；或者，當它們連在一起時，-X-Y-是-CH＝CH-或-C≡C-；Z是直鏈或支鏈C1-C10亞烷基；A是一個鍵、-O-、-S-、-CH＝CH-或者-CRaRb-，其中各個Ra和Rb獨立地是氫、C1-C5烷基，或者是R7取代的苯基；或者當Ra和Rb與和它們所連接的碳原子連在一起時，形成C4-C8的環烷基環；R4是R6，或者R4是具有下述式子之一的部分 或 和式中各R6獨立是-COOH、5-四唑基、-CON(R9)2，或者-CONHSO2R10；各R7是氫、C1-C4烷基、C2-C5鏈烯基、C2-C5炔基、芐基、甲氧基、-W-R6、-T-G-R6、(C1-C4烷基)-T-(C1-C4亞烷基)-O-，或者是羥基；R8是氫或鹵素；各R9獨立是氫、苯基，或者是C1-C4烷基；或者當R9與和它所連接的氮原子連在一起時，形成嗎啉代、哌啶子基、哌嗪子基或吡烷子基；R10是C1-C4烷基，或者是苯基；R11是R2、-W-R6，或者是-T-G-R6；各W是一個鍵，或者是直鏈或支鏈的含1-8個碳原子的二價烴基；各G是直鏈或支鏈的含1-8個碳原子的二價烴基；各T是一個鍵、-CH2-、-O-、-NH-、-NHCO-、-C(＝O)-，或者是-S(O)q-；K是-C(＝O)-或-CH(OH)-；各q獨立是0、1或2；p是0或1；t是0或1；條件是，當X是-O-或-S-時，Y不是-O-；另一條件是，當A是-O-或-S-時，R4不是R6；還有一個條件是，當A是-O-或-S-，且Z是鍵時，Y不是-O-；又一條件是，當p是0時，W不是鍵。
本發明還涉及一種治療患者腺癌的方法。該方法包括向患者給予治療有效量的式I的化合物，或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物。
附圖的簡短描述
圖1A和1B是顯示LTB4受體拮抗劑LY293111對胸苷摻到MiaPaCa-2胰腺癌細胞系中的濃度依賴性抑制(圖1A)和隨時間變化的效果(圖1B)的柱形圖。結果表示為對照的百分比；與對照相比，*＝p＜0.05，**＝p＜0.01，***＝p＜0.001；數據代表從四組分別的試驗得到的結果。
圖2顯示LY293111對MiaPaCa-2胰腺癌細胞中的細胞數的隨時間變化的效果。用500nM LY293111處理細胞24、48和72小時，結果(實線，■)表示為相對細胞數/孔。圖中也給出對照數據(虛線，▲)。與對照相比，*＝p＜0.05，**＝p＜0.01，***＝p＜0.001；數據代表從四組分別的試驗得到的結果。
圖3A-3D是相差顯微成像圖。圖3B顯示相對于對照MiaPaCa-2胰腺癌細胞(圖3A)，250nM LY293111在MiaPaCa-2胰腺癌細胞中12小時后誘導的形態學上變化。圖3D顯示與對照的LoVo結腸癌細胞相比(圖3C)，250nM LY293111在LoVo結腸癌細胞中誘導的形態學上的變化。
圖4A和4B是顯示LTD4拮抗劑LY171883的不同濃度對胸苷摻到胰腺癌細胞系MiaPaCa-2(圖4A)和HPAF(圖4B)48小時后產生的影響的柱形圖。結果表示為對照的百分比；與對照相比，*＝p＜0.05，**＝p＜0.01，***＝p＜0.001；數據代表從四組分離的試驗得到的結果。
圖5A是顯示不同濃度的LTN4在24小時后對胸苷摻入MiaPaCa-2細胞中所產生的影響的柱形圖。圖5B和5C是顯示100nM LTB4在24、48和72小時對胸苷摻入MiaPaCa-2細胞(圖5B)和HPAF(圖5C)產生的影響的柱形圖。胸苷摻入的結果表示為cpm；與對照相比，*＝p＜0.05，**＝p＜0.01，***＝p＜0.001；數據代表從四組分別的試驗得到的結果。
圖6A和6B是顯示250nM LY293111對100nM LTB4在24小時后對胰腺癌細胞MiaPaCa-2(圖6A)和HPAF(圖6B)的刺激性影響所產生的影響的柱形圖。結果表示為對照的百分比；與對照相比，*＝p＜0.05，**＝p＜0.01，***＝p＜0.001；數據代表從四組分別的試驗得到的結果。
圖7是瓊脂糖凝膠電泳圖，它顯示反映了LY293111誘導的MiaPaCa-2細胞中的凋亡的DNA片段化作用。細胞用250、500進而1000nM LY293111處理48小時。在1.8％瓊脂糖上分離總的細胞DNA，用溴乙錠染色使其顯像。結果是三個分別試驗的代表。
圖8A-8C是顯示用250nM(圖8B)和500nM(圖8C)LY293111處理48小時的MiaPaCa-2胰腺癌細胞的TUNEL試驗結果的點型圖，圖8A是對照。右上象限中熒光事件的增加是由于破碎的DNA被UTP標記的緣故，這些結果是三個分別試驗的代表。
圖9A-9F是顯示LY293111對胰腺癌和結腸癌細胞系的增殖的影響的柱形圖。圖9A、9C和9D顯示LY293111分別對胰腺癌細胞系MiaPaCa2、HPAF和Capan2產生的劑量影響。圖9B顯示LY293111對胰腺癌細胞系MiaPaCa2的時間依賴性影響。圖9E和9F顯示0.5μM LY293111對作為時間的函數的胰腺癌細胞系MiaPaCa2細胞數(圖9E)和結腸癌細胞系LoVo細胞數(圖9F)的影響。
圖10A和10B是western印跡圖，它們分別顯示LTB4和LY293111對Bcl-2在MCF-7乳腺癌細胞中的表達的影響。
圖11是外源移植了人胰腺癌細胞系AsPc-1的無胸腺小鼠的腫瘤體積圖，該體積是口服LY293111(▲)的治療時間和對照(●)的治療時間的函數。
發明的詳細描述本發明涉及一種減少腺癌細胞的增殖、或者誘導腺癌細胞的凋亡、或者誘導腺癌細胞分化成非癌細胞的方法。該方法包括使包含腺癌細胞的樣品與抑制白三烯B4與白三烯B4受體的結合的化合物接觸。
“抑制”及其其它形式(如抑制的)包括任何程度的抑制作用(如，約5％以上，約10％以上，約20％以上，約30％以上，約40％以上，約50％以上，約60％以上，約70％以上，約80％以上，約90％以上，約95％以上，約98％以上，約99％以上)以及包括完全的阻止(100％抑制)。
抑制白三烯B4與白三烯B4受體的結合的機制對于本發明的實踐并不是特別關鍵。抑制可以是直接的，如化合物直接干擾了白三烯B4與白三烯B4受體的結合的例子(如，通過直接與白三烯B4受體直接結合，如下文所詳細描述的)，或者抑制是間接的，如化合物干擾白三烯B4和/或白三烯B4受體的產生的例子，下文將有詳細的描述。
例如，化合物可通過與白三烯B4受體結合而抑制自三烯B4與白三烯B4受體的結合。較佳的是，化合物與白三烯B4受體的結合是特異性的，即該化合物基本上不與樣品中存在的其它生物物質結合。例如，較佳的是化合物對白三烯B4受體的IC50大于該化合物對樣品中所有其它生物材料的IC50的約1.1倍，更佳的是大于約1.5倍，還更佳的是大于約2倍，仍更佳的是大于約5倍，仍更佳的是大于約10倍。雖然即使在化合物與白三烯B4受體的結合程度小于白三烯B4與白三烯B4受體的結合(即IC50較低)時，也可在某些情況下獲得所需的效果，但是化合物與白三烯B4受體的結合程度較佳是大于白三烯B4與白三烯B4受體的結合(即有較大的IC50)。
“結合”在本文中包括不可逆的結合和可逆的結合。結合可以是熱力學的力(如有利的平衡常數)或動力學因素(如，有利的開/關比例常數)作用的結果，也可以是化學相互作用(如共價結合、離子結合、氫鍵、范德華力、螯合、π-δ鍵，和/或π-π鍵)或物理相互作用(如表面現象、俘獲等)的結果。化合物與結合配體的“結合”(如化合物與白三烯B4受體的結合)在本文中還包括化合物與其結合配體的任何相互作用，這種相互作用導致該結合配體完成其生理功能的能力下降。例如，對于結合配體是白三烯B4受體的例子，化合物與白三烯B4受體的“結合”包括該化合物與白三烯B4受體間的任何相互作用或相互作用的組合，其結果是使白三烯B4受體中產生物理的、化學的和/或其它的變化，這種變化反過來使白三烯B4受體與白三烯B4結合的能力下降。
可使用各種化合物，通過它們與白三烯B4受體的結合來抑制白三烯B4與白三烯B4受體的結合。這類化合物的例子包括具有下式的那些化合物(“式I”)或其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物 R1是C1-C5烷基、C2-C5鏈烯基、C2-C5炔基、C1-C4烷氧基、(C1-C4烷基)硫代、鹵素或R2取代的苯基；每個R2和R3獨立地是氫、鹵素、羥基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、(C1-C4烷基)-S(O)q-、三氟甲基，或者是二-(C1-C3烷基)氨基；X是-O-、-S-、-C(＝O)-，或者是-CH2-；Y是-O-或-CH2-；或者，當它們連在一起時，-X-Y-是-CH＝CH-或-C≡C-。Z是直鏈或支鏈C1-C10亞烷基。A是一個鍵、-O-、-S-、-CH＝CH-或者-CRaRb-，其中各個Ra和Rb獨立地是氫、C1-C5烷基，或者是R7取代的苯基；或者當Ra和Rb與和它們所連接的碳原子連在一起時，形成C4-C8的環烷基環。R4是R6，或者R4是具有下述式子中的一個的部分 或 式中各R6獨立是-COOH、5-四唑基、-(CON(R9)2，或者-CONHSO2R10。各R7是氫、C1-C4烷基、C2-C5鏈烯基、C2-C5炔基、芐基、甲氧基、-W-R6、-T-G-R6、(C1-C4烷基)-T-(C1-C4亞烷基)-O-，或者是羥基。R8是氫或鹵素。各R9獨立是氫、苯基，或者是C1-C4烷基；或者當R9與和它所連接的氮原子連在一起時，形成嗎啉代、哌啶子基、哌嗪子基或吡烷子基。R10是C1-C4烷基，或者是苯基。R11是R2、-W-R6，或者是-T-G-R6。各W是一個鍵，或者是直鏈或支鏈的含1-8個碳原子的二價烴基。各G是直鏈或支鏈的含1-8個碳原子的二價烴基。各T是一個鍵、-CH2-、-O-、-NH-、-NHCO-、-C(＝O)-，或者是-S(O)q-。K是-C(＝O)-或-CH(OH)-。各q獨立是0、1或2；p是0或1；t是0或1。較佳的是，當X是-O-或-S-時，Y不是-O-；當A是-O-或-S-時，R4不是R6；當A是-O-或-S-，且Z是鍵時，Y不是-O-；當p是0時，W不是鍵。術語“C1-C6烷基”指含1-6個碳原子的直鏈和支鏈脂族基團，如甲基、乙基、丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、叔丁基、正戊基、2，2-二甲基丙基、己基等。包括在這個定義內的術語是“C1-C3烷基”、“C1-C4烷基”、和“C1-C5烷基”。術語“C2-C5鏈烯基”指含一個雙鍵含2-5個碳原子的直鏈和支鏈脂族基團，如-CH＝CH2、-CH2-CH＝CH2、-CH2-CH2-CH＝CH2、-CH-C(CH3)＝CH2、-CH2-CH＝C(CH3)2等等。術語“C2-C5炔基”指含有一個三鍵含2-5個碳原子的直鏈或支鏈脂族殘基，如-C≡CH、-CH2-C≡CH、-CH2-CH2-C≡CH、-CH2-CH(CH3)-C≡CH、-CH2-C≡C-CH3等等。術語“C1-C4烷氧基”指如甲氧基、乙氧基、丙氧基、異丙氧基、丁氧基、仲丁氧基和叔丁氧基。術語“鹵素”指如氟、氯、溴和碘。術語“C1-C10亞烷基”指從C1-C10烷烴衍生得到的二價基團，如-CH2-、-CH(CH3)-、-C(CH3)2-、-CH(C2H5)-、-CH2-CH2-、-CH2-CH(CH3)-、-CH(CH3)-CH2-、-CH(CH3)-CH(CH3)-、-CH2-CH(C2H5)-、-CH2-CH2-CH2-、-CH(CH3)-CH2-CH2-、-CH2-CH(CH3)-CH2-、-CH2-CH(C2H5)-CH2-、-CH2-CH2-CH(C2H5)-、-C(CH3)2-CH2-CH2-、-CH(CH3)-CH2-CH(CH3)-、-CH2-CH2-CH2-CH2-、-CH2-C(CH3)2-CH2-CH2-、-CH2-C(CH3)2-CH2-、-CH2-CH2-CH(C2H5)-CH2-、-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-、-CH(CH3)-CH2-CH2-CH2-CH2-、-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-CH2-、-(CH2)10-等。包括在這個定義內的術語有“C1-C4亞烷基”和“C2-C4亞烷基”。術語“C4-C8環烷基”指含4-8個碳原子的環烷基，如環丁基、環戊基、環己基、4，4-二甲基環己基、環庚基、環辛基等。術語“含1-8個碳原子的直鏈或支鏈二價烴基殘基”指從含1-8個碳原子的直鏈或支鏈烷烴、烯烴或炔烴衍生得到的二價基團。根據分支和碳原子的數目，有機化學家將理解，這樣的部分可含有一個、兩個或三個雙鍵或三鍵，或者兩者的組合。這樣，這個術語可認為是上述定義的含有1-8個碳原子，并任選地含有一個到三個雙鍵或三鍵或兩種鍵的組合(其限定如前面的句子所述)的亞烷基。
如上述，也可使用式I的化合物的藥學上可接受的堿加成鹽。這類鹽包括從無機堿衍生得到的鹽，如銨和堿金屬和堿土金屬氫氧化物、碳酸鹽、碳酸氫鹽等等，以及從堿性有機胺衍生得到的鹽，如脂族胺和芳族胺、脂族二胺、羥基烷基胺等。因此，在制備用于本發明的實踐的鹽中使用的這些堿包括氫氧化銨、碳酸鉀、碳酸氫納、氫氧化鈣、甲胺、二乙胺、乙二胺、環己胺、乙醇胺等。特別優選鉀鹽和鈉鹽形式。
本發明包括使用單鹽形式和二鹽形式，前者即1∶1的式I化合物和先前所述的堿，而在后一種形式的那些物質中，式I的化合物具有兩個酸性基團。此外，本發明的方法可使用式I的化合物或其鹽的溶劑合物的形式進行，如乙醇溶劑合物、水合物等。
認識到在具有支鏈烷基、亞烷基或烴基官能度的化合物中，以及那些具有雙鍵或三鍵的化合物中，可能存在各種立體異構產物。本發明的方法并不限于任何具體的立體異構體，而包括所有可能的單獨異構體及其混合物。術語“5-四唑基”指兩種互變異構體，即(1H)-5-四唑基和(2H)-5-四唑基。
可用于本發明方法的實踐的闡述性化合物包括2-(2-丙基-3-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)丙氧基)苯氧基)苯甲酸、3-(2-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)丙氧基)-6-(4-羧基-苯氧基)苯基)丙酸、1-(4-(羧基-甲氧基)苯基)-1-(1H-四唑-5-基)-6-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)己烷、3-(4-(7-羧基-9-氧代-3-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)-丙氧基)-9H-呫噸))丙酸、5-(3-(2-(1-羰基)-乙基)-4-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)丙氧基)苯基)-4-戊炔酸、其藥學上可接受的鹽或溶劑合物、或這些化合物的組合、鹽、和/或溶劑合物。較佳的是，本發明使用2-(2-丙基-3-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)丙氧基)苯甲酸或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物進行。
可采用已經建立的方法合成式I的化合物，如Baker等人的美國專利第5,462,954號和Fleisch等人的美國專利第5,910,505號中所述的那些方法，本文將這些專利納入作為參考。
可通過它們自身與白三烯受體的結合來抑制白三烯B4與白三烯B4受體結合的其它化合物包括其它的白三烯B4受體拮抗劑，如下述文獻中所述的那些拮抗劑Fleisch等人的美國專利第5,998,454號；Fleisch等人的美國專利第5,914,340號；Fleisch等人的美國專利第5,817,864號；Anderskewitz等人的美國專利第6,037,377號；Perchonock等人的《一系列5-芳基4，6-二硫雜壬二酸(dithianonanedioic)和相關的化合物的合成和結構活性關系研究一類新的白三烯拮抗劑》(Synthesisand Structure-Activity Relationship Studies of a Series of 5-Aryl-4，6-dithianonanedioicAcids and Related CompoundsA Novel Class of Leukotriene Antagonists)，J.Med.Chem.，291442-1452(1986)；Gleason等人，《與編者的聯系》(Communication tothe Editor)，J.Med.Chem.，30959-961(1987)；Konno等人，《一系列的作為一類新的白三烯B4拮抗劑的取代的苯基丙酸的合成和結構活性研究》(Synthesis andStructure-activity Relationships of a Series of Subsitituted-phenylpropionic acids as aNovel Class of Leukotriene B4 Antagonists)”，Adv.Prosraglandin Thromboxane Leukot.Res.，21A411-414(1991)；Daines等人，《(E)-3-[[[[6-(2-羰基乙烯基)-5-[[8-(4-甲氧基苯基)辛基]氧基]-2-吡啶基]-甲基]硫代]甲基]苯甲酸一種新穎的高親和力白三烯B4受體拮抗劑》((E)-3-[[[[6-(2-carboxythenyl)-5-[[8-(4-methoxyphenyl)octyl]oxy]-2-pyridinyl]-methyl]thio]methyl]benzoic AcidA NovelHigh-affinity Leukotriene B4 Receptor Antagonist)，J.Med.Chem.，36(18)2703-2705(1993)(已出版的勘誤出現在J.Med.Chem.，36(25)4130(1993)；Showell等人，《有利的和選擇性的白三烯B4拮抗劑CP-195543的臨床前藥物學特征》(ThePreclinical Pharmacological Profile of the Potent and Selective Leukotriene B4Antagonist CP-195543)，J.Pharmacol.Exp.Ther.，285(3)346-954(1998)；和Hullot等人，《新穎的白三烯B4受體拮抗劑(1S*，3S*)-1-羥基-3-[(3R*S*，E)-3-羥基-7-苯基-1-庚-1-基]-1-環己烷醋酸鈉的合成和生化/藥物學特性》(Synthesis andBiochemical/Pharmacological Profile of the Novel Leukotriene B4 Receptor AntagonistSodium(1S*，3S*)-1-hydroxy-3-[(3R*S*，E)-3-hydroxy-7-phenyl-1-heten-1-yl]-1-cyclohexane acetate)，Arzneimittelforschung，47(1)51-58(1997)，本文將這些文獻納入作為參考。
可通過與白三烯B4受體結合來抑制白三烯B4由白三烯B4受體的結合的其它化合物包括抗體(單克隆或多克隆的)以及肽藥物，如識別并與白三烯B4受體結合的擬表位(mimotope)。制備和使用這類抗體和擬表位的方法對于本領域熟練的技術人員來說是已知的，這些方法將在下面涉及制備識別白三烯A4水解酶并與其結合的抗體和擬表位的內容中進行描述。
或者，可使用與白三烯B4結合的化合物，以形成如不能與白三烯B4受體結合的復合物，從而抑制白三烯B4與白三烯B4受體的結合。較佳的是，該化合物與白三烯B4的結合是特異性的，即該化合物基本上不與樣品中存在的其它生物材料結合。例如，較佳的是該化合物與白三烯B4的IC50大于該化合物與樣品中的其它生物材料的IC50的約1.1倍，更佳的是大于約1.5倍，還更佳的是大于約2倍，仍更佳的是大于約5倍，仍更佳的是大于約10倍。雖然即使在化合物與白三烯B4受體的結合程度小于白三烯B4與白三烯B4受體的結合(即IC50較低)時，也可在某些情況下獲得某些效果，但是化合物與白三烯B4受體的結合程度較佳是大于白三烯B4與白三烯B4受體的結合(即有較大的IC50)。
或者，可通過抑制白三烯B4的生產而抑制白三烯B4與白三烯B4受體的結合。例如，可通過抑制白三烯B4合成途徑中的一個或多個步驟抑制白三烯B4的產生。
例如，該化合物可以是抑制白三烯A4轉變為白三烯B4的化合物。
舉個例，可通過使樣品和與白三烯A4結合的化合物接觸，形成如不受或不易于被白三烯A4水解酶水解的復合物，從而抑制白三烯A4向白三烯B4轉變。
再舉一例，可通過使樣品與抑制白三烯A4水解酶的活性的化合物接觸，從而抑制白三烯A4向白三烯B4轉化。
本領域熟練的技術人員將理解，使樣品與結合白三烯A4水解酶的化合物接觸，可抑制白三烯A4水解酶的活性。這種白三烯A4水解酶抑制劑可以是傳統的小分子或其藥學上可接受的鹽。這類白三烯A4水解酶抑制劑的例子包括3-環氧乙基苯甲酸及其衍生物；Rhone-Poulenc Roere RP-64996；2-氨基-3-苯基丙烷衍生物，如(2S)-2-氨基-3-苯基丙基硫醇、2-氨基-3-(4′-芐基氧基)苯基丙基硫醇和鹽酸(2S)-3-(4-(2-萘基甲基氧基)苯基)-1，2-二氨基-丙烷及其相應的4′-芐氧基衍生物。其它白三烯A4水解酶抑制劑的例子在下述文獻中描述如，Djuric等人的美國專利第5990326號；Isakson等人的美國專利第5990148號；Yuan等人的美國專利第5445271號；國際專利出版WO96/11192和WO96/1099；Evans等人，Prostaglandins，Leukotrienes and Medicine，23167-171(1986)；Yuan等人，《大鼠中白三烯A4水解酶抑制劑SC-57461的代謝物的分離和鑒別》(Isolation and Identification ofMetabolites of Leukotriene A4 Hydrolase Inhibitor SC-57461 in Rats)，Drug Metab.Dispos.，24(10)1124-1133(1996)；Tsuji等人，《白三烯A4水解酶抑制劑SA6541以及吲哚美辛對角叉菜聚糖誘導的鼠皮炎的影響》(Effects of SA 6541，aLeukotriene A4 Hydrolase Inhibitor，and Indomethacin On Carrageenan-inducedMurine Dermatitis)，Eur.J.Pharmacol.，346(1)81-85(1998)；Penning等人，《一種有力的白三烯A(4)(LTA(4))水解酶抑制劑1-[2-(4-苯基苯氧基)乙基]吡咯烷(SC-22716)的結構-活性關系研究》(Structure-activity Relationship Studies On 1-[2-(4-Phenylphenoxy)ethyl]pyrrolidine(SC-22716)，a Potent Inhibitor of Leukotriene A(4)(LTA(4))Hydrolase)，J.Med.Chem.，43(4)721-735(2000)，本文在此將這些文獻納入作為參考。
白三烯A4水解酶抑制劑也可成肽藥物產品的形式。通常可參見Bevan等人，Trends in Biotechnology，13(3)115-121(1995)；Sepetov等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，925426-5430(1995)；O′Connor等人，Cancer Chemother.Pharmacol.，34225-229(1994)；和Webber等人，J.Med.Chem.，36733-746(1993)，本文在此將它們納入作為參考。
可采用本領域已知的各種方法制備藥物，如肽藥物。一種方法是利用表位庫的發展和噬菌體庫的生物淘選技術(biopanning)。簡言之，為限定各種單克隆抗體的結合位點作出的努力已使表位庫得到發展。Parmley等人，Gene，73305-318(1988)(“Parmley”)描述了可在其表面上顯示外來表位的噬菌體表達載體，本文在此將其納入作為參考。這種載體可用于構建大的噬菌體集合，這個集合實際上可包括一條短肽(如6個氨基酸)的所有可能的序列。Parmley還描述了生物淘選技術，這是一種使用特異性的抗體根據親和力來純化那些顯示外來表位的噬菌體的方法，本文將此文納入作為參考。例如還可參見Parmley；Cwirla等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，876378-6382(1990)；Scott等人，Science，249386-390(1990)；Christian等人，J.Mol.Biol.，227711-718(1992)；和Smith等人，Methods inEnzymology，217228-257(1993)(“Smith”)，本文將這些文獻納入作為參考。
在發展了表位庫后，Smith建議使用Parmley的噬菌體表達載體和生物淘選技術來鑒別給定長度的所有可能的序列的表位也應該是可能的，本文在此將這兩篇文獻納入作為參考。這就產生了通過生物淘選表位庫鑒別抗體的表位配體的想法，這種想法可用于疫苗設計、表位繪圖、基因鑒別以及其它的應用中〔Parmley；和Scott，Trends in Biochem.Sci.，17241-245(1992)，本文將其納入作為參考〕。
使用表位庫和生物淘選技術，搜索表位序列的研究者發現了模擬該表位的非肽序列，即不識別連續的線性天然序列或根本沒必要出現在天然的蛋白質序列中的序列。這些模擬的肽稱為擬表位(mimotope)。以這種方法，已發現各種結合位點/蛋白質的擬表位。LaRocca等人，Hybridoma，11191-201(1992)描述了人乳腺上皮粘蛋白串聯重復子在大腸桿菌中的表達，本文將其納入作為參考。Balass等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，9010638-10642(1993)(“Balass”)鑒別了模擬乙酰膽堿受體的構象依賴性結合位點的六肽，本文在此將該文納入作為參考。Hobart等人，Proc.R.Soc.London.B，252157-162(1993)公開了模擬C6表位(補體的第6種成分的表位)的擬表位的分離，本文將該文納入作為參考。
從定義上來說，這些和其它擬表位的序列并不識別連續的線性天然序列或不總是以任何方式出現在天然的分子，如天然的蛋白質中。擬表位的序列僅僅形成在功能上模擬天然蛋白質上的結合位點的肽。例如，Balass描述的擬表位模擬乙酰膽堿受體的結合位點。
許多這些擬表位是短肽。可采用本發明的方法開發易于大量合成并可模擬天然序列(即結合位點)的短肽。
例如，采用本技術，可鑒別針對識別白三烯A4水解酶的單克隆抗體的擬表位。這些擬表位的序列代表可在隨后用于各種用途中的短肽，如用作結合白三烯A4水解酶并減少該酶的活性的肽藥物。一旦測定了該擬表位的序列，即可化學合成這些肽藥物。
針對白三烯A4水解酶的抗體代表用于抑制白三烯A4向白三烯B4轉化的另一類化合物，這類化合物通過抑制白三烯A4水解酶的活性而抑制這種轉化。“抗體”在本文中包括抗體片段，如Fab、Fab2和Fd片段，以及其人源化形式。可采用本發明已知方法中的一種產生人源化形式的抗體，如嵌合作用(chimerization)。抗體與白三烯A4水解酶結合，降低了其活性。合適的抗體包括多克隆抗體和單克隆抗體。
可使用雜交瘤生產與白三烯A4水解酶結合的單克隆抗體。雜交瘤是無限繁殖的細胞系，它能分泌一種特殊的單克隆抗體。
總之，制備多克隆抗體和單克隆抗體以及能生產所需抗體的雜交瘤的技術在本領域中是周知的。例如可參見Campbell，《單克隆抗體技術生物化學和分子生物學中的實驗技術》(Monoclonal antibody TechnologyLaboratory Techniques inBiochemistry and Molecular Biology)，Amsterdam，荷蘭Elsevier SciencePubilshing(1984)(“Campbell”)；和St.Groth等人，J.Immunol.Methods.，351-21(1980)，本文將它們納入作為參考。可用抗原性白三烯A4水解酶(或其抗原性片段)免疫已知其能產生抗體的任何動物(小鼠、兔等)。免疫的方法在本領域中是已知的。這些方法包括皮下或腹膜內注射該酶。本領域熟練的技術人員將認識到，用于免疫的酶的量將根據所免疫的動物、酶的抗原性以及注射位點而改變。
為了增強用作免疫原的酶的抗原性，可將其修飾，或者將其加到佐劑中后再給藥。增強酶的抗原性的方法在本領域中是周知的，包括但不限于使酶與異源的蛋白質(如球蛋白或β-半乳糖苷酶)偶聯，或者在免疫時使用佐劑。
對于單克隆抗體，從經免疫的動物取出脾細胞，使其與骨髓瘤細胞如SP2/O-Ag 15骨髓瘤細胞融合，然后使其成為產生單克隆抗體的雜交瘤細胞。
可采用本領域已知的大量方法中的任何一種來鑒別產生具有所需的特性的抗體的雜交瘤細胞。這些方法包括使用如ELISA檢測、western印跡分析或放射性免疫檢測來篩選雜交瘤。例如可參見Lutz等人，Exp.Cell Res.，175109-124(1988)，本文將該文納入作為參考。
將分泌所需抗體的雜交瘤克隆，采用本領域已知的方法測定其類別和亞類，這些方法如Campbell中所述的方法，本文將該文納入作為參考。
對于多克隆抗體，從經免疫的動物中分離出含有抗體的抗血清，然后采用一種上述方法對具備所需特性的抗體的存在進行篩選。
闡述性地說，可通過使樣品與編碼白三烯A4水解酶的核酸分子結合，從而降低白三烯A4水解酶的表達的核酸化合物接觸，從而抑制白三烯A4向白三烯B4轉化。
合適的核酸分子包括，如反義核酸分子和核酶。反義核酸分子與編碼白三烯A4水解酶的mRNA的至少一部分互補。白三烯A4水解酶的核酸序列和氨基酸序列是已知的。例如可參見Medina等人，《小鼠白三烯A-4水解酶cDNA的分子克隆和表達》(Molecular Cloning and Expression of Mouse Leukotriene A-4Hydralse cDNA)，Biochem.Biophys.Res.Commun.，1761516-1524(1991)；Minami等人，《編碼人白三烯A-4水解酶的cDNA的分子克隆類二十烷酸合成中涉及的酶的完整的一級結構》(Molecular Cloning of a cDNA Coding for HumanLeukotriene A-4 HydrolaseComplete Primary Structure of an Enzyme Involved inEicosanoid Syhtnesis)，J.Biol.Chem.，26213873-13876(1987)；Funk等人，《白三烯水解酶的分子克隆和氨基酸序列》(Molecular Cloning and Amino Acid Sequenceof Leukotnene Hydrolase)，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，846677-6681(1987)；Mancini等人，《人白三烯A4水解酶基因的克隆和表征》(Cloning and Characterization of theHuman Leukotriene A4 Hydrolas Gene)，Eur.J.Biochem.，231(1)65-71(1995)；Makita等人，《采用聚合酶鏈式反應進行大鼠白三烯A4水解酶的分子克隆和功能表達》(Molecular Cloning and Functional Expression of Rat Leukotriene A4 Hydrolase Usingthe Polymerase Chain Reaction)，FEBS Lett.，293(3)273-277(1992)；Genbank登記號M63848(小鼠mRNA和氨基酸序列)，GenBank登記號J03459、J02959和U27293(人mRNA和氨基酸序列)；GenBank登記號S87522(大鼠mRNA和氨基酸序列)，本文將這些文獻納入作為參考。反義核酸分子可以是RNA或單鏈DNA，也可以與編碼白三烯A4水解酶的整個mRNA分子(即核苷酸長度與完整的分子相同)互補。但是，可能更希望使用較短的分子。在這個例子中，反義分子可與編碼白三烯A4水解酶的完整mRNA分子的一部分互補。這些較短的反義分子能與編碼該完整的分子的mRNA雜交，并且較佳的是，這些分子由至少15個核苷酸到約100個以內核苷酸組成。可使這些反義分子與具有與白三烯A4水解酶的mRNA的至少一部分互補的RNA或單鏈DNA分子的細胞接觸(如將反義分子引入樣品中)，從而降低白三烯A4水解酶的水平。反義分子可與白三烯A4水解酶的mRNA發生堿基配對，阻止mRNA翻譯成蛋白質。因此，針對白三烯A4水解酶的反義分子可阻止編碼白三烯A4水解酶的mRNA翻譯成功能性白三烯A4水解酶，從而減少細胞中白三烯A4水解酶的活性。
可采用任何合適的方法使反義分子與細胞接觸。根據本發明的方法，所述細胞是腺癌細胞，如前列腺癌細胞、肺癌細胞、胃癌細胞、乳腺癌細胞、結腸癌細胞和胰腺癌細胞。在一個實施例中，通過將反義ENA分子直接注射到細胞質中，而使該分子與細胞接觸，在胞質中該RNA分子干擾了翻譯。也可使用載體將反義分子引入細胞中。這些載體包括如各種質粒和病毒載體。還可使用脂質體將反義分子引入細胞中。對于反義分子及其用途的概括性討論，可參見Han等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，884313-4317(1991)(“Han”)；和Rossi，British MedicalBulletin，51(1)217-225(1995)，本文將這些文獻納入作為參考。
還可使用一類特殊的反義RNA分子來抑制A4水解酶的活性，這類分子即已知的核酶，它們具有與編碼白三烯A4水解酶的mRNA的特殊區域互補的識別序列。核酶不僅僅通過互補反義序列與靶序列復合，它還催化模板mRNA分子的水解或斷裂。
核酶在細胞中的表達可抑制基因的表達(如白三烯A4水解酶的表達)。更具體而言，具有與編碼白三烯A4水解酶的mRNA的特殊區域互補的識別序列的核酶可用于減少白三烯A4水解酶的表達。選擇具有第一表達水平的白三烯A4水解酶的細胞，然后將核酶引入該細胞。該核酶在該細胞中減少該細胞白三烯A4水解酶的表達，這通常是由編碼白三烯A4水解酶的mRNA被解離因而不能翻譯引起。
根據本發明方法，可采用任何合適的方法使核酶與癌細胞接觸。例如，可直接將核酶注射到細胞質中，在那里核酶切斷mRNA，從而干擾翻譯過程。或者，可使用載體將核酶引入細胞。這類載體包括各種質粒和病毒載體。在此，應注意的是，編碼核酶的DNA不需要被摻入宿主細胞的基因組中；反之，例如，編碼核酶的DNA分子可在被病毒載體感染的宿主細胞中與表達該核酶的載體表達。還可使用脂質體將核酶分子引入細胞。對于核酶及其用途的概括性討論，可參見如Chrisey等人，Antisense Research and Development，1(1)57-63(1991)；Rossi等人，AIDS Research and Human Retroviruses，8(2)183-189(1992)；和Christoffersen等人，Journal of Medicinal Chemistry，38(12)2023-2037(1995)，本文將這些文獻納入作為參考。
如上所述，轉化細胞的一些方法最好是使用中間質粒載體進行。Cohen等人的美國專利第4237224號(本文在此將其納入作為參考)描述使用限制酶切割和DNA連接酶連接產生重組質粒的形式的表達系統。然后通過轉化將這些重組質粒引入，并使它們在含有在組織培養物中生長的原核生物和真核生物細胞的單細胞培養物中復制。采用本領域已知的標準克隆方法將該DNA序列克隆到質粒載體中，如Sambrook等人，《分子克隆——實驗室手冊》(Molecular CloningA LaboratoryManual)，第二版，Cold Spring Harbor，紐約Cold Spring Harbor LaboratoryPress(1989)，本文在此將該文納入作為參考。
如上所述，可通過將反義構建物或核酶構建物引入細胞中，從而降低腺癌細胞如前列腺癌細胞、肺癌細胞、乳腺癌細胞、結腸癌細胞或胰腺癌細胞中白三烯A4水解酶的水平。反義構建物阻斷編碼白三烯A4水解酶的mRNA翻譯成白三烯A4水解酶。核酶構建物將編碼白三烯A4水解酶的mRNA切割，因而也阻止功能性白三烯A4水解酶的表達。為了減低白三烯A4水解酶的體內表達，可利用各種基因治療技術將反義構建物或核酶構建物引入所需的細胞中。可能需要采用已知的方法將該構建物靶向該所需的細胞(如前列腺癌細胞、肺癌細胞、胃癌細胞、胰腺癌細胞、結腸癌細胞或乳腺癌細胞)，因為在患者的其它細胞中，白三烯A4水解酶表達的減少可能不是需要的。
如上所述，通過抑制白三烯B4的產生，可抑制白三烯B4與白三烯B4受體的結合。上面還提到，通過如抑制白三烯B4合成途徑中的一個或多個步驟，可抑制白三烯B4的產生。抑制白三烯B4合成途徑的另一方法涉及抑制白三烯A4的產生，例如，使腺癌細胞樣品與5-脂氧化酶抑制劑接觸，從而實現抑制。5-脂氧化酶抑制劑在本文中指直接或間接抑制5-脂氧化酶的活性的任何化合物。這類5-脂氧化酶抑制劑的例子包括5-脂氧化酶激活蛋白的抑制劑〔如，3-(1-(4-氯芐基)-3-叔丁基-硫代-5-異丙基-2-基)-2，2-二甲基丙酸和/或去甲二氫愈創木酸〕，以及使5-脂氧化酶表達減少的核酸分子。關于這些化合物的進一步描述在申請人的未授權美國專利申請系列號09/111343中討論到，本文將其納入作為參考。
或者，可使用抑制白三烯B4與白三烯B受體的結合，但不抑制白三烯A4的生產的化合物實施本發明的方法。例如，可使用不是5-脂氧化酶抑制劑、不是5-脂氧化酶-激活蛋白抑制劑、不是3-(1-(4-氯芐基)-3-叔丁基-硫代-5-異丙基-2-基)-2，2-二甲基丙酸和/或不是去甲二氫愈創木酸的抑制劑的化合物實施本發明的方法。
如上所述，使用抑制白三烯B4與白三烯B4受體結合的化合物實施本發明。通過減少白三烯B4受體的表達，可實施這種方法，或者或除此之外的上述各種方法。上面討論的關于減少白三烯A4水解酶表達的方法在此同樣可以應用。更具體而言，所述化合物可以是與編碼白三烯B4受體的核酸分子結合的核酸分子，如靶向編碼白三烯B4受體的核酸分子的反義核酸分子和核酶。可用來設計適當的反義核酸分子和核酶的白三烯B4受體的核酸和氨基酸序列在下述文獻中公開如Martin等人，《小鼠和人白三烯B4受體轉染的細胞中HIV共受體功能的白三烯結合、發信號和分析》(Leukotriene Binding，Signaling，and Analysis if HIVCoreceptor Function in Mouse and Human Leukotriene B4 Receptor-transfectedCells)，J.Biol.Chem.，27413)8597-8603(1999)；Yokomizo等人，《介導趨化性的白三烯B4的G蛋白偶聯受體》(A G-protein-coupled Receptor for Leukotriene B4That Mediates Chemotaxis)，《自然》，387(6633)620-624(1997)；Toda等人，《大鼠白三烯B(4)受體的克隆和表征》(Cloning and Characterization of RatLeukotriene B(4)Receptor)，Biochem.Biophys.Res.Commun.，262(3)806-812(1999)；GenBank登記號AF077673(小鼠基因和氨基酸序列)；GenBank登記號D89078和D89079(人基因和氨基酸序列)，以及GenBank登記號AB025230(大鼠基因和氨基酸序列)，本文將這些文獻納入作為參考。
在鑒別了可用于抑制白三烯B4與白三烯B4受體的結合的各種化合物后，本發明的方法以這些化合物減少腺癌細胞的增殖、和/或誘導腺癌細胞的凋亡、和/或誘導腺癌細胞分化成非癌細胞的發現為基礎。術語“增殖”、“凋亡”和“分化”的含義在本領域中易于理解。檢測增殖、凋亡或分化的闡述性方法將在下面的實施例中給出，并且這些方法都在申請人的待授權美國專利申請系列號09/111343中也有描述，本文將該文納入作為參考。可采用這些方法鑒別抑制白三烯B4與白三烯B4受體的結合的其它化合物，以及“減少”增殖、“誘導”凋亡和/或“誘導”分化的那些化合物。
上面的討論描述了本發明關于抑制白三烯B4與腺癌細胞上的白三烯B4受體結合的化合物的影響這方面的概念，所述腺癌細胞尤其是癌上皮細胞，如前列腺癌細胞、肺癌細胞、胃癌細胞、乳腺癌細胞、胰腺癌細胞和結腸癌細胞。本發明的方法可在體外或體內進行。
例如，可在體外實施本發明的方法，以篩選可潛在地用于治療腺癌(如前列腺癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、結腸癌和/或胰腺癌)的化合物；評估化合物在治療腺癌中的功效；或者研究化合物抵抗腺癌的機制(如不論該化合物通過誘導凋亡、誘導分化、減少增殖等方式還是其它方式)。例如，一旦鑒別出一種化合物為抑制白三烯B4與白三烯B4受體結合的化合物，則本領域熟練的技術人員可在體外應用本發明的方法來評估該化合物誘導凋亡、誘導分化和/或減少癌細胞增殖的程度；或者，本領域熟練的技術人員可應用本發明的方法測定該化合物是通過誘導凋亡發揮作用，還是通過誘導分化、通過減少增殖、或者通過組合這些方式而發揮作用。
或者，可在體內實施本發明的方法，以治療腺癌，如前列腺癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、乳腺癌和結腸癌。對于在體內實施本發明方法的例子，例如，在人患者中存在腺癌細胞的例子中，可通過向該患者給予治療有效量的化合物而實現接觸，例如，直接將該化合物注射到腫瘤中。關于本發明方法的給予化合物的內容將在下文描述。
本發明的另一方面涉及治療患者中的腺癌的方法，如前列腺癌、胰腺癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、結腸癌或涉及上皮細胞的其它癌癥。該方法包括向該患者給予一定量的有效抑制白三烯B4與白三烯B4受體結合的化合物。
合適的患者包括如哺乳動物，如大鼠、小鼠、貓、狗、猴和人。合適的人患者包括如那些先前已確定為存在患前列腺癌、肺癌、胃癌。胰腺癌、結腸癌和/或乳腺癌的風險的患者，以及已診斷出患有前列腺癌、肺癌、胃癌、胰腺癌、結腸癌和/或乳腺癌的那些患者。較佳的是，該患者沒有患有口腔鱗狀細胞癌，或者沒有被指定為治療口腔鱗狀細胞癌的候選人。在確定具有患腺癌的風險(較佳的是，沒有患口腔鱗狀細胞癌)的患者中，較佳是在有效減少增殖和/或誘導凋亡和/或誘導腺癌細胞在它們發展的事件中分化的條件下，向該患者給予抑制白三烯B4與白三烯B4受體結合的化合物。這種預防性治療(并不是絕對的100％地預防)可用在高危個體中，只要給予抑制白三烯B4與白三烯B4受體的結合的化合物所產生的不利的副作用沒有超過其預防性的潛在利益即可。
上述任何一種化合物可用在本發明的治療方法中。例如，抑制白三烯B4與白三烯B4受體結合的化合物，如在本文中公開的直接與白三烯B4受體結合的傳統的化學藥物和肽藥物，可以單獨的方式給予，或以與匹配的載體組合為組合物的方式給予。匹配的載體包括合適的藥學載體或稀釋劑。應選擇稀釋劑或載體的成分，以使它們不減小本發明中使用的化合物的治療效果。
本文的組合物可制成適用于所需用途的任何適當形式。合適的劑型包括口服的、腸道外的或局部的劑型。
口服用的合適劑型包括片劑、分散的粉末、粒劑、膠囊、懸浮液、糖漿和酏劑。用于片劑的惰性稀釋劑和載體包括，如碳酸鈣、碳酸鈉、乳糖和滑石粉。片劑也可含有造粒劑和崩解劑，如淀粉和藻酸；結合劑，如淀粉、明膠和阿拉伯樹膠；和潤滑劑，如硬脂酸鎂、硬脂酸和滑石粉。片劑可以是未包衣的，或可采用已知的技術將片劑包衣，以延遲其崩解和吸收。可用在膠囊中的惰性稀釋劑和載體，包括如碳酸鈣、磷酸鈣和高嶺土。懸浮液、糖漿和酏劑可含有常規的賦形劑，例如，甲基纖維素、黃蓍膠、藻酸鈉；增濕劑，如卵磷脂和聚氧乙烯硬脂酸酯；和防腐劑，如對羥基苯甲酸乙酯。
適合于腸道外給藥的劑型包括溶液、懸浮液、分散劑、乳劑等。它們也可制成無菌固體組合物的形式，這種組合物可在要使用前溶解或懸浮在無菌的可注射的介質中。它們可含有本領域已知的懸浮劑或分散劑。腸道外給藥的例子是心室內、大腦內、肌肉內、靜脈內、腹膜內、直腸內和皮下給藥。
除了上面所述的以外，還包括上述制劑的通常無活性成分，這些制劑可包括其它的活性物質，尤其是已鑒別為可用在前列腺癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、結腸癌、胰腺癌和/或其它腺癌的治療中的活性物質。這些活性物質是廣譜的抗癌癥制劑，這樣它們還可用于治療其它類型的癌癥(即，除了腺癌以外的癌癥)，或者它們可在如其它活性成分是用于治療腺癌而不是治療口腔鱗狀細胞癌的情況下更有特異性。其它的活性成分除了具有抗腺癌特性外，還可具有非抗癌藥學特性。例如，其它的活性成分可具有抗炎癥特性，或者它們沒有這種抗炎癥特性。
將可理解，根據本發明給予的化合物，其實際的優選量將根據具體的化合物、具體配制的組合物以及給藥的方式而改變。本領域熟練的技術人員將考慮到可能改變化合物的作用的許多因素(如體重、性別、飲食、給藥的時間、給藥的途徑、排泄、患者的狀況、藥物組合以及反應敏感性和嚴重性)。可在最大耐受劑量的范圍內連續或間斷給藥。對于給定的條件，最好的給藥速率可由本領域熟練的技術人員采用常規的劑量給藥試驗來確定。
本發明將結合下述實施例進行進一步的闡述。
實施例實施例1——材料和方法在下面的實施例中使用到下述材料和方法。
材料.從Sigma Chemicals(St.Louis，密蘇里)購得DMEM、MEM和McCoy 5A培養基、青霉素-鏈霉素溶液、胰蛋白酶-EDTA溶液、蛋白酶K、碘化丙錠、RNA酶A和苯酚/氯仿。從Atlanta Biologicals(Norcross，佐治亞)購得胎牛血清(“FBS”)。從Pharmingen(San Diego，加利福尼亞)購得用于TUNEL檢測的APO-BRDU試劑盒。從Cayman Chemicals(Ann Arbor，密歇根)購得白三烯B4(“LTB4”)。由Eli Lilly及其公司(Indianapo1is，印第安納)提供LTB4的拮抗劑2-(2-丙基-3-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)丙氧基)-苯氧基)苯甲酸(下文稱為“LY293111”)。從Biomol Research Laboratories(Plymouth Meeting，Pehhsylvania)購得LTD4的拮抗劑1-(2-羥基-3-丙基-4-(4-(1H-四唑-5-基)丁氧基)苯基)乙醇。
細胞培養物.使用下述胰腺癌細胞系MiaPaCa-2和PANC-1(分化很差)；Capan-1和Capan-2(分化很好)；和HPAF和AsPC-1(多形的，pleomorphic)。這些細胞系從美國典型培養物保藏中心(Rockville，馬里蘭州)購得。使PANC-1和MiaPaCa-2在DMEM培養基中生長；使HPAF和AsPC-1在MEN培養基中生長；使Capan-1和Capan-2在McCoy培養基中生長。培養基用10％FBS補充，細胞在37℃下，在95％O2和5％CO2的潮濕氣氛中生長。將細胞有規則地接種到75cm2的燒瓶中，隔天換一次培養基。對于試驗，當細胞鋪滿80％時，用胰蛋白酶-EDTA消化，然后適當地以50,000個/ml的濃度接種在12孔或24孔平板上。-胸苷摻入的DNA合成.將細胞接種在12孔或24孔平板上。細胞鋪滿70％后，將它們放在無血清培養基中培育24小時，然后用新配制的無血清培養基替換，該培養基可含有適當濃度的白三烯B4受體拮抗劑LY293111(62.5-1000nM)、LTB4(100-400nM)或兩者，或者都不含有。培育適當的時間后，加入0.5μCi/孔的[3H]-甲基-胸苷，另外培育2小時，檢測細胞的DNA合成。然后，用PBS洗滌細胞兩次，用10％三氯乙酸(“TCA”)固定30分鐘，然后將0.4M NaOH加到各孔中增溶。加入閃爍混合物，并在閃爍計數器(LKB RackBeta，Wallac，Turku，Finland)上計數，測定表明3H-胸苷摻入DNA中的放射性。
細胞增殖檢測.將胰腺癌細胞接種到24孔微平板上，在37℃下培育。24小時后，在有或沒有250nM LY293111的無血清培養基中培育這些細胞24、48和72小時。在各個時間段結束時，用胰蛋白酶處理這些細胞，以產生單獨的細胞懸浮液，用Z1-Coulter計數器(Luton，Bedfordsire，英國)測定各孔中的細胞數。
使用光學顯微鏡測定形態學變化.用不同濃度的LY293111處理75cm2燒瓶中生長的胰腺癌細胞不同的時間。然后用相差顯微鏡觀察這些細胞，并拍照。
DNA斷裂檢測.對于采用瓊脂糖凝膠電泳進行的DNA斷裂分析，用胰蛋白酶-EDTA使經處理的胰腺癌細胞從75cm2燒瓶中分離，用PBS洗滌二次，再懸浮在1ml裂解緩沖液(25mM EDTA、10mM Tris、0.5％Triton X-100和1％SDS)中，然后使其在-80℃下凍融過夜。然后，將等體積的PEG/NaCl原液加到該裂解物中，得到最終濃度為0.25％的PEG和1M的NaCl，在4℃以13,200g離心所得溶液30分鐘。然后在37℃使含有斷裂的小分子量DNA的上清液與RNA酶A(0.3mg/ml)培育1小時，然后再與蛋白酶K(10mg/ml)培育3小時。然后用苯酚-氯仿抽提樣品，用70％乙醇沉淀過夜。然后將含有DNA的沉積物再懸浮在50ml的TE緩沖液中，在含有溴乙錠(1mg/ml)的1.8％瓊脂糖凝膠上進行電泳，用UV燈觀察，并使用分子分析凝膠記錄系統(Molecular Analyst Gel Documentation system，Bio-radLaboratories，Hercules，加利福尼亞)進行分析。
TUNEL檢測.進行末端脫氧核苷酸轉移酶介導的脫氧尿苷三磷酸酯缺口端標記(“TUNEL”)檢測，由流式細胞計數法測量凋亡。用LY293111處理細胞適當的時間，然后用胰蛋白酶-EDTA消化，用冰冷的PBS洗滌兩次，在冰上用10％低聚甲醛固定20分鐘。然后用PBS洗滌細胞，用70％乙醇滲透至少4小時，再次用PBS洗滌，并使其在37℃與2.5單位的末端脫氧核苷酸轉移酶(TdT酶)和100pmol的Br-dUP的DNA標記溶液中培育1小時。然后清洗細胞2次，在暗處再懸浮在0.1ml熒光素標記的抗BrdU抗體溶液中30分鐘。然后加入0.5ml碘化丙錠/RNA酶A溶液，在488nm激勵用流式細胞計數法分析這些細胞。
統計學分析.通過使用Dunnett的用于多種比較的Bonderroni校正分析變量(“ANOVA”)，從而對數據進行適當的分析。使用Prism軟件包(GraphPad，SanDiego，加利福尼亞)進行這種分析。數據以平均值±SEM表示。實施例2——LY293111對胰腺癌細胞的作用白三烯B4受體拮抗劑LY293111在MiaPaCa-2胰腺癌細胞系中導致胸苷摻入的濃度依賴性抑制(圖1A)〔F(5，30)＝77.30，P＜0.0001〕和時間依賴性抑制(圖1B)〔F(3，20)＝331.1，P＜0.0001〕細胞數(圖2)的時間依賴性抑制。使用5種其它的胰腺癌細胞系(HPAF、Capan-1、Capan-2、AsPC-1和PANC-1)進行試驗，24小時后的結果也顯示LY293111以濃度依賴性的方式抑制了增殖。這些試驗的結果列在表I中，其中結果表示為對照的百分比(平均值±SEM)，*＝P＜0.05，**＝P＜0.01，***＝P＜0.001。
表1
此外，使用這5種其它的胰腺癌細胞系(HPAF、Capan-1、Capan-2、AsPC-1和PANC-1)研究了LY293111對細胞增殖的時間影響。結果列在表II中，這些結果顯示，500nM的LY293111以時間依賴性的方式抑制這些細胞系中的每一種的細胞增殖。在表II中，結果表示為對照的百分比(平均值±SEM)，*＝P＜0.05，**＝P＜0.01，***＝P＜0.001。
表II
LY293111在濃度為250nM時抑制至少50％的增殖，在濃度為1000nM時抑制95％以上的增殖。相差顯微術揭示，與未處理對照(圖3A)相比，經處理的MaiPaCa-2胰腺癌細胞早在用250nM的LY293111處理后4小時時即具有明顯的形態學變化(圖3B)。經處理的細胞隨著時間而變圓，并出現膜滲漏、染色質濃縮、核破裂以及最終與微平板分離。這些形態學變化先前已經被解釋為反應性凋亡。如圖3C(經LY293111處理)和圖3D(對照)所示，類似的結果也在結腸細胞系LoVo中發現。實施例3——LY171883對胰腺癌細胞的作用與LTB4拮抗劑LY293111的作用不同，特異性LTD4受體拮抗劑LY171883在MiaPaCa-2〔F(5，6)＝1.875，P＝0.2316〕和HPAF〔F(5，6)＝1.940，P＝0.2217〕胰腺癌細胞中使用時僅僅在最高濃度(10mM)影響增殖。但是，這有可能反映了毒性作用。MiaPaCa-2和HPAF胰腺癌細胞的結果分別顯示在圖4A和4B中。實施例4——白三烯B4對胰腺癌細胞增殖的作用白三烯B4以濃度依賴性和時間依賴性這兩種方式刺激MiaPaCa-2〔F(3，8)＝64.02和F(3，8)＝50.31，P＜0.0001〕和HPAF〔F(3，8)＝30.06，P＜0.0001〕胰腺癌細胞系的增殖。圖5A顯示不同濃度的LTB4對胸苷摻入MiaPaCa-2細胞的影響，這個結果在處理24小時后測得。圖5B和5C顯示100nM LTB4對胸苷摻入MiaPaCa-2細胞(圖5B)和HPAF細胞(圖5C)的影響，這些結果分別為第24、48和72小時測得的。在用100nM濃度處理72小時時，與對照相比，LTB4使兩倍以上的胸苷摻入。實施例5——LY293111對LTB4對胰腺癌細胞增殖的刺激性效果的作用LTB4消除了白三烯B4受體拮抗劑LY293111對MiaPaCa-2(圖6A)和HPAF(圖6B)胰腺癌細胞系的增殖的影響。在用100nM的LTB4處理24小時后，與對照相比增殖有25％的增加，而250nM的LY293111則導致增殖減少50％。當用LTB4及其拮抗劑LY293111組合處理時，增殖幾乎回復到對照的水平。實施例6——DNA斷裂試驗進行DNA斷裂試驗，以研究經LY293111處理的胰腺癌細胞的凋亡。在用250、500和1000nM的LY293111處理MiaPaCa-2細胞48小時后，將細胞的DNA加到1.8％瓊脂糖凝膠上進行電泳，可以看到明顯的DNA梯級，而在對照細胞中則沒有觀察到這樣的梯級(圖7)。類似的結果在所測試的其它胰腺癌細胞系中也獲得。實施例7——TUNEL試驗還進行TUNEL試驗評估LY293111誘導的胰腺癌細胞系凋亡。用250nM和500nM的LY293111處理MiaPaCa-2細胞24小時，結果分別將凋亡大大地增加到12.6％和18.6％。相反，對照細胞種群中的凋亡程度則非常低(1.5％)。結果在圖8A-8C給出，其中右上象限中熒光事件的增加是由于斷裂DNA被UTP標記的緣故。類似的凋亡在所研究的其它胰腺癌細胞系、結腸癌細胞系和乳腺癌細胞系中也被誘導。實施例8——LY293111對胰腺癌細胞和結腸癌細胞的增殖的作用通過測量胸苷摻入和細胞數來研究LY293111對癌細胞增殖的影響。LY293111對所研究的所有的胰腺癌細胞系、結腸癌細胞系和乳腺癌細胞系的增殖都產生顯著的濃度依賴性和時間依賴性抑制。結果列在圖9A-9F中。圖9A和9B顯示的是胰腺癌細胞系MiaPaCa2；圖9C顯示的是胰腺癌細胞系HPAF；圖9D顯示的是胰腺癌細胞系Capan2。圖9A、9C和9D各顯示LY293111對這些胰腺癌細胞系的劑量影響。此外，圖9B顯示LY293111對胰腺癌細胞系MiaPaCa2的時間依賴性影響。圖9E和9F顯示，與對照相比，0.5μM LY293111對作為時間的函數的胰腺癌細胞系MiaPaCa2(圖9E)和結腸癌細胞系LoVo(圖9F)的細胞數的影響。實施例9——LTB4和LY293111對Bcl2的影響如圖10A所示，使用Bcl-2特異性抗血清進行的western印跡的結果揭示，LTB4(100nM)增加MCF-7乳腺癌細胞中凋亡前蛋白Bcl-2的表達。相反，如圖10B所示，LY293111(500nM)抑制MCF-7乳腺癌細胞中的凋亡前蛋白Bcl-2的表達。實施例10——LY293111對外源植入無胸腺小鼠的AsPc-1人胰腺癌腫瘤細胞系的生長的影響給無胸腺小鼠皮下注射50μl含3百萬個癌細胞的無血清培養基。在此試驗中使用高度惡性和侵襲性的胰腺癌腫瘤細胞系。先使腫瘤建立并生長4天，然后在用小鼠的飲用水中加入LY293111，使其濃度為0.01％，用此溶液進行治療。圖11顯示作為治療時間的函數的腫瘤大小(mm3)。結果顯示，在它們的飲用水中含有LY293111的小鼠的腫瘤比對照組的小。
雖然本文對優選的實施例進行了敘述和描述，但是本領域熟練的技術人員應明白，在不偏離本發明的實質的情況下可進行各種修改、添加、取代等，這些都被認為是包括在下述權利要求所定義的本發明范圍之內。
權利要求
1.一種減少腺癌細胞增殖、或誘導腺癌細胞凋亡、或誘導腺癌細胞分化成非癌細胞的方法，該方法包括在有效抑制白三烯B4與白三烯B4受體結合的條件下，使含有腺癌細胞的樣品與一種化合物接觸。
2.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述樣品不含有口腔鱗狀細胞癌細胞。
3.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述樣品含有前列腺癌細胞、肺癌細胞、胃癌細胞、乳腺癌細胞、胰腺癌細胞、結腸癌細胞或它們的組合。
4.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述化合物通過與白三烯B4受體的結合而抑制白三烯B4與白三烯B4受體的結合。
5.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述化合物具有下式結構 或者其藥學上可接受的鹽或其溶劑合物，其中R1是C1-C5烷基、C2-C5鏈烯基、C2-C5炔基、C1-C4烷氧基、(C1-C4烷基)硫代、鹵素或R2取代的苯基；每個R2和R3獨立地是氫、鹵素、羥基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、(C1-C4烷基)-S(O)q-、三氟甲基，或者二-(C1-C3烷基)氨基；X是-O-、-S-、-C(＝O)-，或者是-CH2-；Y是-O-或-CH2-；或者，當它們連在一起時，-X-Y-是-CH＝CH-或-C≡C-；Z是直鏈或支鏈C1-C10亞烷基；A是一個鍵、-O-、-S-、-CH＝CH-或者-CRaRb-，其中各個Ra和Rb獨立地是氫、C1-C5烷基，或者是R7取代的苯基；或者當Ra和Rb與和它們所連接的碳原子連在一起時，形成C4-C8的環烷基環；R4是R6，或者R4是具有下述式子之一的部分 或 和式中各R6獨立是-COOH、5-四唑基、-CON(R9)2，或者-CONHSO2R10；各R7是氫、C1-C4烷基、C2-C5鏈烯基、C2-C5炔基、芐基、甲氧基、-W-R6、-T-G-R6、(C1-C4烷基)-T-(C1-C4亞烷基)-O-，或者是羥基；R8是氫或鹵素；各R9獨立是氫、苯基，或者是C1-C4烷基；或者當R9與和它所連接的氮原子連在一起時，形成嗎啉代、哌啶子基、哌嗪子基或吡烷子基；R10是C1-C4烷基，或者是苯基；R11是R2、-W-R6，或者是-T-G-R6；各W是一個鍵，或者是直鏈或支鏈的含1-8個碳原子的二價烴基；各G是直鏈或支鏈的含1-8個碳原子的二價烴基；各T是一個鍵、-CH2-、-O-、-NH-、-NHCO-、-C(＝O)-，或者是-S(O)q-；K是-C(＝O)-或-CH(OH)-；各q獨立是0、1或2；p是0或1；t是0或1；條件是，當X是-O-或-S-時，Y不是-O-；另一條件是，當A是-O-或-S-時，R4不是R6；還有一個條件是，當A是-O-或-S-，且Z是鍵時，Y不是-O-；又一條件是，當p是0時，W不是鍵。
6.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述化合物選自2-(2-丙基-3-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)丙氧基)苯氧基)苯甲酸、3-(2-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)丙氧基)-6-(4-羧基-苯氧基)苯基)丙酸、1-(4-(羧基-甲氧基)苯基)-1-(1H-四唑-5-基)-6-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)己烷、3-(4-(7-羧基-9-氧代-3-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)-丙氧基)-9H-呫噸))丙酸、5-(3-(2-(1-羧基)-乙基)-4-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)-丙氧基)苯基)-4-戊炔酸、其藥學上可接受的鹽或溶劑合物，或它們組合。
7.如權利要求4所述的方法，其特征在于，所述化合物是2-(2-丙基-3-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)丙氧基)苯氧基)苯甲酸或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物。
8.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述化合物通過減少白三烯B4受體的表達而抑制白三烯B4與白三烯B4受體的結合。
9.如權利要求8所述的方法，其特征在于，所述化合物是核酸分子，它與編碼白三烯B4受體的核酸分子結合。
10.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述化合物通過結合白三烯B4而抑制白三烯B4與白三烯B4受體的結合。
11.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述化合物通過抑制白三烯B4的產生而抑制白三烯B4與白三烯B4受體的結合。
12.如權利要求11所述的方法，其特征在于，所述化合物通過抑制白三烯A4向白三烯B4轉化而抑制白三烯B4的產生。
13.如權利要求12所述的方法，其特征在于，所述化合物通過結合白三烯A4而抑制白三烯A4向白三烯B4轉化。
14.如權利要求12所述的方法，其特征在于，所述化合物通過抑制白三烯A4水解酶的活性而抑制白三烯A4向白三烯B4轉化。
15.如權利要求14所述的方法，其特征在于，所述化合物通過與白三烯A4水解酶結合而抑制白三烯A4水解酶的活性。
16.如權利要求14所述的方法，其特征在于，所述化合物通過減少白三烯A4水解酶的表達而抑制白三烯A4水解酶的活性。
17.如權利要求16所述的方法，其特征在于，所述化合物是一種核酸分子，它與編碼白三烯A4水解酶的核酸分子結合。
18.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述化合物不抑制白三烯A4的產生。
19.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述化合物不是5-脂氧化酶抑制劑。
20.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述化合物不是5-脂氧化酶激活蛋白的抑制劑。
21.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述所述化合物不是減少5-脂氧化酶表達的核酸分子。
22.如權利要求1所述的方法，其特征在于，所述腺癌細胞存在于人患者中，所述接觸包括向該人患者給予治療有效量的所述化合物。
23.一種治療患者的腺癌的方法，所述方法包括向患者給予一定量的有效抑制白三烯B4與白三烯B4受體的結合的化合物。
24.如權利要求23所述的方法，其特征在于，所述患者是人。
25.如權利要求23所述的方法，其特征在于，所述患者不患有口腔鱗狀細胞癌。
26.如權利要求23所述的方法，其特征在于，所述數量有效減少患者中癌細胞的增殖。
27.如權利要求23所述的方法，其特征在于，所述數量有效誘導患者中癌細胞的凋亡。
28.如權利要求23所述的方法，其特征在于，所述數量有效誘導患者中的癌細胞分化成非癌細胞。
29.如權利要求23所述的方法，其特征在于，所述化合物通過與白三烯B4受體結合而抑制白三烯B4與白三烯B4受體的結合。
30.如權利要求29所述的方法，其特征在于，所述化合物具有下式結構 或者其藥學上可接受的鹽或溶劑合物；其中R1是C1-C5烷基、C2-C5鏈烯基、C2-C5炔基、C1-C4烷氧基、(C1-C4烷基)硫代、鹵素或R2取代的苯基；每個R2和R3獨立地是氫、鹵素、羥基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、(C1-C4烷基)-S(O)q-、三氟甲基，或者二-(C1-C3烷基)氨基；X是-O-、-S-、-C(＝O)-，或者是-CH2-；Y是-O-或-CH2-；或者，當它們連在一起時，-X-Y-是-CH＝CH-或-C≡C-；Z是直鏈或支鏈C1-C10亞烷基；A是一個鍵、-O-、-S-、-CH＝CH-或者-CRaRb-，其中各個Ra和Rb獨立地是氫、C1-C5烷基，或者是R7取代的苯基；或者當Ra和Rb與和它們所連接的碳原子連在一起時，形成C4-C8的環烷基環；R4是R6，或者R4是具有下述式子之一的部分 或 和式中各R6獨立是-COOH、5-四唑基、-CON(R9)2，或者-CONHSO2R10；各R7是氫、C1-C4烷基、C2-C5鏈烯基、C2-C5炔基、芐基、甲氧基、-W-R6、-T-G-R6、(C1-C4烷基)-T-(C1-C4亞烷基)-O-，或者是羥基；R8是氫或鹵素；各R9獨立是氫、苯基，或者是C1-C4烷基；或者當R9與和它所連接的氮原子連在一起時，形成嗎啉代、哌啶子基、哌嗪子基或吡烷子基；R10是C1-C4烷基，或者是苯基；R11是R2、-W-R6，或者是-T-G-R6；各W是一個鍵，或者是直鏈或支鏈的含1-8個碳原子的二價烴基；各G是直鏈或支鏈的含1-8個碳原子的二價烴基；各T是一個鍵、-CH2-、-O-、-NH-、-NHCO-、-C(＝O)-，或者是-S(O)q-；K是-C(＝O)-或-CH(OH)-；各q獨立是0、1或2；p是0或1；t是0或1；條件是，當X是-O-或-S-時，Y不是-O-；另一條件是，當A是-O-或-S-時，R4不是R6；還有一個條件是，當A是-O-或-S-，且Z是鍵時，Y不是-O-；又一條件是，當p是0時，W不是鍵。
31.如權利要求29所述的方法，其特征在于，所述化合物選自2-(2-丙基-3-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)丙氧基)苯氧基)苯甲酸、3-(2-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)丙氧基)-6-(4-羧基-苯氧基)苯基)丙酸、1-(4-(羧基-甲氧基)苯基)-1-(1H-四唑-5-基)-6-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)己烷、3-(4-(7-羧基-9-氧代-3-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)-丙氧基)-9H-呫噸))丙酸、5-(3-(2-(1-羧基)-乙基)-4-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)-丙氧基)苯基)-4-戊炔酸、其藥學上可接受的鹽或溶劑合物，或它們組合。
32.如權利要求29所述的方法，其特征在于，所述化合物是2-(2-丙基-3-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)丙氧基)苯氧基)苯甲酸或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物。
33.如權利要求23所述的方法，其特征在于，所述化合物不抑制白三烯A4的產生。
34.如權利要求23所述的方法，其特征在于，所述腺癌選自前列腺癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、結腸癌、胰腺癌和它們的組合。
35.一種減少腺癌細胞增殖、或誘導腺癌細胞凋亡、或者誘導腺癌細胞分化成非癌細胞的方法，該方法包括使含有腺癌細胞的樣品與具有下式的化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物接觸 式中R1是C1-C5烷基、C2-C5鏈烯基、C2-C5炔基、C1-C4烷氧基、(C1-C4烷基)硫代、鹵素或R2取代的苯基；每個R2和R3獨立地是氫、鹵素、羥基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、(C1-C4烷基)-S(O)q-、三氟甲基，或者二-(C1-C3烷基)氨基；X是-O-、-S-、-C(＝O)-，或者是-CH2-；Y是-O-或-CH2-；或者，當它們連在一起時，-X-Y-是-CH＝CH-或-C≡C-；Z是直鏈或支鏈C1-C10亞烷基；A是一個鍵、-O-、-S-、-CH＝CH-或者-CRaRb-，其中各個Ra和Rb獨立地是氫、C1-C5烷基，或者是R7取代的苯基；或者當Ra和Rb與和它們所連接的碳原子連在一起時，形成C4-C8的環烷基環；R4是R6，或者R4是具有下述式子之一的部分 或 和式中各R6獨立是-COOH、5-四唑基、-CON(R9)2，或者-CONHSO2R10；各R7是氫、C1-C4烷基、C2-C5鏈烯基、C2-C5炔基、芐基、甲氧基、-W-R6、-T-G-R6、(C1-C4烷基)-T-(C1-C4亞烷基)-O-，或者是羥基；R8是氫或鹵素；各R9獨立是氫、苯基，或者是C1-C4烷基；或者當R9與它所連接的氮原子連在一起時，形成嗎啉代、哌啶子基、哌嗪子基或吡烷子基；R10是C1-C4烷基，或者是苯基；R11是R2、-W-R6，或者是-T-G-R6；各W是一個鍵，或者是直鏈或支鏈的含1-8個碳原子的二價烴基；各G是直鏈或支鏈的含1-8個碳原子的二價烴基；各T是一個鍵、-CH2-、-O-、-NH-、-NHCO-、-C(＝O)-，或者是-S(O)q-；K是-C(＝O)-或-CH(OH)-；各q獨立是0、1或2；p是0或1；t是0或1；條件是，當X是-O-或-S-時，Y不是-O-；另一條件是，當A是-O-或-S-時，R4不是R6；還有一個條件是，當A是-O-或-S-，且Z是鍵時，Y不是-O-；又一條件是，當p是0時，W不是鍵。
36.如權利要求35所述的方法，其特征在于，所述化合物選自2-(2-丙基-3-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)丙氧基)苯氧基)苯甲酸、3-(2-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)丙氧基)-6-(4-羧基-苯氧基)苯基)丙酸、1-(4-(羧基-甲氧基)苯基)-1-(1H-四唑-5-基)-6-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)己烷、3-(4-(7-羧基-9-氧代-3-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)-丙氧基)-9H-呫噸))丙酸、5-(3-(2-(1-羧基)-乙基)-4-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)-丙氧基)苯基)-4-戊炔酸、其藥學上可接受的鹽或溶劑合物，或它們組合。
37.如權利要求35所述的方法，其特征在于，所述化合物是2-(2-丙基-3-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)丙氧基)苯氧基)苯甲酸或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物。
38.如權利要求35所述的方法，其特征在于，所述樣品不含有口腔鱗狀細胞癌細胞。
39.如權利要求35所述的方法，其特征在于，所述樣品包含前列腺癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、胰腺癌、結腸癌和它們的組合。
40.一種治療患者腺癌的方法，所述方法包括向該患者給予治療有效量的下式化合物或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物 式中R1是C1-C5烷基、C2-C5鏈烯基、C2-C5炔基、C1-C4烷氧基、(C1-C4烷基)硫代、鹵素或R2取代的苯基；每個R2和R3獨立地是氫、鹵素、羥基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基、(C1-C4烷基)-S(O)q-、三氟甲基，或者二-(C1-C3烷基)氨基；X是-O-、-S-、-C(＝O)-，或者是-CH2-；Y是-O-或-CH2-；或者，當它們連在一起時，-X-Y-是-CH＝CH-或-C≡C-；Z是直鏈或支鏈C1-C10亞烷基；A是一個鍵、-O-、-S-、-CH＝CH-或者-CRaRb-，其中各個Ra和Rb獨立地是氫、C1-C5烷基，或者是R7取代的苯基；或者當Ra和Rb與和它們所連接的碳原子連在一起時，形成C4-C8的環烷基環；R4是R6，或者R4是具有下述式子之一的部分 或 和式中各R6獨立是-COOH、5-四唑基、-CON(R9)2，或者-CONHSO2R10；各R7是氫、C1-C4烷基、C2-C5鏈烯基、C2-C5炔基、芐基、甲氧基、-W-R6、-T-G-R6、(C1-C4烷基)-T-(C1-C4亞烷基)-O-，或者是羥基；R8是氫或鹵素；各R9獨立是氫、苯基，或者是C1-C4烷基；或者當R9與和它所連接的氮原子連在一起時，形成嗎啉代、哌啶子基、哌嗪子基或吡烷子基；R10是C1-C4烷基，或者是苯基；R11是R2、-W-R6，或者是-T-G-R6；各W是一個鍵，或者是直鏈或支鏈的含1-8個碳原子的二價烴基；各G是直鏈或支鏈的含1-8個碳原子的二價烴基；各T是一個鍵、-CH2-、-O-、-NH-、-NHCO-、-C(＝O)-，或者是-S(O)q-；K是-C(＝O)-或-CH(OH)-；各q獨立是0、1或2；p是0或1；t是0或1；條件是，當X是-O-或-S-時，Y不是-O-；另一條件是，當A是-O-或-S-時，R4不是R6；還有一個條件是，當A是-O-或-S-，且Z是鍵時，Y不是-O-；又一條件是，當p是0時，W不是鍵。
41.如權利要求40所述的方法，其特征在于，所述化合物選自2-(2-丙基-3-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)丙氧基)苯氧基)苯甲酸、3-(2-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)丙氧基)-6-(4-羧基-苯氧基)苯基)丙酸、1-(4-(羧基-甲氧基)苯基)-1-(1H-四唑-5-基)-6-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)己烷、3-(4-(7-羧基-9-氧代-3-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)-丙氧基)-9H-呫噸))丙酸、5-(3-(2-(1-羧基)-乙基)-4-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)-丙氧基)苯基)-4-戊炔酸、其藥學上可接受的鹽或溶劑合物，或它們組合。
42.如權利要求40所述的方法，其特征在于，所述化合物是2-(2-丙基-3-(3-(2-乙基-4-(4-氟苯基)-5-羥基苯氧基)丙氧基)苯氧基)苯甲酸或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物。
43.如權利要求40所述的方法，其特征在于，所述患者是人。
44.如權利要求40所述的方法，其特征在于，所述患者不患有口腔鱗狀細胞癌。
45.如權利要求40所述的方法，其特征在于，所述腺癌選自前列腺癌、肺癌、胃癌、乳腺癌、結腸癌、胰腺癌和它們的組合。
全文摘要
公開了一種減少腺癌細胞增殖、或者誘導腺癌細胞凋亡、或者誘導腺癌細胞分化成非癌細胞的方法。這樣的方法包括，在使化合物有效抑制白三烯B4與白三烯B4受體結合的條件下，使腺癌細胞與該化合物接觸。在另一種方法中，該方法包括使腺癌細胞與2－(2－丙基－3－(3－(2－乙基－4－(4－氟苯基)－5－羥基苯氧基)丙氧基)苯氧基)苯甲酸或其藥學上可接受的鹽、溶劑合物或同族物接觸。還公開了治療患者的腺癌的方法。一種方法包括向患者給予一定量的有效抑制白三烯B4與白三烯B4受體結合的化合物。另一種方法包括向患者給予2－(2－丙基－3－(3－(2－乙基－4－(4－氟苯基)－5－羥基苯氧基)丙氧基)苯氧基)苯甲酸或其藥學上可接受的鹽、溶劑合物或同族物。
文檔編號A61K31/41GK1429111SQ01809329
公開日2003年7月9日 申請日期2001年5月8日 優先權日2000年5月9日
發明者T·E·阿德里安 申請人:克賴頓大學