專利名稱：重樓皂苷化合物的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及兩種重樓皂苷化合物的應用，屬于中藥應用技術的開發領域。
背景技術：
本發明涉及的兩種重樓皂苷化合物是由中藥重樓(RHIAOMA PARIDIS)經乙醇提取，有機溶劑萃取，再經硅膠柱、SephadexLH20、制備液相分離純化得到的。中藥重樓為百合科重樓屬(Paris)植物云南重樓(Paris polyphylla Smith var.yannanensis)及七葉一支花(Paris polyphylla Smith var.chinensis(Franch.)Hara)的根莖，其味辛、苦、微辣，性微寒，有小毒，歸肝經。具有清熱解毒、消腫止痛、涼肝定驚之功效，用于臃腫、咽喉腫痛、毒蛇咬傷、跌打傷痛、涼風抽搐等癥，現代藥理作用表明該藥具有止血、祛痰和抑菌、鎮痛鎮靜、抗早孕殺滅精子、抗細胞毒等作用，在臨床應用于治療功能性子宮出血、神經性皮炎和外科炎癥以及治療腫瘤等，都有顯著的療效，重樓所含化學成分主要有甾體皂苷類，植物蛻皮激素及黃酮類物質，據報道從重樓中提取的皂苷類化合物可應用于胃粘膜的保護及免疫調節，但其抗癌活性未見報到。
發明內容
本發明的目的在于提供兩種重樓皂苷化合物的應用，用于治療癌癥。
本發明是通過下述技術方案加以實現的，由云南產云南重樓(Paris polyphylla Smithvar.yannanensis)經乙醇提取，有機溶劑萃取，再經硅膠柱、凝膠柱(SephadexLH20)、制備液相分離，得到化合物I，名稱為薯蕷皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷，和化合物II，名稱為偏諾皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷。經過MTT法活性試驗證明化合物I、II細胞生長抑制率分別達到86.03％、88.98％，IC50分別為0.40μg/ml、2.85μg/ml，其特征在于，該兩種化合物用于治療癌癥的藥物。
本發明的優點在于中藥重樓來源廣泛，從該植物中提取分離化合物I、II過程簡單，經過比較詳細的體外活性試驗證明化合物I、II具有很高的抗腫瘤活性，相對于中藥重樓本身，該兩種化合物結構清楚，可制備成各種不同劑型后用于治療癌癥具有廣闊的前景。
具體實施例方式
將5kg的云南產滇重樓分別用95％、60％乙醇加熱回流提取3次，兩部分提取液合并濃縮得到的浸膏加水分散，再分別用石油醚、乙酸乙酯萃取、將乙酸乙酯萃取物66g經硅膠柱層析氯仿甲醇梯度洗脫得到十三個部分，將第九個部分過sephadexLH20柱，然后用甲醇反復重結晶得到化合物I薯蕷皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷20mg，將第11個部分過sephadexLH20柱及制備液相得到化合物II偏諾皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷30mg。
將提取分離得到的化合物I、II做抗腫瘤活性試驗，其方法和結果如下一 抗腫瘤活性試驗方法1細胞株及培養小鼠肺腺癌LA795細胞株，為貼壁細胞，培養于含10％滅活胎牛血清，100U/mL青霉素，100μg/mL鏈霉素的RPMI1640培養基中，37℃，5％CO2培養箱及飽和濕度條件下培養，3-4天傳代一次。
2藥物抗腫瘤活性測定MTT法將對數生長期細胞用胰酶消化后配制成濃度為3×105個/mL的細胞懸液，接種于96孔酶標板，每孔加200μL。24h后換不含血清培養液使細胞同步化生長，每孔200μL。第三天加含不同濃度藥物及相應溶劑對照的新鮮培養液，每孔加200μL，受試藥設8個劑量組，每組設8個平行孔，于37℃培養24h后，每孔加無血清無酚紅培養液新鮮配制的0.5mg/mLMTT100μL，繼續培養4h，然后，每孔加100μLDMSO溶解MTT甲簪顆粒，用微型振蕩器振蕩混勻后，于酶標儀上測定光密度值(OD)，實驗重復三次，取平均值。以溶劑對照處理腫瘤細胞為對照組，由OD值計算抑制率，公式為細胞生長抑制率＝(對照組OD值-實驗組OD值)/對照組OD×100％。并由此求得IC50(半數抑制率)，IC50＝細胞生長抑制率為50％的藥物濃度。
二 抗腫瘤活性試驗結果表1藥物抗腫瘤活性試驗結果
表2 兩種化合物的IC50
三 結論經實驗證明，中藥重樓中分離得到的化合物I、II具有較高的抗腫瘤活性，細胞生長抑制率分別達到86.03％、88.98％，IC50分別為0.40μg/mL、2.85μg/mL。
權利要求
1.一種重樓皂苷化合物的應用，由云南產云南重樓(Paris polyphylla Smith var.yannanensis)經乙醇提取，有機溶劑萃取，再經硅膠柱、凝膠柱、制備液相分離，得到化合物I，名稱為薯蕷皂苷元-3-O-α-L-吡喃鼠李糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷，和化合物II，名稱為偏諾皂苷元-3-O-α-L-呋喃阿拉伯糖基(1→4)-[α-L-吡喃鼠李糖基(1→2)]-β-D-葡萄糖苷，經過MTT法活性試驗證明化合物I、II細胞生長抑制率分別達到86.03％、88.98％，IC50分別為0.40μg/ml、2.85μg/ml，其特征在于，該兩種化合物用于治療癌癥的藥物。
全文摘要
本發明公開了一種重樓皂苷化合物的應用，屬于中藥應用技術的開發領域。以中藥重樓為原料經乙醇提取，再經各種色譜分離，得到化合物I薯蕷皂苷元－3－O－α－L－吡喃鼠李糖基(1→4)－[α－L－吡喃鼠李糖基(1→2)]－β－D－葡萄糖苷和化合物II偏諾皂苷元－3－O－α－L－呋喃阿拉伯糖基(1→4)－[α－L－吡喃鼠李糖基(1→2)]－β－D－葡萄糖苷。化合物I、II具有很高的抗腫瘤活性，細胞生長抑制率分別達到86.03％、88.98％，IC
文檔編號A61P35/00GK1850095SQ20061001320
公開日2006年10月25日 申請日期2006年2月22日 優先權日2006年2月22日
發明者高文遠, 劉新橋, 王羽, 顏璐璐, 陳海霞 申請人:天津大學