專利名稱：番茄紅素脂質體及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種藥物的劑型，即番茄紅素脂質體及其制備方法。
背景技術：
番茄紅素是一種強抗氧化劑，具有猝滅單線態氧和清除自由基的生理功能，可以預防多種疾病的發生，具備很好的應用開發前景。然而由于它是一種脂溶性的類胡羅卜素，在水中不溶解，在光、熱氧的作用下很容易被氧化降解，這就大大限制其在食品、保健品、化妝品等領域中的應用，尤其是作為口服保健品，不利于人體的吸收和利用。脂質體是一種由脂質雙分子層組成，內部為水相的閉合囊泡，大小從幾十納米到幾十微米，在脂質體的水相和膜內可以包裹多種物質。有天然膜成分組成的脂質體，其脂質體膜的雙層結構原則上與天然細胞膜一樣，分散在水中時形成多層囊泡，而且每一層均為脂質雙分子層，各層之間被水相隔開，適合于生物體內降解。脂質體無毒性和無免疫性，作為藥物載體，具有靶向性，臨床使用，可減少藥物劑量，提高吸收效率，降低毒性等。
發明內容
本發明就是針對番茄紅素在實際應用中的局限性和脂質體作為藥物載體的優點，提供的一種番茄紅素的新劑型及其制備方法。
本發明番茄紅素脂質體是將番茄紅素溶入含卵磷脂、膽固醇的有機溶液，溶液的溶劑為乙醚或二氯甲烷、或三氯甲烷；以旋轉薄膜—超聲法制備而成。其原料質量比為番茄紅素∶膽固醇∶卵磷脂為1-5∶10-25∶100，番茄紅素脂質體由脂質雙分子層組成，內部為水相的閉合大單室囊泡，有效粒徑為0.7±0.05um，最大包封率為52.6％。其制備方法包括以下步驟a、將重量比0.1-0.25∶1的卵磷脂和膽固醇完全溶入有機溶劑乙醚、或二氯甲烷、或三氯甲烷；b、再溶入番茄紅素得到類脂質體，其中番茄紅素∶膽固醇∶卵磷脂的質量比為1-5∶10-25∶100，在25-35℃恒溫水浴條件下，以80-140r/min旋轉，減壓(0.02-0.06Mpa)揮發有機溶劑，在瓶壁上形成類脂薄膜；c、充N25-10分鐘，使溶劑完全除去，加入25-30℃水合介質含0.05％吐溫80或0.5-1％的五聚甘油酸酯PBS溶液(PH值7.3-7.4)，同時加入直徑為3-4mm的玻璃小珠，旋轉洗膜，將形成的類脂薄膜水合變成牛奶狀脂質體混懸液；d、將脂質體混懸液先水浴超聲10-20分鐘，再用探針式超聲分散10-15分鐘，在冷水條件下得番茄紅素脂質體，入棕色瓶，充N2密閉、4℃保存。
將上述脂質體混懸液，分別用普通生物顯微鏡、透射電鏡進行觀察；普通生物顯微鏡觀察，脂質體輪廓清晰，呈圓球狀囊形顆粒(見附圖1和附圖2)；透射電鏡采用磷鎢負染法進行，脂質體呈典型單室，其雙分子膜規整、均一、連續，呈橢圓形球體(見附圖3)。
取上述脂質體，經相應的水合介質稀釋后，用JI-1155型激光散射粒度測定儀測定脂質體的粒徑及分布，有效粒徑為0.7±0.05um(見附圖4)。
取0.5ml番茄紅素質體于10ml的離心管中，再加入4.5ml相應的水合介質，混勻后離心。離心條件為25℃，3500g，20分鐘，然后再用4000g，10分鐘，棄上清，下部沉淀為脂質體沉積，再加入5ml乙酸乙酯溶劑，萃取脂質體中的番茄紅素，然后進行液相色譜測定，得出脂質體中番茄紅素的含量，進而計算出番茄紅素脂質體的最大包封率為52.6％。
用差示掃描量熱法(differential scanning calorimetry，DSC)即DSC曲線(也稱為DSC熱分析相圖)考察本發明脂質體制備方法過程中結構的變化、藥物與脂質體的相互作用、表面活性劑對脂質體柔性的影響。
單一組分磷脂形成的脂質體DSC曲線上可發現2個特征不同的吸熱峰。前一吸熱峰峰形平緩且峰面積較小，來源于磷脂分子中極性端的熱運動，磷脂Lβ雙層結構轉變為雙Pβ稱為預相變。磷脂極性區結合其他分子特別極性物質會顯著影響預相變。后出現的吸熱峰稱為主相變，峰面積較大，來源于磷脂分子中碳氫鏈的熔融，結構中含有不飽和鍵會降低主Tm，增加碳鏈長度會提高主Tm，同樣，結合脂溶性物質主要影響主Tm。多組分磷脂形成的脂質體與單組分脂質體的熱轉變特征不相同。從熱分析相圖上可以反映出不同組分在脂質雙層中的均一狀態。如果兩種組分的結構相關較大，則影響體系的均一性，將會擴大相變半峰寬(ΔT1/2)，而且使峰形不對稱。如果主Tm消失，說明脂質體形成一種介于膠晶態與液晶態之間的一種狀態。當脂質體膜由兩種以上成分組成時，它們各自有特定的Tm，在一定的Tm環境下它們可以同時存在著不同的相(即液晶相及膠晶相)稱之為相分離，脂質體中添加不同物質，可誘導脂膜表面產生區塊結構，如藥物、表面活性劑等有可能影響脂質體膜的Tm變化。
以上結果顯示，本發明番茄紅素脂質體呈均一大單室型，有效粒徑0.7±0.05um，最大包封率52.6％。這就大大增加了番茄紅素的水溶性和穩定性，提高了藥物的生物利用率。
1、圖1和圖2分別是番茄紅素脂質體在生物光學顯微鏡下放大200倍和400倍的照片，可見脂質體輪廓清晰，呈圓球狀囊形顆粒，且在懸液中分布比較均勻。
2、圖3是番茄紅素脂質體在透射電鏡下放大20000倍的照片，可見脂質體雙分子膜規整、均一、連續，呈橢圓形微球體。
3、圖4是用激光散射粒度測定儀測試番茄紅素脂質體的粒徑分布結果，由圖中可看出脂質體的平均粒徑為1.22um，如果在脂質體的制備過程中延長超聲時間會進一步減小脂質體的粒徑，以符合應用需要。
4、圖5至圖7是番茄紅素脂質體各組成物質經過差示掃描量熱法(DSC)檢測后的相變過程。從圖中可看出卵磷脂的預相變溫度是45.20℃；膽固醇，卵磷脂，番茄紅素的主相變溫度分別為148.65℃、210℃和174.31℃。
5、圖8和圖9分別是空白脂質體和番茄紅素脂質體經過差示掃描量熱法(DSC)檢測后的相變過程。如圖所示，在空白脂質體(只含有膽固醇、卵磷脂)的DSC曲線上，其主相變溫度為98.96℃，而膽固醇、卵磷脂相變峰消失。提示，膽固醇和卵磷脂的結構發生了變化，二者的結合致使相變峰有了變化。而在番茄紅素脂質體的DSC曲線上，其相變峰只有一個，主相變溫度為99.62℃，說明脂質體中由于番茄紅素的加入，磷脂雙分子層結構的變化才導致其相變峰和主相變峰溫度發生變化。以上證據充分說明番茄紅素作為脂溶性物質，與脂質體中的磷脂雙分子層發生了結合。
具體實施例方式
實施例1，制備番茄紅素脂質體稱取適量膽固醇和卵磷脂(二者的質量比為0.1-0.25∶1)加入一定量的有機溶劑(乙醚或三氯甲烷或二氯甲烷，其中番茄紅素在二氯甲烷中溶解度最大)中，優選二氯甲烷。待完全溶解后將0.01-0.05g番茄紅素溶入其中，得類脂溶液；半該類脂溶液置于250ml磨口梨形燒瓶中，然后將梨形燒瓶置于25-35℃恒溫水浴中，用旋轉蒸發儀在轉速80-140r/min及減壓(壓力保持在0.02-0.06Mpa)的條件下揮發有機溶劑，使卵磷脂等成膜材料在燒瓶上形成均勻類脂薄膜，再向燒瓶中充N25-10min，使溶劑完全除去；向燒瓶中加入適量溫度為25-30℃水合介質含0.05％吐溫80或0.5-1％五聚二硬脂酸的PBS(PH＝7.3-7.4)溶液，同時加入直徑3-4mm的玻璃小珠，并在同溫度條件下用旋轉蒸發儀轉動洗膜，待形成的類脂薄膜水合變成牛奶狀脂質體混懸液；再將該脂質體混懸液采用水浴超聲(條件為25-30℃，工作10-20分鐘)以分散和均勻脂質體大小，然后再用探針式超聲波粉碎機(240HZ，即工作5s、間隙5s)超聲分散10-15min，減小脂質體的粒徑，同時在冷水浴條件下控制混懸液溫度在30℃左右，即得番茄紅素脂質體，置棕色瓶中，充N2，密閉，4℃貯存。
實施例2，制備番茄紅素脂質體稱取適量膽固醇和卵磷脂(二者的質量比為0.1-0.25∶1)加入二氯甲烷。待完全溶解后將0.03g番茄紅素溶入其中，得類脂溶液；半該類脂溶液置于250ml磨口梨形燒瓶中，同時加入直徑為3-4mm的玻璃小珠，然后將梨形燒瓶置于25-35℃恒溫水浴中，用旋轉蒸發儀在轉速80-140r/min及減壓(壓力保持在0.02-0.06Mpa)的條件下揮發有機溶劑，使卵磷脂等成膜材料在燒瓶壁及玻璃小珠上形成均勻類脂薄膜，再向燒瓶中充N25-10min，使溶劑完全除去；向燒瓶中加入適量溫度為25-30℃水合介質含0.05％吐溫80或0.5-1％五聚二硬脂酸的PBS(PH＝7.3-7.4)溶液，同時加入直徑3-4mm的玻璃小珠，并在同溫度條件下用旋轉蒸發儀轉動洗膜，待形成的類脂薄膜水合變成牛奶狀脂質體混懸液；再將該脂質體混懸液采用水浴超聲(條件為25-30℃，工作10-20分鐘)以分散和均勻脂質體大小，然后再用探針式超聲波粉碎機(240HZ，即工作5s、間隙5s)超聲分散10-15min，減小脂質體的粒徑，同時在冷水浴條件下控制混懸液溫度在30℃左右，即得番茄紅素脂質體，置棕色瓶中，充N2，密閉，4℃貯存。
權利要求
1.番茄紅素脂質體，其特征在于將番茄紅素溶入含卵磷脂、膽固醇的有機溶液，溶劑為乙醚、或二氯甲烷、或三氯甲烷，以旋轉薄膜—超聲法制備而成，其原料質量比為番茄紅素∶膽固醇∶卵磷脂為1-5∶10-25∶100，所說的番茄紅素脂質體由脂質雙分子層組成，內部為水相的閉合大單室囊泡，有效粒徑為0.7±0.05um，最大包封率為52.6％。
2.-種番茄紅素脂質體的制備方法，包括以下步驟a、將質量比0.1-0.25∶1的卵磷脂和膽固醇完全溶入有機溶劑，溶劑為乙醚、或二氯甲烷、或三氯甲烷；b、再溶入番茄紅素得到類脂質體，其中番茄紅素∶膽固醇∶磷脂的重量比為1-5∶10-25∶100，在25-35℃恒溫水浴條件下，以80-140r/min旋轉，減壓(0.02-0.06Mpa)揮發有機溶劑，在瓶壁上形成類脂薄膜；c、充N2 5-10分鐘，使溶劑完全除去，加入25-30℃水合介質含0.05％吐溫80或0.5-1％的五聚二硬脂酸PBS(PH＝7.3-7.4)溶液旋轉洗膜，將形成的類脂薄膜水合變成牛奶狀脂質體混懸液；d、將脂質體混懸液用水浴式超聲分散25-30℃，10-20分鐘，再用探針式超聲分散10-15分鐘，在冷水條件下得番茄紅素脂質體，入棕色瓶，充N2密閉、4℃保存。
3.根據權利要求2所述的番茄紅素脂質體，其特征在于所說的有機溶劑為二氯甲烷，其番茄紅素∶膽固醇∶磷脂的質量比為3∶15∶100。
全文摘要
本發明是番茄紅素的新劑型，即將番茄紅素溶入含卵磷脂、膽固醇的有機溶液，溶劑為乙醚、或二氯甲烷、或三氯甲烷，以旋轉薄膜—超聲法制備而成，其原料質量比為番茄紅素∶膽固醇∶卵磷脂為1－5∶10－25∶100，本發明番茄紅素質體由脂質雙分子層組成，內部為水相的閉合大單室囊泡，有效粒徑為0.7±0.05um，最大包封率為52.6％。本發明番茄紅素脂質體無毒性和無免疫原性，具有靶向性，臨床使用可減少藥物劑量，提高吸收效率，降低毒性，大大增加了番茄紅素的溶解度和穩定性，提高了生物劑利用率。
文檔編號A61P39/00GK1739524SQ200510012810
公開日2006年3月1日 申請日期2005年9月13日 優先權日2005年9月13日
發明者常彥忠, 田艷燕, 段相林 申請人:河北師范大學