專利名稱：控制敗血癥性休克的制作方法
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本發明涉及敗血癥性休克，控制敗血癥性休克和抵抗內毒素引起的動脈氧張力衰退的方法，以及一些無菌藥物組合物在制備用于控制敗血癥性休克和抵抗內毒素引起的動脈氧張力衰退的藥物中的應用。
僅在美國，每年約有500,000人患有敗血癥，其中估計有175,000人死亡(Stone R.，Science，1994，264，365-7)。雖然在抗微生物治療和醫學支持方面取得了一些進展，但是敗血癥性休克仍然是加護病房(ICUs)中的主要死因，并且其發生率在不斷增加。據報道其死亡率高(例如95％)，甚至在迅速診斷和治療的情況下也可高達60％。關于敗血癥性休克、其發病機理和目前的治療的綜述參見例如WiessnerW.H.，Casey L.C.& Zbilut J.P.，Heart Lung，1995，24(5)，380-92；Meier-Hellmann A.等人，Clin.Chem.Lab.Med.，1999，37(3)，333-9；Dellinger R.P.，Infect Dis.Clin.North Am.，1999，13(2)，495-509；Hazinski M.F.，Crit.Care Nurs.Clin.NorthAm.，1994，6(2)，309-19；Zanetti G.等人，SchweizMed.Wochenschr.，1997，127(12)，489-99和Oh H.M.，Ann.Acad.Med.Singapore，1998，27(5)，738-43。
概括來說，在嚴重感染后，當革蘭氏陰性菌釋放出內毒素時，會發生革蘭氏陰性敗血癥性休克。難以保持動脈氧張力是敗血癥性休克的一個特征，并且該病癥經常惡化，導致可能發展成成人呼吸窘迫綜合征(ARDS)。該嚴重病癥包括難以保持患者充氧，因為肺受到嚴重影響和發生水腫。內毒素引起非常復雜的涉及細胞因子補體和/或花生四烯酸的生化級聯過程，后者導致幾種病生理事件，包括自由基介導的氧化性損傷和/或COX介導的炎癥。據信參與敗血癥性休克的兩種物質是前列腺素和異前列腺烷(一亞組前列腺素，主要是PGF2α和8-異-PGF2α)，它們主要在肺(ARIS的靶器官)中代謝。內毒素還引起血液動脈和小動脈擴張，導致流到器官例如腦中的循環血量減少。因此，在由革蘭氏陰性菌引起的敗血癥性休克中，內毒素引起動脈氧張力衰退。然而，敗血癥性休克還可能是由革蘭氏陽性菌、真菌等引起的。在這些情況下不涉及內毒素。
敗血癥性休克中的相互作用和級聯事件是復雜的，并且一旦發生敗血癥和敗血癥性休克，目前沒有任何能有效干預這些事件的治療手段。目前對敗血癥性休克的治療包括施用抗生素和流體，以及維持血壓的治療(例如使用ionotropes)。經常還采取針對其它伴隨癥狀的治療。
對敗血癥性休克的輔助治療可分為抗細菌組分的治療、抗源自宿主的炎性介質的治療、和設計用來限制組織損害的治療。迄今為止，針對敗血癥和敗血癥性休克的新輔助治療劑的所有試驗都沒有表現出效力。所試驗的抗內毒素的治療劑，包括腫瘤壞死因子、白介素-1和血小板衍生因子沒有降低敗血癥性休克的死亡率。將來可能有效的治療可根據感染性質和患者類型聯合使用治療劑。然而，對于控制敗血癥性休克的有效治療劑，現在存在著強烈且未滿足的需求。
現在我們已經驚奇地發現，2，6-二異丙基苯酚(普魯泊福)能有效地在豬中抵抗內毒素引起的動脈氧張力衰退，并且普魯泊福和含有普魯泊福的藥物組合物可用作控制敗血癥性休克的治療劑。
普魯泊福是靜脈內鎮靜劑，可用于引起和維持全身麻醉和用于鎮靜，例如在加護病房中使用。普魯泊福是非常成功的麻醉劑，并且以商標“Diprivan”市售用于治療人，以商標“Rapinovet”市售用于獸醫。
一經確定出普魯泊福的麻醉特性，即提交了UK專利申請13739/74，并且該申請作為UK專利1,472,793被授權。同族專利已經在USA(U.S.專利4,056,635、U.S.專利4,452,817和U.S.專利4,798,846)和許多其它地區授權。
發現“Diprivan”原始制劑的非無菌操作所致的偶發外來微生物污染可導致術后感染，使得開始開發具有合適的添加劑的改性制劑(所述添加劑能夠將常見微生物的生長阻礙至外來污染后24小時內不超過1log增加(即10倍)，這相當于“接觸污染”)。開發改性的、含有edetate的普魯泊福制劑帶來了特別是UK專利2,298,789的申請和授權。同族專利已經在例如USA(U.S.專利5,714,520；U.S.專利5,731,355；U.S.專利5,731,356；U.S.專利5,908,869)和其它地區授權。市售改性“Diprivan”制劑含有0.005％ edetate二鈉。
如上所述，并且如所附的非限制性實驗和結果部分所示，我們已經驚奇地發現，含有普魯泊福的藥物組合物能有效地在豬中抵抗內毒素引起的動脈氧張力衰退，并且普魯泊福和含有普魯泊福的藥物組合物可用于控制敗血癥性休克。在ICU中比較普魯泊福與其它鎮靜劑(例如咪達唑侖)的應用的研究已經集中于對象例如成本、不換氣和營養。沒有研究已證實普魯泊福能抵抗內毒素引起的動脈氧張力衰退，以及由此可用于控制敗血癥性休克或革蘭氏陰性敗血癥性休克。
“控制敗血癥性休克”是指治療—包括預防性治療或預防—敗血癥性休克、特別是革蘭氏陰性敗血癥性休克的某些或所有影響。當動脈氧張力衰退存在于這樣的一般性全身敗血癥(敗血癥綜合征)中時，該術語還包括控制嚴重的敗血癥(發生或不發生休克)。因此，該術語包括減輕敗血癥綜合征和/或敗血癥性休克的影響，和促進從敗血癥綜合征和/或敗血癥性休克中的恢復。可被控制的敗血癥綜合征和/或敗血癥性休克的某些影響包括血壓(可增高至更健康的水平)、體溫(可正常化)和通過例如Swan-Ganz導管測定的左側壓(可正常化)。有效控制應當還包括動脈氧張力的的改善/正常化(即朝著健康個體的基準水平恢復)和前列腺素8-異-PGF2α水平的正常化(即朝著健康個體的基準水平恢復)。例如，在健康豬呼吸的空氣(約21％氧)中，PaO2的正常水平是9.7-12.6kPa—參見Hannon J Bossone C Wade C用于生物醫學研究的意識清醒的豬的正常生理值。Lab Animal Sci，40293-298，1990。在本文中，正常化是指朝著基準值恢復。在該實驗中的動物是基準麻醉的，并且用30％氧機械換氣，這樣基準值與在意識清醒豬中測定的基準值不同。然而，這些值在相同范圍內，或者實驗豬中的值稍高一些。類似討論可適用于8-異-PGF2α水平和人(對動物)人體。類似討論也可適用于術語“抵抗內毒素引起的動脈氧張力衰退”(即朝著健康個體的基準動脈氧張力水平恢復)。
雖然不想受縛于理論，但是我們相信本文所描述的作用是由于減輕了明顯的氧化性損失所致，并且據信普魯泊福對于自由基和COX介導的損失都有作用。抵抗內毒素引起的動脈氧張力衰退的作用據信是通過清除自由基而阻礙F2-異前列腺烷形成所致。據信這影響了脂質過氧化物還原，主要是F2-異前列腺烷形成，并且還可以使得普魯泊福和含有普魯泊福的藥物組合物可用于控制和治療再灌注損傷，例如心動停止和/或血管手術后的再灌注損傷。在自由基介導的損傷的繼發性病癥中，普魯泊福能夠保持動脈血液、以及組織中的氧張力。這樣的病癥不僅包括敗血癥性休克，而且還存在于腸手術患者、輻射損傷、燒傷、血管損傷和心動停止中。因此普魯泊福對于多種損傷有利用價值，并且對于控制(包括預防性應用)敗血癥性休克有利用價值。根據設定，普魯泊福可全身給藥或局部給藥。
鑒于涉及敗血癥性休克的相互作用非常復雜，普魯泊福抵抗該復雜級聯事件的有效性確實令人驚訝。實際上，鑒于當使用含有普魯泊福的藥物組合物時低血壓是可能的不利作用(根據計量和使用的前驅給藥和其它治療劑)，本發明所研究的內毒素引起的動脈氧張力衰退得到改善而不是加重(血壓降低是內毒素血癥和敗血癥性休克的一個特征)更令人驚訝。
本文所報道的結果首次表明在原始制劑和改性制劑Diprivan(含有edetate二鈉)中的2，6-二異丙基苯酚(普魯泊福)能迅速地抵抗(即朝著正常基準水平恢復)內毒素血癥豬(頻繁輸注內毒素以模擬革蘭氏陰性敗血癥性休克)中的內毒素引起的動脈氧張力衰退。此外，當使用原始制劑Diprivan時，8-異-PGFα的血漿濃度沒有增加。在本發明實驗中，在已經麻醉的研究用動物中，沒有觀察到由于低血壓和/或腸細菌釋放到血流中而引起的死亡。
不論普魯泊福制劑含有edetate二鈉與否，所觀察到的對動脈氧張力的作用都是類似的。
在本發明實驗中，當使用原始制劑Diprivan時，觀察到γ-生育酚水平提高(當使用改性Diprivain時沒有進行血漿分析)，但是直到實驗后期才發生。α-生育酚和γ-生育酚的模式分別與8-異-PGF2α和15-k-dh-PGF2α的模式完全不同，這表明普魯泊福的有益作用不是γ-生育酚帶來的。因此，據信所觀察到的作用不是由于存在edetate(二鈉鹽)和/或γ生育酚所致。這與普魯泊福對動脈氧張力和8-異-PGF2α血漿濃度的影響相反，它們在內毒素血癥短時間后顯著。
因此，本發明提供了控制敗血癥性休克的方法，包括施用有效量的如UK專利1,472,793或2,298,789中所描述和要求專利保護的藥物組合物。
本發明特別提供了控制敗血癥性休克的方法，包括施用有效量的無菌藥物組合物，所述組合物包含化合物2，6-二異丙基苯酚(普魯泊福)和無菌可藥用稀釋劑或載體，并且所述組合物適于直接或者用液體稀釋劑稀釋后非胃腸道施用給恒溫動物。
本發明還提供了控制敗血癥性休克的方法，包括施用有效量的非胃腸道給藥用無菌藥物組合物，所述組合物包含水包油乳液，其中溶解在水不可混溶溶劑中的普魯泊福是用水乳化的，并用表面活性劑穩定，所述組合物還任選包含其量足以在至少24小時內防止微生物顯著生長(如果發生偶發的外來污染)的edetate。
本發明還提供了用作控制敗血癥性休克的藥物的如UK專利1,472,793或2,298,789中所描述和要求專利保護的藥物組合物。
本發明還提供了用作控制敗血癥性休克的藥物的無菌藥物組合物，所述組合物包含化合物2，6-二異丙基苯酚(普魯泊福)和無菌可藥用稀釋劑或載體，并且所述組合物適于直接或者用液體稀釋劑稀釋后非胃腸道施用給恒溫動物。
本發明還提供了用作控制敗血癥性休克的藥物的非胃腸道給藥用無菌藥物組合物，所述組合物包含水包油乳液，其中溶解在水不可混溶溶劑中的普魯泊福是用水乳化的，并用表面活性劑穩定，所述組合物還任選包含其量足以在至少24小時內防止微生物顯著生長(如果發生偶發的外來污染)的edetate。
本發明還提供了如UK專利1,472,793或2,298,789中所描述和要求保護的藥物組合物在制備用于控制敗血癥性休克的藥物中的應用。
本發明特別提供了無菌藥物組合物在制備用于控制敗血癥性休克的藥物中的應用，所述組合物包含化合物2，6-二異丙基苯酚(普魯泊福)和無菌可藥用稀釋劑或載體，并且所述組合物適于直接或者用液體稀釋劑稀釋后非胃腸道施用給恒溫動物。
本發明還提供了非胃腸道給藥用無菌藥物組合物在制備用于控制敗血癥性休克的藥物中的應用，所述組合物包含水包油乳液，其中溶解在水不可混溶溶劑中的普魯泊福是用水乳化的，并用表面活性劑穩定，所述組合物還任選包含其量足以在至少24小時內防止微生物顯著生長(如果發生偶發的外來污染)的edetate。
本發明提供了抵抗內毒素引起的動脈氧張力衰退的方法，包括施用有效量的如UK專利1,472,793或2,298,789中所描述和要求保護的藥物組合物。
本發明特別提供了抵抗內毒素引起的動脈氧張力衰退的方法，包括施用有效量的無菌藥物組合物，所述組合物包含化合物2，6-二異丙基苯酚(普魯泊福)和無菌可藥用稀釋劑或載體，并且所述組合物適于直接或者用液體稀釋劑稀釋后非胃腸道施用給恒溫動物。
本發明還提供了抵抗內毒素引起的動脈氧張力衰退的方法，包括施用有效量的非胃腸道給藥用無菌藥物組合物，所述組合物包含水包油乳液，其中溶解在水不可混溶溶劑中的普魯泊福是用水乳化的，并用表面活性劑穩定，所述組合物還任選包含其量足以在至少24小時內防止微生物顯著生長(如果發生偶發的外來污染)的edetate。
本發明還提供了基本上如本文實驗和結果部分所述實現的本文所述的應用和方法。
在具體的實施方案中，本發明應用和方法是用于預防性地控制敗血癥性休克。
本發明方法和應用涉及用于需要抵抗內毒素引起的動脈氧張力衰退和/或控制敗血癥性休克的恒溫動物，特別是例如人。本發明方法和應用特別涉及控制革蘭氏陰性敗血癥性休克。
因此，本發明提供了例如(a)用作控制敗血癥性休克的藥物的無菌藥物組合物，所述組合物包含化合物2，6-二異丙基苯酚(普魯泊福)和無菌可藥用稀釋劑或載體，并且所述組合物適于直接或者用液體稀釋劑稀釋后非胃腸道施用給恒溫動物。(b)依據(a)的用作控制敗血癥性休克的藥物的無菌藥物組合物，其中所述無菌藥物組合物包含水包油乳液，其中溶解在水不可混溶溶劑中的普魯泊福是用水乳化的，并用表面活性劑穩定，所述組合物還任選包含其量足以在至少24小時內防止微生物顯著生長(如果發生偶發的外來污染)的edetate。(c)化合物2，6-二異丙基苯酚(普魯泊福)在制備用于控制敗血癥性休克的藥物中的應用。(d)化合物2，6-二異丙基苯酚(普魯泊福)在制備用于抵抗內毒素引起的動脈氧張力衰退的藥物中的應用。(e)無菌藥物組合物在制備用于控制敗血癥性休克的藥物中的應用，所述組合物包含化合物2，6-二異丙基苯酚(普魯泊福)和無菌可藥用稀釋劑或載體，并且所述組合物適于直接或者用液體稀釋劑稀釋后非胃腸道施用給恒溫動物。(f)無菌藥物組合物在制備用于控制敗血癥性休克的藥物中的應用，所述組合物包含水包油乳液，其中溶解在水不可混溶溶劑中的普魯泊福是用水乳化的，并用表面活性劑穩定，所述組合物還任選包含其量足以在至少24小時內防止微生物顯著生長(如果發生偶發的外來污染)的edetate。(g)依據(e)和(f)的無菌藥物組合物的應用，其中所述應用是在制備用于抵抗內毒素引起的動脈氧張力衰退的藥物中的應用。(h)依據(e)-(g)任一項的應用，其中所述無菌藥物組合物呈水包油乳液形式，所述乳液包含(1)1重量％的普魯泊福，(2)10重量％的大豆油，(3)1.2重量％的卵磷脂，(4)2.25重量％的甘油，(5)氫氧化鈉，(6)水。(i)依據(e)-(g)任一項的應用，其中所述無菌藥物組合物呈水包油乳液形式，所述乳液包含(1)2重量％的普魯泊福，(2)10重量％的大豆油，(3)1.2重量％的卵磷脂，(4)2.25重量％的甘油，(5)氫氧化鈉，(6)水。(j)依據(h)或(i)的應用，其中所述無菌藥物組合物還包含0.005重量％的edetate二鈉鹽。(k)控制敗血癥性休克的方法，包括施用有效量的無菌藥物組合物，所述組合物包含化合物2，6-二異丙基苯酚(普魯泊福)和無菌可藥用稀釋劑或載體，并且所述組合物適于直接或者用液體稀釋劑稀釋后非胃腸道施用給恒溫動物。(1)依據(k)的方法，其中所述無菌藥物組合物包含水包油乳液，其中溶解在水不可混溶溶劑中的普魯泊福是用水乳化的，并用表面活性劑穩定，所述組合物還任選包含其量足以在至少24小時內防止微生物顯著生長(如果發生偶發的外來污染)的edetate。(m)抵抗內毒素引起的動脈氧張力衰退的方法，包括施用有效量的無菌藥物組合物，所述組合物包含化合物2，6-二異丙基苯酚(普魯泊福)和無菌可藥用稀釋劑或載體，并且所述組合物適于直接或者用液體稀釋劑稀釋后非胃腸道施用給恒溫動物。(n)依據(m)的方法，其中所述無菌藥物組合物包含水包油乳液，其中溶解在水不可混溶溶劑中的普魯泊福是用水乳化的，并用表面活性劑穩定，所述組合物還任選包含其量足以在至少24小時內防止微生物顯著生長(如果發生偶發的外來污染)的edetate。
“含有普魯泊福的藥物組合物”包括在UK專利1,472,793和2,298,789(二者的內容引入本發明以作參考)以及在其它地區的同族申請/專利中描述和要求保護的藥物組合物。只要普魯泊福存在于適于給藥的組合物中，就可以還存在其它添加劑(參見下文“與其它治療劑聯合使用”)。包含可在體內代謝以提供普魯泊福本身的普魯泊福前藥的組合物也包括在本發明內。
“水包油乳液”是指處于平衡、并且作為整體實際上是動力學穩定和熱力學不穩定的明顯二相系統。
術語“edetate”包括金屬離子螫合劑例如多氨基羧酸鹽螯合劑，例如“乙二胺四乙酸”(乙二胺四乙酸-EDTA)、二亞乙基三胺五乙酸(DTPA)和EGTA、以及它們的衍生物。例如，edetate的二鈉衍生物稱為乙二胺四乙酸二鈉鹽。一般情況下，合適的金屬離子螯合劑是對游離酸形式的親和力比鈣低的鹽，特別是在UK專利2,298,789中描述的衍生物。特別優選的金屬離子螯合劑是edetate二鈉鹽。
在含有edetate的普魯泊福組合物中，金屬離子螯合劑一般以3×10-5-9×10-4的摩爾濃度(按金屬離子螯合劑游離酸計)存在于組合物中。金屬離子螯合劑游離酸優選以3×10-5-7.5×10-4、例如5×10-5-5×10-4、更優選1.5×10-4-3.0×10-4、最優選約1.5×10-4的摩爾濃度存在于組合物中。特別是，金屬離子螯合劑游離酸以約0.0005％-0.1％的濃度存在(精確濃度取決于所選的金屬離子螯合劑的特征，只要其對于偶發的外來污染能在至少24小時內防止微生物顯著生長即可)。
適于本發明應用的普魯泊福組合物一般包含0.1-5重量％的普魯泊福。組合物優選包含1-2重量％的普魯泊福、特別是約1％或約2重量％的普魯泊福。單獨的普魯泊福可用水通過表面活性劑乳化，但是優選在乳化之前將普魯泊福溶解在水不可混溶溶劑中。水不可混溶溶劑適于以占組合物重量的最高達30％、更適當為5-25％、優選10-20％、特別是約10％的量存在。
有多種水不可混溶溶劑可用于適用于本發明的組合物中。水不可混溶溶劑一般是植物油例如大豆油、紅花油、棉籽油、玉米油、向日葵籽油、花生油、蓖麻油或橄欖油。植物油優選是大豆油。或者，水不可混溶溶劑是中鏈或長鏈脂肪酸的酯例如甘油單酯、甘油二酯或甘油三酯；或者是化學改性或生產的物質例如油酸乙酯、肉豆蔻酸異丙酯、棕櫚酸異丙酯、甘油酯或聚烴氧基氫化蓖麻油。或者，水不可混溶溶劑可以是海洋生物油例如鱈魚肝油或另一源自魚類的油。合適的溶劑還包括分餾油例如分餾的椰子油或改性大豆油。此外，適用于本發明的組合物可包含一種或多種上述水不可混溶溶劑的混合物。
單獨的或者溶解在水不可混溶溶劑中的普魯泊福是通過表面活性劑乳化的。合適的表面活性劑包括合成的非離子表面活性劑例如乙氧基化的醚和酯以及聚丙烯-聚乙烯嵌段共聚物，和磷脂例如天然磷脂如卵磷脂和大豆磷脂以及改性或人工生產的磷脂(例如通過物理分餾和/或色譜法制得的磷脂)，或它們的混合物。優選的表面活性劑是卵磷脂和大豆磷脂。
如果需要，通過堿例如氫氧化鈉將適用于本發明的組合物適當地配制成具有生理中性pH、一般是pH6.0-8.5的組合物。
可通過加入合適的滲透調節劑例如甘油使適用于本發明的組合物與血液等滲。
適用于本發明的組合物一般是無菌制劑，并且是依據使用例如無菌生產或通過高壓滅菌法的末期滅菌的常規生產技術制得的。關于適用于本發明的組合物的制備的進一步詳細描述包括在本文所提及的專利中，并引入本發明以作參考。
適用于本發明的組合物可用作麻醉劑，包括鎮靜作用和維持全身麻醉，并且這樣的特征可在依據本發明控制敗血癥性休克期間有效地利用。普魯泊福是速效麻醉劑，適于引起和維持全身麻醉，有鎮靜作用以補充局部止痛技術，對接受重病監護的換氣患者有鎮靜作用，也適用于在加護病房中進行的手術和診斷操作的意識清醒鎮靜作用。普魯泊福可通過單次或反復靜脈內快速濃注或連續輸注來給藥。其非常迅速地從血流中清除出去和代謝。因此，鎮靜作用的深度易于控制，并且停藥后患者的恢復通常很快，與施用其它麻醉劑相比，患者的頭腦通常要更清醒得多。
用于產生全身麻醉—誘導(對于成人，例如約2.0-2.5mg/kg)和維持(例如約4-12mg/kg/小時)和用于產生意識清醒鎮靜作用和/或ICU鎮靜作用(例如0.3-4.5mg/kg/小時)的普魯泊福的劑量水平可從有關普魯泊福的文獻中推知。對于兒童和其它動物(例如豬)，可能需要較高劑量(例如對于誘導，5.0-7.5mg/kg)，對于維持，最高達約24mg/kg/小時。此外，麻醉師和/或醫師將依據本領域標準技能調整劑量以對任何具體患者實現所需效果。適于治療或預防敗血癥性休克的劑量水平一般在上述劑量水平內(例如對于成人，是0.3-12mg/Kg/小時)，但是可以根據本領域標準技能(例如通過確定動脈氧張力和/或敗血癥性休克的其它量度指標朝著正常健康水平恢復的劑量)來確定最佳劑量以在任何特定患者中實現所需效果。例如，對于成人，對于誘導，合適的劑量水平(根據本發明實驗中用于豬的劑量水平)是約2.0-2.5mg/kg(約5分鐘)，然后以約3.0-6.0mg/kg/小時的劑量連續輸注。推薦麻醉劑量水平。
在使用時，施用普魯泊福組合物的持續時間可比單純用于鎮靜作用的時間長，即可通過施用普魯泊福組合物同時對患有敗血癥性休克的患者進行鎮靜治療和敗血癥性休克治療，但是維持鎮靜作用直至認為已經對敗血癥性休克進行了有效治療。人工換氣需要鎮靜，普魯泊福可用于此目的。同時，普魯泊福可通過獨立于人工換氣的機制改善動脈氧張力。因此，靜脈內施用的普魯泊福在患有敗血癥性休克的患者中的使用價值可能是雙重的。也就是說，避免動脈氧張力發生不健康的減弱，這種減弱的生化特征可能是8-異-PGF2α(氧化性損傷的指標)增加以及可能COX-介導的15-k-dh-PGF2α的更輕度增加，其次對需要人工換氣的患者還有鎮靜作用。與其它治療劑聯合使用作為本發明另一特征，本發明提供了適用于本發明的含有普魯泊福的非胃腸道給藥用藥物組合物，所述組合物包含例如水包油乳液，該乳液含有治療劑或藥物活性劑，其中單獨或者溶解在水不可混溶溶劑中的所述治療劑或藥物活性劑是用水和普魯泊福乳化的，并用表面活性劑穩定，所述組合物還任選包含其量足以在至少24小時內防止微生物顯著生長的edetate。
合適的治療劑或藥物活性劑是能夠在水包油乳液中非胃腸道給藥的那些。這樣的治療劑或藥物活性劑(可以與普魯泊福組合物分開、順序或同時給藥)一般是親脂性化合物，并且可以是例如抗真菌劑、麻醉劑、抗菌劑、抗癌劑、抗嘔吐劑、抗氧化劑、作用于中樞神經系統的物質例如安定、甾族化合物、巴比妥類藥物和維生素制劑。最適用的治療劑或藥物活性劑是可在敗血癥性休克及其癥狀和病因的治療或預防中具有另外益處的那些，例如抗菌劑、NSAIDs、維生素E、流體治療和血管活性胺。器官機能不全的支持治療可包括人工換氣和透析。
因此，本發明提供了含有普魯泊福的非胃腸道給藥用藥物組合物在制備用于治療或預防敗血癥性休克的藥物中的應用，所述組合物包含例如水包油乳液，該乳液含有治療劑或藥物活性劑，其中單獨或者溶解在水不可混溶溶劑中的所述治療劑或藥物活性劑是用水和普魯泊福乳化的，并用表面活性劑穩定，所述組合物還任選包含其量足以在至少24小時內防止微生物顯著生長的edetate。本發明還提供了治療或預防敗血癥性休克的方法，包括使用這樣的組合物。該本發明特征特別涉及通常對有需要的患者給藥一天或更長時間的這樣的水包油乳液。
涉及一般的和優選的用于本發明的普魯泊福組合物及其制劑的注解可在細節上作必要的修改，以適用于含有另外的治療劑或藥物活性劑的水包油乳液。實驗&結果材料和方法簡言之，將10頭麻醉的小豬隨機分配成兩個相同大小的組，并靜脈內施用普魯泊福或相應體積的大豆脂乳液。通過連續輸注大腸桿菌內毒素來誘導內毒素血癥(實驗敗血癥性休克)。
詳細來說，該實驗包括10頭健康的豬(兩種性別10-12周齡；體重為19.0-26.9kg)，得到了Uppsala大學動物倫理委員會的批準(C212/98)。給每頭豬肌內注射與2.2mg.kg-1Rompun Vet_(Xylazin；Bayer，Leverkusen，Germany)和0.04mg.kg-1阿托品混合的6mg.kg-1Zoletil forte vet_(Zoletil 100_；Tilétamine-Zolazépam；Boehringer Ingleheim Vetmedica，Ingelheim，Germany)以誘導麻醉。連續靜脈內輸注戊巴比妥鈉(Apoteksbolaget，Ume_，Sweden；8mg.kg-1.h-1)以維持麻醉。靜脈內注射嗎啡(20mg；Pharmacia，Uppsala，Sweden)。當動物入睡時，進行氣管切開術。在實驗期間，以18ml.kg-1.h-1的速度輸注含有氯化鈉(70mmol.1-1)的2.5％葡萄糖。進行手術操作，包括應用動脈插管以測定動脈血壓和取樣(插到右頸動脈內)；裝配有熱敏電阻的7F Swan-Ganz-導管以用于測定肺動脈血壓(插到肺動脈內)；用于輸注藥物的中心靜脈線(插到右外頸靜脈內)和尿導管。在插入導管期間給予在N2O中的氧氣(30％)，其余時間給予在N2中的氧氣(30％)。該實驗操作以前已詳細描述過(Eriksson M.等人；Thromb Haemost，1998；80，1022-1026)，引入本發明以作參考。
通過密封信封法將動物隨機分配成2個同樣大小的組。對這些豬進行如下所述的兩個實驗方案。第一個實驗給10頭豬連續輸注內毒素，其中5頭接受普魯泊福(原始制劑Diprivan，購自Swedish pharmacy source)；另5頭接受相應體積的10％大豆脂乳液(Vasolipid_，Braun AG，Melsungen，Germany，Vasolipid_在該實驗中被認為與Intralipid_同等)。在后一組中的豬用作對照。第二個實驗該實驗與第一個實驗相同，除了有5頭豬接受普魯泊福(含有0.005％ edetate二鈉的改性制劑Diprivan，購自AstraZeneca UKLimited)，另5頭豬接受相應體積的10％大豆脂乳液(Vasolipid_，Braun AG，Melsungen，Germany，與0.005％ edetate二鈉混合，用作對照，Vasolipid_在該實驗中被認為與Intralipid_同等)。在后一組中的豬用作對照。
已經表明，PGF2α—一種環加氧酶催化的花生四烯酸氧化產物在炎癥期間釋放(Basu，Prost.Leuk & Ess.Fatty Acids，58，347-352，1998)，8-異-PGF2α—一種自由基催化的花生四烯酸氧化產物是在氧化性損傷期間釋放(Morrow & Roberts，Biochem.Pharma.，Col.51，1-9，1996)。已經表明，測定8-異-PGF2α和15-k-dh-PGF2α(PGF2α的主要代謝產物)分別是氧化性損傷和炎癥的良好指標(Basu，Prost.Leuk& Ess.Fatty Acids，58，319-325和347-352，1998)。在各個實驗中，給豬進行機械換氣，并監測呼吸和循環變量。測定8-異-PGF2α(氧化性損傷的指標)和15-k-dh-PGF2α(COX介導的炎性反應的指標)的血漿水平，以及α-生育酚和γ-生育酚水平。
如下所述施用普魯泊福開始輸注內毒素前5分鐘，用5分鐘靜脈內施用普魯泊福(以2.5mg.kg-1的劑量)，然后以10mg.kg-1.h-1連續輸注普魯泊福。該劑量在臨床適當范圍內(Mathy-Hartert M.等人；Mediat Inflamm，1998，7，327-333)，并且該給藥稍微超過了普魯泊福在人體中的典型濃度(Gepts E.等人；Anesth Analg，1987，66，1256-1263)，這樣普魯泊福消除的物種差異應當不是我們模型中的主要因素(Simons P.J.等人；Xenobiotica，1991，21，1243-1256)。通過以4μg.kg-1連續輸注30分鐘內毒素(大腸桿菌0111B4SigmaChemicals，St Louis，Mo.，USA)，然后以1μg.kg-1.h-1連續輸注5.5小時來在所有豬中誘導出內毒素血癥。
在臨施用普魯泊福前、開始輸注內毒素30分鐘后、以及在內毒素血癥的每一小時采集動脈血樣。離心(以3000r.min-1離心10分鐘)后，將血樣在-70℃冷凍以進一步分析。
在實驗期間觀測呼吸和循環參數并記錄，結果表明輸注內毒素約30分鐘后在所有動物中都迅速發生了內毒素血癥，這是通過兩倍的平均肺動脈壓(MPAP；mmHg)和這些變量惡化所評估的。通過靜脈內給予超劑量的氯化鉀將發生內毒素血癥后存活6小時、仍然處于麻醉狀態的動物處死。對于施用兩種普魯泊福制劑的動物，生理數據基本上相同。監測和計算使用標準方法測定中心靜脈壓(CVP；mmHg)和肺毛細血管楔壓(PCWP；mmHg)。還連續測定平均動脈壓(MAP；mmHg)、MPAP和心率(HR；1.min-1)。通過標準熱稀釋技術計算心輸出量(CO；1.min-1)。
使用Dubois公式計算體表面積(BSA；m2)BSA＝體重0.425×身高(m)0.725×0.007184使用下述公式計算動脈血中的肺泡-動脈氧差(A-a DO2)(A-a DO2)＝PAO2-PaO2計算動脈血中的動脈氧張力(PaO2)，并根據下述公式計算肺末端毛細血管氧張力(PAO2)PAO2＝FiO2(PB-PH2O)-PACO2(FiO2+[1-FiO2/R])其中FiO2是吸入的氧濃度，PB是常壓，PH2O是水蒸氣壓力，且R是呼吸商。所用的R的值是0.8。肺泡二氧化碳張力(PACO2)假定與動脈二氧化碳張力PaCO2相等。
使用下述公式計算血動力學參數。與容積有關的變量心臟指數(CI)＝CO/BSA，心搏指數(SI)＝CI/HR。與流量有關的變量左室搏動作功指數(LVSWI)＝SI×MAP，右室搏動作功指數(RSVWI)＝SI×MPAP。全身血管阻力指數(SVRI)是如下計算的SVRI＝(MAP-CVP)/CI×60，肺部血管阻力指數(PVRI)是如下計算的PVRI＝(MPAP-PCWP)/CI×60。實驗室研究1. 15-K-DH-PGF2α的放射免疫測定通過放射免疫測定(Basu S.，Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids，1998，58，347-352)分析肝素化的(未提取的)血樣以測定作為炎性反應指數的15-K-DH-PGF2α。抗體與PCF2α、15-酮基-PGF2α、PGE215-酮基-13，14-二氫-PGE2、8-異-15-酮基-13，14-二氫-PGF2α、11β-PGF2α、9β-PGF2α、TXB2和8-異-PGF2α的交叉反應性分別是0.02、0.43、＜0.001、0.5、1.7、＜0.001、＜0.001、＜0.001、0.01％。檢測限為約45pmol/l。2. 8-異-PGF2α的放射免疫測定通過放射免疫測定(Basu S.，Prostaglandins Leukot Essent Fatty Acids，1998，58，319-325)分析肝素化的(未提取的)血樣以測定作為氧化性損傷指數的8-異-PGF2α。8-異-PGF2α抗體與15-酮基-13，14-二氫-8-異-PGF2α、8-異-PGF2β、PGF2α、15-酮基-13，14-二氫-PGF2α、TXB2、11β-PGF2α、9β-PGF2α和8-異-PGF3α的交叉反應性分別是1.7、9.8、1.1、0.01、0.01、0.1、0.03、1.8和0.6％。該測定檢測限為約23pmol/l。3.分析α-生育酚和γ-生育酚，并分別與甘油三酯和膽固醇關聯。通過ABL 300(Radiometer，Copenhagen，Denmark)，依據制造商的說明分析動脈pH、堿過量以及血內氣體。統計學通過方差分析檢驗(ANOVA)計算兩組豬之間的結果差異。結果以平均值±SD表示。P值＜0.05認為有顯著差異。結果結果如下所示附
圖1-6實驗1(即使用原始Diprivan)的血漿分析。對于實驗2(即使用改性Diprivan)沒有進行血漿分析。
附圖7-10實驗1和2的動脈壓測定。
使用下述符號原始Diprivan(不含edetate二鈉的普魯泊福)＝Prop或PPF改性Diprivan(含edetate二鈉的普魯泊福)＝Prop+EDTA大豆脂乳液＝溶劑＝Solv內毒素＝Etx顯著水平通過下述符號表示* p＜0.05** p＜0.01*** p＜0.001在施用原始Diprivan的有5頭豬的組中，沒有任何死亡，而在沒有接受普魯泊福(即僅接受大豆脂乳液)的有5頭豬的對照組中，有2頭豬死亡。
在施用改性Diprivan的有5頭豬的組中，沒有任何死亡，而在沒有接受普魯泊福(即僅接受大豆脂乳液)的有5頭豬的對照組中，有1頭豬死亡。
豬之所以死亡是因為由于敗血癥性休克導致多個器官衰竭。
在豬之間，基準值(體重、PaO2、心臟性能、實驗室發現)沒有任何差異。因此，無論使用原始或改性Diprivan、還是對照，在所有豬中，為了維持動物身體狀況而記錄的動物生理數據(例如體重等)都基本上相同。
附圖簡述附圖1表示的是在施用原始Diprivan或相應體積溶劑的內毒素血癥豬中15-酮基-二氫-前列腺素F2a的血漿濃度。
在對照組中，在30分鐘內血漿15-k-dh-PGF2α水平顯著增加，并且在6小時長實驗的主要部分內保持高水平。在用原始Diprivan治療的內毒素血癥豬中，血漿15-k-dh-PGF2α水平增加的程度比對照組小，并且很快返回基準水平。
在時間0的基準值(＝內毒素血癥前的水平)反映的是麻醉豬的一般身體狀況。非麻醉豬的基準水平應當接近這樣的水平。
附圖2表示的是在施用原始Diprivan或相應體積溶劑的內毒素血癥豬中8-異-前列腺素F2a的血漿濃度。
在對照組中，在30分鐘內血漿8-異-PGF2α水平顯著增加，并且在6小時長實驗的主要部分內保持高水平。在用原始Diprivan治療的內毒素血癥豬中，沒有觀察到8-異-PGF2α的增加。因此，在輸注原始Diprivan的內毒素血癥豬中，如較低的血漿8-異-PGF2α值所表示，其受氧化性損傷比施用內毒素+大豆脂乳液的對照組輕。在輸注原始Diprivan+內毒素的組中，肺部血管阻力指數(PVRI)較低。在兩個組中，全身和肺血液動力學基本上相同。
在時間0的基準值(＝內毒素血癥前的水平)反映的是麻醉豬的一般身體狀況。非麻醉豬的基準水平應當接近這樣的水平。
附圖3表示的是在施用原始Diprivan或相應體積溶劑的內毒素血癥豬中γ-生育酚的血漿濃度。
附圖4表示的是在施用原始Diprivan或相應體積溶劑的內毒素血癥豬中與甘油三酯和膽固醇有關的血漿γ-生育酚水平(mg×mmol-1)。
附圖5表示的是在施用原始Diprivan或相應體積溶劑的內毒素血癥豬中α-生育酚的血漿濃度。
附圖6在施用原始Diprivan或相應體積溶劑的內毒素血癥豬中與甘油三酯和膽固醇有關的血漿α-生育酚水平(mg×mmol-1)。
PropEtx SolvEtx
所用的對照大豆乳液和原始Diprivan都含有α-生育酚、β-生育酚和γ-生育酚，其中在各種情況下γ-生育酚水平都更高(Vasolipid和Diprivan都含有大約相等水平的γ-生育酚，但是不同批量可能含有不同水平)。然而，在用普魯泊福治療的組中，γ-生育酚血漿水平顯著增加。可能施用的Diprivan釋放了γ-生育酚(可能經由從α-或β-形式生物轉化成γ-形式生育酚)。而且，因為Vasolipid和Diprivan都含有γ-生育酚，可能外來加入的γ-生育酚在對照組(＝Vasolipid)中消耗的比例比在Diprivan組中高。Diprivan和γ-生育酚都作為抵抗自由基介導的損傷的清除劑起作用。這類損傷可由增加的8-異-PGF2α水平評估。
附圖7表示的是在施用原始Diprivan或相應體積溶劑的內毒素血癥豬中的動脈氧壓。
附圖8表示的是在施用改性Diprivan或相應體積溶劑的內毒素血癥豬中的動脈氧張力。N.B.在附圖8中，y軸應當標記為“kPa”，x軸是“小時”。
附圖9表示的是在用原始Diprivan、改性Diprivan和溶劑治療的內毒素血癥豬中的動脈氧張力變化的總結。
附圖10表示的是在施用普魯泊福或相應體積的溶劑的內毒素血癥豬中的動脈二氧化碳壓。
普魯泊福對敗血癥性休克的作用的最佳度量指標是測定的PaO2，并且圖解表示在上述附圖7-10中。
Diprivan對敗血癥性休克中的PaO2的(臨床)顯著作用視為是朝著內毒素血癥前(基準)PaO2-水平的方向恢復(正常化)。在用Diprivan治療的內毒素血癥中，PaO2的任何衰退都視為“不顯著”。這與在對照組中看到的PaO2衰退相反。
對于施用普魯泊福以代替脂乳液的豬，在內毒素血癥期間，PaO2更高，PaCO2更低。因此，普魯泊福(不論是在原始Diprivan中還是在改性Diprivan中)有效地抵抗內毒素引起的動脈氧張力(PaO2)衰退。
權利要求
1.用作控制敗血癥性休克的藥物的非胃腸道給藥用無菌藥物組合物，所述組合物包含化合物2，6-二異丙基苯酚(普魯泊福)和無菌可藥用稀釋劑或載體，并且所述組合物適于直接或者用液體稀釋劑稀釋后非胃腸道施用給恒溫動物。
2.依據權利要求1的用作控制敗血癥性休克的藥物的非胃腸道給藥用無菌藥物組合物，其中所述無菌藥物組合物包含水包油乳液，其中溶解在水不可混溶溶劑中的普魯泊福是用水乳化的，并用表面活性劑穩定，所述組合物還任選包含其量足以在至少24小時內防止微生物顯著生長(如果發生偶發的外來污染)的edetate。
3.化合物2，6-二異丙基苯酚(普魯泊福)在制備用于控制敗血癥性休克的藥物中的應用。
4.化合物2，6-二異丙基苯酚(普魯泊福)在制備用于抵抗內毒素引起的動脈氧張力衰退的藥物中的應用。
5.非胃腸道給藥用無菌藥物組合物在制備用于控制敗血癥性休克的藥物中的應用，所述組合物包含化合物2，6-二異丙基苯酚(普魯泊福)和無菌可藥用稀釋劑或載體，并且所述組合物適于直接或者用液體稀釋劑稀釋后非胃腸道施用給恒溫動物。
6.非胃腸道給藥用無菌藥物組合物在制備用于控制敗血癥性休克的藥物中的應用，所述組合物包含水包油乳液，其中溶解在水不可混溶溶劑中的普魯泊福是用水乳化的，并用表面活性劑穩定，所述組合物還任選包含其量足以在至少24小時內防止微生物顯著生長(如果發生偶發的外來污染)的edetate。
7.依據權利要求5或6的無菌藥物組合物的應用，其中所述應用是在制備用于抵抗內毒素引起的動脈氧張力衰退的藥物中的應用。
8.依據權利要求5-7任一項的應用，其中所述無菌藥物組合物呈水包油乳液形式，所述乳液包含(a)1重量％的普魯泊福，(b)10重量％的大豆油，(c)1.2重量％的卵磷脂，(d)2.25重量％的甘油，(e)氫氧化鈉，(f)水。
9.依據權利要求5-7任一項的應用，其中所述無菌藥物組合物呈水包油乳液形式，所述乳液包含(a)2重量％的普魯泊福，(b)10重量％的大豆油，(c)1.2重量％的卵磷脂，(d)2.25重量％的甘油，(e)氫氧化鈉，(f)水。
10.依據權利要求8或9的應用，其中所述無菌藥物組合物還包含0.005重量％的edetate二鈉鹽。
11.控制敗血癥性休克的方法，包括施用有效量的非胃腸道給藥用無菌藥物組合物，所述組合物包含化合物2，6-二異丙基苯酚(普魯泊福)和無菌可藥用稀釋劑或載體，并且所述組合物適于直接或者用液體稀釋劑稀釋后非胃腸道施用給恒溫動物。
12.依據權利要求11的方法，其中所述無菌藥物組合物包含水包油乳液，其中溶解在水不可混溶溶劑中的普魯泊福是用水乳化的，并用表面活性劑穩定，所述組合物還任選包含其量足以在至少24小時內防止微生物顯著生長(如果發生偶發的外來污染)的edetate。
13.抵抗內毒素引起的動脈氧張力衰退的方法，包括施用有效量的非胃腸道給藥用無菌藥物組合物，所述組合物包含化合物2，6-二異丙基苯酚(普魯泊福)和無菌可藥用稀釋劑或載體，并且所述組合物適于直接或者用液體稀釋劑稀釋后非胃腸道施用給恒溫動物。
14.依據權利要求13的方法，其中所述無菌藥物組合物包含水包油乳液，其中溶解在水不可混溶溶劑中的普魯泊福是用水乳化的，并用表面活性劑穩定，所述組合物還任選包含其量足以在至少24小時內防止微生物顯著生長(如果發生偶發的外來污染)的edetate。
全文摘要
本發明涉及控制敗血癥性休克和抵抗內毒素引起的動脈氧張力衰退的方法，包括施用有效量的非胃腸道給藥用無菌藥物組合物，所述組合物包含化合物2，6－二異丙基苯酚(普魯泊福)和無菌可藥用稀釋劑或載體，所述無菌藥物組合物作為控制敗血癥性休克的藥物的應用，以及所述無菌藥物組合物在制備用于控制敗血癥性休克和抵抗內毒素引起的動脈氧張力衰退的藥物中的應用。
文檔編號A61P31/04GK1430509SQ0180972
公開日2003年7月16日 申請日期2001年5月15日 優先權日2000年5月19日
發明者A·T·埃克, S·巴蘇, M·艾利松 申請人:阿斯特拉曾尼卡有限公司