專利名稱：非免疫抑制劑2－哌啶酸衍生物在誘導軟骨形成分化中的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及FKBP型親免疫因子配體在誘導軟骨形成分化中的新用途。
背景技術：
某些免疫抑制劑2-哌啶酸衍生物對FKBP型親免疫因子如FK506具有親和力，可用于誘導軟骨形成分化(WO00/74665)。
WO96/40140披露了某些對FKBP型親免疫因子具有親和力的非免疫抑制劑2-哌啶酸衍生物，具有刺激受損周圍神經生長或促進神經元再生的活性。
下文中提及的化合物(1)，在(WO89/05304)中被公開。并還已知其具有神經保護作用(WO01/05385)和高水平的神經營養活性和低水平的免疫抑制活性(WO02/053159)。
然而，現有技術中還沒有關于對FKBP型親免疫因子具有親和力的非免疫抑制劑2-哌啶酸衍生物能誘導軟骨形成分化的記載。
發明公開本發明的發明者發現對FKBP型親免疫因子具有親和力的非免疫抑制劑2-哌啶酸衍生物具有誘導軟骨形成分化的活性。
另外，本發明還提供了對FKBP型親免疫因子具有親和力的非免疫抑制劑2-哌啶酸衍生物在誘導軟骨形成分化中的新用途。
進一步而言，本發明提供了一種用于誘導軟骨形成分化的試劑，其中包括對FKBP型親免疫因子具有親和力的非免疫抑制劑2-哌啶酸衍生物。
更進一步而言，本發明提供了一種誘導軟骨形成分化的方法，其中包括對哺乳動物給藥所述對FKBP型親免疫因子具有親和力的非免疫抑制劑2-哌啶酸衍生物。
更進一步而言，本發明提供了一種預防或治療軟骨損傷的方法，其中包括對哺乳動物給藥所述對FKBP型親免疫因子具有親和力的非免疫抑制劑2-哌啶酸衍生物。
本發明“對FKBP型親免疫因子具有親和力的非免疫抑制劑2-哌啶酸衍生物”中優選的“FKBP型親免疫因子”是FKBP-12。它們的親和力可通過已知的結合測定法來評估。例如，可用WO02/053159，實施例5中記載的“與FKBP12的結合測定”來舉例說明。
“非免疫抑制劑2-哌啶酸衍生物”的免疫抑制活性可通過已知的試驗方法來評估。因此，例如，可用“三環化合物(I)對IL-2產生的抑制″(USP4,929,611的試驗12)或“混合淋巴細胞反應(MLR)”(WO02/053159，實施例5)來舉例說明。本發明中的“非免疫抑制劑2-哌啶酸衍生物”是指那些基本上沒有免疫抑制活性的“2-哌啶酸衍生物”。更具體而言，它們基本上不能抑制IL-2的產生。
作為“對FKBP型親免疫因子具有親和力的非免疫抑制劑2-哌啶酸衍生物”的優選實例，可用記載于WO96/40140中的化合物來舉例說明，它們的公開可在此引入作為參考。
更優選的“對FKBP型親免疫因子具有親和力的非免疫抑制劑2-哌啶酸衍生物”是具有下式的化合物(1)。
化合物(1)可以成鹽，其中包括常規的無毒和藥學上可接受的鹽，如其與無機或有機堿所成的鹽，特別是，堿金屬鹽如鈉鹽和鉀鹽，堿土金屬鹽如鈣鹽和鎂鹽，銨鹽和胺鹽如三乙胺鹽和N-芐基-N-甲胺鹽。
關于本發明中所用的化合物(1)，可以知道由于有不對稱碳原子(s)或雙鍵(s)，因而還可能存在構象異構體和一個或多個立體異構體，所述構象異構體和立體異構體均包括在本發明化合物(1)的范圍之內。進一步而言，化合物(1)可以成溶劑化物形式，其也包括在本發明的范圍之內。該溶劑化物優選包括水合物和醇合物。
本發明中所用的“對FKBP型親免疫因子具有親和力的非免疫抑制劑2-哌啶酸衍生物”可以以純化合物或化合物的混合物或優選在藥學賦形劑或載體中給藥。
本發明的藥物組合物可以以藥物制劑的形式，例如以固體、半固體或液體形式使用，其中含有本發明的大環內酯化合物作為活性成分，其與適于外部(局部)、腸內、靜脈、肌內或胃腸外給藥的有機或無機載體或賦形劑混合。活性成分可以是混合的，例如與通常無毒、藥學上可接受的載體混合制成片劑、丸劑、膠囊劑、滴眼劑、栓劑、溶液劑(例如鹽溶液)、乳劑、混懸劑(例如橄欖油)、軟膏劑和其它適于使用的形式。可以使用的載體有水、葡萄糖、乳糖、阿拉伯膠、明膠、甘露醇、淀粉糊、三硅酸鎂、滑石粉、玉米淀粉、角蛋白、膠體硅、土豆淀粉、尿素和其它適于在固體、半固體、液體制劑制備中使用的載體，另外還可添加助劑，可以使用穩定劑、增稠劑和著色劑和香料。藥物組合物中包括的有效量活性目標化合物足以在疾病的過程或情況下產生預期效應。
可以使用本發明方法治療的哺乳動物包括牲畜類哺乳動物如奶牛、馬等等，家畜類動物如狗、貓、鼠等等以及人類。
然而，“對FKBP型親免疫因子具有親和力的非免疫抑制劑2-哌啶酸衍生物”的治療有效劑量各不相同，其取決于每個需要治療的個體病患的年齡和情況，通常治療疾病給藥的活性成分的日劑量為大約0.0001-1000mg，，優選0.001-500mg和更優選0.01-100mg，通常給藥的平均單次劑量為大約0.001-0.01mg，0.2-0.5mg，1mg，5mg，10mg，50mg，100mg，250mg和500mg。人體長期給藥的日劑量在大約0.1-0.3mg/kg/day的范圍之內。
以下的實施例進一步更詳細的說明了本發明，但這些實施例不能被理解為是對本發明范圍的限制。
實施例1根據如下提及的方法評估化合物(1)在軟骨形成分化上的誘導活性。
(1)由RIKEN細胞庫(Tsukuba，Japan)提供的ATDC5細胞系在達爾伯克(氏)改良伊格爾(氏)培養基和添加了10％熱滅活胎牛血清(Intergen，Purchase，NY)的Ham′s F12培養基(Nikken BiomedicalLaboratory，Kyoto，Japan)為1∶1的混合物中生長。在這些條件下，ATDC5細胞保留了類軟骨祖細胞而且沒有表達出軟骨表型。
(2)將上述的ATDC5細胞接種到12-輪塑料培養基中，在培養基中的密度為1×105細胞/孔。4小時后，用含化合物(1)或環孢素A(CsA)的新鮮培養基代替培養基，并且培養持續24天，其中培養基每2或3天更換一次。在室溫下，細胞用甲醇固定并用溶于0.1M鹽酸中的0.1％阿辛藍(Sigma Chemical Co.，St。Louis，MO)染色16小時。隨后用蒸餾水洗滌細胞三次，在用6M胍-HCl(300μl/well)提取后，在620nm測定細胞結合的染料量。
結果用化合物(1)或CsA培養ATDC5細胞24田，測定粘蛋白量。
化合物(1)以濃度依賴方式(1-10000ng/ml)誘導軟骨細胞的分化。換句話而言，CsA不能誘導分化。結果顯示于附
圖1中。
上述結果表明“對FKBP型親免疫因子具有親和力的非免疫抑制劑2-哌啶酸衍生物”，如化合物(1)，能有效的用于預防或治療由外界傷害、炎性疾病、自身免疫疾病等等引起的軟骨損傷(如透明軟骨、纖維軟骨、彈性軟骨)。
更具體而言，本發明能有效的用于預防或治療軟骨細胞不足，如軟骨營養障礙、關節炎(如類風濕性關節炎、骨關節炎等等)、骨質疏松等等。
進一步而言，本發明的大環內酯類還能有效的用于組織，如結締組織(如軟骨組織)和/或骨組織的再生，本文中所引用的專利、專利申請和公開出版物均引入作為參考。
附圖簡述附圖1顯示了化合物(1)在ATDC5細胞的軟骨形成分化上的效果。
權利要求
1.一種誘導軟骨形成分化的方法，其中包括對哺乳動物給藥有效量的對FKBP型親免疫因子具有親和力的非免疫抑制劑2-哌啶酸衍生物以預防或治療軟骨損傷。
2.權利要求1的方法，其中對FKBP型親免疫因子具有親和力的非免疫抑制劑2-哌啶酸衍生物是具有下式的化合物(1)。
3.權利要求1的方法，其中軟骨損傷是軟骨細胞不足或骨質疏松。
4.權利要求1的方法，其中軟骨損傷是透明軟骨、纖維軟骨、彈性軟骨、軟骨營養障礙、類風濕性關節炎、骨關節炎或骨質疏松。
5.對FKBP型親免疫因子具有親和力的非免疫抑制劑2-哌啶酸衍生物在用于制備預防或治療軟骨損傷的藥物中的用途。
6.用于誘導軟骨形成分化的藥物組合物，其中含有對FKBP型親免疫因子具有親和力的非免疫抑制劑2-哌啶酸衍生物與載體或賦形劑的混合物。
7.一種商業化的包裝盒，其中包括含對FKBP型親免疫因子具有親和力的非免疫抑制劑2-哌啶酸衍生物的藥物組合物和與此相關的書面說明，其中書面說明陳述了所述對FKBP型親免疫因子具有親和力的非免疫抑制劑2-哌啶酸衍生物能夠或應該用于預防或治療軟骨損傷。
全文摘要
本發明提供的對FKBP型親免疫因子具有親和力的非免疫抑制劑2－哌啶酸衍生物能用于誘導軟骨形成分化。并公開了含有所述化合物的組合物。
文檔編號A61P19/10GK1756540SQ20048000593
公開日2006年4月5日 申請日期2004年3月1日 優先權日2003年3月4日
發明者西垣扶佐子, 宮田進 申請人:安斯泰來制藥有限公司