抑制血管生成和腫瘤生長的方法

專利名稱：抑制血管生成和腫瘤生長的方法
技術領域：
本發明涉及抑制血管生成和腫瘤生長的方法。更準確地說，本發明涉及應用選擇性地結合整聯蛋白αvβ3并且阻斷整聯蛋白αvβ3與基質金屬蛋白酶2(MMP2)的相互作用的化合物抑制血管生成和腫瘤生長的方法。
雖然已記載了MMP(包括MMP2)的天然抑制劑以及合成抑制劑可抑制血管生成并且伴隨性抑制腫瘤生長，但是這些策略在臨床上的應用具有有限成功，主要是由于這類廣譜抑制劑的毒副作用所致。一般而言，在成年生物中，由于在許多過程中可能需要MMP功能，因此酶功能活性部位的抑制可能對參與組織重建的各種生物過程(例如傷口愈合)有深遠的影響。事實上，已記載了在臨床研究中用廣譜MMP抑制劑治療各種癌癥類型引起嚴重的副作用，包括炎癥性腱炎、多關節炎和肌肉骨骼疼痛綜合征，這些疾病是劑量限制性的并且在中斷治療后通常仍持續。已知整聯蛋白αvβ3在成年生物中有限分布，然而，人們預測MMP2和αvβ3之間的相互作用限定在新血管形成或細胞侵襲部位應該相應地限制這類治療相關毒性效應。事實上，MMP2的重組非催化性羧基端血紅素結合蛋白結構域(PEX)，它介導MMP2與整聯蛋白αvβ3的結合，顯示在體內有抗血管生成和抗腫瘤活性。這種蛋白大片段的潛在效用、但伴有多個缺點(例如大規模生產問題、FDA質量和安全控制問題和抗原性)提示需要這一問題更實際的解決方法。
因此，需要應用選擇性地抑制腫瘤生長部位的MMP活性以及最小程度抑制機體其它部位的MMP的化合物抑制血管生成和腫瘤生長的方法。也需要與整聯蛋白αvβ3的MMP2結合部位特異性地結合的方法。
在結構式(I)的范圍內優選的化合物以結構式(II)表示 其中R2和R3各自獨立地為H、C1-C4烷基、苯基或芐基；X1和X2各自獨立地為鹵基或C1-C4烷氧基；X4和X5各自獨立地為鹵基、硝基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷基或C1-C4全氟烷基；A為H或共價鍵；p和r各自獨立地為1或2數值的整數；而t為0或1數值的整數，條件是當A為H時，t為0；當A為共價鍵時，t為1。當A為共價鍵并且t為1時，則亞氨基二乙酰胺衍生物部分可以與苯連接基團在鄰位、間位或對位連接。
當式(I)化合物和式(II)化合物與含有αvβ3的細胞接觸時，αvβ3與MMP2的結合被抑制，從而干擾血管生成的必需機制。干擾血管生成也可以通過阻止腫瘤的血管形成、從而使腫瘤缺乏營養來抑制腫瘤生長。因此，抑制血管生成和腫瘤生長的本發明化合物是用來治療罹患腫瘤或血管生成性疾病的患者的有效治療藥。因為本發明化合物與αvβ3結合，所以也可以用這些化合物抑制炎癥過程。
本發明化合物可以配制在合適的藥學上可接受的基質中。可以將所述活性化合物的藥用組合物給予腫瘤患者，以減低或消除腫瘤生長。可以通過注射或通過在規定時間內逐漸輸注或者通過適合于特定劑型的任何其它方法胃腸外給予所述活性化合物。
附圖簡述附圖中

圖1是用示意圖說明MMP2與整聯蛋白αvβ3的相互作用及其在血管生成中的作用。
圖2描繪了在Boger等，Bioorg.Med.Chem，6，1347-1378(1998)中公開的600種化合物組合文庫的結構亞單位A、B和C。
圖3圖示在與MMP2競爭時60種化合物的組合混合物與整聯蛋白αvβ3的結合。
圖4說明混合物AxB10與整聯蛋白αvβ3的結合以及A6B10C4的10種不同組分的結合。
圖5描繪A6B10C4類似物的結構。
圖6A圖示在與MMP2競爭時A6B10C4(化合物1)的類似物(化合物2-26)與整聯蛋白αvβ3的結合。
圖6B圖示在與MMP2比較時化合物9和化合物19與整聯蛋白αvβ3的結合。
圖7說明[14C]-標記的化合物19與αvβ3特異性地結合并且可以被25倍過量的非標記化合物19，但不被過量的化合物9、RGD肽或c(RGDfV)肽從所述αvβ3競爭性地取代。
圖8顯示了化合物19破壞MMP2與整聯蛋白αvβ3的結合，但不干擾玻連蛋白與整聯蛋白αvβ3的結合。
圖9顯示了化合物19不直接抑制經純化的活性MMP2的蛋白酶解。
發明詳述MMP2與整聯蛋白αvβ3的結合是血管生成過程中的一個重要機制。該結合相互作用的特異性抑制導致在生長組織例如腫瘤中血管形成減少，從而阻止腫瘤生長。MMP2與整聯蛋白αvβ3的相互作用在圖1中示意性說明。下文描述的一類新的血管生成和腫瘤生長抑制劑，在與MMP2競爭時特異性地結合整聯蛋白αvβ3，從而提供了一種重要的新的治療工具。
本發明的某些化合物可以具有一個或多個不對稱中心，并且可以以旋光形式存在。在諸如烷基的取代基中可能存在另外的不對稱中心。純S-異構體和純R-異構體、所述異構體的外消旋混合物、以及它們的混合物包括在本發明的范圍內。考慮了本發明某些化合物的手性形式，并且具體包括在本發明的范圍內。
術語“烷氧基”是指通過醚鍵連接的氧原子和以下定義的、指定大小的烷基。烷氧基的實例是甲氧基、乙氧基、叔丁氧基等。術語“烷基”是指指定大小的直鏈或支鏈碳基團。典型的烷基是甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、仲丁基、異丁基、叔丁基、2-乙基己基、正辛基、2，4-二甲基戊基等。術語“羥烷基”是指與羥基連接的、以上定義的指定大小烷基。實例包括羥甲基、2-羥乙基、3-羥基-1-丙基、2-羥基-1-丙基、4-羥丁基等。
術語“全氟烷基”是指以下定義的指定大小的、攜帶取代每個氫的氟取代基的烷基，例如三氟甲基和五氟乙基。
術語“鹵基”或“鹵素”是指溴、氯、氟和碘。
可用于本發明方法中的化合物由式(I)表示，并且包括與一個連接基團化學連接的亞氨基二乙酰胺衍生物 其中G1和G2各自獨立地為-NH-C(O)-O-R1、-NH-C(O)-O-(CH2)v-(C6H4)-X3、-NH-C(O)-NH-(CH2)v-(C6H4)-X3、-O-C(O)-NH-(CH2)v-(C6H4)-X3、-O-C(O)-O-(CH2)v-(C6H4)-X3或-NH-C(O)-CH2-(C6H4)-X3；Y1和Y2各自獨立地為-OH、C1-C4烷基、C1-C4羥烷基、C1-C4烷氧基、苯基、芐基或-NH2；R1為C1-C4烷基；X1和X2各自獨立地為鹵基或C1-C4烷氧基；X3為鹵基、硝基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4全氟烷基；Z為-C≡C-、-C6H4-、順式-CH＝CH-、反式-CH＝CH-、順式-CH2-CH＝CH-CH2-、反式-CH2-CH＝CH-CH2-、1，4-萘基、順式-1，3-環己基、反式-1，3-環己基、順式-1，4-環己基或反式-1，4-環己基；A為H或共價鍵；m和n各自獨立地為0或1數值的整數；t為0或1數值的整數；而p、r和v各自獨立地為1或2數值的整數；條件是當A為H時，t為0；當A為共價鍵時，t為1；當m為0時，Y1為C1-C4羥烷基；當n為0時，Y2為C1-C4羥烷基。
在結構式(I)的范圍內優選的化合物由結構式(II)表示，并且包括在鄰位、間位或對位與一個苯連接基團連接的亞氨基二乙酰胺衍生物 其中R2和R3各自獨立地為H、C1-C4烷基、苯基或芐基；X1和X2各自獨立地為鹵基或C1-C4烷氧基；X4和X5各自獨立地為鹵基、硝基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷基或C1-C4全氟烷基；A為H或共價鍵；p和r各自獨立地為1或2數值的整數；而t為0或1數值的整數，條件是當A為H時，t為0；當A為共價鍵時，t為1。
優選取代基X1和X2在相對于CH2基團的4-位(即對位取代基)與所述苯環結合。優選X1和X2中至少一個是氟基，最優選X1和X2兩個都為對位氟基。優選r和p都為2。X4和X5優選為C1-C4全氟烷基，最優選為對三氟甲基。優選R2和R3基團為氫和甲基。取代基X2和X3可以相同或不同，取代基R2和R3也可以相同或不同。
式(I)化合物和式(II)化合物連同其合成方法詳細描述于Boger等，Bioorg.Med.Chem，6，1347-1378(1998)，該文獻通過引用結合到本文中。
其中A為共價鍵并且t為1的由式(II)表示的化合物家族中一種特別有活性的化合物是以下流程1中的化合物19。流程1.
以化合物19的合成為例說明由Boger等描述的生產式(I)化合物和式(II)化合物的通用方法。從市售N-ε-BOC-L-賴氨酸甲酯開始，以三個步驟合成化合物19。4-(三氟甲基)芐醇與N，N-二琥珀酰亞胺基碳酸酯反應，隨后加入具有游離α-氨基的活化產物，以99％收率接入氨基甲酸酯，得到中間體化合物27。然后使所述賴氨酸衍生物進行N-BOC去保護(HCl)，并且將其用六氟合磷氫酸溴三吡咯烷基磷鎓(PyBrOP，74％)與亞氨基二乙酸單酰胺化合物28的游離羧酸官能基團偶聯，得到二酰胺化合物29。在N-BOC去保護(HCl)之后，通過與間苯二酰二氯反應，使其二聚體化，完成所述合成，得到化合物19(60％收率)。將一種放射性標記通過兩個甲酯(LiOH，95％)的皂化作用摻入到所述分子中，得到二羧酸化合物30，然后通過1-(3-(二甲氨基)丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(EDCl)和催化性4-二甲基氨基吡啶(DMAP)的介導，與[14C]-甲醇酯化，得到[14C]-化合物1(35％收率)。
式(I)化合物和式(II)化合物的藥用制劑可以通過在藥學上可接受的載體基質中配制所述化合物來制備。將包含所述活性式(I)化合物和式(II)化合物的藥用組合物給予腫瘤患者，以減低或消除腫瘤生長。所述活性化合物可以通過注射或在規定時間內逐漸輸注而胃腸外給予。雖然需要治療的組織最通常通過腹膜內或皮下給藥進行治療，但是所述活性化合物也可以眼內、靜脈內、肌內、滑膜內、腔內或透皮給予，以及可以通過蠕動式手段傳遞。
本文所用的術語“給予”本發明的化合物或組合物是指系統應用，例如以含有需要的常規無毒的藥學上可接受的載體、輔料和溶媒的劑型單位制劑采取口服、胃腸外途徑給予(吸入噴霧、通過鼻腔、直腸或口腔含化途徑給予或者局部給予)。本文所用的術語“胃腸外”包括靜脈內、肌內、腹膜內、胸骨內、皮下和關節腔注射和輸注技術。
所謂“藥學上可接受的”，它是指這樣的鹽、酰胺和酯在合理的醫療判斷范圍內、適用于接觸人體組織和低等動物組織而沒有過度的毒性、刺激性、變態反應等，而且具有合理的利益/風險比，有效用于治療腫瘤和和血管生成相關疾病。
藥學上可接受的鹽是本領域眾所周知的。例如S.M Berge等在J.Pharmaceutical Sciences，66，1-19(1977)中詳細介紹的藥學上可接受的鹽。典型的酸加成鹽包括鹽酸鹽、氫溴酸鹽、硫酸鹽、硫酸氫鹽、醋酸鹽、草酸鹽、戊酸鹽、油酸鹽、棕櫚酸鹽、硬脂酸鹽、月桂酸鹽、硼酸鹽、苯甲酸鹽、乳酸鹽、磷酸鹽、甲苯磺酸鹽、甲磺酸鹽、檸檬酸鹽、馬來酸鹽、富馬酸鹽、琥珀酸鹽、酒石酸鹽、抗壞血酸鹽、葡糖庚酸鹽、乳糖酸鹽、十二烷基硫酸鹽等。典型的堿金屬鹽或堿土金屬鹽包括鈉鹽、鈣鹽、鉀鹽、鎂鹽等。
本文所用的術語“藥學上可接受的載體”是指無毒的、惰性固體、半固體或液體填充劑、稀釋劑、包膠囊材料或任何類型的輔助劑。可以用作藥學上可接受的載體的所述材料的部分實例是糖，例如乳糖、葡萄糖和蔗糖；淀粉，例如玉米淀粉和馬鈴薯淀粉；纖維素及其衍生物，例如羥甲基纖維素鈉、乙基纖維素和醋酸纖維素；粉狀西黃蓍膠；麥芽；明膠；滑石粉；賦形劑，例如可可脂和栓劑蠟；油，例如花生油、棉子油、紅花油、芝麻油、橄欖油、玉米油和豆油；二元醇類，例如丙二醇；多元醇，例如甘油、山梨醇、甘露醇和聚乙二醇；酯類，例如油酸乙酯和月桂酸乙酯；瓊脂；緩沖劑，例如氫氧化鎂和氫氧化鋁；藻酸；無熱原水；等滲鹽水；Ringer氏溶液；乙醇和磷酸緩沖溶液以及其它在藥用制劑中所用的無毒相容的物質。
根據配制者的判斷，在所述組合物中也可以存在潤濕劑、乳化劑和潤滑劑，例如十二烷基硫酸鈉和硬脂酸鎂，以及著色劑、釋放劑、包衣劑、甜味劑、矯味劑和芳香劑、防腐劑和抗氧化劑。藥學上可接受的抗氧化劑的實例包括水溶性抗氧化劑，例如抗壞血酸、半胱氨酸鹽酸鹽、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、亞硫酸鈉等；油溶性抗氧化劑，例如棕櫚酸抗壞血酸酯、丁基化羥基苯甲醚(BHA)、丁基化羥基甲苯(BHT)、卵磷脂、鎵酸丙酯、α-生育酚等；以及金屬螯合劑，例如檸檬酸、乙二胺四乙酸(EDTA)、山梨醇、酒石酸、磷酸等。
本發明藥物或化合物的“治療有效量”是指以適合于任何醫學治療的合適利益/風險比治療腫瘤和血管生成相關疾病的所述化合物的足夠量。然而，人們知道，本發明化合物和組合物的總日用劑量將由主治醫師經合理的醫療判斷決定。任何具體患者的具體治療有效劑量水平取決于各種因素，包括所治療的病癥和病癥的嚴重程度、使用的具體化合物活性、使用的具體組合物、患者的年齡、體重、一般健康狀況、性別和飲食、給藥時間、給藥途徑和所使用的具體化合物的排泄率、治療持續時間、聯合應用的藥物或與所用具體化合物同時使用的藥物以及醫學領域熟知的類似因素。
本發明還提供單位劑型的藥用組合物，所述藥用組合物包含治療有效量的一種或多種本發明化合物以及常規的藥用載體。注射制劑，例如無菌注射用水性混懸劑或油狀混懸劑可以按照已知的技術使用合適的分散劑或濕潤劑和懸浮劑進行配制。無菌注射制劑也可以是在無毒胃腸外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射的溶液、混懸液或乳液，例如1，3-丁二醇溶液。其中可以使用的所述可接受的溶媒和溶劑是水、Ringer氏溶液、U.S.P.和等滲氯化鈉溶液。另外，無菌非揮發性油類常規作為溶劑或懸浮介質使用。為此，可以使用任何刺激性小的非揮發性油，包括合成甘油單酯或甘油二酯。
另外，在所述注射制劑中使用脂肪酸，例如油酸。所述注射制劑可以例如通過阻留細菌的濾膜過濾，或者在臨用前可用無菌水或其它無菌注射介質溶解或分散的無菌固體組合物形式中摻入殺菌劑，可使注射制劑無菌。
為了延長藥物的作用，通常需要減緩皮下注射或肌內注射的藥物吸收。最常用的方式是通過注射水溶性差的結晶或無定形物質的混懸液來實現。那么藥物的吸收速率取決于藥物的溶解速率，而溶解速率又可能取決于藥物的物理狀態，例如晶體大小和晶型。延遲藥物吸收的另一種方法是藥物以油溶液或油混懸液給予。也可以通過使藥物和生物可降解聚合物例如聚丙交酯-聚乙交酯形成微囊骨架，制備注射貯庫型劑型。根據藥物與聚合物的比例和所述聚合物的組成，可以控制藥物釋放速率。其它生物可降解聚合物的實例包括聚-原酸酯和聚酐類。還可將藥物包埋在與機體組織相容的脂質體或微乳中，制備貯庫型注射制劑。
可以通過使所述藥物與適宜的非刺激性賦形劑例如可可脂和聚乙二醇混合，制備用于直腸給藥的栓劑，所述賦形劑在常溫下為固體，但在直腸溫度下為液體，因此在直腸內熔融而釋放出所述藥物。
用于口服給藥的固體劑型可包括膠囊劑、片劑、丸劑、粉劑、prills和顆粒劑，在這樣的固體劑型中，可以將所述活性化合物與至少一種惰性稀釋劑例如蔗糖、乳糖或淀粉混合。根據常規實踐，這樣的劑型還可以包含除惰性稀釋劑以外的其它物質，例如制片潤滑劑和其它制片助劑，例如硬脂酸鎂和微晶纖維素。如果為膠囊劑、片劑和丸劑，所述劑型還可以包含緩沖劑。另外，還可用腸溶包衣和其它控釋包衣劑制備片劑和丸劑。利用諸如乳糖或奶糖以及高分子量聚乙二醇等的這類賦形劑，相似類型的固體組合物也可用作填充軟明膠膠囊和填充硬明膠膠囊的填充物。
用于口服給藥的液體劑型可以包含藥學上可接受的、含有本領域常用的惰性稀釋劑例如水的乳劑、微乳劑、溶液劑、混懸劑、糖漿劑和酏劑。這樣的組合物還可以包含輔料，例如濕潤劑；乳化劑和懸浮劑；甜味劑、矯味劑和芳香劑。如果需要，可以將本發明化合物摻入到緩釋或定向給藥系統，例如聚合物骨架、脂質體和微球體。可以例如通過阻留細菌的濾膜過濾，或者在臨用前可用無菌水或某些其它無菌注射介質溶解的無菌固體組合物形式中摻入殺菌劑，可使所述制劑無菌。所述活性化合物也可以為具有如上所述的一種或多種賦形劑的微囊化形式。
可以用包衣和殼體例如腸溶包衣和藥物配制領域熟知的其它包衣劑制備片劑、糖錠劑、膠囊劑、丸劑和顆粒劑固體劑型。它們可以任選包含遮光劑，而且也可以為這樣的組合物它們任選以延遲方式僅在或優選在某部分腸道釋放所述有效成分。可以使用的包埋組合物的實例包括聚合物物質和蠟。用于局部給予或透皮給予本發明化合物的劑型還包括軟膏劑、糊劑、乳油、洗液、凝膠劑、粉劑、溶液劑、噴霧劑、吸入劑或貼劑。可以使所述有效成分在無菌條件下與藥學上可接受的載體和任何所需防腐劑或可能需要的緩沖劑進行混合。
在本發明的范圍內也考慮了眼用制劑、滴耳劑、眼膏劑、粉劑和溶液劑。所述軟膏劑、糊劑、乳油和凝膠劑除含有本發明的活性化合物外，還可以含有賦形劑，例如動物和植物的脂肪、油、蠟、石蠟、淀粉、西黃蓍膠、纖維素衍生物、聚乙二醇、硅酮、皂土、硅酸、滑石粉和氧化鋅或它們的混合物。
粉劑和噴霧劑除含有本發明化合物外，還可以含有賦形劑，例如乳糖、滑石粉、硅酸、氫氧化鋁、硅酸鈣和聚酰胺粉或這些物質的混合物。另外，噴霧劑還可以含有常規的拋射劑，例如含氯氟烴。
透皮貼劑具有提供使化合物控制釋放到機體的附加優點。通過使所述化合物在適宜介質中溶解或分散，可以制備這樣的劑型。也可使用吸收促進劑增加所述化合物通過皮膚。其速率可以或者受提供的速率控制膜控制或者通過使所述化合物在聚合物骨架或凝膠中分散而控制。
以與給藥制劑匹配的方式和以治療有效量給予含有所述活性化合物的組合物。給藥量和給予時間取決于待治療的宿主、宿主系統利用所述有效成分的能力以及所需治療效應的程度。需要給予的所述有效成分的準確量取決于主治醫師的判斷，并且對于每個個體而言都是特有的。
本文公開了用于系統應用的合適劑量范圍，所述劑量范圍取決于給藥途徑。合適的給藥方案也是可變化的，但通常為在初次給藥后，以一種或多種預定間隔通過后續注射或其它給藥途徑重復給藥。
本發明還提供可用于實施本文所述治療方法的藥用組合物。所述組合物含有上文所述的活性化合物以及藥學上可接受的載體。
用于胃腸外給予本發明化合物或組合物的制劑包括無菌的水溶液或非水溶液劑、混懸劑和乳劑。非水溶劑的實例是丙二醇、聚乙二醇、植物油例如橄欖油和可注射的有機酯例如油酸乙酯。水性載體包括水、醇溶液/水溶液、乳液或混懸液，包括鹽水和緩沖介質。原溶媒包括氯化鈉溶液、Ringer氏葡萄糖、葡萄糖和氯化鈉、乳酸化Ringer氏或非揮發性油類。靜脈內溶媒包括液體營養補充劑、電解質補充劑(例如基于Ringer氏葡萄糖的補充劑)等。也可以存在防腐劑和其它添加劑，例如抗菌劑、抗氧化劑、螯合劑、惰性氣體等。
本發明的另一方面提供抑制MMP2與整聯蛋白αvβ3相互作用、從而抑制腫瘤組織中的血管生成的方法。所述抑制方法包括給予所述宿主包含血管生成抑制量的上文所述化合物的組合物。通過使αvβ3與本發明化合物接觸，抑制MMP2與αvβ3相互作用。
血管生成是從現有的宿主血管形成新血管網絡，并且腫瘤生長超過1-2mm3需要血管生成。對于本發明的目的而言，只要血管生成和血管生成介導的病癥得以緩解，則抑制了血管生成。
給予宿主所述活性化合物的劑量范圍取決于針對特定腫瘤或整聯蛋白的具體活性化合物及其效力。無需過多實驗，本領域技術人員可容易地確定具體活性化合物的準確劑量。所述宿主可以是任何哺乳動物。所述劑量應該大到足以產生所需治療效應，其中血管生成和血管生成介導的病癥得以緩解，并且通常是將所述活性化合物的血漿水平足以維持在以下范圍內的量約0.01微摩爾-約100微摩爾(μM)，優選約0.2μM-約20μM，更優選約1μM-約10μM。然而，所述劑量不應大到引起毒副作用。每公斤(kg)體重的劑量可以在每劑1-20mg的范圍內變化，每日給予一劑或多劑，持續一天或數天或長期給予。
為了抑制血管生成，所述治療有效量是足以在治療的組織中產生可測量到的血管生成抑制的活性化合物的量，即血管生成抑制量或MMP2-αvβ3相互作用抑制量。可以通過本文所述的免疫組織化學或者通過本領域技術人員已知的其它方法，原位測定血管生成的抑制。
另外，本發明還提供可用于實施本文所述治療方法的藥用組合物。所述組合物含有上文定義的活性化合物以及藥學上可接受的載體。
本發明還提供誘導腫瘤細胞凋亡的方法。該方法包括給予所述宿主治療有效量的、足以引起腫瘤細胞凋亡的活性化合物。
對于本發明的目的而言，如果在治療的靶腫瘤中觀察到腫瘤細胞凋亡增加，則誘發了腫瘤細胞凋亡。通過本文所述方法或本領域熟知的方法，可以測定腫瘤細胞凋亡。
提供以下非限制性實施例說明本發明的各個方面。材料和方法抗體細胞和試劑。CS-1倉鼠黑素瘤細胞和用人β3-整聯蛋白亞基轉染的CS-1細胞(β3CS-1細胞)先前已有描述(Cell，85，683-93(1996)；Cell，92，391-400(1998))。綴合辣根過氧化物酶(HRP)的單克隆抗體抗生物素mAb BN-34和抗肌動蛋白mAb AC-40得自Sigma(St.Louis，MO)。抗-von Willebrand Factor(vWF)多克隆抗體(pAb)得自DAKO(Glostrup，丹麥)。環肽cRGDfV和cRADfV和整聯蛋白-αvβ3由MerckKGaA(Darmstadt，德國)提供。純化proMMP2和整聯蛋白-αvβ3由Chemicon International(Temecula，CA)提供。純化活性MMP2得自Calbiochem(La Jolla，CA)。堿性成纖維細胞生長因子(bFGF)由Scios(Mountain View，CA)友好提供。實施例1.固相整聯蛋白結合測定將純化整聯蛋白在微量滴定孔上吸附過夜(1-5μg/ml，50μg/孔)，然后用Caseinblocker(Pierce，Rockford，IL)封閉。在存在或不存在試驗化合物、環RGD或RAD肽、或單獨的緩沖溶媒的情況下，將在結合緩沖液(50mM Tris，pH8，150mM NaCl，1mM MgCl2，0.5mMMnCl2)中的純化生物素化MMP2(bMMP2，3-5nM)加入到各孔中。對照孔不加入整聯蛋白。生物素化玻連蛋白(bVN，1μg/ml)用作參比物。結合蛋白用HRP-抗生物素mAb檢測，并且于450nm用3，3′，5，5′-四甲基聯苯胺溶液(TMB；所述過氧化物酶的底物)(BioRad，Hercules，CA)進行定量。
為了評價化合物19直接結合整聯蛋白，將αvβ3和α5β1(10μg/ml，50μl/孔)包被在Immulon-4微量滴定孔(Dynatech Laboratories，Chantilly，VA)上，基本被封閉后，與逐漸增量的[14C]-化合物19一起孵育，然后加入150μl含有0.1％吐溫-20的結合緩沖液，吸出所有液體。分離干燥的各孔，然后將其浸漬在BetaMat液體閃爍混合劑(ICNBiochemicals，Costa Mesa，CA)中以供定量。根據該結合曲線，在存在和不存在25倍摩爾過量(75μl)的未標記化合物19或化合物9、或100μM環RGD或RAD肽的情況下，檢查[14C]-化合物19的亞飽和濃度(3μM)。對照為bVN，如上所述進行使用和檢測。實施例2.MMP2細胞結合測定和[3H]-膠原蛋白IV降解測定將CS-1細胞或β3CS-1細胞在含有以下成分的粘附緩沖成纖維細胞基礎培養基(FBM)中于37℃孵育45分鐘，然后洗滌，加入到[3H]-膠原蛋白IV包被的各孔中僅含有4nM純化活性MMP2或者組合有10μM化合物19或化合物9并且補充0.5％牛血清白蛋白(BSA)、0.4mM MnCl2和10μg/ml抑蛋白酶肽。用50μl 0.414mCi/ml[3H]-膠原蛋白IV(ICN Biochemicals，Costa Mesa，CA)將各孔包被過夜，充分洗滌直到在回收的洗滌溶液中的放射性達到本底值。或者，在不存在MMP2的情況下如上處理細胞，或者將所述MMP2溶液直接加到無細胞的各孔中，作為對照。根據液體閃爍計數器測定，通過測量釋放到50μl培養基的放射性，對膠原蛋白IV的降解定量。為了評價生物素化MMP2與CS-1細胞的結合，將細胞懸浮于粘附緩沖液中，在存在或不存在10μM化合物19或化合物9的情況下，與12nMbMMP2一起于37℃孵育45分鐘。隨后洗滌細胞，然后裂解并且加工以供SDS-PAGE使用，用抗生物素mAb進行免疫印跡法。實施例3.化合物27的合成將N，N’-二琥珀酰亞胺碳酸酯(95.38g，21mmol)的乙腈(150ml)溶液用4-(三氟甲基)芐醇(2.87ml，21mmol)和三乙胺(Et3N；5.8ml，42mmol)處理，于25℃下攪拌。3小時后，將該溶液加到裝有N-ε-BOC-賴氨酸甲酯(4.2g，14mmol)的乙腈溶液的燒瓶中，再攪拌3小時。將溶劑蒸發，殘余物溶于CH2Cl2(250ml)中，然后用10％鹽酸(2×200ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(200ml)洗滌。經快速色譜(SiO2，3∶1CH2Cl2/EtOAc)，得到6.4g(99％)為淺黃色油狀物的化合物27[α]D25-8.95.55，CH3OH；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ7.57(d，J＝8.1Hz，2H)，7.39(d，J＝8.1Hz，2H)，5.70(d，J＝7.9Hz)，5.13(m，2H)，4.71(m，1H)，4.28(m，1H)，3.67(s，3H)，3.03(m，2H)，1.78(m，1H)，1.64(m，1H)，1.46-1.32(m，4H)，1.35(s，9H)；13C NMR(CDCl3，100MHz)δ172.9，156.2，155.8，140.4，130.1(q，J＝32.0Hz)，127.8，125.3，122.9，(qJ＝270.0Hz)，79.05，65.8，53.7，52.3，39.8，31.7，29.5，28.4，22.2；IR(膜)vmax3357，2952，1790，1745，1524cm-1；FABHRMS(NBA-NaI)m/z 463.2044(M+H+，C21H29F3N2O6理論值463.2056)。實施例4.化合物29的合成將化合物27(2.2g，48.8mmol)的CH2Cl2(3ml)溶液用4N HCl-二噁烷(10ml)處理，于25℃下攪拌20分鐘。減壓除去溶劑和過量的酸，將粗鹽酸鹽溶于DMF(40ml)中，用N-((叔丁氧基)羰基)-N′-(2-(4-氟苯基)乙基)亞氨基二乙酸單酰胺(化合物28)(1.68g，4.8mmol)、PyBrOP(3.3g，7.1mmol)和二異丙基乙胺(i-Pr2NEt；5.0ml，29mmol)處理，于25℃下攪拌1小時。反應混合物用EtOAc(400ml)稀釋，用10％鹽酸水溶液(2×300ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(300ml)洗滌。經快速色譜(SiO2，1∶1 CH2Cl2/EtOAc)，得到2.47g(74％)為白色泡沫狀固體的化合物29[α]D25-7.14.50，CH3OH；1H NMR(CDCl3，400MHz)δ8.23和7.59(m，和1H)，7.58(d，J＝8.1Hz，2H)，7.43(m，2H)，7.13(m，2H)，7.06和6.78(m，和1H)，6.94(m，2H)，5.70(dd，J＝12.9和8.2Hz，1H)，5.11(m，2H)，4.31(m，1H)，3.85-2.72(m，4H)，3.71(s，3H)，3.49(m，2H)，3.22(m，2H)，2.79(m，2H)，1.81-1.39(m，6H)，1.38(s，9H)；13CNMR(CDCl3，100MHz)δ172.8，170.0，169.9，155.8，154.8，161.4(d，J＝242.7Hz)，140.2，134.4，130.1(q，J＝33.4Hz)，130.0，127.7，125.3(q，J＝3.0Hz)，123.8(q，J＝299.9Hz)，115.0，81.2，65.7，53.9，53.3，52.2，40.8，38.6，34.4，31.5，28.0，22.4；IR(膜)vmax3367，2935，1708，1657，1511cm-1；FABHRMS(NBA-CsI)m/z831.2026(M+Cs+，C33H42F4N4O8理論值831.1993)。實施例5.化合物19的合成將化合物29(50mg，0.075mmol)的CH2Cl2(1ml)溶液用4N HCl-二噁烷(1ml)處理，于25℃下攪拌1小時。在氮氣流下除去溶劑和過量的酸，將粗鹽酸鹽懸浮于CH2Cl2(1ml)中，用間苯二酰二氯(7.6mg，0.038mmol)和i-Pr2NEt(0.05ml，0.3mmol)處理，于25℃下攪拌12小時。反應混合物用EtOAc(50ml)稀釋，用10％鹽酸(3×30ml)、飽和碳酸氫鈉水溶液(30ml)和飽和氯化鈉水溶液(30ml)洗滌。經快速色譜(SiO2，1∶4.5∶4.5 MeOH/CH2Cl2/EtOAc)，得到30mg(60％)為白色粉末的化合物191H NMR(CD3OD，400MHz)δ7.62(m，4H)，7.52(m，4H)，7.42(m，4H)，7.19(m，4H)，6.96(m，4H)，5.14(m，4H)，4.16(m，2H)，4.13(m，2H)，4.08(m，2H)，3.99(m，4H)，3.68(s，6H)，3.45-3.35(m，4H)，3.25-3.11(m，4H)，2.82-2.70(m，4H)，1.82(m，2H)，1.69(m，2H)，1.60-1.34(m 8H)；IR(膜)vmax3291，2936，1725，1651，1326cm-1；FABHRMS(NBA-CsI)m/z 1459.4015(M+Cs+，C64H70F8N8O14理論值1459.3938)。實施例6.化合物30的合成將化合物19(13mg，0.01mmol)的叔丁醇(0.3ml)溶液用在H2O(0.15ml)中溶解的LiOH·H2O(0.91mg，0.22mmol)處理，于0℃下攪拌2小時。然后反應混合物用HCO2H(1ml)猝滅，用EtOAc(10ml)稀釋，用飽和氯化鈉水溶液(2×10ml)洗滌。干燥(Na2SO4)并蒸發，得到12mg(95％)為白色粉末的化合物301H NMR(DMSO-d6，400MHz)δ12.54(br s，2H)8.63(m，1H)，8.43(m，2H)，8.30(m，1H)，7.74(m，4H)，7.69(m，2H)，7.57(m，4H)，7.40(m，4H)，7.24(m，4H)，7.09(m，4H)，5.15(m，4H)，4.14(m，2H)，4.02-3.87(m，8H)，3.31(m，4H)，3.208(m，4H)，2.74(m，4H)，1.71(m，2H)，1.62(m，2H)1.50-1.34(m，8H)；IR(膜)vmax3287，2928，1705，1659，1320cm-1；MALDIHRMS m/z 1321.4493(M+Na+，C62H66F8N8O14理論值1321.4468)。實施例7. [14C]-化合物19的合成將化合物27(1.7mg，1.3mmol)和EDCI(2.0mg，10.3mmol)的DMF(20ml)溶液用0.3ml14CH3OH的CH2Cl2(57mCi/mmol，5.2mmol14CH3OH)溶液和35ml DMAP的CH2Cl2(0.6mmol DMAP)儲備液處理，于0℃下攪拌4小時。然后反應混合物用EtOAc(3L)稀釋，用10％鹽酸(3×3ml)和飽和碳酸氫鈉水溶液(3ml)洗滌，干燥(Na2SO4)。在PTLC上純化(SiO2，2∶3∶3 EtOH/CHCl3/EtOAc)，得到0.6mg(35％)為白色膜狀物的[14C]-化合物19。通過1H NMR和HPLC，該物質與相應未標記的二甲酯化合物1相同。相對活度約為104mCi/mmol1HNMR(CD3OD，400MHz)δ7.62(m，4H)，7.52(m，4H)，7.42(m，4H)，7.19(m，4H)，6.96(m，4H)，5.14(m，4H)，4.16(m，2H)，4.13(m，2H)，4.08(m，2H)，3.99(m，4H)，3.68(s，6H)，3.45-3.35(m，4H)，3.25-3.11(m，4H)，2.82-2.70(m，4H)，1.82(m，2H)，1.69(m，2H)，1.60-1.34(m 8H)。結果和討論包括式(I)化合物和式(II)化合物在內的化合物的組合文庫連同其合成方法詳細描述于Boger等，Bioorg.Med.Chem，6，1347-1378(1998)。Boger等分別介紹了10種化合物的60種混合物的組合文庫的制備，其中所述混合物中的每種化合物由如圖2中所示的偶聯一起的三個亞單位組成。所述化合物的亞單位被稱為A、B和C。所述文庫從6個不同的A單位(A1-A6)、10個不同的B單位(B1-B10)和10個不同的C連接基團(C1-C10)構建。每個A單位與每個B單位偶聯，形成60種不同的AB化合物。然后單個AB化合物與10個不同的C連接基團的混合物偶聯，分別形成10種化合物的60種混合物，稱為AxBy，其中所述x和y分別表示被摻入到所述混合物的所述化合物中的單個A亞單位和單個B亞單位。所述化合物組合文庫的A亞單位、B亞單位和C亞單位示于圖2中。
評價在競爭性整聯蛋白αvβ3結合測定中上文所述的60種混合物與MMP2的競爭表明，數種所述混合物抑制MMP2與整聯蛋白αvβ3的結合。評價測定結果示于圖3中。特別有活性的混合物包括A1B6、A1B7、A1B8、A4B1、A5B4、A5B5、A5B6、A5B10和A6B10。活性最高的混合物是A6B10，因此，分別合成所述混合物的10種單個化合物，以相同測定進行檢測，其結果示于圖4中。在所述測定中所有的單個組分A6B10C1-A6B10C10在3μM濃度都有活性。
也評價了圖5中所示的A6B10C4(化合物1)的類似物化合物(2-26)。化合物2-26的結合測定結果示于圖6A中。除化合物8、9和23之外，所有的所述化合物都抑制MMP2與整聯蛋白結合。
式(I)和式(II)包括本發明的活性MMP2/整聯蛋白-αv-β3結合抑制劑。
詳細檢測了化合物19，以測定其專一性靶并確定其生物特性。盡管苯甲酰胺化合物9具有總體結構相似物和相似的物理特性(例如溶解度和疏水性)，但是由于在所述結合測定中發現其缺乏拮抗劑活性，所以選擇所述苯甲酰胺化合物9作為可供這些研究中的許多研究用的合適陰性對照化合物。如圖6B所示，化合物19濃度依賴性抑制MMP2與整聯蛋白結合。
將一種放射性標記(14C)摻入到化合物19的酯取代基中(相對活度約104mCi/mmol)。與固定αvβ3一起孵育(3μM)后，然后洗滌，正如圖7所證明的，發現該化合物粘附于所述整聯蛋白。在25倍摩爾過量的冷的化合物19存在下孵育顯著減少所述觀測到的結合物的量，而在25倍摩爾過量的(冷的)對照化合物9存在下孵育不影響[14C]-化合物19的結合。在一個測定[14C]-化合物19與固定MMP2的相互作用的類似實驗中，沒有觀測到結合。這些結果表明，在MMP2-αv-β3結合測定中觀測到的所述拮抗劑活性來源于化合物19與αv-β3的特異性結合。化合物19-ov-β3相互作用的性質與識別Arg-Gly-Asp序列的整聯蛋白位點無關。環RGD肽環(Arg-Gly-Asp-D-Phe-Val)不影響[14C]-化合物19的結合(圖7)。事實上，如圖8所示，化合物19不抑制玻連蛋白、即αvβ3的典型高親和性配體與所述整聯蛋白的結合，與化合物19的結合部位與結合RGD-配體的結合部位不同的構思一致。
在一種測定內皮細胞利用MMP2降解蛋白質基質(血管生成中的一個關鍵步驟)的能力的細胞測定中，也研究了化合物19。先前的研究表明，破壞MMP2與αvβ3的結合抑制膠原蛋白IV的降解。發現用αvβ3轉染的CS-1黑素瘤細胞，降解固定化[3H]-膠原蛋白IV遠遠高于降解β3陰性CS-1細胞(它缺乏αvβ3)。如圖9所示，用化合物19處理這些細胞顯著減少所述被增加的基質降解，與所述細胞不能利用MMP2相一致，所述MMP2不與所述整聯蛋白表面結合。然而，因為沒有細胞的純化(活性)酶能夠在存在或不存在化合物19的情況下在相似程度上降解[3H]-膠原蛋白IV，所以化合物19不直接抑制MMP2的蛋白酶解活性。
這些結果支持的命題是，式(I)化合物破壞腫瘤細胞以與PEX類似的方式利用MMP2降解ECM蛋白的能力。式(I)化合物不干擾αvβ3與其典型的RGD配體的結合，它們也不作為直接蛋白酶抑制劑起作用。
前面的說明和實施例是說明性的，而不是限制性的。在本發明的精神和范圍內的其它變化對于本領域技術人員而言是可能的并且本身是顯而易見的。
權利要求
1.一種抑制MMP2與宿主細胞整聯蛋白αvβ3相互作用的方法，所述方法包括使所述整聯蛋白與相互作用抑制量的下式化合物接觸 其中G1和G2各自獨立地為-NH-C(O)-O-R1、-NH-C(O)-O-(CH2)v-(C6H4)-X3、-NH-C(O)-NH-(CH2)v-(C6H4)-X3、-O-C(O)-NH-(CH2)v-(C6H4)-X3、-O-C(O)-O-(CH2)v-(C6H4)-X3或-NH-C(O)-CH2-(C6H4)-X3；Y1和Y2各自獨立地為-OH、C1-C4烷基、C1-C4羥烷基、C1-C4烷氧基、苯基、芐基或-NH2；R1為C1-C4烷基；X1和X2各自獨立地為鹵基或C1-C4烷氧基；X3為鹵基、硝基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4全氟烷基；Z為-C≡C-、-C6H4-、順式-CH＝CH-、反式-CH＝CH-、順式-CH2-CH＝CH-CH2-、反式-CH2-CH＝CH-CH2-、1，4-萘基、順式-1，3-環己基、反式-1，3-環己基、順式-1，4-環己基或反式-1，4-環己基；A為H或共價鍵；m和n各自獨立地為0或1數值的整數；t為0或1數值的整數；而p、r和v各自獨立地為1或2數值的整數；條件是當A為H時，t為0；當A為共價鍵時，t為1；當m為0時，Y1為C1-C4羥烷基；當n為0時，Y2為C1-C4羥烷基。
2.權利要求1的方法，其中G1和G2為-NH-C(O)-O-(CH2)v-(C6H4)-X3，A為共價鍵，v為1。
3.權利要求2的方法，其中X3為三氟甲基。
4.權利要求2的方法，其中Y1和Y2為-OH，m為1，n為1。
5.權利要求2的方法，其中X1和X2中至少一個為對位氟基。
6.權利要求2的方法，其中m為1，n為1，R2和R3中至少一個為甲基。
7.權利要求2的方法，其中R2和R3為H，m和n為1，X1和X2為氟基，X3為三氟甲基。
8.一種抑制MMP2與宿主細胞整聯蛋白αvβ3相互作用的方法，所述方法包括使所述整聯蛋白與相互作用抑制量的下式化合物接觸 其中R2和R3各自獨立地為H、C1-C4烷基、苯基或芐基；X1和X2各自獨立地為鹵基或C1-C4烷氧基；X4和X5各自獨立地為鹵基、硝基、C1-C4烷氧基、C1-C4烷基或C1-C4全氟烷基；A為H或共價鍵；p和r各自獨立地為1或2數值的整數；而t為0或1數值的整數，條件是當A為H時，t為0，當A為共價鍵時，t為1。
9.權利要求8的方法，其中X4和X5中至少一個為C1-C4全氟烷基，A為共價鍵。
10.權利要求8的方法，其中R2和R3中至少一個為H，A為共價鍵。
11.權利要求8的方法，其中R2和R3中至少一個為甲基，A為共價鍵。
12.權利要求8的方法，其中X4和X5為三氟甲基，R2和R3各自為甲基，A為共價鍵。
13.權利要求8的方法，其中A為共價鍵，R2和R3為甲基，X4和X5為三氟甲基，X1和X2為氟基，m為1，n為1。
14.一種抑制宿主體內血管生成的方法，所述方法包括給予所述宿主血管生成抑制有效量的下式化合物 其中G1和G2各自獨立地為-NH-C(O)-O-R1、-NH-C(O)-O-(CH2)v-(C6H4)-X3、-NH-C(O)-NH-(CH2)v-(C6H4)-X3、-O-C(O)-NH-(CH2)v-(C6H4)-X3、-O-C(O)-O-(CH2)v-(C6H4)-X3或-NH-C(O)-CH2-(C6H4)-X3；Y1和Y2各自獨立地為-OH、C1-C4烷基、C1-C4羥烷基、C1-C4烷氧基、苯基、芐基或-NH2；R1為C1-C4烷基；X1和X2各自獨立地為鹵基或C1-C4烷氧基；X3為鹵基、硝基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4全氟烷基；Z為-C≡C-、-C6H4-、順式-CH＝CH-、反式-CH＝CH-、順式-CH2-CH＝CH-CH2-、反式-CH2-CH＝CH-CH2-、1，4-萘基、順式-1，3-環己基、反式-1，3-環己基、順式-1，4-環己基或反式-1，4-環己基；A為H或共價鍵；m和n各自獨立地為0或1數值的整數；t為0或1數值的整數；而p、r和v各自獨立地為1或2數值的整數；條件是當A為H時，t為0；當A為共價鍵時，t為1；當m為0時，Y1為C1-C4羥烷基；當n為0時，Y2為C1-C4羥烷基。
15.按照權利要求14抑制血管生成的方法，其中G1和G2為-NH-C(O)-O-(CH2)v-(C6H4)-X3，A為共價鍵，v為1。
16.按照權利要求15抑制血管生成的方法，其中X3為三氟甲基。
17.按照權利要求15抑制血管生成的方法，其中Y1和Y2為-OH，m為1，n為1。
18.按照權利要求15抑制血管生成的方法，其中X1和X2中至少一個為對位氟基。
19.按照權利要求15抑制血管生成的方法，其中m為1，n為1，R2和R3中至少一個為甲基。
20.按照權利要求15抑制血管生成的方法，其中R2和R3為甲基，m和n為1，X1和X2為氟基，X3為三氟甲基。
21.按照權利要求14抑制血管生成的方法，其中所述給藥包括腹膜內、皮下、靜脈內、透皮、滑膜內、肌內或口服給藥。
22.一種抑制宿主體內腫瘤生長的方法，所述方法包括給予所述宿主治療有效量的下式化合物 其中G1和G2各自獨立地為-NH-C(O)-O-R1、-NH-C(O)-O-(CH2)v-(C6H4)-X3、-NH-C(O)-NH-(CH2)v-(C6H4)-X3、-O-C(O)-NH-(CH2)v-(C6H4)-X3、-O-C(O)-O-(CH2)v-(C6H4)-X3或-NH-C(O)-CH2-(C6H4)-X3；Y1和Y2各自獨立地為-OH、C1-C4烷基、C1-C4羥烷基、C1-C4烷氧基、苯基、芐基或-NH2；R1為C1-C4烷基；X1和X2各自獨立地為鹵基或C1-C4烷氧基；X3為鹵基、硝基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4全氟烷基；Z為-C≡C-、-C6H4-、順式-CH＝CH-、反式-CH＝CH-、順式-CH2-CH＝CH-CH2-、反式-CH2-CH＝CH-CH2-、1，4-萘基、順式-1，3-環己基、反式-1，3-環己基、順式-1，4-環己基或反式-1，4-環己基；A為H或共價鍵；m和n各自獨立地為0或1數值的整數；t為0或1數值的整數；而p、r和v各自獨立地為1或2數值的整數；條件是當A為H時，t為0；當A為共價鍵時，t為1；當m為0時，Y1為C1-C4羥烷基；當n為0時，Y2為C1-C4羥烷基。
23.按照權利要求22抑制腫瘤生長的方法，其中G1和G2為-NH-C(O)-O-(CH2)v-(C6H4)-X3，A為共價鍵，v為1。
24.按照權利要求23抑制腫瘤生長的方法，其中X3為三氟甲基。
25.按照權利要求23抑制腫瘤生長的方法，其中Y1和Y2為-OH，m為1，n為1。
26.按照權利要求23抑制腫瘤生長的方法，其中X1和X2中至少一個為對位氟基。
27.按照權利要求23抑制腫瘤生長的方法，其中m為1，n為1，R2和R3中至少一個為甲基。
28.按照權利要求23抑制腫瘤生長的方法，其中R2和R3為甲基，m和n為1，X1和X2為氟基，X3為三氟甲基。
29.按照權利要求22抑制腫瘤生長的方法，其中所述給藥包括腹膜內、皮下、靜脈內、透皮、滑膜內、肌內或口服給藥。
30.一種誘導腫瘤細胞凋亡的方法，所述方法包括給予所述腫瘤細胞治療有效量的下式化合物 其中G1和G2各自獨立地為-NH-C(O)-O-R1、-NH-C(O)-O-(CH2)v-(C6H4)-X3、-NH-C(O)-NH-(CH2)v-(C6H4)-X3、-O-C(O)-NH-(CH2)v-(C6H4)-X3、-O-C(O)-O-(CH2)v-(C6H4)-X3或-NH-C(O)-CH2-(C6H4)-X3；Y1和Y2各自獨立地為-OH、C1-C4烷基、C1-C4羥烷基、C1-C4烷氧基、苯基、芐基或-NH2；R1為C1-C4烷基；X1和X2各自獨立地為鹵基或C1-C4烷氧基；X3為鹵基、硝基、C1-C4烷基、C1-C4烷氧基或C1-C4全氟烷基；Z為-C≡C-、-C6H4-、順式-CH＝CH-、反式-CH＝CH-、順式-CH2-CH＝CH-CH2-、反式-CH2-CH＝CH-CH2-、1，4-萘基、順式-1，3-環己基、反式-1，3-環己基、順式-1，4-環己基或反式-1，4-環己基；A為H或共價鍵；m和n各自獨立地為0或1數值的整數；t為0或1數值的整數；而p、r和v各自獨立地為1或2數值的整數；條件是當A為H時，t為0；當A為共價鍵時，t為1；當m為0時，Y1為C1-C4羥烷基；當n為0時，Y2為C1-C4羥烷基。
31.按照權利要求30誘導凋亡的方法，其中G1和G2為-NH-C(O)-O-(CH2)v-(C6H4)-X3，A為共價鍵，v為1。
32.按照權利要求31誘導凋亡的方法，其中X3為三氟甲基。
33.按照權利要求31誘導凋亡的方法，其中Y1和Y2為-OH，m為1，n為1。
34.按照權利要求31誘導凋亡的方法，其中X1和X2中至少一個為對位氟基。
35.按照權利要求31誘導凋亡的方法，其中m為1，n為1，R2和R3中至少一個為甲基。
36.按照權利要求31誘導凋亡的方法，其中R2和R3為甲基，m和n為1，X1和X2為氟基，X3為三氟甲基。
37.按照權利要求30誘導凋亡的方法，其中所述給藥包括腹膜內、皮下、靜脈內、透皮、滑膜內、肌內或口服給藥。
全文摘要
血管生成、腫瘤生長和金屬蛋白酶2(MMP2)與整聯蛋白－α
文檔編號A61K38/55GK1429106SQ01809743
公開日2003年7月9日 申請日期2001年3月27日 優先權日2000年3月27日
發明者D·L·博格, D·A·徹雷什 申請人:斯克里普斯研究學院