專利名稱：治療子宮內膜異位癥經期腹痛的中藥組合物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種中藥組合物，特別涉及用于治療子宮內膜異位癥的中藥組合物，同時涉及該組合物的制備方法和各種制劑。
背景技術：
子宮內膜異位癥，已為婦科臨床工作中的常見病、多發病。近年來明顯地看到其發病率大有上升趨勢，同時也看到本病所導致的臨床癥狀也呈現漸進的加重狀態，加之本病又多發于生育年齡階段，故除病痛之外，又有多方面的因素給廣大婦女患者之身心以沉重的困擾，從而降低了他們的生活質量和健康狀態。雖然子宮內膜異位的病灶分布不一，如宮骶韌帶、子宮直腸陷凹及子宮肌腺癥、盆腔腹膜部位和盆腔器官的表面，有時是多個部位同時受侵，其所表現的臨床癥狀也有一定的差異，但所引起的經期腹痛、腰骶疼痛等癥狀基本上是一致的。
由于異位的子宮內膜同樣受到周期性卵巢激素的影響，同樣出現月經期的變化，如增生、出血、分泌液及組織碎片等均聚集在組織間隙之中，結聚不散，從而導致臨床所見的主要癥狀之一的疼痛，且此疼痛癥狀多出現在經前1～2天，多以在經期第一天為最劇，一般在月經干凈時此疼痛逐漸減輕或緩解，這是因為月經過后，異位之內膜逐漸萎縮之故。
痛經為常見和突出的臨床癥狀，多為“繼發”。除由于以上所提到的組織結聚所導致的疼痛之外，因為異位的子宮內膜同樣產生前列腺素，刺激子宮過度收縮，使子宮內壓增高，而引起子宮之血流量減少，局部缺血亦是導致疼痛產生之原因。
子宮內膜異位癥所表現的痛經癥狀的輕重是不一致的。有的是“難以忍受”，必用藥物止痛方能緩解，一般來說這種病痛是比較痛苦的。由于是周期性的發生，患者實有較為明顯的恐懼情緒，參讀《中華婦產科學》中引用Lukayat的統計數據，在618例診斷為子宮內膜異位癥的患者中有27-40％無疼痛癥狀，但有73-60％的患者會出現痛經癥狀，由此可見，痛經乃是子宮內膜異位癥的多發癥狀。此外在其他有關的書籍中也把疼痛列為子宮內膜異位癥的主要臨床癥狀。臨床實踐中也確是看到此點。
綜觀以上情況，研制開發治療子宮內膜異位所引發的經期疼痛的藥物是臨床工作中所迫切需要的，也是藥品流通市場所需要的。
雖然目前有關治療“痛經”的藥品已有很多，但定位在醫治子宮內膜異位性痛經的專治品種，經過查新，截至目前尚屬缺如，此乃本次發明目的。
由于子宮內膜組織的異位改變，所引起的經期或月經前后期的疼痛現象乃為本病的主要和常見的癥狀。其疼痛特點除發作時間上有其“規律性”之外，在臨床癥狀的表現方面也是有其可循之處的。如疼痛部位多在下腹部及腰骶部、陰道、會陰、肛門等處，并常伴有脹墜難忍之感。當然有關疼痛程度是與異位之部位、范圍有明顯關系，在時間上則多以經期第一天為最劇。臨床診斷認為本癥之經期疼痛多歸屬于繼發痛經之范疇(個別病例屬原發)。參閱多篇有關子宮內膜異位引起的痛經癥的臨床總結，主要是以化瘀止痛為主治方法。
子宮內膜異位癥的部位之多發性及其病理變化之特殊性，其所形成反復的凝滯和結聚狀態，致使本癥痛經癥狀為纏綿起伏和出現周期性的反復發作，在不斷的困擾著廣大的病患者。
發明內容
本發明的一個目的在于公開一種新的治療子宮內膜異位癥經期腹痛的中藥組合物；本發明的另一個目的在于公開制備一種新的治療子宮內膜異位癥經期腹痛的中藥組合物的方法；本發明的另一個目的在于公開一種新的治療子宮內膜異位癥經期腹痛中藥組合物的制劑和質量控制方法。
本發明藥物組合物的主要原料藥組成及配比如下(按重量份)當歸 50～1000重量份 茜草 50～600重量份川芎 10～500重量份三七 10～700重量份。
上述原料藥配比優選如下(按重量份)當歸 200～600重量份 茜草 80～300重量份川芎 50～300重量份三七 30～300重量份。
上述本發明主要原料藥其中還可包含下述中藥中的一種或幾種
延胡索 50～800重量份 牡 蠣 50～1500重量份杜 仲 50～600重量份 夏枯草 50～1000重量份野菊花 50～1000重量份車前子 50～1000重量份；配比優選如下(按重量份)延胡索 100～400重量份牡 蠣 150～700重量份杜 仲 100～300重量份夏枯草 150～500重量份野菊花 150～500重量份車前子 150～500重量份本發明的組合物也可按如下配比組成當 歸 200～600重量份茜 草 80～300重量份川 芎 50～300重量份 三 七 30～300重量份延胡索 100～400重量份牡 蠣 150～700重量份杜 仲 100～300重量份夏枯草 150～500重量份野菊花 150～500重量份車前子 150～500重量份本藥物最佳組合物的制備方法當歸、川芎、三七、夏枯草和延胡索加5～20倍量20～90％的有機溶媒回流提取1～5次，每次1～5小時，濾過，合并濾液，回收溶劑并濃縮至相對密度為1.10～1.38(30～80℃)的清膏。牡蠣先煎0.5～3小時后加入茜草等其余四味(車前子包煎)，煎煮1～5次，每次0.5～3小時，加水量為藥材量的5～20倍量，濾過，合并煎液，濃縮至相對密度為1.10～1.38(30～80℃)，加乙醇使醇濃度達30～90％，放置12～84小時，濾過，濾液回收溶媒并濃縮至相對密度為1.10～1.38(30～80℃)，和上述醇提清膏合并，繼續濃縮至相對密度為1.10～1.38(30～80℃)，減壓干燥，粉碎成細粉，經過常規工序直接或間接加入藥學上可接受的賦型劑制成臨床可接受的劑型，如片劑、口服液、膠囊、顆粒劑、注射劑等。
上述制備方法所述的有機溶媒可以為乙醇、甲醇、氯仿、丙酮、乙酸乙酯等中的任一種。
本發明組合物制成藥劑的質量控制方法包括鑒別和/或含量測定。(下述質量控制方法所用本發明組合物制劑為顆粒劑，每克顆粒劑相當原藥材2.4克；所用顆粒劑型不意味該質量控制方法在應用劑型范圍上的限制，其它劑型應用該質量控制方法，用量上應與所用顆粒劑在原藥材的量上相當。)鑒別方法包括下列方法中的一種和/或幾種a.取本發明顆粒劑5g，加8-11∶0.3-0.7醋酸乙酯-甲酸20ml，超聲處理20-35分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取當歸、川芎各2g，分別同法制成對照藥材溶液，再取阿魏酸對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VIB)試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以7-10∶1-3∶1-2石油醚(30～60℃)—醋酸乙酯—冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與當歸、川芎對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；b.取本發明顆粒劑2g，加甲醇20ml，超聲處理25-40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml，再加鹽酸1ml，置水浴中加熱25-40分鐘，立即冷卻，用乙醚分1-3次提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取茜草對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以3-5∶1-3石油醚(60～90℃)-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，噴以飽和氫氧化鈉溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；c.取本發明顆粒劑10g，加入水飽和正丁醇25ml，超聲處理25-40分鐘，濾過，濾液轉移至分液漏斗中，用氨試液提取1-3次，每次25ml，棄去，取正丁醇層，置蒸發皿中，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取三七對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液，再取人參皂苷Rb1、Re、Rg1、三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述三種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以11-15∶6-9∶1-3氯仿-甲醇-水10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，于105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；d.取本發明顆粒劑5g，加甲醇50ml，超聲處理25-40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水溶解，加濃氨試液調至堿性，用乙醚提取1-3次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取延胡索對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液，再取延胡索乙素對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述溶液各2μl，分別點于同一用1％氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以6-9∶3-5∶1-2正己烷—氯仿—甲醇為展開劑，置以展開劑預飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，以碘蒸氣熏至斑點顯色清晰，日光下檢視，供試品色譜中在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；在空氣中揮盡板上吸附的碘后，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；e.取本發明顆粒劑5g，加乙醇20ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣用石油醚(30-60℃)浸泡1-3次，每次15ml，1-3分鐘，傾去石油醚液，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取熊果酸對照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以20∶5∶8∶0.5環己烷-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，于100℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測定；色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以25-35∶60-80甲醇-1％冰醋酸為流動相；檢測波長320nm；理論板數按阿魏酸峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備 精密稱取阿魏酸對照品適量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本發明顆粒劑約2g，研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加5％碳酸鈉溶液50ml，稱定重量，超聲處理25-40分鐘，功率250W，頻率20kHz，放置至室溫，再稱定重量，用5％碳酸鈉溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續濾液25ml，用鹽酸1-3ml調節PH至1-2后，再用乙醚萃取3次，每次30ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇定量轉移至5ml量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本發明每單位量含當歸、川芎以阿魏酸(C10H10O4)計，不得少于0.85-1mg。
所述單位量是指相當24克原藥材的成品藥劑量。
本發明組合物各配方制劑均具有很好的化瘀止痛，除濕散結，促進機體的恢復，治療子宮內膜異位癥經期腹痛等作用，且無毒副作用。
下面實驗例用于進一步說明本發明(內異痛經顆粒為本發明組合物顆粒劑)實驗例1 藥效學實驗經實驗本發明組合物制劑具有化瘀止痛，除濕散結，促進機體的恢復，治療子宮內膜異位癥經期腹痛等作用。
一、主要藥效學試驗研究受試藥物內異痛經顆粒，由山西亞寶藥業集團股份有限公司提供，批號020627，含8.5g生藥/g藥粉，臨用前以蒸餾水配制至所需濃度。劑量設計臨床用量為72g生藥/d，按60kg計算，即1.2g生藥/kg/d。按動物與人公斤體重等效劑量折算，小鼠用13.0g/kg/d(11倍)、大鼠用6.5g/kg/d(5.4倍)，家兔用3.8g/kg/d(3.2倍)，相當于臨床等效劑量為中劑量，高劑量為中劑量的2倍，低劑量為中劑量的1/2倍。陽性對照藥婦女痛經丸，某上市產品，批號1070671。臨床用量為18.5g/d，按60kg計算，即0.308g/kg/d。按動物與人公斤體重等效劑量的2倍劑量折算，小鼠6.8g/kg/d(22倍)、大鼠用3.33g/kg/d(11倍)。宮血寧膠囊，某上市產品，批號010605，成人日用量0.78g/d，按平均體重60kg計算為0.013g/kg，大鼠用0.14g/kg、小鼠用0.286g/kg，婦寧片，某上市產品批號010801。達那唑膠囊，某上市產品，批號20020401。給藥量和給藥途徑小鼠給藥量為20ml/kg；大鼠給藥量為10ml/kg，家兔給藥量為2ml/kg，采用灌胃給藥方式。動物昆明小鼠，體重20±2g；北京生物制品研究所提供，合格證號為京動許字1999第012號；SD大鼠，體重200±20g，由北京維通利華實驗動物技術有限公司提供，合格證號SCXK(京)-02-0003；家兔，由北京學院路通利試驗動物養殖場提供，合格證號第024總069號。試劑己烯雌酚，上海第九制藥廠生產，批號010102；縮宮素注射液，上海第一生化藥業公司、上海生物化學制藥廠生產，批號020161；甲醛，北京化工廠生產，批號840601。戊巴比妥鈉，佛山市化工實驗廠生產，批號860901；材料及儀器消毒手術器械；ZS-3型半自動生化分析儀，上海中生生物工程高技術公司出品。電子天平，瑞士制造；MP-100多導生理記錄系統，美國；恒溫干燥箱，北京朝陽區來廣營醫療器械廠；組織天平，型號BS200S-WE1，北京賽多利斯天平有限公司。R-20型血液粘度測試儀，北京中勒世帝公司生產。
試驗方法和結果1. 內異痛經顆粒對動物子宮內膜異位癥和大鼠離體子宮平滑肌的影響1.1 內異痛經顆粒對家兔子宮內膜異位癥的影響1.1.1 試驗方法1.1.1.1 手術用3％戊巴比妥鈉按1ml/kg于雌性家兔耳緣靜脈注射麻醉(48只)，腹部皮膚常規消毒，沿腹中線剪開腹壁和腹膜(切口大約3cm)，找到右側子宮，在離卵巢1cm處，分離附著于子宮肌壁的脂肪和結締組織后，兩頭分別用手術線結扎，剪取中間約2cm一段子宮體置于盛有生理鹽水的培養皿中，斷端吻合，剪開子宮暴露子宮內膜，剪成5mm×5mm三塊，縫在左側子宮靠卵巢附近，左側子宮正中，及子宮角附近。縫合線為無損傷6-0錦綸單絲線，正常對照組(8只)做開腹、縫合假手術。術后，肌肉注射慶大霉素0.5ml/只，連續4天。
1.1.1.2 分組及給藥術后將40只子宮內膜異位癥家兔隨機分成模型組，陽性對照藥組(達哪唑20mg/kg)，內異痛經顆粒大劑量組(7.6g生藥/kg)、中劑量組(3.8g生藥/kg)、小劑量組(1.9g生藥/kg)5組。正常對照組與模型組給予相同體積的蒸餾水，其余各組按2ml/kg給相應藥物，連續1個月。
1.1.1.3 解剖末次給藥后24小時，用3％戊巴比妥鈉按1ml/kg戊巴比妥鈉耳緣靜脈麻醉，腹主動脈抽血檢測血液流變學(東直門醫院活血化瘀組測定)，子宮用10％甲醛固定作病理組織學檢查。
1.1.1.4 病理組織學判斷標準觀察指標定量采用假腺體記數法，用t檢驗進行統計學處理；半定量采用假腺體形成和炎癥細胞浸潤及出血情況綜合判斷，用秩和檢驗進行統計學處理。
半定量標準“-”子宮內膜正常，腺體大、小均勻，記分為0；“+”子宮內膜輕度假腺體形成，少量炎癥細胞浸潤，記分為1；“++”子宮內膜假腺體形成，炎癥細胞浸潤，并有少量出血，記分為2；“+++”大量的假腺體形成，炎癥細胞浸潤明顯增多，間質有出血、腫脹，記分為3。
1.1.2 試驗結果1.1.2.1 內異痛經顆粒對家兔子宮內膜異位癥的影響(血液流變學檢查)表1結果可見，模型對照組全血粘度與正常對照組相比顯著升高，所有給藥組均有不同程度的降低，內異痛經顆粒高劑量組有顯著的抑制作用，可降低全血粘稠度。
表1 內異痛經顆粒對家兔子宮內膜異位癥的影響(血液流變學檢查)劑量動物數 全血粘度(mpa.s) (X±SD)組別(g/kg)5 10 38150模型對照 -- 814.67±3.219.64±1.74 5.09±0.61 3.29±0.33正常對照 -- 89.07±1.73** 6.26±1.09** 3.62±0.54** 2.52±0.35**達哪唑 0.02 79.49±0.96** 6.59±0.45** 3.86±0.12** 2.72±0.13**內異痛經 7.689.57±1.28*6.65±0.80** 3.89±0.43** 2.75±0.32*3.8712.92±2.168.62±1.14 4.66±0.46 3.10±0.441.9811.97±2.848.03±1.59 4.41±0.63*2.96±0.41注與模型對照組相比*P＜0.05 **P＜0.01。
1.1.2.2 內異痛經顆粒對家兔子宮內膜異位癥的影響(病理組織學觀察)病理檢查表明(表2、附病理報告1和彩色照片1)，模型組異位子宮內膜有囊腫形成，腺上皮呈萎縮狀態，呈假腺體樣改變，內異痛經顆粒高、中劑量組異位內膜腺體明顯減少，并可不同程度的減輕異位子宮內膜炎癥細胞浸潤、出血和腫脹。
表2內異痛經顆粒對家兔子宮內膜異位癥的影響(病理組織學觀察)劑量 鼠數假腺體 病理綜合判斷 秩和檢驗組別(g/kg) (只) (數) (積分值) (值)模型對照 --89.50±6.65 2.37±0.52達哪唑0.02 81.13±1.13** 1.25±0.89** 46.0*內異痛經 7.6 72.75±4.59*1.37±1.06* 49.0*3.8 83.25±4.37*1.50±0.76* 47.5*1.9 75.63±5.37 1.75±0.8969.5注與對照組相比 *P＜0.05 **P＜0.011.2 內異痛經顆粒對大鼠子宮內膜異位癥的影響1.2.1 試驗方法1.2.1.1 手術 手術前連續2天皮下注射己烯雌酚0.1mg/kg，手術時用3％戊巴比妥鈉1ml/kg腹腔注射麻醉，腹部皮膚常規消毒，沿腹中線剪開腹壁和腹膜(切口2-3cm)，找右側子宮，在離卵巢1cm處，分離附著于子宮肌壁的脂肪和結締組織后，剪取中間約1.5cm一段子宮體置于盛有生理鹽水的培養皿中，斷端吻合，剪開子宮暴露子宮內膜，剪成4mm×4mm三塊，縫在左側子宮卵巢附近，子宮正中，子宮角附近。縫合線為無損傷6-0錦綸單絲線。對照組開腹、縫合作假手術。手術后，肌肉注射慶大霉素0.2ml/只，連續4天。
1.2.1.2 分組及給藥 手術后1個月后，隨機抽出4只，觀察移植的子宮內膜生長情況，移植子宮內膜成活后，將子宮內膜異位癥動物隨機分成模型組、中藥陽性組(婦女痛經丸3.33g/kg)，西藥陽性組(婦寧片0.72mg/kg)，內異痛經顆粒高劑量組(13g生藥/kg)、中劑量組(6.5g生藥/kg)、低劑量組(3.25g生藥/kg)六組，對照組(假手術組)。給藥各組按10ml/kg給相應藥物，對照組與模型組給相同體積的蒸餾水，連續1個月。解剖和病理觀察同上，血液流變學由望京醫院藥理室測定。
1.2.2 試驗結果1.2.2.1 內異痛經顆粒對大鼠子宮內膜異位癥的影響(血液流變學檢查)
表3 內異痛經顆粒對大鼠子宮內膜異位癥的影響(血液流變學檢查)劑量 動物 全血粘度(mpa.s) (X±SD)組別(g/kg)數高切 中切1 中切2 低切模型對照 -- 10 4.00±0.46 4.48±0.625.74±1.318.14±2.91正常對照 -- 10 3.27±0.41** 3.41±0.54** 3.77±0.86** 4.39±1.47**婦寧片0.72mg 10 3.77±0.20 4.13±0.305.09±0.716.84±1.60痛經丸3.33 10 3.65±0.25*4.00±0.32* 4.75±0.60* 6.03±1.01內異痛經 13.0 10 3.54±0.37*3.75±0.45** 4.30±0.65** 5.25±1.02*6.5 10 3.57±0.39*3.87±0.41* 4.62±0.57* 5.98±1.05*3.25 10 3.70±0.43 4.11±0.535.17±0.857.12±1.55注與模型對照組相比 *P＜0.05 **P＜0.01。
表3結果可見，模型對照組全血粘度與正常對照組相比顯著升高，所有給藥組與模型對照組相比均有不同程度的降低，內異痛經顆粒高、中劑量組均有明顯的降低作用。
1.2.2.2 內異痛經顆粒對大鼠子宮內膜異位癥的影響(病理組織學觀察)病理檢查表明(表4、附照片2)，模型組大鼠異位子宮內膜病灶組織中有假腺體樣形成，子宮內膜的間質有纖維組織增生。內異痛經顆粒異位內膜腺體、間質纖維增生明顯減少，可不同程度的抑制異位子宮內膜的病理改變。
表4 內異痛經顆粒對大鼠子宮內膜異位癥的影響(病理組織學觀察)劑量鼠數假腺體 病理綜合判斷 秩和檢驗組別(g/kg) (只) (數) (積分值) (P值)模型對照 -- 10 4.60±3.86 2.00±0.67婦寧片 0.72 10 1.70±1.34*0.90±0.74**70.0**痛經丸 3.33 10 1.50±0.85*1.60±0.70 88.013.0 10 0.80±0.92*1.00±0.82**72.0*內異痛經 6.510 1.10±0.57*1.10±0.57**72.0*3.25 10 2.50±2.68 1.00±0.68**71.0**注與對照組相比 *P＜0.05 **P＜0.012 內異痛經顆粒對正常大鼠及宮縮素所致大鼠離體子宮平滑肌收縮的影響2.1 內異痛經顆粒對正常大鼠離體子宮平滑肌收縮的影響[3]2.1.1 試驗方法2.1.1.1 藥物制備
內異痛經顆粒高劑量(1.300g生藥/ml)3.04g藥粉加蒸餾水至20ml離心，調pH為中性；中、低劑量對倍稀釋。
陽性藥婦寧片(0.0719mg/ml)1mg婦寧片加蒸餾水至14ml離心，調pH為中性。
洛氏液的配制稱取氯化鈉22.5g；氯化鉀1.05g；碳酸氫鈉0.5g；氯化鈣0.6g；葡萄糖2.5g(臨用時加)加蒸餾水至2500ml2.1.1.2 試驗前大鼠雌激素處理SD雌性未孕大鼠，體重200-220g，實驗前兩天，皮下注射己烯雌酚(0.1ng/kg)促情，待用。
2.1.1.3 試驗步驟實驗時用頸椎脫臼法處死大鼠，剖腹取出子宮，立即置于盛有洛氏液的平皿中，輕柔剝離附著于子宮壁上的結締組織和脂肪組織，取一側子宮角長約2cm，一端固定于浴槽中，另一端與張力傳感器相連，并使恒溫水浴保持工作，使溫度在37±0.5℃，通混合氣(氧氣95％+二氧化碳5％)(61-80個泡/min)。使子宮保持1g的張力，用MP-100多導生理記錄系統記錄子宮收縮情況，待子宮自發收縮穩定后，記錄一段正常收縮曲線，加入藥物，觀察記錄給藥后20min內子宮平滑肌收縮幅度、頻率和活力的變化。觀察結束后，用新鮮營養液沖洗5次，待子宮穩定，記錄一段正常收縮曲線后，再加入另一種藥物。通過MP-100數據采集器，連續記錄各參數，保存于計算機；實驗結束后，用該系統專用程序對張力、頻率、活力進行實時分析整理，其中活力＝張力×頻率。
2.1.2 試驗結果表5 內異痛經顆粒對正常大鼠子宮平滑肌收縮的影響(5min)劑量 樣本 張力減少值 頻率減少值活力減少值組別(g/ml) (個) (mm) (次/10min) (單位)對照組-- 100.02±0.110.1±0.32 0.66±1.93婦寧片0.072mg100.14±0.250.5±0.85 2.2±3.207內異痛經 1.3100.54±0.54** 0.95±0.89* 4.31±3.51*0.65 100.44±0.37** 1.1±0.876** 5.01±3.58**0.325 100.4±0.28** 0.7±0.82*4.52±4.71*與對照組相比 *p＜0.05 **p＜0.01
表6 內異痛經顆粒對正常大鼠子宮平滑肌收縮的影響(10min)劑量樣本 張力減少值 頻率減少值活力減少值組別(g/ml) (個) (mm) (次/10min)(單位)對照組 -- 100.05±0.13 0.1±0.32 0.77±1.71婦寧片 0.072mg 100.28±0.26* 0.75±0.95 3.59±3.39*內異痛經1.3 100.72±0.56** 1.1±1.13* 5.33±3.41**0.65100.57±0.43** 1.35±0.82** 5.98±3.21**0.325 100.56±0.36** 0.75±0.79*5.25±4.38**與對照組相比 *p＜0.05 **p＜0.01表7 內異痛經顆粒對正常大鼠子宮平滑肌收縮的影響(20min)劑量樣本 張力減少值 頻率減少值 活力減少值組別(g/ml) (個) (mm) (次/10min)(單位)對照組--100.06±0.06 0±00.31±0.3婦寧片0.072mg 100.62±0.38** 1.3±0.95** 6.33±3.94**內異痛經 1.3 101.06±0.65** 1.7±1.23** 7.82±4.56**0.65 100.73±0.45** 1.55±0.86**7.02±3.32**0.325 100.65±0.41** 1.2±0.98** 6.46±4.44**與對照組相比 *p＜0.05 **p＜0.01由表5-7結果可見內異痛經顆粒三個劑量組對正常大鼠子宮平滑肌張力、頻率和活力在所觀察時間內均有明顯的抑制作用，張力減少、頻率減慢、活力降低。
2.2 內異痛經顆粒對縮宮素所致大鼠離體子宮平滑肌收縮的影響2.2.1 實驗方法2.2.1.1 藥物配制同前。
2.2.1.2 試驗前大鼠雌激素處理同前。
2.2.1.3 試驗步驟實驗時用頸椎脫臼法處死大鼠，剖腹取出子宮，立即置于盛宮素0.6ml(0.1u/ml)，并記錄子宮活動，縮宮素作用明顯時加入藥物，觀察給藥后藥物對縮宮素所致子宮收縮的影響。觀察結束后，用洛氏液沖洗5次，待子宮穩定，記錄一段正常收縮曲線后，再加入另一種藥物。
2.2.2 實驗結果由表8-10結果可見內異痛經顆粒三個劑量組對縮宮素所致大鼠子宮平滑肌張力增加、頻率加快和活力增強有明顯的抑制作用，在所觀察的時間內張力減少、頻率減慢、活力降低。
表8 內異痛經顆粒對縮宮素致大鼠子宮平滑肌收縮增強的影響(5min)劑量 張力減少值 頻率減少值 活力減少值組別樣本(個)(g/ml)(mm) (次/10min) (單位)對照組 -- 10 0.02±0.03 0±0 0.11±0.19婦寧片 0.072mg10 0.43±0.40* 0.8±0.79**5.45±4.83**內異痛經1.310 1.7±0.47** 1.1±0.84**9.09±3.76**0.65 10 1.32±0.91** 0.9±1.10* 9.24±4.14**0.325 10 1.16±0.5** 1.05±0.69** 10.4±3.49**與對照組相比 *p＜0.05 **p＜0.01表9 內異痛經顆粒對縮宮素致大鼠子宮平滑肌收縮增強的影響(10min)劑量 樣本 張力減少值頻率減少值 活力減少值組別(g/ml) (個) (mm) (次/10min)(單位)對照組 -- 10 0.06±0.060±00.36±0.44婦寧片 0.072mg10 0.67±0.36** 1.35±0.75**8.71±4.79**內異痛經 1.310 2.01±0.49** 1.75±0.92**11.3±5.24**0.65 10 1.66±1.15** 1.35±1.16**11.6±5.96**0.325 10 1.41±0.57** 1.45±1.0** 12.7±5.05**與對照組相比 *p＜0.05 **p＜0.01表10 內異痛經顆粒對縮宮素致大鼠子宮平滑肌收縮增強的影響(20min)劑量張力減少值 頻率減少值 活力減少值組別 樣本(個)(g/ml) (mm)(次/10min) (單位)對照組 -- 10 0.08±0.06 0±0 0.49±0.35婦寧片 0.072mg10 0.93±0.36**1.8±0.72** 11.2±4.57**內異痛經 1.310 2.33±0.61**3.4±1.97** 14±7.55**0.65 10 1.94±1.34**2.1±1.24** 14±6.69**0.325 10 1.8±0.82** 2±0.91**15.9±6.00**與對照組相比 *p＜0.05 **p＜0.013 抗炎作用3.1 內異痛經顆粒對大鼠棉球肉芽腫形成的影響[4]3.1.1 試驗方法3.1.1.1 動物與手術取230-260g SD雌性大鼠50只，腹腔注射3％戊巴比妥鈉0.ml/kg麻醉，常規消毒，沿腹中線切口，用止血鉗將20mg的高壓滅菌棉球，從切口處植入兩側腹股溝皮下，隨即縫合皮膚。
3.1.1.2 實驗分組及給藥將術后大鼠按體重隨機分為5組，模型對照組，陽性藥婦女痛經丸組，內異痛經顆粒高、中、低劑量組。模型對照組每天按10ml/kg給蒸餾水，其余各組給相應藥物，連續7天，第8天打開原切口，將棉球連同周圍結締組織一起取出，剔除脂肪組織，放烘箱37℃24小時，烘干，稱重。將稱得的重量減去棉球原重量即得肉芽腫重量，比較各組肉芽腫重量。
3.1.2 試驗結果 內異痛經顆粒三個劑量組均可明顯抑制大鼠棉球肉芽組織形成，對胸腺、脾等臟器指數無明顯影響(表11)。
表11 內異痛經顆粒對大鼠棉球肉芽腫形成的影響劑量 鼠數 芽組織 胸腺指數脾指數組別(g/kg) (只) (mg) (g/100g) (g/mg)對照組-- 1075.35±20.85 0.14±0.03 0.26±0.05痛經丸3.31055.20±16.81**0.16±0.03 0.27±0.05內異痛經 13.0 1053.85±17.00**0.15±0.03 0.24±0.026.51055.55±17.22**0.15±0.04 0.26±0.043.25 1060.25±22.83* 0.16±0.04 0.26±0.04注與對照組相比 *p＜0.05，**p＜0.013.2 內異痛經顆粒對大鼠子宮炎癥的影響3.2.1 試驗方法3.2.1.1 動物和手術取230-260g SD雌性大鼠50只，腹腔注射3％戊巴比妥鈉0.1ml/kg進行麻醉，常規消毒后，于腹正中線切口，暴露子宮，沿右側子宮角上1cm處做一橫切口，將一塑料管(管徑2mm，長0.5cm，重10mg，酒精消毒)放置于子宮內，與子宮切口縫合固定，以防脫落。傷口滴入青霉素0.1mg(溶于注射用水0.2m1中)，以防感染，縫合皮膚。
3.2.1.2 試驗分組及給藥將術后大鼠分為5組，模型對照組，陽性藥婦女痛經丸組，內異痛經顆粒高、中、低劑量組。模型對照組每天按10ml/kg給蒸餾水，其余各組給相應藥物，連續7天，第8天處死動物，取出兩側子宮，組織天平稱重，每鼠的右側子宮減去左側子宮重量，即為炎癥腫脹程度，計算各組腫脹度之均值與標準差，按公式求出給藥組的腫脹抑制率，以t檢驗進行統計。
3.2.2 試驗結果 內異痛經顆粒高、中劑量可抑制子宮炎癥模型大鼠子宮腫脹，具有抗子宮炎癥的作用(表12)。
表12 內異痛經顆粒對子宮炎癥模型大鼠子宮的影響組別 劑量(g/kg) 鼠數(只)腫脹度(g)腫脹率(％) 抑制率(％)對照組 -- 10 0.30±0.14 107.3 --婦女痛經丸 3.3 10 0.16±0.07* 48.99 54.35內異痛經顆粒13.0 10 0.14±0.07** 41.75 61.106.5 10 0.16±0.10* 46.22 56.933.25 10 0.22±0.10 64.81 39.61注與對照組相比 *p＜0.05，**p＜0.014 鎮痛作用4.1 內異痛經顆粒對醋酸所致小鼠疼痛反應的影響4.1.1 試驗方法選取健康雌性小鼠50只，體重為18-20g，分為5組，每組10只，對照組，陽性藥婦女痛經丸組，內異痛經顆粒高、中、低劑量組。每天灌胃1次，給藥組按20ml/kg給藥，對照組給予相同體積的蒸餾水，連續4d，末次給藥1.0h后腹腔注射0.6％醋酸溶液0.2ml/20g，5分鐘后觀察記錄小鼠15分鐘內扭體次數，以t檢驗進行統計學處理，并計算扭體抑制率。
4.1.2 實驗結果 由表13可見，內異痛經顆粒所試劑量均明顯減少醋酸致小鼠疼痛的扭體次數，具有較強的鎮痛作用。
表13 內異痛經顆粒對醋酸致小鼠疼痛的影響鼠數 抑制率組別 劑量(g/kg) 扭體數(次)(只)(％)對照組 -- 1029.5±9.57婦女痛經丸 6.81018.8±10.97* 36.3內異痛經顆粒26.0 1017.0±8.12** 42.413.0 1015.3±10.97**48.16.51016.0±11.3* 45.8注與對照組相比 *p＜0.05，**p＜0.014.2 內異痛經顆粒對縮宮素所致小鼠疼痛反應的影響4.2.1 試驗方法選取健康雌性小鼠50只，體重18-20g，隨機分為5組，每組10只，每天灌胃1次，對照組給予相同體積的蒸餾水，連續4d，末次給藥1h后腹腔注射縮宮素0.2u/只，觀察記錄各小鼠30min內扭體次數，比較各組的差異性。
表14 內異痛經顆粒對縮宮素致小鼠疼痛的影響劑量鼠數 扭體數 抑制率組別(g/kg)(只) (次) (％)對照組 -- 10 10.3±7.5婦女痛經丸 6.8 10 4.3±4.3*58.3內異痛經顆粒26.0 10 2.7±3.5*73.813.0 10 3.4±4.3*67.06.5 10 5.1±4.7 50.5注與對照組相比 *p＜0.05，**p＜0.014.2.2 試驗結果 由表14可見，內異痛經顆粒所試劑量均明顯減少縮宮素致小鼠疼痛的扭體發生數，高、中劑量與對照組相比有顯著性差異。
5. 內異痛經顆粒對小鼠出、凝血時間的影響5.1 內異痛經顆粒對小鼠凝血時間的影響5.1.1 試驗方法取體重18-22g健康雌性小鼠50只，按體重隨機分為5組，每組10只，空白對照組，陽性對照組宮血寧膠囊，內異痛經顆粒高劑量組、中劑量組、低劑量組，每天灌胃給藥1次，給藥組按20ml/kg給相應藥物，對照組給予同體積的蒸餾水，連續7d，末次給藥1h后，用毛細管插入鼠內眥靜脈叢，采血兩滴于玻片上，每隔10s用針頭挑一次，計算從采血到出現血凝絲時間，即為凝血時間，所得數據與對照組進行t檢驗。
5.1.2 試驗結果 內異痛經顆粒對小鼠凝血時間無明顯影響(表15)。
表15 內異痛經顆粒對小鼠凝血時間的影響組別 劑量(g/kg)鼠數(只) 凝血時間(秒)抑制率(％)對照組-- 10 155.0±73.7宮血寧0.28610 82.0±51.4* 47.1內異痛經 26.0 10 123±36.5320.613.0 10 137.0±84.1 11.66.5 10 132.0± 102.9 14.8注與對照組相比 *p＜0.05，5.2 內異痛經顆粒對小鼠出血時間的影響[9]5.2.1 試驗方法動物分組、給藥等同小鼠凝血時間實驗，末次給藥0.5h，分別以利剪將小鼠尾尖0.5cm處剪斷，血液自行流出后計時，每隔10s用濾紙吸去血滴一次，直至血液自行停止，計算出血時間，所得數據與對照組進行t檢驗。
5.2.2 試驗結果 內異痛經顆粒對小鼠出血時間無明顯影響(表16)。
表16 內異痛經顆粒對小鼠出血時間的影響組別 劑量(g/kg) 鼠數(只) 出血時間(秒) 抑制率(％)對照組 -- 10 135.0±97.7宮血寧 0.286 10 135.0±75.7 0內異痛經 26.0 10 102.0±90.6 24.413.0 10 73.0±36.8 45.96.510 122.0±66.3 9.56 內異痛經顆粒對幼鼠生殖器發育的影響[10]6.1 試驗方法將12-14g雌性幼小鼠隨機分為5組，每組10只，空白對照組，陽性對照組、雌二醇組(每周給藥2次，肌肉注射)、內異痛經顆粒高、中、低劑量組，每天灌胃給藥1次，空白對照組給同體積蒸餾水，連續14天，第15天將動物稱重，處死，摘取子宮和卵巢，剝離凈其周圍的結締組織，用組織天平稱重，計算臟器指數。
表17 內異痛經顆粒對幼鼠生殖器官發育的影響組別 劑量(g/kg)鼠數(只) 子宮指數(mg/100g)卵巢指數(mg/100g)對照組-- 1052.53±13.16 31.17±17.83雌二醇0.0015 1070.81±16.45* 51.60±19.16*內異痛經 26.0 1056.65±16.62 36.98±12.4213.0 1051.33±12.99 34.03±12.636.5 1052.52±9.82 33.50±12.006.2 試驗結果內異痛經顆粒對小鼠子宮和卵巢重量無明顯影響(表17)小結通過以上藥理實驗，表明內異痛經顆具有以下藥理作用1.對子宮內膜異位癥的影響 內異痛經顆粒不同程度的降低大鼠子宮內膜異位癥模型家兔和大鼠的全血粘度，抑制血清雌二醇增高，病理檢查結果表明，高、中劑量組明顯抑制子宮假腺體生成。2.對大鼠子宮平滑肌的影響 內異痛經顆粒對正常大鼠子宮平滑肌和縮宮素所致大鼠子宮平滑肌收縮增強均有不同程度的抑制作用。3.抗炎作用內異痛經顆粒可抑制子宮炎癥模型大鼠子宮內肉芽組織增生，對大鼠棉球肉芽組織生成亦有明顯的抑制作用。4.鎮痛作用 對乙酸及縮宮素所致小鼠扭體發生數均有明顯的抑制作用，有較強的鎮痛作用。5.內異痛經顆粒高劑量組小鼠出、凝血時間無明顯影響。6.內異痛經顆粒對幼鼠生殖器官發育無明顯影響。
以上結果表明內異痛經顆粒對動物子宮內膜異位癥有明顯的治療作用，可抑制子宮平滑肌收縮，并有明顯的抗炎和鎮痛作用，對小鼠出、凝血時間和幼鼠生殖器官發育無明顯影響。
實驗例2 毒性研究1、急性毒性試驗內異痛經顆粒以動物能耐受的最大濃度、最大體積的藥量一日內連續三次灌胃給予小鼠，共20只，雌性，最大給藥量為557.8g生藥/kg，相當于臨床用量的464.8倍。給藥后即刻觀察動物反應，并連續觀察7天。未發生死亡，動物體重均增加，肉眼觀察未見明顯毒性反應。為臨床安全用藥提供參考。2、長期毒性試驗大鼠分別灌胃給予內異痛經顆粒60.0、30.0、15.0g生藥/kg/d，(相當于人臨床用藥劑量的50.0、25.0和12.5倍)連續26周，停藥后觀察30天。對動物體重增長、進食量等一般情況無明顯影響，外周血象和肝、腎功能等十項生化指標均在正常范圍內波動，對重要臟器的重量、肉眼檢查均未見明顯變化，經組織病理學觀察亦未見有由于藥物所引起的明顯病理形態學改變。
實驗例3 臨床試驗病例來源本組觀察病例44例，均來源于北京中醫醫院婦科門診。其中33例為觀察組，中藥對照組(痛經寶顆粒)11例。
兩組年齡比較治療組年齡為20-46歲，平均年齡為33.42±4.17歲。
對照組年齡為20-44歲，平均年齡為33.18±7.04歲。
兩組病程比較治療組病程1-20年，平均7.82±3.43年。
對照組病程1-16年，平均5.83±2.82年。
兩組病情期別比較治療組I期患者13例，II期患者13例，III期患者4例，IV期患者3例。
對照組I期患者4例，II期患者4例，III期患者2例，IV期患者1例。
治療方法1、治療組內異痛經顆粒。2、對照組痛經定顆粒，每次4粒，每日4次。
服藥方法以上兩組藥均為經前10天服藥，連服14天。一個月經周期為一個療程，連續服用3個療程。(并可反復治療)統計學方法計量資料采用t檢驗，計算資料采用X2檢驗。等級資料采用Kidit分析。
結果兩組療效比較，見表一表1兩組子宮內膜異位組別 總例數 痊愈例％ 顯效例％ 有效例％無效例％ 愈顯率％ 總有效率％治療組 33 36.3(12/33) 42.4(14/33)15.1(5/33) 6.0(2/33)78.7 93.9對照組 11 18.11(2/11) 27.2(3/11) 9.0(1/11) 43.3(5/11) 45.4 34.3注本表中結果乃為包括多種臨床癥狀及B超結果等項目。
統計學結果兩組痊愈率比較X2＝34282 P＜0.05兩組愈顯率比較X2＝8.4068 P＜0.01表2治療前后痛經癥狀改善情況組別 例數療前評分 療后評分差值治療組3311.14±4.404.13±1.287.07±3.22對照組117.60±2.18 4.90±3.142.73±0.97統計學處理結果治療組織療前后評分比較P＜0.01對照組織療前后評分比較P＜0.01治療組與對照組評分改變的差之比P＜0.01表3 兩組治療前后B超監測結果比較→組別 例數 療前 療后→ 縮小值治療 154.17±1.02 2.92±0.811.32±0.05對照組7 3.65±0.86 3.27±0.830.34±0.27妊娠率治療組伴有不孕的14例，妊娠5例對照組伴有不孕的5例，無一例妊娠安全性檢查33例患者停藥后做肝、腎功能及尿便檢查均無異常。
下述實施例均能實現上述實驗例的效果。
實施例1顆粒劑當 歸260g 茜 草120g川 芎80g 三 七50g延胡索230g
牡 蠣350g杜 仲200g夏枯草230g野菊花300g車前子280g制法以上十味，當歸、川芎、三七、夏枯草和延胡索加10倍量60％的乙醇回流提取三次，每次2小時，濾過，合并濾液，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.15-1.20(50℃)的清膏。牡蠣先煎1小時后加入茜草等其余四味(車前子包煎)，煎煮三次，每次1小時，加水量為藥材量的10倍量，濾過，合并煎液，濃縮至相對密度為1.10-1.15(50℃)，加乙醇使醇濃度達70％，放置過夜，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度為1.15-1.20(50℃)，和上述醇提清膏合并，繼續濃縮至相對密度為1.25-1.30(50℃)，減壓干燥，粉碎成細粉，加入阿司帕坦10g，糊精適量，混勻，用85％乙醇制粒，干燥，制成顆粒1000g，即得。
功能與主治化瘀止痛，除濕散結。治療子宮內膜異位癥經期腹痛等的作用。用法與用量開水沖服，一次1袋，一日3次。
實施例2膠囊劑當 歸400g茜 草200g川 芎200g三 七200g延胡索300g牡 蠣500g杜 仲200g夏枯草400g野菊花400g車前子400g制法以上十味，當歸、川芎、三七、夏枯草和延胡索加10倍量60％的乙醇回流提取三次，每次2小時，濾過，合并濾液，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.15-1.20(50℃)的清膏。牡蠣先煎1小時后加入茜草等其余四味(車前子包煎)，煎煮三次，每次1小時，加水量為藥材量的10倍量，濾過，合并煎液，濃縮至相對密度為1.10-1.15(50℃)，加乙醇使醇濃度達70％，放置過夜，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度為1.15-1.20(50℃)，和上述醇提清膏合并，繼續濃縮至相對密度為1.25-1.30(50℃)，減壓干燥，粉碎成細粉，經常規工藝制成膠囊劑300粒，一次3粒，一日3次。
實施例3片劑當 歸250g茜 草100g川 芎150g三 七100g延胡索150g牡 蠣300g杜 仲100g夏枯草200g野菊花250g車前子250g制法以上十味，當歸、川芎、三七、夏枯草和延胡索加10倍量60％的乙醇回流提取三次，每次2小時，濾過，合并濾液，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.15-1.20(50℃)的清膏。牡蠣先煎1小時后加入茜草等其余四味(車前子包煎)，煎煮三次，每次1小時，加水量為藥材量的10倍量，濾過，合并煎液，濃縮至相對密度為1.10-1.15(50℃)，加乙醇使醇濃度達70％，放置過夜，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度為1.15-1.20(50℃)，和上述醇提清膏合并，繼續濃縮至相對密度為1.25-1.30(50℃)，減壓干燥，粉碎成細粉，經常規工藝制成片劑300片，一次3片，一日3次。
實施例4顆粒劑當 歸260g茜 草120g川 芎80g三 七50g延胡索230g參照實施例1的工藝制成顆粒劑。
實施例5膠囊劑當 歸260g茜 草120g川 芎80g三 七50g延胡索230g牡 蠣350g杜 仲200g夏枯草230g參照實施例2的工藝制成膠囊劑。
實施例6顆粒劑當 歸260g茜 草120g川 芎80g三 七50g野菊花300g車前子280g參照實施例1的工藝制成顆粒劑。
實施例7片劑當 歸260g茜 草120g川 芎80g三 七50g野菊花300g車前子280g杜 仲200g參照實施例3的工藝制成顆粒劑。
實施例8顆粒劑當 歸260g茜 草120g川 芎80g三 七50g 延胡索230g野菊花300g車前子280g參照實施例1的工藝制成顆粒劑。
實施例9膠囊劑當 歸450g茜 草250g川 芎150g 三 七240g 延胡索340g牡 蠣540g杜 仲250g夏枯草350g 野菊花350g 車前子360g制法以上十味，當歸、川芎、三七、夏枯草和延胡索加10倍量60％的乙醇回流提取三次，每次2小時，濾過，合并濾液，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.15-1.20(50℃)的清膏。牡蠣先煎1小時后加入茜草等其余四味(車前子包煎)，煎煮三次，每次1小時，加水量為藥材量的10倍量，濾過，合并煎液，濃縮至相對密度為1.10-1.15(50℃)，加乙醇使醇濃度達70％，放置過夜，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度為1.15-1.20(50℃)，和上述醇提清膏合并，繼續濃縮至相對密度為1.25-1.30(50℃)，減壓干燥，粉碎成細粉，經常規工藝制成膠囊劑300粒，一次3粒，一日3次。
實施例10片劑當 歸300g茜 草150g川 芎180g三 七150g延胡索150g牡 蠣300g杜 仲100g夏枯草200g野菊花250g車前子250g制法以上十味，當歸、川芎、三七、夏枯草和延胡索加10倍量60％的乙醇回流提取三次，每次2小時，濾過，合并濾液，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.15-1.20(50℃)的清膏。牡蠣先煎1小時后加入茜草等其余四味(車前子包煎)，煎煮三次，每次1小時，加水量為藥材量的10倍量，濾過，合并煎液，濃縮至相對密度為1.10-1.15(50℃)，加乙醇使醇濃度達70％，放置過夜，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度為1.15-1.20(50℃)，和上述醇提清膏合并，繼續濃縮至相對密度為1.25-1.30(50℃)，減壓干燥，粉碎成細粉，經常規工藝制成片劑300片，一次3片，一日3次。
實施例11口服液當 歸250g茜 草100g川 芎150g三 七100g車前子250g制法當歸、川芎、三七加10倍量60％的乙醇回流提取三次，每次2小時，濾過，合并濾液，回收乙醇并濃縮至相對密度為1.15-1.20(50℃)的清膏。茜草、車前子(車前子包煎)，煎煮三次，每次1小時，加水量為藥材量的10倍量，濾過，合并煎液，濃縮至相對密度為1.10-1.15(50℃)，加乙醇使醇濃度達70％，放置過夜，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至相對密度為1.15-1.20(50℃)，和上述醇提清膏合并，繼續濃縮至相對密度為1.10-1.15(50℃)，加入適量糖漿，純化水及適量其他輔料，制成1000ml，灌入10ml小瓶，即得。每次2支，每日3次。
實施例12顆粒劑的質量控制方法鑒別a.取本品5g，加醋酸乙酯-甲酸(9.5∶0.5)20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取當歸、川芎各2g，分別同法制成對照藥材溶液，再取阿魏酸對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以石油醚(30～60℃)—醋酸乙酯—冰醋酸(8.5∶1.5∶1)為展開劑，展開，取出，晾干，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與當歸、川芎對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。b.取本品2g，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml，再加鹽酸1ml，置水浴中加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚分2次提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取茜草對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以石油醚(60～90℃)-丙酮(4∶1.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以飽和氫氧化鈉溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。C.取本品10g，加入水飽和正丁醇25ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液轉移至分液漏斗中，用氨試液提取2次，每次25ml，棄去，取正丁醇層，置蒸發皿中，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取三七對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液，再取人參皂苷Rb1、Re、Rg1、三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述三種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以氯仿-甲醇-水(13∶7∶2)10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，于105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。d.取本品5g，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水溶解，加濃氨試液調至堿性，用乙醚提取2次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取延胡索對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液，再取延胡索乙素對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述溶液各2μl，分別點于同一用1％氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以正己烷—氯仿—甲醇(7.5∶4∶1)為展開劑，置以展開劑預飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，以碘蒸氣熏至斑點顯色清晰，日光下檢視，供試品色譜中在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。在空氣中揮盡板上吸附的碘后，置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點。e.取本品5g，加乙醇20ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣用石油醚(30-60℃)浸泡2次，每次15ml(約2分鐘)，傾去石油醚液，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取熊果酸對照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。照薄層色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI B)試驗，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以環己烷-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸(20∶5∶8∶0.5)為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，于100℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
含量測定照高效液相色譜法(中國藥典2000年版一部附錄VI D)測定。
色譜條件與系統適用性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以甲醇-1％冰醋酸(30∶70)為流動相；檢測波長320nm。理論板數按阿魏酸峰計算應不低于3000。對照品溶液的制備精密稱取阿魏酸對照品適量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得。供試品溶液的制備取裝量差異項下的本品約2g，研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加5％碳酸鈉溶液50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，(功率250W，頻率20kHz)，放置至室溫，再稱定重量，用5％碳酸鈉溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續濾液25ml，用鹽酸1-3ml調節PH至1-2后，再用乙醚萃取3次，每次30ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇定量轉移至5ml量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，用微孔濾膜(0.45μm)濾過，即得。測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得。本品每袋含當歸、川芎以阿魏酸(C10H10O4)計，不得少于0.90mg。
權利要求
1.一種治療子宮內膜異位癥的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物主要是由下述中藥組成的當 歸 50～1000重量份 茜 草 50～600重量份川 芎 10～500重量份 三 七 10～700重量份。
2.如權利要求1所述的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物主要是由下述中藥組成的當 歸 200～600重量份 茜 草 80～300重量份川 芎 50～300重量份 三 七 30～300重量份。
3.如權利要求1所述的中藥組合物，還可包含下述中藥中的一種或幾種延胡索 50～800重量份 牡 蠣 50～1500重量份杜 仲 50～600重量份 夏枯草 50～1000重量份野菊花 50～1000重量份 車前子 50～1000重量份。
4.如權利要求2所述的中藥組合物，還可包含下述中藥中的一種或幾種延胡索 100～400重量份 牡 蠣 150～700重量份杜 仲 100～300重量份 夏枯草 150～500重量份野菊花 150～500重量份 車前子 150～500重量份。
5.如權利要求4所述的中藥組合物，其特征在于該中藥組合物可由下述原料藥的配比組成當 歸 200～600重量份 茜 草 80～300重量份川 芎 50～300重量份 三 七 30～300重量份延胡索 100～400重量份 牡 蠣 150～700重量份杜 仲 100～300重量份 夏枯草 150～500重量份野菊花 150～500重量份 車前子 150～500重量份。
6.如權利要求5所述的中藥組合物的制備方法，其特征在于該方法為以上十味，當歸、川芎、三七、夏枯草和延胡索加5～20倍量20～90％的有機溶媒回流提取1～5次，每次1～5小時，濾過，合并濾液，回收溶劑并濃縮至30～80℃相對密度為1.10～1.38的清膏。牡蠣先煎0.5～3小時后加入茜草等其余四味，煎煮1～5次，每次0.5～3小時，加水量為藥材量的5～20倍量，濾過，合并煎液，濃縮至30～80℃相對密度為1.10～1.38，加乙醇使醇濃度達30～90％，放置12～84小時，濾過，濾液回收溶媒并濃縮至30～80℃相對密度為1.10～1.38，和上述醇提清膏合并，繼續濃縮至30～80℃相對密度為1.10～1.38，減壓干燥，粉碎成細粉，經過常規工序直接或間接加入藥學上可接受的賦型劑制成臨床可接受的片劑、口服液、膠囊、顆粒劑、注射劑中的任一劑型。
7.如權利要求6所述的中藥組合物的制備方法，其特征在于該方法中有機溶媒為乙醇、甲醇、氯仿、丙酮、乙酸乙酯中的任一種；車前子需包煎。
8.如權利要求7所述的中藥組合物的制備方法，其特征在顆粒劑的制備方法為以上十味，當歸、川芎、三七、夏枯草和延胡索加10倍量60％的乙醇回流提取三次，每次2小時，濾過，合并濾液，回收乙醇并濃縮至50℃相對密度為1.15-1.20的清膏。牡蠣先煎1小時后加入茜草等其余四味，煎煮三次，每次1小時，加水量為藥材量的10倍量，濾過，合并煎液，濃縮至50℃相對密度為1.10-1.15，加乙醇使醇濃度達70％，放置過夜，濾過，濾液回收乙醇并濃縮至50℃相對密度為1.15-1.20，和上述醇提清膏合并，繼續濃縮至50℃相對密度為1.25-1.30，減壓干燥，粉碎成細粉，加入阿司帕坦10重量份，糊精適量，混勻，用85％乙醇制粒，干燥，制成顆粒。
9.如利要求1-5所述的中藥組合物制劑的質量控制方法，其特征在于該方法中的鑒別方法包括如下鑒別中的一種或幾種a.取本發明顆粒劑5g，加8-11∶0.3-0.7醋酸乙酯-甲酸20ml，超聲處理20-35分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取當歸、川芎各2g，分別同法制成對照藥材溶液，再取阿魏酸對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以7-10∶1-3∶1-2石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與當歸、川芎對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；b.取本發明顆粒劑2g，加甲醇20ml，超聲處理25-40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml，再加鹽酸1ml，置水浴中加熱25-40分鐘，立即冷卻，用乙醚分1-3次提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取茜草對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以3-5∶1-3石油醚(60～90℃)-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，噴以飽和氫氧化鈉溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；c.取本發明顆粒劑10g，加入水飽和正丁醇25ml，超聲處理25-40分鐘，濾過，濾液轉移至分液漏斗中，用氨試液提取1-3次，每次25ml，棄去，取正丁醇層，置蒸發皿中，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取三七對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液，再取人參皂苷Rb1、Re、Rg1、三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以11-15∶6-9∶1-3氯仿-甲醇-水10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，于105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；d.取本發明顆粒劑5g，加甲醇50ml，超聲處理25-40分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水溶解，加濃氨試液調至堿性，用乙醚提取1-3次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取延胡索對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液，再取延胡索乙素對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各2μl，分別點于同一用1％氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以6-9∶3-5∶1-2正己烷-氯仿-甲醇為展開劑，置以展開劑預飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，以碘蒸氣熏至斑點顯色清晰，日光下檢視，供試品色譜中在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；在空氣中揮盡板上吸附的碘后，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；e.取本發明顆粒劑5g，加乙醇20ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣用石油醚(30-60℃)浸泡1-3次，每次15ml，1-3分鐘，傾去石油醚液，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取熊果酸對照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以20∶5∶8∶0.5環己烷-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，于100℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
10.如利要求9所述的中藥組合物制劑的質量控制方法，其特征在于顆粒劑的鑒別方法包括如下鑒別中的一種或幾種a.取本品5g，加9.5∶0.5醋酸乙酯-甲酸20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取當歸、川芎各2g，分別同法制成對照藥材溶液，再取阿魏酸對照品，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各5μl，分別點于同一以羧甲基纖維素鈉為黏合劑的硅膠G薄層板上，以8.5∶1.5∶1石油醚(30～60℃)-醋酸乙酯-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與當歸、川芎對照藥材及對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；b.取本品2g，加甲醇20ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水10ml，再加鹽酸1ml，置水浴中加熱30分鐘，立即冷卻，用乙醚分2次提取，每次20ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取茜草對照藥材0.5g，同法制成對照藥材溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各5μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以4∶1.5石油醚(60～90℃)-丙酮為展開劑，展開，取出，晾干，噴以飽和氫氧化鈉溶液，供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；C.取本品10g，加入水飽和正丁醇25ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液轉移至分液漏斗中，用氨試液提取2次，每次25ml，棄去，取正丁醇層，置蒸發皿中，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取三七對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液，再取人參皂苷Rb1、Re、Rg1、三七皂苷R1對照品，加甲醇制成每1ml各含1mg的混合溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述三種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以13∶7∶2氯仿-甲醇-水10℃以下放置過夜的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，于105℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；d.取本品5g，加甲醇50ml，超聲處理30分鐘，濾過，濾液蒸干，殘渣加水溶解，加濃氨試液調至堿性，用乙醚提取2次，每次10ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取延胡索對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液，再取延胡索乙素對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述溶液各2μl，分別點于同一用1％氫氧化鈉溶液制備的硅膠G薄層板上，以7.5∶4∶1正己烷-氯仿-甲醇為展開劑，置以展開劑預飽和的展開缸內，展開，取出，晾干，以碘蒸氣熏至斑點顯色清晰，日光下檢視，供試品色譜中在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點；在空氣中揮盡板上吸附的碘后，置365nm紫外光燈下檢視；供試品色譜中，在與對照藥材和對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光斑點；e.取本品5g，加乙醇20ml，加熱回流1小時，濾過，濾液蒸干，殘渣用30-60℃石油醚浸泡2次，每次15ml，2分鐘，傾去石油醚液，殘渣加乙醇1ml使溶解，作為供試品溶液；另取熊果酸對照品，加乙醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液；照薄層色譜法試驗，吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以20∶5∶8∶0.5環己烷-氯仿-醋酸乙酯-冰醋酸為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，于100℃加熱至斑點顯色清晰，供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，顯相同顏色的斑點。
11.如利要求1-5所述的中藥組合物制劑的質量控制方法，其特征在于該方法中的含量測定方法為照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統適用性試驗，用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以25-35∶60-80甲醇-1％冰醋酸為流動相；檢測波長320nm；理論板數按阿魏酸峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取阿魏酸對照品適量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本發明顆粒劑約2g，研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加5％碳酸鈉溶液50ml，稱定重量，超聲處理25-40分鐘，功率250W，頻率20kHz，放置至室溫，再稱定重量，用5％碳酸鈉溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續濾液25ml，用鹽酸1-3ml調節PH至1-2后，再用乙醚萃取3次，每次30ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇定量轉移至5ml量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得；測定法，分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本發明每單位量含當歸、川芎以阿魏酸計，不得少于0.85-1mg。
12.如利要求11所述的中藥組合物制劑的質量控制方法，其特征在于顆粒劑的含量測定方法為照高效液相色譜法測定；色譜條件與系統適用性試驗用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以30∶70甲醇-1％冰醋酸為流動相；檢測波長320nm；理論板數按阿魏酸峰計算應不低于3000；對照品溶液的制備精密稱取阿魏酸對照品適量，加甲醇制成每1ml含30μg的溶液，即得；供試品溶液的制備取裝量差異項下的本品約2g，研細，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加5％碳酸鈉溶液50ml，稱定重量，超聲處理30分鐘，功率250W，頻率20kHz，放置至室溫，再稱定重量，用5％碳酸鈉溶液補足減失的重量，搖勻，濾過，精密吸取續濾液25ml，用鹽酸1-3ml調節PH至1-2后，再用乙醚萃取3次，每次30ml，合并乙醚液，蒸干，殘渣加甲醇定量轉移至5ml量瓶中并稀釋至刻度，搖勻，用0.45μm微孔濾膜濾過，即得；測定法分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各5μl，注入液相色譜儀，測定，即得；本品每10克當歸、川芎以阿魏酸計，不得少于0.90mg。
全文摘要
本發明公開了一種治療子宮內膜異位所致的經期或經期前后腹痛、腰骶疼痛、下腹墜脹等婦科臨床常見病的中藥組合物及其制備方法。該組合物主要由當歸、茜草、川芎、三七等組成。該中藥組合物制備，經過科學的方法直接或間接加入藥學上可接受的賦型劑制成臨床可接受的劑型，包括片劑、口服液、膠囊、滴丸、顆粒劑、注射劑、凍干粉針和各種緩釋制劑等劑型。本組合物具有很好的化淤止痛，除濕散結，治療子宮內膜異位癥經期腹痛等的作用。
文檔編號A61K9/00GK1611231SQ20031010228
公開日2005年5月4日 申請日期2003年10月30日 優先權日2003年10月30日
發明者李亞政, 柴嵩巖, 任武賢, 馮偉, 衛銀波, 王輝軒, 李陽波 申請人:山西亞寶藥業集團股份有限公司