一種柴胡凍干粉針劑及其制備方法

專利名稱：一種柴胡凍干粉針劑及其制備方法
技術領域：
本發明屬中藥制藥技術領域，具體涉及一種柴胡凍干粉針劑及其制備方法。
背景技術：
柴胡為傘形科植物柴胡或狹葉柴胡的干燥根，有“北柴胡”和“南柴胡”之分，具有解表、退熱、疏肝解郁功能，主治感冒發熱，寒熱往來，胸肋腹痛等癥。柴胡中含有的揮發油及柴胡皂苷是其主要有效成分。在柴胡的多種制劑中，大部分為口服制劑。已有以柴胡經水蒸氣蒸餾制成的滅菌水溶液—柴胡注射液(部頒中藥十七冊)，其中以揮發油為主要有效成分，但其中揮發油濃度低，用藥劑量大，而未能達到預期的臨床效果。最重要的是，其制備方法制成的柴胡注射液中舍去了柴胡的另一大類有效成分—柴胡皂苷。柴胡皂苷有明顯的抗炎、解熱、鎮痛作用，它在柴胡的功能主治中發揮著重要的作用。藥理實驗研究表明柴胡皂苷可使熱刺法所致發熱家兔，1.5小時后體溫恢復正常或更低，隨后又上升至正常。柴胡揮發油對三聯菌苗致熱的家兔，有明顯的解熱作用。由此可以看出，柴胡所含的揮發油和皂苷分別對不同機理的發熱癥狀有著不同的治療作用，兩者相互補充，在疾病的治療中都不可缺少。
申請號為CN02137936.X的專利文獻制成了富含柴胡黃酮的組合物。其所用的藥材為柴胡的地上部分，這與《中國藥典》中柴胡的用藥部位根有著本質的區別，所含成分差別很大。
注射液對穩定性要求高，在攜帶、儲藏、運輸時容易破碎，帶來許多麻煩。
在資料檢索中未發現有關柴胡凍干粉針劑的任何報道。

發明內容
本發明的目的是公開一種富含活性成分、療效好、方便使用的柴胡凍干粉針制劑。
本發明的另一個目的是提供上述凍干粉針制劑的制備方法。
本發明通過以下技術方案實現。
一、制備方法(1)原料藥為柴胡；(2)取柴胡藥材，粉碎，加6-15倍量的水浸泡8-20小時后，經水蒸氣蒸餾6-10小時提取揮發油，將收集的揮發油緩慢加入HP-β-CD飽和水溶液中，50℃-60℃保溫條件下攪拌3小時，室溫下繼續攪拌5小時，冷藏過夜，過濾，60℃以下干燥，得到包合物；(3)將提取揮發油后煎煮液過濾，藥渣再加4-10倍量的水提取1-2小時；合并兩次煎煮液，靜置，過濾，濾液50℃濃縮至相對密度為1.23-1.27的浸膏，加乙醇使含醇量達70％-90％，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，高速離心，上清液過已處理好的非極性或弱極性大孔吸附樹脂柱，用3-5倍柱體積的水洗脫后，再用2-5倍柱體積60％-90％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物。
(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，濾過，加入凍干賦型劑，加注射用水至規定量，用葡甲胺調節pH值至4.0-7.0，灌裝，冷凍干燥，即得。
我們研究人員在柴胡凍干粉針劑的制備中，采用水蒸氣蒸餾法提取柴胡中的揮發油后，再用羥丙基倍他環糊精(HP-β-CD)進行包合。HP-β-CD為水溶性的包合物，用其包合的揮發油制成分粉針劑在溶液中溶解性好，注射時吸收好，生物利用度高，患者痛感小，易于被患者愉快的接受；而且用HP-β-CD對揮發油進行包合，使其在制備、貯藏、運輸的過程中不易被空氣氧化而變質，增加了揮發油的穩定性，提高了療效。水提液中含有大量的有效成分柴胡皂苷，我們利用皂苷可溶于水又可溶于醇的性質，采用經典的水提醇沉法在除去大量的雜質后，又用大孔吸附樹脂對皂苷進行了分離純化，使得水提物中主要有效成分柴胡皂苷a、d的含量大于25％。
二、含量測定分析1、高效液相色譜法測定柴胡制劑中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的含量1.1儀器與試藥 高效液相色譜儀包括LC-10ATvp型溶劑輸送泵，SPD-10ATvp型紫外可見檢測器(日本島津公司)；N2000色譜工作站(浙江大學智能信息工程研究所)；KQ3200型超聲波清洗儀(昆山市超聲儀器有限公司)，TGL-16G高速臺式離心機(上海安亭科學儀器廠)。色譜純乙腈(德國默克公司)；水為三蒸水(自制)；其它試劑均為分析純。柴胡注射液(漯河三匯藥業有限公司)；本發明柴胡凍干粉針劑(北京乾露春科技有限公司實驗室提供)；柴胡皂苷a對照品和柴胡皂苷d對照品(中國藥品生物制品檢定所)。
1.2色譜條件與系統適用性試驗 色譜柱迪馬公司C18柱(5μm，250mm×4.6mm，I.D)；流動相乙腈-水(50∶50)；流速1.0ml/min；檢測波長203nm；理論板數按柴胡皂苷a峰記算應不低于3000。
1.3對照品混合溶液配制 精密稱取柴胡皂苷a對照品和柴胡皂苷d對照品各5.0mg，置10ml量瓶中，加入甲醇，超聲使溶解，再加甲醇至刻度，搖勻，即得。
1.4標準曲線制備 精密吸取上述對照品溶液1.0、2.0、4.0、6.0、8.0、10μl，在上述測定條件下進樣測定。結果表明，柴胡皂苷a和柴胡皂苷d在1.00μg～10.00μg范圍內進樣量與峰面積呈良好線性關系，線性方程分別為Y＝587483X+50138，r＝0.9998；Y＝604937X+48726，r＝0.9999；
1.5供試品溶液的制備 取本品內容物，精密稱定，取約0.5g，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇20ml，稱定重量，超聲處理40min，放冷，再稱定重量，用甲醇補足減失的重量，搖勻，離心(12000rpm)10min，取上清液過濾，取續濾液，即得。
1.6測定法 精密吸取供試品溶液各10μl，注入液相色譜儀，測定峰面積，用標準曲線計算含量。結果見表1。
表1 制劑中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量之和比較制劑中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量之和*組別(mg/支)柴胡注射液 -本發明柴胡凍干粉針劑22.7注-表示未檢測出。
以上制劑含量測定結果說明，柴胡注射液中未含有皂苷類有效成分，而本發明的柴胡凍干粉針劑由于采用新的制備方法，含有皂苷類有效成分。說明本發明的制備方法更加合理、更加科學、更具有實用性，制成的柴胡凍干粉針劑效果也一定會更好。
2、高效液相色譜法測定柴胡提取物中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的含量測定儀器、試藥及方法同上。柴胡提取物按上述制備方法所得，由北京乾露春科技有限公司提供。結果見表2。
表2 提取物中柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量測定柴胡皂苷a和柴胡皂苷d含量之和批號(％)1 27.42 25.83 28.3
4 26.5以上含量測定結果表明，本發明柴胡凍干粉針劑的提取物中主要有效成分柴胡皂苷a、d的含量之和高于25％。
三、藥理實施例1.柴胡制劑對二甲苯致小鼠耳腫脹的抑制作用取健康昆明種小鼠30只，體重20～24g。隨機分成對照組、柴胡注射液組、本發明柴胡凍干粉針劑組。每組10只，雌雄各半，分籠飼養。以人常規治療劑量折算為小鼠的劑量。折算公式為待測動物試用劑量＝已知動物給藥量×待測動物的體表面積比值/已知動物的體表面積比值。對照組給予蒸餾水，連續給藥7天，最后1次給藥后30分鐘，每只小鼠左耳前后兩面涂布二甲苯0.03ml致炎，30分鐘后頸椎脫臼處死動物，沿耳廓基線剪下兩耳，用9mm直徑打孔器分別在同一對稱部位打下圓耳片，扭力天平稱重，每鼠的左耳片重減去右耳片重量即為腫脹度，計算各組腫脹度之均值和標準差，并作t檢驗，比較組間差異性，按下列公式計算腫脹抑制百分率抑制率＝(對照組平均腫脹度-給藥組平均腫脹度)/對照組平均腫脹度×100％。結果見表2。
表2 柴胡制劑對二甲苯致小鼠耳腫脹的抑制作用(X±SD)鼠數耳腫脹率抑制率組別(只)(％)(％)對照組 10 15.74±2.88 -柴胡注射液組10 10.62±3.58*32.5本發明柴胡凍干粉針劑組 10 8.03±3.24*# 48.9注與對照組比較*P＜0.01；與柴胡注射液組比較#P＜0.01本發明柴胡凍干粉針劑和柴胡注射液對二甲苯致小鼠耳腫脹均有抑制作用(P＜0.01)；本發明柴胡凍干粉針劑和柴胡注射液相比，對二甲苯致小鼠耳腫脹也有顯著差異(P＜0.01)。說明本發明柴胡凍干粉針劑的藥理作用強于柴胡注射液。
2.熱板法鎮痛試驗水溫恒定在55±0.5℃，取預選合格的小鼠30只，隨機分3組。對照組、柴胡注射液組和本發明柴胡凍干粉針劑組。各組分別連續給藥7天，末次給藥后1h測量各小鼠的痛閾值。結果見表3。
表3 柴胡制劑熱板法鎮痛實驗(X±SD)鼠數痛閾值(s)組別(只)給藥前給藥后對照組10 16.47±5.36 17.57±4.63柴胡注射液組 10 16.83±4.75 23.27±5.38*本發明柴胡凍干粉針劑組10 17.34±4.62 29.15±5.54*#注與對照組比較*P＜0.01；與柴胡注射液組比較#P＜0.01本發明柴胡凍干粉針劑和柴胡注射液均能顯著增加小鼠的痛閾值(P＜0.01)；本發明柴胡凍干粉針劑和柴胡注射液相比，痛閾值提高也有顯著差異(P＜0.01)。說明本發明柴胡凍干粉針劑的藥理作用強于柴胡注射液。
以上藥理實驗證明，用新工藝制備的本發明柴胡凍干粉針劑具有更好的治療效果。
六、制備實施例實施例1(1)原料藥的處方為柴胡1200g；(2)取柴胡藥材，粉碎，加15倍量的水浸泡20小時后，經水蒸氣蒸餾10小時提取揮發油，將收集的揮發油緩慢加入HP-β-CD飽和水溶液中，50℃-60℃保溫條件下攪拌3小時，室溫下繼續攪拌5小時，冷藏過夜，過濾，60℃以下干燥，得到包合物15g；(3)將提取揮發油后煎煮液過濾，藥渣再加10倍量的水提取2小時；合并兩次煎煮液，靜置，過濾，濾液50℃濃縮至相對密度為1.27的浸膏，加乙醇使含醇量達70％，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，以12000轉/分的速度離心，上清液過已處理好的D101大孔吸附樹脂柱，用3倍柱體積的水洗脫后，再用5倍柱體積90％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物85g。
(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，濾過，加入聚乙烯吡咯烷酮200g，加注射用水至1000ml，用葡甲胺調節pH值至7.0，灌裝，冷凍干燥，即得本發明柴胡凍干粉針劑500支。
實施例2(1)原料藥的處方為柴胡800g；(2)取柴胡藥材，粉碎，加6倍量的水浸泡8小時后，經水蒸氣蒸餾6小時提取揮發油，將收集的揮發油緩慢加入HP-β-CD飽和水溶液中，50℃-60℃保溫條件下攪拌3小時，室溫下繼續攪拌5小時，冷藏過夜，過濾，60℃以下干燥，得到包合物6g；(3)將提取揮發油后煎煮液過濾，藥渣再加4倍量的水提取1小時；合并兩次煎煮液，靜置，過濾，濾液50℃濃縮至相對密度為1.23的浸膏，加乙醇使含醇量達90％，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，以20000轉/分的速度離心，上清液過已處理好的AB-8大孔吸附樹脂柱，用5倍柱體積的水洗脫后，再用2倍柱體積60％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物40g。
(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，濾過，加入甘露醇和葡聚糖254g，加注射用水至1000ml，調節pH值至4.0，灌裝，冷凍干燥，即得本發明柴胡凍干粉針劑500支。
實施例3
(1)原料藥的處方為柴胡1000g；(2)取柴胡藥材，粉碎，加10倍量的水浸泡12小時后，經水蒸氣蒸餾8小時提取揮發油，將收集的揮發油緩慢加入HP-β-CD飽和水溶液中，50℃-60℃保溫條件下攪拌3小時，室溫下繼續攪拌5小時，冷藏過夜，過濾，60℃以下干燥，得到包合物10g；(3)將提取揮發油后煎煮液過濾，藥渣再加8倍量的水提取2小時；合并兩次煎煮液，靜置，過濾，濾液50℃濃縮至相對密度為1.25的浸膏，加乙醇使含醇量達80％，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，以15000轉/分的速度離心，上清液過已處理好的D101大孔吸附樹脂柱，用4倍柱體積的水洗脫后，再用3倍柱體積80％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物65g。
(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，濾過，加入葡萄糖和果糖225g，加注射用水至1000ml，用葡甲胺調節pH值至6.0，灌裝，冷凍干燥，即得本發明柴胡凍干粉針劑500支。
實施例4(1)原料藥的處方為柴胡900g；(2)取柴胡藥材，粉碎，加8倍量的水浸泡18小時后，經水蒸氣蒸餾7小時提取揮發油，將收集的揮發油緩慢加入HP-β-CD飽和水溶液中，50℃-60℃保溫條件下攪拌3小時，室溫下繼續攪拌5小時，冷藏過夜，過濾，60℃以下干燥，得到包合物8g；(3)將提取揮發油后煎煮液過濾，藥渣再加6倍量的水提取1小時；合并兩次煎煮液，靜置，過濾，濾液50℃濃縮至相對密度為1.24的浸膏，加乙醇使含醇量達75％，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，以18000轉/分的速度離心，上清液過已處理好的NKA大孔吸附樹脂柱，用4倍柱體積的水洗脫后，再用4倍柱體積70％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物73g。
(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，濾過，加入右旋果糖和乳糖219g，加注射用水至1000ml，調節pH值至5.0，灌裝，冷凍干燥，即得本發明柴胡凍干粉針劑500支。
實施例5(1)原料藥的處方為柴胡1100g；(2)取柴胡藥材，粉碎，加12倍量的水浸泡16小時后，經水蒸氣蒸餾9小時提取揮發油，將收集的揮發油緩慢加入HP-β-CD飽和水溶液中，50℃-60℃保溫條件下攪拌3小時，室溫下繼續攪拌5小時，冷藏過夜，過濾，60℃以下干燥，得到包合物11g；(3)將提取揮發油后煎煮液過濾，藥渣再加9倍量的水提取2小時；合并兩次煎煮液，靜置，過濾，濾液50℃濃縮至相對密度為1.26的浸膏，加乙醇使含醇量達85％，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，以13000轉/分的速度離心，上清液過已處理好的D101大孔吸附樹脂柱，用5倍柱體積的水洗脫后，再用5倍柱體積75％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物52g。
(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，濾過，加入葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮和葡萄糖237g，加注射用水至1000ml，用葡甲胺調節pH值至6.5，灌裝，冷凍干燥，即得本發明柴胡凍干粉針劑500支。
實施例6(1)原料藥的處方為柴胡1050g；
(2)取柴胡藥材，粉碎，加9倍量的水浸泡10小時后，經水蒸氣蒸餾8小時提取揮發油，將收集的揮發油緩慢加入HP-β-CD飽和水溶液中，50℃-60℃保溫條件下攪拌3小時，室溫下繼續攪拌5小時，冷藏過夜，過濾，60℃以下干燥，得到包合物13g；(3)將提取揮發油后煎煮液過濾，藥渣再加7倍量的水提取2小時；合并兩次煎煮液，靜置，過濾，濾液50℃濃縮至相對密度為1.25的浸膏，加乙醇使含醇量達81％，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，以16000轉/分的速度離心，上清液過已處理好的D101大孔吸附樹脂柱，用3倍柱體積的水洗脫后，再用3倍柱體積82％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物67g。
(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，濾過，加入甘露醇、果糖和右旋果糖220g，加注射用水至1000ml，用葡甲胺調節pH值至5.5，灌裝，冷凍干燥，即得本發明柴胡凍干粉針劑500支。
肌內注射，一次1-2支，一日1-2次。
權利要求
1.一種柴胡凍干粉針劑，其特征在于它是由柴胡的揮發油HP-β-CD包合物6-15重量份、提取物40-85重量份和藥用輔料254-200重量份制備而成；其特征還在于提取物中柴胡皂苷a、d的重量百分含量之和大于或等于25％。
2.根據權利要求1所述的凍干粉針劑，其特征在于藥用輔料為凍干賦型劑，它是甘露醇、葡聚糖、聚乙烯吡咯烷酮、葡萄糖、果糖、右旋果糖和乳糖中的一種、兩種或幾種的混合物。
3.一種柴胡凍干粉針劑的制備方法，其特征包括以下步驟(1)原料藥為柴胡；(2)取柴胡藥材，粉碎，加6-15倍量的水浸泡8-20小時后，經水蒸氣蒸餾6-10小時提取揮發油，將收集的揮發油緩慢加入HP-β-CD飽和水溶液中，50℃-60℃保溫條件下攪拌3小時，室溫下繼續攪拌5小時，冷藏過夜，過濾，60℃干燥得到包合物；(3)將提取揮發油后煎煮液過濾，藥渣再加4-10倍量的水提取1-2小時；合并兩次煎煮液，靜置，過濾，濾液50℃濃縮至相對密度為1.23-1.27的浸膏，加乙醇使含醇量達70％-90％，靜置24小時，濾過，濾液減壓回收乙醇至無醇味，加水稀釋至溶液∶藥材為1∶1，高速離心，上清液過已處理好的大孔吸附樹脂柱，用3-5倍柱體積的水洗脫后，再用2-5倍柱體積60％-90％乙醇溶液洗脫，收集乙醇洗脫液，減壓濃縮，干燥，粉碎，得到提取物。(4)取上述包合物、提取物加注射用水溶解，濾過，加入凍干賦型劑，加注射用水至規定量，用葡甲胺調節pH值至4.0-7.0，灌裝，冷凍干燥，即得。
4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，醇沉時乙醇濃度優選為75％-85％。
5.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，醇沉時乙醇濃度最佳為79％-81％。
6.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，大孔吸附樹脂為非極性或弱極性。
7.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，大孔吸附樹脂優選為D101型。
8.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，洗脫大孔吸附樹脂的乙醇濃度優選為70％-85％。
9.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，洗脫大孔吸附樹脂的乙醇濃度最佳為75％-82％。
10.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，高速離心速度以12000-20000轉/分為宜。
全文摘要
本發明公開了一種柴胡凍干粉針劑及其制備方法。它是由柴胡的揮發油HP－β－CD包合物、提取物和藥用輔料制備而成。揮發油采用水蒸氣蒸餾法得到后，并用HP－β－CD進行包合，使其更加穩定，易于吸收，生物利用度提高；提取物采用水提醇沉、大孔吸附樹脂分離純化的方法獲得，其中的主要有效成分柴胡皂苷a、d的重量百分含量大于25％。本發明還公開了其制備方法。含量測定結果和藥理實驗結果說明，本發明含有的有效成分更全，藥理作用更強，具有更好的清熱解毒功效。
文檔編號A61P29/00GK1628834SQ20041007465
公開日2005年6月22日 申請日期2004年9月10日 優先權日2004年9月10日
發明者張平 申請人:張平