專利名稱：一種消炎止血的婦科藥物及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種治療婦科病的藥物。具體地說是涉及對“宮血寧膠囊”的改進，以及改進后的宮血寧膠囊在制藥領域中的用途。
本發明還提供了所述藥物的新用途，即在制藥中的新應用。
技術方案本發明提供的消炎止血的婦科藥物，可由下述方法制備獲得該方法包括(1)將重樓藥材粉碎成黃豆粒大小的粗粉；(2)加溫水浸泡，放棄水液，濾干；(3)用乙醇熱回流提取，合并提取液，濾過；(4)濾液減壓回收乙醇、脫脂，其特征在于濾液經回收乙醇脫脂后，再選擇下述兩種方法之一，進行制備A.進一步減壓回收乙醇，并濃縮至相對密度為1.12～1.16，濃縮液噴霧干燥，過80目篩，得干浸膏粉，加輔料適量，混勻，制得膠囊1000粒，即得成品；B.采用大孔吸附樹脂吸附，再分別用水、30％乙醇、乙醇洗脫，收集乙醇洗脫部分，回收乙醇，濃縮、干燥、粉碎、分裝，即為成品。
所述的溫水浸泡的溫度為60℃以下；所述的用乙醇熱回流提取的乙醇的重量百分濃度為90％，有益效果本發明由于濾液經減壓回收乙醇后，進一步減壓回收、濃縮、噴霧干燥，或者是進一步采用大孔吸附樹脂吸附等措施，它保留了宮血寧膠囊中的有效成分，除去了大量無效成分，每粒膠囊的體積由原來的280毫克縮小為80毫克，含量仍相當于生藥2克，質量高，療效好，膠囊體積小服用也方便。特別是能有效消除部分患者原來服用后引起的腸胃不適，擴大適用范圍。
通過對本發明藥物系統深入的研究，所述的藥物除了已知的止血作用外，本發明還進一步提供了該藥物的新用途，即在制藥中的新應用。
實際上本發明提供了所述藥物作為制備治療或預防由金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌引起的炎癥藥中的應用。
提供了所述藥物作為制備治療或預防慢性盆腔炎的藥中的應用。
下面將通過實施例1～4對本發明作詳細具體的說明，但本發明的內容并不局限于此。
實施例1取重樓2000克，粉碎成粗粉，加入四倍量55℃的溫水浸泡三次，每次4小時。棄去水液；浸泡后的重樓粗粉濾干，加入四倍量90％乙醇回流提取三次，每次3小時。合并提取液，濾過，在55℃下，濾液減壓回收乙醇至含醇量為25％，相對密度為1.05，冷卻靜置12小時，除去濃縮液上層脂狀物，進一步減壓回收乙醇，并濃縮至相對密度為1.15，濃縮液噴霧干燥，過80目篩，得干浸膏粉，加輔料適量，混勻，制成膠囊1000粒，即得成品。成品為膠囊劑，內容物為淺黃棕色至灰棕色粉末，味苦。
〖檢查〗產品應符合膠囊劑項下有關的各項規定(中國藥典2000版附錄IL)。
〖含量測定〗照高效液相色譜法測定。(中國藥典2000版附錄VID)測定。
色譜條件與系統適用性試驗用辛烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑，乙腈—水(45∶55)為流動相，檢測波長為203nm。理論塔板數按重樓皂甙VI峰計算，應不低于5000。對照溶液的制備精密稱取重樓皂甙VI對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.4mg的溶液，作為對照品溶液。供試品溶液的制備取本品裝量差異項下內容物1克，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇25ml，密塞，稱定重量，超聲處理{功率250W，頻率25KHz}40rain，放冷，稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻。濾過，棄去初濾液，取續濾液作為供試品溶液。
實施例2除了濾液經回收乙醇脫脂后，采用大孔吸附樹脂吸附，再分別用水、30％乙醇、乙醇洗脫，收集乙醇洗脫部分，回收乙醇，濃縮、干燥、粉碎、分裝，即為成品外，其余過程與實施例1相同。
實施例3
由于原料重樓的主要成份為皂甙，多糖，粘液質，其中皂甙又分為薯芋皂甙和偏諾皂甙。藥理實驗證明，宮血寧的有效成份為偏諾皂甙，該種皂甙在水中溶出極微，薯芋皂甙部份可溶出，多糖，粘液質易溶于水，根據其性質，采用水除去部份水溶性物質后，以乙醇提取的制備方法。取重樓粗粉1200g，均分4份，每份300g，取其三份，分別用30℃、60℃、90℃熱水浸泡，各浸泡三次，每次3小時，水浸液棄去，濾干。連同未用水浸泡的一份，各份再分別用90℃乙醇熱回流3次，每次3小時，所得醇液合并，回收乙醇，濃縮呈稠膏，80℃真空干燥12小時，稱重，計算收得率。取各份水浸液及醇提液，濃縮至1/10量，硅膠G板點樣，氯仿∶甲醇∶水(8∶2∶0.1)展開，10％硫酸乙醇溶液顯色，熱風吹至斑點清晰，檢查偏諾皂甙，以重樓皂甙VI、VII對照，見
圖1.圖2，試驗結果見表1.
表1.水浸泡醇提試驗結果
試驗結果表明，重樓用溫水浸洗除去部分水溶性雜質，當水溫超過60℃時，通過薄層層析檢查，即可檢出有效成分偏諾皂甙VI、VII。因此，溫水浸洗溫度控制在60℃以下為佳。
實施例4采用正交試驗法優選重樓乙醇提取工藝條件1.表頭設計試驗以大鼠子宮收縮試驗，結合浸膏得率作為考察指標，選擇了提取過程中的提取次數、提取時間、乙醇濃度、每次乙醇用量四個因素，每個因素設三個水平進行正交試驗，試驗選用L9(34)正交表。因素水平表設計如表2。
表2.正交試驗因素水平表因素A B C D水平提取次數提取時間醇用量醇濃度1 3 1.5 6 70°2 2 2 5 80°3 2 3 4 90°2.大鼠子宮收縮試驗供試品溶液的配制，取試驗所得干燥浸膏0,6g，取24ml蒸餾水分次加入并研磨10分鐘后，放置24小時備用。
標準品溶液的配制，同縮宮素(催產素)生物檢定法(中國藥典77年版二部附錄)項下，臨用時用生理鹽水稀釋成，1ml含0,01個單位。
子宮營養液的配制同縮宮素(催產素)生物檢定法(中國藥典二部附錄)項下，必要時增加0.5-1倍氯化鈣(無水)量。
供試用動物同縮宮素(催產素)生物檢定法(中國藥典二部附錄)項下。
試驗法實驗條件同縮宮素(催產素)生物檢定法(中國藥典二部附錄)項下。實驗時將子宮肌置于盛有25ml蓄養液的子宮肌槽內，靜置約15分鐘，取標準品稀釋液0.3ml加入溶槽內，啟動記錄儀同時記時，待子宮肌收縮至最高點并開始松馳時(如收縮緩慢或不收縮，只觀察3分鐘)，關上記錄儀，將蓄養液放去，用新蓄養液洗滌三次，放去。再加25ml蓄養液，休息5-10分鐘，再進行第二次藥液加注。每次子宮肌休息時間應固定。調節標準品稀釋液的給藥量，使所致反應為最大收縮的一半左右且較穩定，即以此劑量為ds，供試品給藥量dT同標準品，按ds、dT、dT、ds或dT、ds、ds、dT的順序注入一組4個劑量，然后以第一與第三，第二與第四劑量所致反應，分別比較，若dT所致反應均大于ds所致反應，即認為供試品大鼠子宮收縮作用符合規定，如dT所致反應均小于ds所致反應，即認為供試品大鼠子宮收縮作用不符合規定，如dT所致反應并不是均大于ds所致反應，應另取子宮復試，復試時按上述次序用2組8個劑量按同法比較；如dT所致反應均大于ds所致反應，亦認為供試品的大鼠子宮收縮作用符合規定，否則為不符合規定。
3、試驗方法及結果取重樓粗粉1800g，45±5℃溫水浸洗3次，每次3小時，濾干水份，均分9份，每份200g，按L9(34)表進行提取試驗，所得提取液經濃縮、干燥至恒重計算浸膏得率，并進行大鼠子宮收縮試驗，結果見表3。
表3.正交試驗表L9(34)
4、試驗結論從試驗結果可看出，影響大鼠子宮收縮試驗和浸膏收率的因素依次為RD＞RB＞RA＞RC，醇濃度最為關鍵，醇提時間次之。既能滿足大鼠子宮試驗規定，浸膏收率又較高的提取條件為選擇90％L醇提取，提取時間每次3小時，共3次，每次加醇為原料粗粉的4倍量，即A1B3C3D3。經按該工藝條件生產，結果所得浸膏均滿足要求。
為了更好地理解本發明的實質，下面將通過應用實施例1～7所進行的藥理試驗及結果來說明其在制藥領域中的新用途。
受試藥物宮血寧膠囊[II]，由云南白藥集團股份有限公司提供；溶劑為1％羧甲基纖維素鈉溶液；配制方法稱取宮血寧用上述溶劑配至所需濃度。
實驗動物大鼠，SD種，由云南白藥集團股份有限公司研究所動物室提供，普通級，合格證號滇實動證第9717號。小鼠ICR種，提供單位同上，普通級，合格證號滇實動證第9716號。
劑量設置受試藥宮血寧設兩個劑量組，高劑量組0.64g/kS(給藥量/體重，以下同)，低劑量組0.32g/kg。陽性對照藥均設一個劑量婦炎凈3g/kg，云南白藥2.5g/Kg。
給藥方法所有試驗小鼠按0.8mh/20g，大鼠按1ml/100g，體積灌胃給藥。
試驗對照空白對照，給同受試藥等體積的含1％CMC-Na的蒸餾水。陽性對照，婦炎凈膠囊，廣西梧州中藥廠生產，婦炎凈為1988衛生部批準的三類新藥。
應用實施例1——本發明的藥物對二甲苯引起的小鼠耳廓腫脹的影響實驗方法取ICR小鼠40只，雄性，體重25-28g，隨機分為空白對照組，試藥高、低劑量組、陽性對照組每天給藥一次，共3天，于末次給藥1小時后，在每鼠右耳涂50μl二甲苯致炎，左耳作對照，30min后拉頸椎處死，剪下兩耳，用同一打孔器打下圓耳片，分析天平穩重，以(右耳重—左耳重)/左耳重作為腫脹率。比較各給藥組與空白對照組腫脹率的差異，試驗結果見表4。實驗結果本發明的藥物高低劑量均能明顯對抗二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，有較強的抗炎作用。
表4.小鼠耳廓腫脹率(X±SD)
*與空白組比較P＜0.05，**與空白組比較P＜0.01。
應用實施2——本發明的藥物對角叉菜膠所致大鼠足跖腫脹影響實驗方法選用健康大鼠48只，體重150-190g，隨機分為四組，空白對照組，宮血寧高、低劑量組，陽性對照組，致炎前灌胃給藥，每天一次，連續三天，于末次給藥30min后，在大鼠足跖部皮下注射1％角叉菜膠0.1ml致炎，用毛細管法測量，致炎前后大鼠足跖關節以下的體積變化，并比較致炎后1、2、3、6小時各組的平均腫脹率(致炎后體積—致炎前體積)/致炎前體積，結果見表5。
表5.大鼠足跖腫脹率經時變化 (X+SD)
*與空白組比較P＜0.05，**與空白組比較P＜0.01。
實驗結果本發明的藥物大小劑量在致炎后1、2小時有顯著抑制大鼠足跖腫脹的作用。
應用實施例3——本發明的藥物對大鼠棉球肉芽腫增生的影響實驗方法取140-170g雄性大鼠經乙醚淺麻醉于無菌條件下作腹部切口，將2個20mg的滅菌棉球植入兩側，腹股溝皮下，術后隨機分為4組，分別給予宮血寧高低劑量、婦炎凈、蒸餾水，手術當天給藥，一天一次，連續7天。第八天先稱體重，將大鼠斷頭處死，剝離脂肪分出棉球肉芽腫組織，于烘箱內60℃干燥12小時稱重，減去原棉球重，即為肉芽腫凈重。同時取出大鼠的胸腺、脾臟稱重，比較各組肉芽腫指數及臟器指數(肉芽腫重或臟器重mg/大鼠體重g)，試驗結果見表6。
表5.大鼠肉芽腫指數 (X+SD)
*與空白組比較P＜0.05，**與空白組比較P＜0.01。
試驗結果表明，本發明的藥物高劑量能明顯抑制慢性肉芽腫的增生。
應用實施例4——本發明的藥物對大鼠子宮炎癥的影響實驗方法實驗選用200-250g·雌性健康大鼠，無菌條件，在乙醚麻醉下，減去下腹部毛，碘酒及75％酒精消毒，于下腹正中切口2cm，暴露子宮，沿左側子宮角上1cm處作一橫切口，將一塑料管(管徑2mm，長5mm，重2mg，酒精消毒)放置于子宮內，與子宮切口縫合固定，以防脫落。傷口滴入含2萬μ的青霉素以防感染。術后隨機分組。2小時開始給藥，每天一次，連續7天，第8天處死動物，取出兩側子宮，分析天平稱重，以(左側子宮重—右側子宮重)/右側子宮重，為炎癥腫脹率，比較各組腫脹率之間的差異，并進行統計，結果見表7。
表7.大鼠子宮腫脹率(X+SD)
*與空白組比較P＜0.05，**與空白組比較P＜0.01試驗結果表明，對照組大鼠左側放置塑料管子宮明顯紅腫，子宮壁厚度增加，較對側子宮明顯變粗，兩側子宮差異較大；給藥組與之相比均有不同程度的減輕，經統計與對照組比較有顯著性差異，表明宮血寧膠囊對動物子宮內放置塑料管所致炎癥有明顯的抑制作用。
應用實施例5——本發明藥物的鎮痛作用實驗方法取ICR小鼠40只，雌雄各半，體重18～22g，隨機分為空白對照組，陽性藥組，試藥高；低劑量。每天灌胃給藥一次，連續3天，于末次藥30min后，每鼠按腹腔注射0.6％冰醋酸0.1ml/log，記錄注射致痛劑后20min內各鼠的扭體次數。比較各組間差異，并進行統計。結果見表8。
試驗結果表明，試藥高低劑量均能明顯減少小鼠注射致痛劑后產生的扭體次數，有一定的鎮痛作用。
表8.小鼠扭體次數 (X+SD)
*與空白組比較P＜0.05。
應用實施例6——本發明藥物具有的抑菌作用實驗方法將本發明的藥物用培養基稀釋為所需濃度梯度，分別置于試管中(1ml/管)，每管加入0.1ml稀釋10-3倍的新鮮菌液，于37℃培養箱培養18h后，觀察有無細菌生長，確定細菌不生長的最低抑菌濃度，結果見9。
表9.宮血寧最低抑菌濃度(液體試管法)
實驗結果表明，宮血寧對金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌均有一定的抑制作用，其最低抑菌濃度分別為0.0625g/ml，0.125g/ml、0.125g/ml。
應用實施例7——臨床療效觀察試驗用藥用法用量試驗組宮血寧膠囊，本發明的藥物；每次2粒，每日3次；療程28天。服藥后第14天、28天復查。
對照組婦炎凈膠囊，批號990204(廣西梧州制藥股份有限公司生產)至次2粒，每天3次；療程28天。服藥后第14天、28天復查。
療效觀察通過對患者治療前診查及治療后2周、4周進行復診和婦科檢查，觀察治療后患者癥狀、體征的改善情況，發現宮血寧膠囊對于慢性盆腔炎治療后2周癥狀和體征即有所改善，在治療4周后改善尤為明顯。經統學檢驗，治療總有效率無明顯性差異(P＞0.05 Ridit-檢驗)，但在顯效及痊愈率方面與對照組比較有顯著性差異(P＜0.05 Ridit-檢驗)，見表10。
表10.宮血寧對慢性盆腔炎的療效
表10表明，本發明的藥物治療四周后與對照組相比，在顯愈率方面與對照組比較有顯著性差異P＜0.05Ridit—檢驗。
對白帶常規的治療結果見表11。
表11.兩組白帶常規化驗指標治療后分布表白帶常規 治療組 對照組I°18 12II° 83 38III° 00合計 101 50與治療前比較，均有顯著性差異P＜0.05(Ridit—檢驗)，與同期對照組比較P＞0.05(Ridit—檢驗)。說明本發明的藥物對白帶常規的改善有顯著作用。
以上試驗結果清楚地顯示，采用改進工藝制備的本發明的藥物，除去了無效成分，有效成分高度富集，服用量雖小，但卻具有十分有效的縮宮作用是婦科止血的良藥。以0.32、0.64g/kg不同劑量的本發明的藥物灌胃大鼠，能顯著研制角叉萊膠所致足跖腫脹，慢性棉球肉芽腫形成及塑料環引起的子宮炎癥。以0.32、0.64g/kg、灌胃小鼠對二甲苯誘發的小鼠耳廓腫脹有明顯抑制作用；對由注射醋酸引起的小鼠扭體次數有明顯的減少作用。體外抑菌試驗表明，本發明的藥物在0.0625-0.125g/ml濃度下能抑制金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌和大腸桿菌的生長。表明本發明的藥物有明顯的抗炎、鎮痛、抑菌作用，為臨床治療提供了切實的藥效學基礎，提示了新的開發應用前景，本發明的藥物可作為制備治療或預防由金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌引起的炎癥藥中的應用，臨床資料表明本發明的藥物可應用于制備治療或預防慢性盆腔炎的有效藥物。
權利要求
1.一種消炎止血的婦科藥物，該藥物由下述方法制備獲得該方法包括(1)將重樓藥材粉碎成黃豆粒大小的粗粉；(2)加溫水浸泡，放棄水液，濾干；(3)用乙醇熱回流提取，合并提取液，濾過；(4)濾液減壓回收乙醇、脫脂，其特征在于濾液經回收乙醇脫脂后，再選擇下述兩種方法之一，進行制備A.進一步減壓回收乙醇，并濃縮至相對密度為1.12～1.16，濃縮液噴霧干燥，過80目篩，得干浸膏粉，加輔料適量，混勻，制得膠囊1000粒，即得成品；B.采用大孔吸附樹脂吸附，再分別用水、30％乙醇、乙醇洗脫，收集乙醇洗脫部分，回收乙醇，濃縮、干燥、粉碎、分裝，即為成品。
2.根據權利要求1所述的消炎止血的婦科藥物，其中所述的溫水浸泡的溫度為60℃以下。
3.根據權利要求1所述的消炎止血的婦科藥物，其中所述的用乙醇熱回流提取，乙醇的重量百分濃度為90％。
4.權利要求1所述的藥物作為制備婦科止血藥物的應用。
5.權利要求1所述的藥物作為制備治療或預防由金黃色葡萄球菌、溶血性鏈球菌、大腸桿菌引起的炎癥藥中的應用。
6.權利要求1所述的藥物作為制備鎮痛藥物中的應用。
7.權利要求1所述的藥物作為制備治療或預防慢性盆腔炎的藥中的應用。
全文摘要
本發明提供了一種消炎止血的婦科藥物及其應用。該藥物由下述方法制備獲得該方法包括(1)將重樓藥材粉碎；(2)加溫水浸泡，放棄水液，濾干；(3)用乙醇熱回流提取，合并提取液，濾過；(4)濾液減壓回收乙醇、脫脂，其特征在于濾液經回收乙醇脫脂后，再選擇下述兩種方法之一，進行制備A.進一步減壓回收乙醇，并濃縮至相對密度為1.12～1.16，濃縮液噴霧干燥，過80目篩，得干浸膏粉，加輔料適量，混勻，制得膠囊1000粒，即得成品；B.采用大孔吸附樹脂吸附，再分別用水、30％乙醇、乙醇洗脫，收集乙醇洗脫部分，回收乙醇，濃縮、干燥、粉碎、分裝，即為成品。所述的藥物可用于制備婦科止血、消炎和鎮痛的藥物，尤其是用于制備治療或預防慢性盆腔炎的藥物。
文檔編號A61P7/00GK1401372SQ0213338
公開日2003年3月12日 申請日期2002年6月26日 優先權日2002年6月26日
發明者高崇昆, 趙曉頂, 張志偉, 倪鳳儀, 崔占和 申請人:云南白藥集團天然藥物研究院