乙酰膽堿酯酶抑制劑在制備治療糖尿病藥物中的應用的制作方法

專利名稱：乙酰膽堿酯酶抑制劑在制備治療糖尿病藥物中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及生物醫藥領域，具體地涉及乙酰膽堿酯酶抑制劑在制備治療糖尿病藥物中的應用。
背景技術：
糖尿病是一組常見的代謝內分泌病，為胰島素絕對缺乏或胰島素生物效應降低所致的慢性病，主要表現血糖增高、體重減輕、易并發感染(如肺結核病等)、動脈硬化、神經病等，世界衛生組織將糖尿病列為三大疑難病之一。全世界有糖尿病患者1.25億，我國的糖尿病患者已達4000萬。患病率隨人們生活水平的提高而增長。在中國13個地區總患病率為0.67％，大城市約1％左右，40歲以后患病率顯著升高。歐美國家患病率達3～6％。其慢性血管并發癥已成為人群死亡的重要原因之一。
按照1999年世界衛生組織的標準，糖尿病主要分為以下四種類型I型糖尿病，過去又稱胰島素依賴型糖尿病；II型糖尿病，過去又稱非胰島素依賴型糖尿病；妊娠期糖尿病；特異型糖尿病。
其中目前I型糖尿病患者只能依賴于外源性給予胰島素進行治療，但注射胰島素并不完全是生理性的治療，不像內生胰島素首先通過門靜脈進入肝臟，其劑量是人為掌握的，不可能準確適合生理的變化和需要。醫用胰島素有豬和牛的胰島素，其氨基酸成分與人胰島素不全相同，胰島素制劑還含有雜質，臨床使用后可發生過敏(皮疹等)，注射部位脂肪增生、萎縮，產生胰島素抗體和抗藥性等副作用。
目前治療II型糖尿病的藥物主要有兩大類一類是藥物不直接刺激胰島素分泌，但能改善胰島素敏感性，即胰島素增敏劑，這類藥物包括雙胍類，α-葡萄糖苷酶抑制劑，噻唑烷二酮類，主要作用是阻礙腸道吸收營養物質，減少肝糖原異生作用，促使胰島素與受體結合。另一類是藥物能直接刺激胰島素分泌，即胰島素促分泌劑，這類藥物包括磺酰脲類，如甲苯磺丁脲(甲磺丁脲、甲糖寧、D860)、氯苯磺酰丙脲(氯磺丙脲)、優降糖等，其主要作用是促進胰腺B細胞分泌胰島素，增加胰島素與受體的結合。
但是雙胍類藥物存在的問題有胃腸道副作用和乳酸性酸中毒。胃腸道副作用表現為惡心、口干、腹脹和腹瀉。乳酸酸中毒是指治療期間二甲雙胍積累，抑制肝臟有氧代謝，引起乳酸增多，血中乳酸積聚導致酸中毒。患者表現為乏力肌痛、呼吸困難、昏睡不醒、低血壓和頑固性心動過緩等癥狀，病死率高達50％。同樣磺酰脲類藥也具有一定的局限性，主要表現在1、治療失敗率高，10-15％新診斷的II型糖尿病患者對磺酰脲類藥物無效，30-35％的患者血糖有所控制，但仍屬于高血糖水平。初始治療有效的患者中，每年仍有5-10％的患者對此藥失去反應；2、引起體重增加，大多數體型肥胖的患者不能使用；3、刺激胰島素分泌可導致低血糖，血中胰島素水平過高，可能會導致心血管并發癥；4、經肝臟代謝、經腎臟和膽汁排泄，肝、腎功能不全的患者慎用，嚴重腎衰和妊娠婦女禁用。
綜上所述，本領域迫切需要開發可有效治療糖尿病的藥物。

發明內容
本發明提供了乙酰膽堿酯酶抑制劑制備治療糖尿病藥物中的應用。
本發明所涉及的乙酰膽堿酯酶抑制劑是指一類抑制乙酰膽堿酯酶活性的化合物，代表性的抑制劑包括(但并不限于)1，5-二[4-烯丙基二甲基銨苯基戊-3-酮]，十烴季銨，N，N，N-三甲基-鄰羥基苯胺，加拉碘銨，3，8-二氨基-5-[3-(二乙基甲基銨)丙基]-6-苯基菲啶，(±)-2-[(1-苯甲基-4-哌啶基)甲基]-5，6-二甲氧基-茚-1-酮，3-[1-(苯甲基)-4-哌啶基]-1-(2，3，4，5-四氫-1H-1-苯并氮雜卓-8-基)-1-丙酮，伊立替康，(S)-N-乙基-N-甲基-3-[(1-二甲基-氨基)乙基]苯基氨基甲酸酯，1，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚甲基氨基甲酸酯，1，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚-N-苯基氨基甲酸酯，1，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1-苯乙基-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-8-芐基-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1，8-二芐基-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，1，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1-苯乙基-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-8-芐基-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1，8-二芐基-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，±-5-[2-叔丁氨基-1-羥基乙基]-間位-苯撐二-二甲基氨基甲酸酯，N，N，N-三甲基-3-[(二甲氨基)甲酰氧基]苯胺，安貝氯銨，1-甲基-3-羥基吡啶翁二甲氨基甲酸酯，1-萘基甲基氨基甲酸酯，2-異丙氧基苯-N-甲基氨基甲酸酯，2，3-二氫-2，2-二甲基苯并呋喃-7-酚甲基氨基甲酸酯，鄰異丙苯基甲基氨基甲酸酯，間甲苯-N-甲基氨基甲酸酯，苯并咪唑-2-基氨基甲酸甲酯，9-氨基-1，2，3，4-四氫吖啶，7-甲氧基他克林，11-甲基-3-甲氧基-4α，5，9，10，11，12-六氫-6H-苯并呋喃[3α，2-ef][2]苯并氮雜-6-醇，(5R，9R，11E)-5-氨基-11-乙叉基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-甲撐環辛并(b)吡啶-2(1H)酮，7-甲基-5，6，9，10，11，12，13，14-八氫-5，11-四氫吡啶-5，9-甲撐環辛并(b)吡啶-2(1H)酮，12-氨基-3-氯-9-乙基-6，7，10，11-四氫-7，11-甲橋環辛[b]喹啉，12-氨基-3-氯-9-甲基-6，7，10，11-四氫-7，11-甲橋環辛[b]喹啉，N-[2-羥基-3-甲氧基-5-氯-亞芐基]-石杉堿甲，12-(2’-羧基-5’-甲氧苯基)-2，12-二羥基-十二烷-4-酮，O，O-二異丙基氟代磷酸酯，N-(磷酸甲基)甘氨酸，O，O-二甲基-(2，2，2-三氯-1-羥基乙基)磷酸酯，O，O-二甲基-O-(2，2-二氯)乙烯基磷酸酯，O，O-二甲基-O-對硝基苯基硫代磷酸酯，O，O-二甲基-S-(N-甲基氨基甲酰甲基)二硫代磷酸酯，O，O-二甲基-S-(N-甲基氨基甲酰甲基)硫代磷酸酯，O，O-二甲基-S-[2-(1，4-丁二酸二乙酯)基]二硫代磷酸酯，苯甲基磺酰氟，甲基磺酰氟，四異丙基焦磷酰胺，Fasciculin-I，Fasciculin-II以及它們的衍生物等。列舉化合物結構參見圖1。這些化合物都是已知的，可按照常規方法(如文獻和專利中報道的方法)合成或從市場上購買。
其中優選的抑制劑是(5R，9R，11E)-5-氨基-11-乙叉基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-甲撐環辛并(b)吡啶-2(1H)酮(huperzine A，石杉堿甲)乙酰膽堿酯酶抑制劑可以以由藥學上或生理學可接受的酸或堿衍生的鹽形式使用。這些鹽包括(但不限于)與如下無機酸形成的鹽如鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸、以及與有機酸形成的鹽，而有機酸則指乙酸、草酸、丁二酸、酒石酸、甲磺酸和馬來酸。其他鹽包括與堿金屬或堿土金屬(如鈉、鉀、鈣或鎂)形成的鹽，以酯、氨基甲酸酯或其他常規的“前體藥物”的形式(當以這種形式給藥時，在體內可轉化成活性部分)。
本發明所涉及的糖尿病包括I型糖尿病和II型糖尿病，其中優選為I型糖尿病。
本發明所依據的基本原理論糖尿病是一組異質性代謝疾病，其發病機制極為復雜，細胞凋亡是近年來注意的又一熱點。Bronwyn等(O′Brien BA，et al.Diabetes，1997，46750-757.〕研究發現胰島內凋亡的細胞為β-細胞。在I型糖尿病中，目前認為由于體內針對胰島β細胞自身反應性T、B淋巴細胞凋亡減少，使β-細胞受其攻擊而發生凋亡增多〔Eisenbarth GS.N Engl J Med，1986，211360-1368.〕，此外免疫活性細胞產生的細胞因子如IL-1、TNF以及烷化劑或NO也介導β-細胞凋亡〔Stassi G，Todaro M，et al.Diabetes，1996，45(Suppl)240A.〕。而II型糖尿病患者胰島β-細胞的胰淀粉樣多肽能誘導胰島β-細胞發生凋亡〔Ankarcrona M，et al.Exp Cell Res，1994，213172-177.)。在糖尿病的發生過程中，由于胰島β-細胞凋亡增加，使其功能降低，可能是導致糖尿病發生的機制之一。
乙酰膽堿酯酶(Acetylcholinesterase，AChE)除了具有快速地水解乙酰膽堿，終止膽堿能神經信號傳遞的功能外，在神經細胞的分化、遷移、突觸形成以及造血細胞和腫瘤細胞的增值與分化調控過程中具有重要作用(Small，DH.，Neurochem Int，1996，28453-483)。最近發現AChE還參與神經細胞凋亡過程(Yang Lei et al.，Neuroscience Res，2002，42261-268)。
雖然在糖尿病過程中β-細胞的凋亡起著主要的作用，但是一直沒有AChE在β-細胞凋亡過程中起作用的報道。本發明證實不僅在體內糖尿病模型而且在體外糖尿病模型中都能發現在β-細胞的凋亡中有AChE的表達，正常的胰腺切片中沒有發現AChE的活性，但是隨著糖尿病病情的加重，會出現越來越多的AChE的活性。同時本發明采用乙酰膽堿酯酶抑制劑能有效地治療糖尿病小鼠，改善其高血糖的癥狀。
在本發明中，使用如下定義本文中，術語“含有”表示各種成分可一起應用于本發明的藥物組合物。因此，術語“主要由...組成”和“由...組成”包含在術語“含有”中。
本文中，“藥學上可接受的”成分是適用于人和/或動物而無過度不良副反應(如毒性、刺激和變態反應)，即有合理的效益/風險比的物質。更佳地，“藥學上可被接受”是指不影響中樞乙酰膽堿酯酶抑制劑活性的無毒物質。
本文中，術語“安全有效量”指按本發明的方式使用時足以獲得需要的治療反應而無過度不良副反應(如毒性、刺激和變態反應)即有合理的效益/風險比的成分的量。顯然，具體的“安全有效量”因各種因素而異，如受治療的特殊病情、患者的身體條件、受治療的哺乳動物的種類、療程、同時進行的治療的種類(如果有的話)、所應用的具體制劑和化合物或其衍生物的結構。
本文中，“活性成分”包括乙酰膽堿酯酶抑制劑及其藥學上可接受的鹽。代表性的鹽包括(但并不限于)鈉鹽、鉀鹽、鋅鹽等。
在本文中，術語“乙酰膽堿酯酶抑制劑”包括乙酰膽堿酯酶抑制劑及其鹽。
本文中，“藥物載體”是用于將乙酰膽堿酯酶抑制劑傳送給動物或人的藥學上可接受的溶劑、懸浮劑或賦形劑。載體可以是液體或固體，可根據給藥方式而選擇的。
活性化合物本發明用于治療糖尿病的活性化合物是乙酰膽堿酯酶抑制劑。乙酰膽堿酯酶抑制劑是一類抑制乙酰膽堿酯酶活性的化合物，代表性的抑制劑包括(但并不限于)(±)-2-[(1-苯甲基-4-哌啶基)甲基]-5，6-二甲氧基-茚-1-酮、3-[1-(苯甲基)-4-哌啶基]-1-(2，3，4，5-四氫-1H-1-苯并氮雜卓-8-基)-1-丙酮、(S)-N-乙基-N-甲基-3-[(1-二甲基-氨基)乙基]苯基氨基甲酸酯、1，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚甲基氨基甲酸酯、9-氨基-1，2，3，4-四氫吖啶、11-甲基-3-甲氧基-4α，5，9，10，11，12-六氫-6H-苯并呋喃[3α，2-ef][2]苯并氮雜-6-醇、(5R，9R，11E)-5-氨基-11-乙叉基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-甲撐環辛并(b)吡啶-2(1H)酮、O，O-二甲基-(2，2，2-三氯-1-羥基乙基)磷酸酯、四異丙基焦磷酰胺、Fasciculin-I和Fasciculin-II以及它們的衍生物等。列舉化合物結構參見圖1。這些化合物都是已知的，可按照常規方法(如文獻和專利中報道的方法)合成或從市場上購買。
一種特別優選的抑制劑是(5R，9R，11E)-5-氨基-11-乙叉基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-甲撐環辛并(b)吡啶-2(1H)酮(huperzine A，石杉堿甲)乙酰膽堿酯酶抑制劑可以以由藥學上或生理學可接受的酸或堿衍生的鹽形式使用。這些鹽包括(但不限于)與如下無機酸形成的鹽如鹽酸、硫酸、硝酸、磷酸、以及與有機酸形成的鹽，而有機酸則指乙酸、草酸、丁二酸、酒石酸、甲磺酸和馬來酸。其他鹽包括與堿金屬或堿土金屬(如鈉、鉀、鈣或鎂)形成的鹽，以酯、氨基甲酸酯或其他常規的“前體藥物”的形式(當以這種形式給藥時，在體內可轉化成活性部分)。
劑量在本發明中，對乙酰膽堿酯酶抑制劑的劑量沒有特別限制，可用任何合適的劑量。糖尿病包括原發性和繼發性。在使用乙酰膽堿酯酶抑制劑治療糖尿病時，藥物的用量取決于疾病的性質、病程、輕重、藥物反應情況以及病人接受治療的情況等，最終由處方醫生決定給予病人多少劑量，一般可參考應用于AD患者的用量。
一般，合適的含量是乙酰膽堿酯酶抑制劑占藥物組合物總重量的0.01％-99％，較佳地0.1-90％。在治療糖尿病時，乙酰膽堿酯酶抑制劑的有效劑量范圍通常為0.005-50毫克/千克·天或更高，較佳地為0.01-5毫克/千克·天，更佳地為0.05-1毫克/千克·天。
劑量單元包括一種乙酰膽堿酯酶抑制劑化合物，或者多種乙酰膽堿酯酶抑制劑化合物所形成的混合物。劑量單元還可含有稀釋劑、填充劑、載體等。劑量單位是固體或凝膠形式，如丸劑、片劑、膠囊等，或者是液體形式，它們適合口服給藥、直腸給藥、局部給藥或腸胃外給藥、或者靜脈內給藥。
劑型本發明的經口給藥的固體組合物可采用片劑、丸劑、膠囊劑、散劑、顆粒劑、滴劑等形式。這些固體組合物中混合了1種或1種以上的活性物質和至少1種惰性稀釋劑，例如，乳糖、甘露糖醇、葡萄糖、羥丙基纖維素、微晶纖維素、淀粉、聚乙烯吡咯烷酮、瓊脂、果膠、硅鋁酸鎂、鋁酸鎂。還可按照常用方法使組合物中含有除了惰性稀釋劑之外的添加劑，例如，硬脂酸鎂等潤滑劑、纖維素乙醇酸鈣等崩解劑、乳糖等穩定劑、谷氨酸或天冬氨酸等助溶劑。如是片劑或丸劑，還可根據需要，在其外部包裹上蔗糖、明膠、羥丙基纖維素、羥丙基甲基纖維素鄰苯二甲酸酯等糖衣或胃溶性、腸溶性薄膜。
經口給藥的液體組合物包括藥劑上允許的乳濁劑、溶液劑、懸浮劑、糖漿劑、酏劑等，通常使用的惰性稀釋劑包括精制水、乙醇。該組合物中除了惰性稀釋劑之外，還可包含濕潤劑、懸浮劑等助劑，甜味劑、矯味劑、芳香劑和防腐劑。
非經口給藥的注射劑包括無菌水性或非水性溶液劑、懸浮劑和乳濁劑。水性溶液劑和懸浮劑中包含注射劑用蒸餾水及生理鹽水。非水溶性溶液劑和懸浮劑中包含丙二醇，聚乙二醇，可可脂、橄欖油、蓖麻油等植物油，乙醇等醇類，阿拉伯膠、吐溫80(商品名)等。這些組合物中還可包含等滲劑、防腐劑、濕潤劑、乳化劑、分散劑、穩定劑(例如，乳糖)、助溶劑(例如，谷氨酸、天冬氨酸)。用濾菌膜過濾上述組合物，再配合使用滅菌劑就可達到無菌的目的。然后，利用上述組合物制得無菌的固體組合物，在使用前用水或無菌注射用溶劑溶解就可加以利用。
可用于配制本發明口服劑型的、具體的藥學上可接受的載體和賦形劑例子，在美國專利No.3,903,297(1975年9月2日授予Robert)中有描述。用于制造本發明的有用劑型的技術和組合物，在下列文獻中有描述7種現代制劑(7ModernPharmaceutics).第9和10章(Banker & Rhodes編輯，1979)；Lieberman等人，藥物劑型片劑(Pharmaceutical Dosage FormsTablets)(1981)；和Ansel，藥物劑型導論(Introduction to Pharmaceutical Dosage Forms)2版(1976)。
治療方法治療方法可以是，治療糖尿病的任何合適有效方法。治療可以是口服給藥、直腸給藥、局部給藥、腸胃外給藥、靜脈內給藥。施用有效量藥物的方法還取決于待治療的糖尿病的癥狀和病情程度。據信，通過將乙酰膽堿酯酶抑制劑與合適的載體或稀釋劑一起配制，并通過口服、靜脈內、皮下或肌內給藥的腸胃外治療方法，是將化合物施用于溫血動物的優選方法。
本發明的乙酰膽堿酯酶抑制劑還可與其他治療和輔助治療糖尿病的物質聯用，以進一步提高治療效果。
本發明的主要優點在于乙酰膽堿酯酶抑制劑可非常有效地通過抑制乙酰膽堿酯酶達到阻止β-細胞凋亡的目的，從而保護了糖尿病病人的β-細胞，提高了胰島的功能。因此，乙酰膽堿酯酶抑制劑可有效地對糖尿病的進行治療，特別對I型的糖尿病患者更能提高療效。


圖1乙酰膽堿酯酶抑制劑化合物的化學結構圖。
11，5-二(4-烯丙基二甲基銨苯基)戊-3-酮1，5-bis(4-allyldimethylammoniumphenyl]-pentan-3-one，BW284c51，C25H38N2O2十烴季銨(decamethonium，C16H38N2)3N，N，N-三甲基-鄰羥基苯胺N，N，N-trimethyl-O-hydroxyaniline，Edrophone，C9H14NO4加拉碘銨(gallamine，C30H60N3O3)53，8-二氨基-5-[3-(二乙基甲基銨)丙基]-6-苯基菲啶3，8-Diamino-5-[3-(diethylmethylammonio)propyl]-6-phenyl phenanthridiniumPropidium，C27H34N46(±)-2-[(1-苯甲基-4-哌啶基)甲基]-5，6-二甲氧基-茚-1-酮
(±)-2-[(1-benzylpiperidin-4-yl)methyl]-5，6-dimethoxy-indan-1-one，donepezil，C24H29NO373-[1-(苯甲基)-4-哌啶基]-1-(2，3，4，5-四氫-1H-1-苯并氮雜卓-8-基)-1-丙酮3-[1-(Phenylmethyl)-4-Piperidinyl]-1-(2，3，4，5-Tetrahydro-1H-1-Benzazepin-8-yl)-1-Propanone，TAK-147，C25H32N2O8伊立替康(Irinotecan，CPT11，C33H39N4O6)9(S)-N-乙基-N-甲基-3-[(1-二甲基-氨基)乙基]苯基氨基甲酸酯(S)-N-ethyl-N-methyl-3-[(1-dimethyl-amino)ethyl]phenylcarbamate，rivastigmine，C14H22N2O2101，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚甲基氨基甲酸酯1，2，3，3a，8，8a-hexahydro-1，3a，8-trimethylpyrrolo[2，3-b]indol-5-ol methylcarbamate，Physostigmine，C15H21N3O2111，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚-N-苯基氨基甲酸酯1，2，3，3a，8，8a-hexahydro-1，3a，8-trimethylpyrrolo[2，3-b]indol-5-ol-N-phenylcarbamate，Phenserine，C20H23N3O2121，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯1，2，3，3a，8，8a-hexahydro-1，3a，8-trimethylpyrrolo[2，3-b]indol-5-yl-N-4′-isopropylphenylcarbamate，Cymserine，C23H29N3O213(-)-(3aS)-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-3a，8-dimethyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo[2，3-b]indol-5-yl N-4′-Isopropylphenylcarbamate，N1-norcymserine，C22H27N3O214(-)-(3aS)-1-苯乙基-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-1-phenethyl-3a，8-dimethyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo[2，3-b]indol-5-yl N-4′-Isopropylphenylcarbamate，N1-phenethylnorcymserine，C30H35N3O215(-)-(3aS)-8-芐基-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-8-Benzyl-1，3a-dimethyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo[2，3-b]indol-5-yl N-4′-Isopropylphenylcarbamate，C29H33N3O216(-)-(3aS)-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-1，3a-Dimethyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo-[2，3-b]indol-5-yl N-4′-Isopropylphenylcarbamate，C22H27N3O217(-)-(3aS)-1，8-二芐基-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-1，8-Dibenzyl-3a-methyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo[2，3-b]indol-5-yl N-4′-Isopropylphenylcarbamate，C35H37N3O218(-)-(3aS)-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-3a-methyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo-[2，3-b]indol-5-yl N-4′-Isopropylphenylcarbamate，C21H25N3O2191，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯1，2，3，3a，8，8a-hexahydro-1，3a，8-trimethylpyrrolo[2，3-b]indol-5-ol-N-2′-Methylphenylearbamate，Tolserine，C21H25N3O220(-)-(3aS)-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-3a，8-dimethyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo[2，3-b]indol-5-yl N-2′-methylphenylcarbamate，N1-nortolserine，C20H23N3O221(-)-(3aS)-1-苯乙基-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-1-phenethyl-3a，8-dimethyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo[2，3-b]indol-5-yl N-2′-methylphenylcarbamate，N1-phenethylnortolserine，C28H30N3O222(-)-(3aS)-8-芐基-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-8-Benzyl-1，3a-dimethyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo[2，3-b]indol-5-yl N-2′-Methylphenylcarbamate，C27H29N3O223(-)-(3aS)-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-1，3a-Dimethyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo-[2，3-b]indol-5-yl N-2′-Methylphenylcarbamate，C20H23N3O224(-)-(3aS)-1，8-二芐基-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-1，8-Dibenzyl-3a-methyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo[2，3-b]indol-5-yl N-2′-Methylphenylcarbamate，C33H33N3O225(-)-(3aS)-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯(-)-(3aS)-3a-methyl-1，2，3，3a，8，8a-hexahydropyrrolo- [2，3-b]indol-5-yl N-2′-Methylphenylcarbamate，C19H21N3O226±-5-[2-叔丁氨基-1-羥基乙基]-間位-苯撐二-二甲基氨基甲酸酯±-5-[2-(tert-butylamino)-1-hydroxyethyl]-m-phenylene bis-dimethylcarbamate，bambuterol，C18H29N3O527N，N，N-三甲基-3-[(二甲氨基)甲酰氧基]苯胺N，N，N-trimethyl-3-[(dimethyl-amino)formyloxy]aniline，neostogmine，C12H19N2O228安貝氯銨(Ambenonium，C29H46Cl2N4O2)291-甲基-3-羥基吡啶翁二甲氨基甲酸酯1-methyl-3-hydroxy-pyridinium dimethylcarbamate，Pyridostigmine，C9H13N2O2301-萘基甲基氨基甲酸酯1-naphthyl methylcarbamate，sevin，carbaryl，C12H11NO2312-異丙氧基苯-N-甲基氨基甲酸酯2-isopropoxyphenyl-N-methylcarbamate，Propoxur，C11H15NO3322，3-二氫-2，2-二甲基苯并呋喃-7-酚甲基氨基甲酸酯2，3-dihydro-2，2-dimethylbenzofuranol-7-ol methylcarbamate，C12H15NO333鄰異丙苯基甲基氨基甲酸酯O-cumenyl methylcarbamate，isoprocarb，C11H15NO234間甲苯-N-甲基氨基甲酸酯meta-tolyl-N-methylcarbamate，C9H10NO235苯并咪唑-2-基氨基甲酸甲酯
benzimidazole-2-yl-amino formic acid methyl ester，C9H9N3O2369-氨基-1，2，3，4-四氫吖啶9-amino-1，2，3，4-tetrahydroacridine，Tacrine，C13H14N2377-甲氧基他克林(7-Methoxytacrine，C14H16N2O)3811-甲基-3-甲氧基-4α，5，9，10，11，12-六氫-6H-苯并呋喃[3α，2-ef][2]苯并氮雜-6-醇11-methyl-3-methoxy-4α，5，9，10，11，12-hexahydro-6H-benzofuran[3α，2-ef][2]benzoaza-6-ol，Galanthamine，C17H21NO339(5R，9R，11E)-5-氨基-11-乙叉基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-甲撐環辛并(b)吡啶-2(1H)酮或石杉堿甲5R，9R，11E-5-amino-11-ethylidene-5，6，9，10-tetrahydro-7-methyl-5，9-methylenecycloocta-(b)pyridine-2(1H)-one，Huperzine A，C15H18N2O407-甲基-5，6，9，10，11，12，13，14-八氫-5，11-四氫吡啶-5，9-甲撐環辛并(b)吡啶-2(1H)酮7-methyl-5，6，9，10，11，12，13，14-octahydro-5，11-tetrahydropyridine-5，9-methylenecycloocta-(b)pyridine-2(1H)-one，Huperzine B，C17H18N2O4112-氨基-3-氯-9-乙基-6，7，10，11-四氫-7，11-甲橋環辛[b]喹啉12-Amino-3-chloro-9-ethyl-6，7，10，11-tetrahydro-7，11-methanocycloocta[b]quinoline，Huperzine X，C18H19ClN2)4212-氨基-3-氯-9-甲基-6，7，10，11-四氫-7，11-甲橋環辛[b]喹啉12-Amino-3-chloro-9-methyl-6，7，10，11-tetrahydro-7，11-methanocycloocta[b]quinolineHuperzine Y，C17H17ClN2)43N-[2-羥基-3-甲氧基-5-氯-亞芐基]-石杉堿甲N-[2-hydroxy-3-methoxy-5-chloro-benzilidene]-huperzine A，ZT-1，C23H23ClN2O34412-(2’-羧基-5’-甲氧苯基)-2，12-二羥基-十二烷-4-酮12-(2’-carboxy-5’-methoxyphenyl)-2，12-dihydroxy-dodeca-4-one，Sporotricolone，C20H31O645O，O-二異丙基氟代磷酸酯O，O-diisopropyl fluorophosphate，DFP，Isoflurophate，C6H14FO3P46N-(磷酸甲基)甘氨酸N-(Phosphonomethyl)glycine，glyphosate，C3H8NPO5
47O，O-二甲基-(2，2，2-三氯-1-羥基乙基)磷酸酯O，O-dimethyl-(2，2，2-trichloro-1-hydroxyethyl)phosphate，Metrifonate，Trichlorfon，Totalene，Higalfon，Pronto，C4H8Cl3O4P48O，O-二甲基-O-(2，2-二氯)乙烯基磷酸酯O，O-dimethyl-O-(2，2-dichlorovinyl)phosphate，DDVP，C4H7Cl2O4P49O，O-二甲基-O-對硝基苯基硫代磷酸酯O，O-dimethyl-O-paranitrobenzylthiophosphate，Parathion-methyl，Dalf，Folidol-M，C8H10NO5PS50O，O-二甲基-S-(N-甲基氨基甲酰甲基)二硫代磷酸酯O，O-dimethyl-S-(N-methylformamylmethyl)dithiophosphate，C5H12NO3PS251O，O-二甲基-S-(N-甲基氨基甲酰甲基)硫代磷酸酯，O，O-dimethyl-S-(N-methylformamylmethyl)thiophosphate，Omethoate，Folemate，C5H12NO4PS52O，O-二甲基-S-[2-(1，4-丁二酸二乙酯)基]二硫代磷酸酯O，O-dimethyl-S-[2-(1，4-diethyl succinate)]dithiophosphate53苯甲基磺酰氟(phenylmethanesulfonyl fluoride，PMSF，C7H7FO2S)54甲基磺酰氟(methanesulfonyl fluoride，MSF，CH3FO2S)55四異丙基焦磷酰胺tetraisopropylpyrophosphoramide，Iso-OMPA，C12H28N4O3P2S圖2.RIN-5F細胞凋亡檢測。AMTT檢測發現STZ使胰島素瘤細胞株RIN-5F的活性降低，且呈劑量依賴關系；B流式細胞儀檢測也發現隨著STZ濃度的增加，細胞凋亡率也增加。正常細胞大約有5％的凋亡率，而用10mM的STZ處理24h后，細胞凋亡率為52％；CDNA ladder電泳。Lane 1未加藥組，Lane 25mM STZ處理組，Lane3DNA marker，用5mM的STZ誘導RIN-5F細胞24h后，可以發現有明顯的DNA ladder現象。
圖3.RT-PCR檢測STZ處理下RIN-5F細胞中AChE表達。Lane 1未加藥組，Lane 25mM STZ處理組，Lane 310mM STZ處理組。STZ處理后，RIN-5F細胞開始表達AchE，而未加STZ處理的RIN-5F細胞不表達AchE。
圖4.在STZ誘導的RIN-5F細胞凋亡中AChE的檢測。A細胞乙酰膽堿酯酶化學染色的明視野影象，B同A一視野熒光影象，細胞用Hoechst 33258(藍色)染細胞核。凋亡細胞有著明顯的特征，比如染色質濃縮，甚至形成凋亡小體(箭頭所示)。乙酰膽堿酯酶化學染色和Hoechst33258陽性標記位置重合。說明在凋亡狀態下，乙酰膽堿酯酶是出現在細胞核內的。X400圖5.糖尿病模型小鼠胰島切片的乙酰膽堿酯酶化學染色。A正常小鼠x100STZ誘導的糖尿病模型小鼠不同時間點的胰島切片乙酰膽堿酯酶化學染色B第8天的胰島切片x100；C第15天的胰島切片x200；D第22天的胰島切片x200；E第29天的胰島切片x100；時間以第一次注射STZ為第0天起算；組織中棕黃沉淀表示乙酰膽堿酯酶的陽性。
圖6.體外乙酰膽堿酯酶抑制劑抑制RIN-5F細胞凋亡。
圖7.乙酰膽堿酯酶抑制劑對糖尿病模型小鼠血糖濃度的影響。
具體實施例下面結合具體實施例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明而不用于限制本發明的范圍。下列實施例中常用的實驗方法的具體步驟乙酰膽堿酯酶的化學染色切片或者細胞固定后，加上反應液(15ml 0.1M sodium phosphate pH6.0，10mgacetylthiocholine iodide，1ml 0.1M sodium citrate solution，2ml 30mM copper sulphatesolution，2ml 5mM potassium ferricyanide)，室溫反應4-8小時。反復洗滌中止反應后，組織切片用蘇木精復染20min，脫水封片。細胞用Hoechst 33258在37℃反應30min，顯微鏡觀察。
DNA ladder的抽取RIN-5F細胞用5mM的STZ處理24h后，收集細胞，加基因組提取液(50mM Tris-cl，PH8.0，100mM EDTA，1％SDS，100μg/ml蛋白酶K，1mM NaCl)，37℃反應16h，然后用酚一氯仿常規抽提，12000rpm離心10min。0.7體積的異丙淳沉淀，-70℃放置30min后，12000rpm離心30min。溶于20μl TE中，1.5％瓊脂糖電泳。
流式細胞儀檢測凋亡5×105的RIN-5F細胞處理后，200g離心10min后，用70％的冰乙醇固定30min，然后用碘化丙啶(PI)染液(75μg/ml PI，100mg/ml RNase A)4℃避光孵育30min。流式細胞儀585nm激發光檢測(FACS calibur，Becton Dickinson)至少10000個細胞。根據細胞的DNA含量計算出凋亡細胞的比例。
MTT反應MTT反應用于檢測細胞的活性。細胞稀釋到合適的濃度以200ul體積接種到96孔板中。培養24小時后進行誘導處理。待處理完畢后，再加入20ul(5mg/ml)的MTT，37℃4小時，最后每孔加入100ul溶液(20％ sodium dodecyl sulfate in 50％N，N-dimethylformamide，04％acetic acid，and 0.04N HCl)反應，待結晶溶解完全后，于590nm檢測。如果細胞活性高，則檢測值高，反之則低。
其它未注明具體條件的實驗方法，通常按照常規條件，例如Sambrook等人，分子克隆實驗室手冊(New YorkCold Spring Harbor Laboratory Press，1989)中所述的條件，或按照制造廠商所建議的條件實驗材料STZ(streptozotocin)，c2-ceremide，BW284c51，iso-OMPAMTT(3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-2，5-diphenyltetrazolium bromide)，和eserine購自Sigma(St.Louis，MO)公司。所有種類的二抗(包括熒光和HRP偶連的二抗)均購自SantaCruz(Santa Cruz，CA)公司。ECL試劑購自Santa Cruz(Santa Cruz，CA)公司。乙酰膽堿酯酶抗體單抗購自BD公司(BD Biosciences，Franklin Lakes，NJ)和中國北京軍事醫學科學院。多抗購自Santa Cruz(Santa Cruz，CA)公司。C57BL/6J小鼠來自中科院動物中心。
實施例1糖尿病模型的制備6-8周的C57BL/6J小鼠，常規飼養。STZ在注射之前，溶于0.1M的檸檬酸鈉緩沖液之中(PH4.5)，45mg/kg連續腹腔注射5天。用羅氏的血糖測試儀一周兩次檢測血糖。血糖濃度大于13.9mM(250mg/ml)的時候，認為糖尿病模型已經建立。
實施例2體外糖尿病模型中凋亡的β-細胞中AChE的表達
1.STZ在體外可以誘導RIN-5F細胞凋亡大鼠的胰島素瘤細胞株RIN-5F用1640培養基(15％小牛血清，1.0mM丙酮酸鈉，4.5g/l葡萄糖，10mMHEPES)在37℃，5％CO2培養。當細胞生長達70％密度時，用5mMSTZ，10mM STZ，15mM STZ誘導24h后，采用MTT法、流式細胞儀檢測和DNA ladder檢測凋亡。
結果用MTT法發現不同劑量的STZ可以使胰島素瘤細胞株RIN-5F的活性降低(圖2A)。16mM的STZ可以使細胞的活力降低到40％。流式細胞儀檢測也發現隨著STZ量的增多，凋亡的比率也增加。正常細胞大約有5％的凋亡率，而用15mM的STZ處理24h后，凋亡率可以增加到52％(圖2B)。用5mM的STZ誘導RIN-5F細胞24h后，可以發現有明顯的DNA ladder現象(圖2C)。
2.在STZ誘導的RIN-5F中有AChE的表達用RT-PCR的方法檢測在凋亡的RIN-5F細胞中乙酰膽堿酯酶mRNA水平的變化。從7×106RIN-5F細胞中用TRIzol(GIBCO)抽取總RNA，然后用Promega的隨機引物進行逆轉錄。接著用乙酰膽堿酯酶特異的引物進行PCR反應。使用的是PTC-100TM型PCR儀(MJ.Research INc.)。PCR循環由以下幾步組成變性94℃60see(第一步95℃5min)，退火65℃60sec，延伸72℃60sec(最后一步72℃10min)共30循環，得到440bp的條帶。
AChE的引物序列為forward primer(1)5’-CCGGAATTCCCGTGCCTCCACATTGACTTG-3’；reverse primer(2)5′-CCGGCTAGGTGCTATAGTGGTCGAACTGGTTCG-3′.β-actin的引物序列為forward primer(3)5′-AACGAGCGGTTCCGATGCCCTGAG-3′；reverse primer(4)5′-TG TCGCCTTCACCGTTCCAGTT-3′.
結果STZ處理后，RIN-5F細胞開始表達AchE，而未加STZ處理的RIN-5F細胞不表達AchE(圖3)。
3.在STZ誘導的RIN-5F細胞凋亡中AChE的檢測凋亡細胞有著明顯的特征，比如染色質濃縮，甚至形成凋亡小體。RIN-5F細胞用STZ處理，乙酰膽堿酯酶化學染色，然后用Hoechst 33258專一標記細胞核，顯微鏡觀察。
結果發現乙酰膽堿酯酶化學染色和Hoechst33258陽性標記位置重合。說明在凋亡狀態下，乙酰膽堿酯酶是出現在細胞核內的(圖4)。
實施例3糖尿病模型小鼠β-細胞中AChE的表達處死實驗小鼠后，胰腺用4％的多聚甲醛(PFA)溶液4℃固定24h，然后用30％蔗糖溶液浸泡12h，用OCT包埋后，10μM冰凍切片，然后乙酰膽堿酯酶化學染色。
結果在STZ誘導的糖尿病模型胰島切片中，β-細胞有明顯的AChE的活性的出現。在正常小鼠的胰腺切片中沒有AChE的陽性染色(圖5A)。相反，隨著糖尿病進程中β-細胞的凋亡以及淋巴細胞的浸潤(從第8天到第29天)，能夠發現AChE的特異染色出現在胰島周圍(圖5B-E)。特別是當糖尿病癥狀厲害的時候(從第22天到第29天)，β細胞的破壞已經相當嚴重，AChE的染色非常強烈(圖5D、E)。
實施例4.體外乙酰膽堿酯酶抑制劑抑制RIN-5F細胞凋亡RIN-5F細胞分別加入5mM STZ，10μM BW284c51，5mM STZ+10μM BW284c51，10μM Tacrine，5mM STZ+10μM Tacrine，同時設立RIN-5F細胞未加藥組作為陰性對照，處理24小時，然后流式細胞儀檢測凋亡率。
結果AChE的特異抑制劑BW284c51和Tacrine來檢測抑制AChE的活性對于凋亡的調節作用。我們發現兩種抑制劑都可以減少STZ所引起的RIN-5F的凋亡(圖6)。加入10μM的BW284c51后，可以使凋亡率從只加5mM的STZ的27％減少到10％(P＜0.01)，而加入10μM的Tacrine后，可以使凋亡率減少到17％。
實施例5.乙酰膽堿酯酶抑制劑對糖尿病模型小鼠的治療作用糖尿病模型小鼠，按下面分組進行藥物治療實驗STZ組；STZ+PBS組；STZ+1mg/kgTacrine組；STZ+0.25mg/Kg Huperzine A組；STZ+0.5mg/Kg Huperzine A組；所有藥物均為腹腔注射(1天兩次)，從STZ注射前一天開始注射，直至處死為止。自注射藥物開始，每隔4天空腹6h后，從小鼠尾端取血測血糖。
結果STZ+0.25mg/Kg Huperzine A、STZ+0.5mg/Kg Huperzine A兩組和STZ+1mg/kgTacrine組的血糖隨著時間的延長逐步下降，尤其是Huperzine A，在用藥30天后，小鼠的血糖已降至正常小鼠的水平，而STZ組和STZ+PBS組一直都維持高血糖，與給藥組之間存在著顯著地差異(P＜0.01)。(圖7)實施例6片劑的制備
處方(1000片)Huperzine A 200克羥丙基纖維素 700克纖維素乙醇酸鈣 100克制備方法將上述的物料，采用本領域常規的方法制備成為片劑，每片重量為1克，活性成份含量為0.2克。
數據統計用SigmaPlot軟件分析FACS的結果，所得分析結果以means±SE表示，Student′st-test和one-way ANOVA分析數據間的明顯差異，顯著性差異的標準P＜0.05。
權利要求
1.乙酰膽堿酯酶抑制劑在制備治療糖尿病藥物中的用途。
2.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的抑制劑選自下組1，5-二[4-烯丙基二甲基銨苯基戊-3-酮]，十烴季銨，N，N，N-三甲基-鄰羥基苯胺，加拉碘銨，3，8-二氨基-5-[3-(二乙基甲基銨)丙基]-6-苯基菲啶，(±)-2-[(1-苯甲基-4-哌啶基)甲基]-5，6-二甲氧基-茚-1-酮，3-[1-(苯甲基)-4-哌啶基]-1-(2，3，4，5-四氫-1H-1-苯并氮雜卓-8-基)-1-丙酮，伊立替康，(S)-N-乙基-N-甲基-3-[(1-二甲基-氨基)乙基]苯基氨基甲酸酯，1，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚甲基氨基甲酸酯，1，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚-N-苯基氨基甲酸酯，1，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1-苯乙基-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-8-芐基-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1，8-二芐基-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-4′-異丙基苯基氨基甲酸酯，1，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1-苯乙基-3a，8-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-8-芐基-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1，3a-二甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-1，8-二芐基-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，(-)-(3aS)-3a-甲基-1，2，3，3a，8，8a-六氫吡咯并[2，3-b]吲哚-5-基-N-2′-甲基苯基氨基甲酸酯，±-5-[2-叔丁氨基-1-羥基乙基]-間位-苯撐二-二甲基氨基甲酸酯，N，N，N-三甲基-3-[(二甲氨基)甲酰氧基]苯胺，安貝氯銨，1-甲基-3-羥基吡啶翁二甲氨基甲酸酯，1-萘基甲基氨基甲酸酯，2-異丙氧基苯-N-甲基氨基甲酸酯，2，3-二氫-2，2-二甲基苯并呋喃-7-酚甲基氨基甲酸酯，鄰異丙苯基甲基氨基甲酸酯，間甲苯-N-甲基氨基甲酸酯，苯并咪唑-2-基氨基甲酸甲酯，9-氨基-1，2，3，4-四氫吖啶，7-甲氧基他克林，11-甲基-3-甲氧基-4a，5，9，10，11，12-六氫-6H-苯并呋喃[3a，2-ef][2]苯并氮雜-6-醇，(5R，9R，11E)-5-氨基-11-乙叉基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-甲撐環辛并(b)吡啶-2(1H)酮，7-甲基-5，6，9，10，11，12，13，14-八氫-5，11-四氫吡啶-5，9-甲撐環辛并(b)吡啶-2(1H)酮，12-氨基-3-氯-9-乙基-6，7，10，11-四氫-7，11-甲橋環辛[b]喹啉，12-氨基-3-氯-9-甲基-6，7，10，11-四氫-7，11-甲橋環辛[b]喹啉，N-[2-羥基-3-甲氧基-5-氯-亞芐基]-石杉堿甲，12-(2’-羧基-5’-甲氧苯基)-2，12-二羥基-十二烷-4-酮，O，O-二異丙基氟代磷酸酯，N-(磷酸甲基)甘氨酸，O，O-二甲基-(2，2，2-三氯-1-羥基乙基)磷酸酯，O，O-二甲基-O-(2，2-二氯)乙烯基磷酸酯，O，O-二甲基-O-對硝基苯基硫代磷酸酯，O，O-二甲基-S-(N-甲基氨基甲酰甲基)二硫代磷酸酯，O，O-二甲基-S-(N-甲基氨基甲酰甲基)硫代磷酸酯，O，O-二甲基-S-[2-(1，4-丁二酸二乙酯)基]二硫代磷酸酯，苯甲基磺酰氟，甲基磺酰氟，四異丙基焦磷酰胺，Fasciculin-I，Fasciculin-II或其藥學上可接受的鹽。
3.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的乙酰膽堿酯酶抑制劑選自下組(±)-2-[(1-苯甲基-4-哌啶基)甲基]-5，6-二甲氧基-茚-1-酮；3-[1-(苯甲基)-4-哌啶基]-1-(2，3，4，5-四氫-1H-1-苯并氮雜卓-8-基)-1-丙酮；(S)-N-乙基-N-甲基-3-[(1-二甲基-氨基)乙基]苯基氨基甲酸酯；1，2，3，3a，8，8a-六氫-1，3a，8-三甲基吡咯并[2，3-b]吲哚-5-酚甲基氨基甲酸酯；9-氨基-1，2，3，4-四氫吖啶；11-甲基-3-甲氧基-4a，5，9，10，11，12-六氫-6H-苯并呋喃[3a，2-ef][2]苯并氮雜-6-醇；(5R，9R，11E)-5-氨基-11-乙叉基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-甲撐環辛并(b)吡啶-2(1H)酮；O，O-二甲基-(2，2，2-三氯-1-羥基乙基)磷酸酯；四異丙基焦磷酰胺；Fasciculin-I、或Fasciculin-II；以及藥學上可接受的鹽。
4.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的抑制劑是(5R，9R，11E)-5-氨基-11-乙叉基-5，6，9，10-四氫-7-甲基-5，9-甲撐環辛并(b)吡啶-2(1H)酮以及藥學上可接受的鹽。
5.如權利要求1-4所述的用途，其特征在于，所述藥物含有0.005-99重量百分比的乙酰膽堿酯酶抑制劑和藥學上可接受的載體。
6.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的糖尿病是I型糖尿病。
7.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的藥物為片劑、顆粒劑、或膠囊。
全文摘要
本發明涉及生物醫藥領域，具體地涉及乙酰膽堿酯酶抑制劑在治療糖尿病中的應用。所述的抑制劑包括所有能抑制乙酰膽堿酯酶活性具有治療糖尿病作用的化合物。本發明實驗結果表明，這類抑制劑具有抑制β－細胞凋亡，降低糖尿病模型小鼠血糖濃度的作用，能夠有效地治療或改善糖尿病癥狀。
文檔編號A61K45/00GK1709508SQ20051002712
公開日2005年12月21日 申請日期2005年6月24日 優先權日2005年6月24日
發明者郭禮和, 余路陽, 林波, 張學軍, 楊磊, 張寶 申請人:上海賽達生物技術研究中心有限公司