專利名稱：一種以裸花紫珠和血竭作為活性組合的藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及包含裸花紫珠和血竭的藥物組合物，具體地說是通過添加血竭而協同增強裸花紫珠有益效果的藥物組合物。
背景技術：
裸花紫珠(Callicarpa Nudiflora)系馬鞭草科植物裸花紫珠的葉，含有黃酮甙、縮合鞣酸、中性樹脂、酚類、多糖、羥基化合物及鎂、鈣、鐵鹽等。裸花紫珠可抑制毛細血管通透性，對早期的炎癥滲出、腫脹有明顯的抗炎性反應作用；同時可明顯縮短出、凝血時間，止血效果顯著；還能抑制多種細菌，可預防繼發性感染的發生；還具有保肝降酶作用，對HFRS引起的肝臟損害有預防和治療作用(王振華等，廣東藥學，1998，55-9；符建等，海南大學學報自然科學版，2002，20(2)154-157)。
裸花紫珠的藥用歷史悠久，具有很好的開發前景。遺憾的是，目前國內外對裸花紫珠化學成分及其活性的深入研究十分有限(參見任風芝等，天然產物研究與開發，2001，13(1)33-34)。孫書臣在CN1155437A中披露了包含天然膠原蛋白和裸花紫珠提取物組合物，該組合物是有止血、愈傷、抑菌抗感染和解毒療瘡的功效；張林文等在CN1092983A中公開了包含紫珠、益母草和烏藥的抗宮炎片。
中，其優勢難以得到有效發揮。例如，研究表明，裸花紫珠可有效治療由細菌感染引起的炎癥，但是對非細菌性感染引起的炎癥和/或復合型炎癥的效力相對不明顯。雖然有人曾在細胞水平上探討了裸花紫珠的藥理作用(謝彬等，廣東藥學院學報，1995，11(3)141-145)，但是迄今為止，沒有人對裸花紫珠與其它活性成分的組合效果提供科學的依據。
血竭，活血散瘀，定痛，止血生肌，斂瘡，治跌打腫痛，內傷瘀痛；外傷出血不止，瘰疬，臁瘡潰久等。另外，《血竭消炎止痛研究》(向金蓮，張路晗，程睿，時珍國醫國藥，2001，12(2)110～111)，作者描述了血竭的消炎止痛作用；《云南血竭的化學成分及其抗真菌活性》(王錦亮，李興從，江東福，云南植物研究，1995，24(3)171～173)作者描述了血竭的抗真菌的作用；《血竭的化學成分與臨床應用研究進展》(吳平，杜青云，海峽藥學，2000，12(2)1～2)描述了血竭的抗炎作用，作者提示血竭是一種“多環節作用”的抗炎藥物，但并沒有暗示或明確教導血竭與任何其它活性成分聯用的有益效果。至今尚未見有人闡述血竭與裸花紫珠聯合應用在臨床上的效應。
因此，本領域技術人員很容易理解、也迫切地希望開發出這樣的復配型藥物組合物；它能針對性地協同增強裸花紫珠之消炎解毒、收斂止血等主要功效，同時能夠對細胞感染引起的炎癥、尤其是非細菌性感染引起的炎癥或復合型復雜炎癥有效，并能縮短病程、降低并發癥的發生率，且施用方便，無不良反應，值得推廣應用。
發明內容
本發明的目的之一是提供一種以裸花紫珠和血竭作為活性成分，且兩者具有協同增效作用的藥物組合物。
本發明的另一目的是提供上述藥物組合物在制備用于預防或治療炎癥、出血性和/或病毒性肝炎相關疾病的藥物中的應用。
本發明的發明人對裸花紫珠及其作用機理進行了深入的研究，特別是通過對具有抗炎作用的特定活性成分的篩選和組方，有效地解決上述問題，在此基礎上的進一步研究即完成了本發明。
根據本發明的一方面，本發明提供了一種藥物組合物，包括治療有效量的裸花紫珠和血竭作為活性成分，其中活性成分的含量約為1-85％重量，優選為20-65％重量。在上下文中，所述裸花紫珠包括裸花紫珠的原粉或提取物，其中提取物包括水和/或醇提取物，也可以是其它特定溶劑(石油醚、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇)提取有效部位的提取物；所述血竭是指血竭本身及其提取物，包括水和/或醇提取物，也可以是其它特定溶劑(石油醚、乙醚、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇)提取有效部位的提取物；并且可以單獨地使用裸花紫珠和血竭的原粉或其用上述溶劑提取的提取物，也可以使用兩種組分的原粉與上述溶劑的提取物的混合物。例如，從工業化和經濟方面考慮，可采用以下提取工藝(1)裸花紫珠提取取裸花紫珠，干燥后粉碎成裸花紫珠粗粉，用3倍量的純化水煎煮提取3次，每次三十分鐘，合并提取液，趁熱濾過，濃縮成稠膏，加入4倍量的95％乙醇，充分攪拌，趁熱濾過，減壓回收乙醇，真空干燥，粉碎后過80目篩備用。
(2)血竭提取取血竭洗凈，用3倍量的95％乙醇浸泡提取3次，合并乙醇提取液，蒸出乙醇，加適量純化水溶解并過濾。用ADS-17樹脂吸附濾液，用適量純化水洗后以70％乙醇洗脫。濃縮洗脫液，真空干燥，粉碎后過80目篩備用。
經過大量實驗篩選，本發明人驚奇地發現，血竭能顯著增強裸花紫珠的有益效果，同時包含血竭和裸花紫珠的組合制品比目前市售產品有顯著的治療優點。先導性試驗表明，裸花紫珠與血竭的聯用表現出協同作用，顯著強于單獨施用這兩種單味藥物所產生的效力。同時，本發明人還驚奇地發現，二者不同配比(例如1∶10-10∶1)與效應之間的關系是非線性的。例如，在預期裸花紫珠為主效應的范圍內(例如抑菌作用)，藥效并不總是隨著裸花紫珠含量的增加而表現出更強的態勢；同樣地，在預期血竭為主效應的范圍內(例如對小鼠耳腫脹的抑制作用)，藥效也不總是隨著血竭含量的增加而增強，推測這可能與二者存在多靶點效應有關。尤其值得注意的是，在所有先導性藥理實驗中均發現了上述現象，這明顯不同于現有技術的教導(例如，陳玉祥等，湖南醫科大學學報，1995，20(5)431-433)。經過深入研究，進一步確定了本發明中裸花紫珠與血竭的重量比例為1∶10-10∶1，優選為1∶5-5∶1，更優選為1∶1。
根據本發明的另一方面，本發明提供了裸花紫珠與血竭聯用在預防或治療炎癥、出血和/或病毒性肝炎相關疾病中的應用。本發明首次創建性地提出聯合給予裸花紫珠與血竭能有效地治療和/或控制由于許多復雜原因造成的上述疾病，提供了一種新的治療方案作為現有技術的替代。所述疾病包括但不限于裸花紫珠已知能治療或預防的疾病種類，例如所述疾病包括感冒發熱、咽喉腫痛、咽喉炎、外耳道或皮膚癤腫、結膜炎、上呼吸道感染、急慢性扁桃腺炎、泌尿系感染、出血(例如鼻、呼吸道、消化道或泌尿生殖系統出血)、急慢性鼻炎、痔瘡、胃痛、急性黃疸、病毒性肝炎或燒燙傷。所述疾病也包括細菌感染和/或非細菌感染引起的炎癥，例如各種婦科炎癥乳腺炎、子宮頸炎、陰道炎(包括一般陰道炎、念珠菌陰道炎、滴蟲性陰道炎)、腸炎、菌痢、尿路感染、膽囊炎、下肢潰瘍、腳癬感染、皮膚濕疹、化膿性皮膚潰瘍。所述聯合給予包括順序施用分別包含裸花紫珠、血竭的制劑，還包括施用同時含有裸花紫珠和血竭的藥物制劑。
優選地，可將本發明藥物組合物制成口服、靜脈給藥的劑型，例如顆粒劑、片劑、膠囊劑、滴丸、小丸劑或注射劑。有利地，為了適應治療需求，還可制成供經皮或粘膜給藥的劑型，例如栓劑、氣霧劑或干粉吸入劑。另外，也可將本發明藥物組合物加到繃帶或紗布中供直接外用。
適于本發明上述劑型的活性成分可以是固、粉末或顆粒、液體形式。尤為有利的是，可采用微射流制粒機、氣流粉碎機等設備，以微晶纖維素、PVP、CMC或PEG等為分散劑，將裸花紫珠、血竭制成微米量級(1-75μm粒徑)、亞微米量級(100-500nm粒徑)或者更細的超細顆粒，以進一步提高其療效，減少給藥劑量(例如，約為常規粉末用量的20-80％，優選35-60％)。
具體實施例方式
實施例1藥效學試驗例材料藥物本發明裸花紫珠血竭復方片；裸花紫珠片，規格0.38g/片，海南中元藥業有限公司；血竭片，規格0.5g/片，海南國瑞堂制藥有限公司；阿司匹林片，焦作市化學制藥廠。各藥于臨用前以純化水溶解稀釋。
動物昆明種小鼠和SD大鼠，均由湖北省醫學動物中心提供；日本大白兔，由海南省試驗動物中心提供。合格證號小鼠19-082，大鼠19-083，家兔30-003。
1.對小鼠毛細血管通透性的影響小鼠90只，雌雄各半，體重18-22g，隨機分為8組(1)對照組(給予等容積蒸餾水)；(2)阿司匹林組0.2g/kg；(3)-(9)組分別給予血竭片、裸花紫珠片及不同配比的復方裸花紫珠血竭片2.0g/kg。各組每日PO給藥1次，連續3天，末次給藥后30min各鼠靜脈注射0.1％的伊文思蘭生理鹽水溶液10mL/kg，隨即每只給予0.6％的冰醋酸(HAC)生理鹽水0.2mL，15min后脫頸椎處死，每只小鼠用6mL生理鹽水數次沖洗腹腔并吸出洗滌液，合并后加生理鹽水至10mL，離心上清液于722分光光度計(590nm)測其光密度(OD)值。
表1 藥物對HAC所致小鼠腹腔毛細血管通性增加的影響(x±s)
a與對照組相比，p＜0.05；b與裸花紫珠片組相比，p＜0.05；c與血竭片組相比，p＜0.052.對二甲苯所致小鼠耳腫脹的影響小鼠分組及給藥同實驗1，于末次給藥后1h，給小鼠右耳滴以二甲苯0.05mL/只，左耳作對照，15min后處死動物，用直徑6mm的打孔器將雙耳同部位切下，在感量為1mg的精密分析天平上稱重，以左右耳片重之差，計出各組腫脹度，求出腫脹抑制率(％)，并比較組間差異。
表2藥物對小鼠耳腫脹的影響(n＝10)(X±S)
a與對照組相比，p＜0.05；b與裸花紫珠片組相比，p＜0.05；c與血竭片組相比，p＜0.053.對蛋清所致大鼠足跖腫的影響體重為150-180g的大鼠80只，雌雄各半，隨機分8組(1)對照組(給予等容積蒸餾水)；(2)阿司匹林組0.15g/kg；(3)-(8)組分別給予血竭片、裸花紫珠片及不同配比的復方裸花紫珠血竭片2.0g/kg。各組每日PO給藥1次，連續3天，于末次給藥后1h各組右后足墊皮下注射100％的新鮮蛋清0.05mL/只以致炎；測量致炎前后不同時間致炎的足跖關節以下的體積變化，以致炎前后體積差值為腫脹度，并進行組間比較。
表3藥物對蛋清所致大鼠足跖腫脹的影響(n＝10)(X±S)
a與對照組相比，p＜0.05；b與裸花紫珠片組相比，p＜0.05；c與血竭片組相比，p＜0.05實驗1-3的結果表明，裸花紫珠片和血竭片按1∶1配比制成復方后，其抗炎作用得到顯著增強，與血竭片及裸花紫珠片相比具有顯著性差異。另外四種配比在一定程度可增強其抗炎作用，但與血竭片、裸花紫珠片相比無顯著性差異。
4.體外抗菌效果實驗所用臨床分離菌株共計62株，均為長沙地區各大醫院的臨床分離菌株。每株細菌在實驗前經瓊脂平板分純，37℃過夜新鮮培養，做適當稀釋后用于實驗。采用瓊脂二倍稀釋法測定最低抑菌濃度(MIC)，結果見表4。
表4不同配比血竭裸花紫珠的體外MIC測定結果
結果表明，對于金黃色葡萄球菌、表皮葡萄球菌及大腸埃希菌，血竭片的抗菌作用較弱，但其與裸花紫珠1∶1配方的抗菌效果最佳，而2∶1、4∶1、1∶2、1∶4配比的復方片與裸花紫珠片的作用相似；對于沙門氏菌，1∶1、2∶1、4∶1配比的裸花紫珠血竭復方片抗菌效果相近，略強于血竭片、裸花紫珠片及1∶2、1∶4配比的復方片，血竭片的作用最弱。
5.解熱作用取家兔24只，室溫24℃，實驗前2d每天測肛溫4次，選體溫在39.0-39.8℃及每天體溫波動不超過0.3℃的動物供實驗用。實驗日晨測動物的基礎體溫后，隨機分成血竭浸膏-裸花紫珠片1.2g/kg、0.6g/kg和對照組(給予等體積0.5％羧甲基纖維素鈉溶液)共3組，每組8只，以傷寒Vi多糖菌苗按0.5ml/kg耳緣靜脈注射后分別按10ml/kg灌胃給藥1次，然后每隔1h測肛溫1次。
表5藥物對家兔傷寒Vi多糖菌苗所致家兔體溫升高的影響(n＝8)(X±S)
注t檢驗，與對照組比較，*p＜0.05結果表明，血竭-裸花紫珠片1.2g/kg、0.6g/kg和對照組體溫升高均于給予菌苗注射后第3h到達高峰，給藥組體溫分別為39.2±0.7℃和39.7±0.6℃，對照組體溫為41.2±0.7℃，表明血竭-裸花紫珠片對傷寒Vi多糖菌苗所致的家兔體溫升高具有一定的解熱作用。
6.鎮痛作用小鼠分組及給藥同實驗1，于末次給藥后30min予濃度為0.7％HAC生理鹽水0.1ml腹腔注射，觀察15min內動物扭體次數，與對照組比較組間差異。
表6 血竭-裸花紫珠片對冰醋酸所致的小鼠扭體的影響(n＝10)
注*與對照組比較結果表明，血竭-裸花紫珠片1.2g/kg、0.6g/kg和0.3g/kg三個劑量組均對冰醋酸所致的小鼠扭體有非常顯著的抑制作用。
7.對小鼠非特異性免疫功能(吞噬功能)的影響小鼠分組及給藥同實驗1，各組動物給藥7d后，尾靜脈按0.1ml/10g注入10％的印度墨汁后，于2min及10min眼眶取血20μl，加到4ml蒸餾水中溶解紅細胞，應用722型分光光度計(600nm)測定光密度(OD)值，以OD值與對照組比較組間差異。
結果表明，血竭-裸花紫珠片1.2g/kg、0.6g/kg和0.3g/kg三個劑量組均能明顯增強小鼠的非特異性功能。
表7血竭-裸花紫珠片對小鼠網狀內皮系統吞噬功能的影響(X±S)
注t檢驗，與對照組比較，*P＜0.05，**P＜0.018.對小鼠遲發型變態反應(DTH)的影響小鼠分組及給藥方法同實驗1，連續給藥5d，于給藥第3d尾靜脈注射羊紅細胞致敏，給藥第5d以羊紅細胞注射左側腳掌，同體積生理鹽水注射右側腳掌作對照。24小時后測量兩腳掌厚度，以兩者之差值與對照組比較組間差異。
表8血竭-裸花紫珠片對小鼠細胞免疫功能的影響(n＝10)
注*與對照組比較。
結果表明，血竭-裸花紫珠片1.2g/kg、0.6g/kg和0.3g/kg三個劑量組均能明顯提高機體的細胞免疫功能。
實施例2片劑
示例工藝取活性成分和乳糖置于V型混合器中混勻，過篩后加適量60％乙醇制粒，60℃干燥，加入硬脂酸鎂，充分混勻，壓片。所得片劑可進一步包衣。
實施例3注射劑
示例工藝取血竭提取物加到注射用水中，調節PH約為6.8-8.0，攪拌完全溶解。用注射用水溶解裸花紫珠提取物，然后加至血竭提取物溶液中。加入適量活性炭，加熱微沸30分鐘，除炭、精濾、灌封、滅菌，即得。
實施例4 注射用粉針
示例工藝取血竭提取物10g，加注射用水適量用碳酸鈉調節PH至8.0使溶解，取紫珠草提取物10g加注射用水溶解制成溶液，將紫珠草提取物水溶液加入血竭提取物溶液中加注射用水至1000ml，加入0.5％針用活性炭，加熱微沸30min，冷卻，除菌過濾，分裝1000支，即得。
實施例5 噴霧劑
示例工藝取裸花紫珠提取物5.0g，加純化水適量，調pH值7.5-8.0，使溶解，取血竭提取物5.0g，加純化水適量使溶解，合并上述兩溶液，加純化水到1000mL，混勻，灌裝。規格60ml/瓶。
實施例6栓劑
示例工藝取400g聚乙二醇6000、700g聚乙二醇1500，加熱至65℃使熔化，攪勻，作為基質，取裸花紫珠提取物50g，血竭提取物50g，加水適量，研磨成稠膏，攪拌下加入基質中，65℃保溫，攪勻，澆模，即得，規格1.2g/粒。
實施例7滴丸劑
工藝示例取PEG6000加熱熔融，加入裸花紫珠血竭提取物、泊洛沙姆和硬脂酸，待完全熔融后，攪拌下加入血竭提取物。將混合物滴入液體石蠟冷凝液中成丸。
權利要求
1.一種以裸花紫珠和血竭作為活性組合的藥物組合物，其特征在于，所述活性組分的含量為1～85wt％，其中裸花紫珠和與血竭重量比例為1∶10～10∶1。
2根據權利要求1所述的一種以裸花紫珠和血竭作為活性組合的藥物組合物，其特征在于，所述活性組分的重量含量為20～65％。
3.根據權利要求1或2所述的一種以裸花紫珠和血竭作為活性組合的藥物組合物，其特征在于，裸花紫珠和與血竭重量比例為1∶5～5∶1。
4.根據權利要求1或2所述的一種以裸花紫珠和血竭作為活性組合的藥物組合物，其特征在于，裸花紫珠和與血竭重量比例為1∶1。
5.根據權利要求1或2所述的一種以裸花紫珠和血竭作為活性組合的藥物組合物，其特征在于，是經口服、靜脈給藥、經皮或粘膜給藥的劑型。
6.根據權利要求1所述所述的一種以裸花紫珠和血竭作為活性組合的藥物組合物，其特征在于，制備用于預防或治療炎癥、出血性和/或病毒性肝炎相關疾病的藥物中的應用。
7.根據權利要求6所述的一種以裸花紫珠和血竭作為活性組合的藥物組合物，其特征在于，所述疾病包括感冒發熱，咽喉腫痛，咽喉炎，外耳道或皮膚癤腫，結膜炎，上呼吸道感染，急、慢性扁桃腺炎，泌尿系感染，鼻、呼吸道、消化道或泌尿生殖系統出血，鼻炎，痔瘡，胃痛，急性黃疸，病毒性肝炎或燒、燙傷。
全文摘要
本發明提供了一種包括1～85wt％的裸花紫珠和血竭、其中裸花紫珠和與血竭重量比例為1∶10～10∶1、且兩者具有協同增效作用的藥物組合物。本發明的藥物組合物可以是經口服、靜脈給藥、經皮或粘膜給藥的劑型。本發明還提供了所述藥物組合物在制備用于預防或治療炎癥、出血性和/或病毒性肝炎相關疾病的藥物中的應用。
文檔編號A61P9/14GK1660349SQ20051000198
公開日2005年8月31日 申請日期2005年1月17日 優先權日2005年1月17日
發明者吳磊 申請人:閆彬