專利名稱：：骨肽注射液制備工藝的制作方法
技術領域：
：本發明屬于醫藥
技術領域：
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背景技術：
：目前在中國醫藥出版社出版的《生化制藥學》中記載了關于骨寧注射液詳細的制備過程，骨寧注射液是以豬的四肢骨為原料制備的注射液，主要成份是多肽或蛋白肽，發射光譜定量分析含量有微量元素，以Ca、Mg、Al、Fe為主，其它痕量元素有Mn、Ba、Cu、Pb、Sn、Ti、Zr等，含量l嗎/ml左右。內含成份溶于水和75%以下的乙醇，可被10倍量丙酮沉淀，水溶液pH4和8.5不產生沉淀，對熱穩定，較長時間加熱不失去其藥理作用。其主要的缺點是①在過程中加入苯酚抑菌，使得注射液靜脈注射不可能。②工藝過程中使得1萬分子量的少量蛋白質及多肽殘留，極易導致過敏反應，在靜脈給藥時，幾乎均發生過敏反應。
發明內容為了解決上述骨寧注射液存在的缺點，本發明通過對現有骨寧注射液的工藝過程的改變，從而獲得新的骨肽注射液制備工藝。本發明的過程是a、提取、去脂、濃縮取健康新鮮豬四肢骨，洗凈，打碎，稱重，原料加水、熱壓，用紗布過濾，骨渣再加水，同上操作熱壓，過濾，合并兩次濾液，立即置于夾層鍋中，通冷卻水，冷至室溫，放置于冷庫中，待冷卻至05。C轉入冷室中靜置，撇去上層脂肪，加溫使凍狀物融成液體，濃縮或真空濃縮，得濃縮液；b、沉淀、濃縮取濃縮液加入乙醇，靜置沉淀，除去雜蛋白，得上清，再真空濃縮；C、酸性沉淀、堿性沉淀上述液體在攪拌下加入鹽酸，調至pH值，常壓加熱；d、將加熱后的液體冷至室溫，立即置于冷庫中，降至05。C后，移入05"C冷庫或冷柜，放置過夜；e、取出除去酸性蛋白，收集上清液，在攪拌條件下加入氫氧化鈉溶液，調節pH值，加熱，再冷至室溫，立即放入冷庫中，待冷卻05t:移入o5t:的冷庫中；d、過濾及超濾將上述清液濾紙，再過10萬道爾頓分子量的超濾柱超濾，再過1萬道爾頓分子量超濾柱超濾一次，超濾液即骨肽原液；f、制劑將骨肽原液按雙縮脲法測定多肽含量，加水調含量、調pH值過濾，灌封，滅菌，即得骨肽注射液。本發明的優點是1、除掉了原工藝中的防腐劑笨酚，而是巧妙地運用低溫來抑制細菌的生長。2、在工藝過程中加入了超濾程序，使得原工藝中分子量大于一萬的殘留多肽得以去除。以上二個優點，使得骨肽注射液免除了過敏物質和毒性物質，大大降低了毒性反應，同時也使其靜脈注射用藥成為可能。具體實施例方式本發明的過程是a、提取、去脂、濃縮取健康新鮮豬四肢骨，洗凈，打碎，稱重，原料加水、熱壓，用紗布過濾，骨渣再加水，同上操作熱壓，過濾，合并兩次濾液，立即置于夾層鍋中，通冷卻水，冷至室溫，放置于冷庫中，待冷卻至05r轉入冷室中靜置，撇去上層脂肪，加溫使凍狀物融成液體，濃縮或真空濃縮，得濃縮液；b、沉淀、濃縮取濃縮液加入乙醇，靜置沉淀，除去雜蛋白，得上清，再真空濃縮；C、酸性沉淀、堿性沉淀上述液體在攪拌下加入鹽酸，調至pH值，常壓加熱；d、將加熱后的液體冷至室溫，立即置于冷庫中，降至05。C后，移入05。C冷庫或冷柜，放置過夜；e、取出除去酸性蛋白，收集上清液，在攪拌條件下加入氫氧化鈉溶液，調節pH值，加熱，再冷至室溫，立即放入冷庫中，待冷卻05"C移入05r的冷庫中；d、過濾及超濾將上述清液濾紙，再過10萬道爾頓分子量的超濾柱超濾，再過1萬道爾頓分子量超濾柱超濾一次，超濾液即骨肽原液；f、制劑將骨肽原液按雙縮脲法測定多肽含量，加水調含量、調pH值過濾，灌封，滅菌，即得骨肽注射液。木發明的詳細工藝過程骨肽注射液是以豬的四肢骨為原料制備的注射液，主要成份是多肽或蛋白肽，含有G"Mg.Al.Fe等金屬離子，亦含有其它痕量元素Mn、Ba、Cu、Pb、Sn、Ti、Zr等。內含成份溶于水和75%以下的乙醇，可被10倍量丙酮沉淀，水溶液PH4和8.5不產生沉淀，對熱穩定，較長時間加熱不失去其藥理作用。臨床適用于促進骨折愈合。1、提取、去脂、濃縮取健康新鮮豬四肢骨，洗凈，打碎，稱重。每75kg原料加水75150kg，1.2kg/cm2熱壓1.5小時，用雙層紗布過濾，骨渣再加水75kg，同上操作熱壓l小時，過濾，合并兩次濾液。立即置于夾層鍋中，通冷卻水，冷至室溫，放置于-20-30。C的冷庫中，待冷卻至05。C轉入冷室中靜置12—24小時，撇去上層脂肪，加溫使凍狀物融成液體，濃縮或真空濃縮，得體積為50L的濃縮液。為了節省冷室的體積，也可先將上述兩次合并的濾液先濃縮至50L，再進行冷卻處理，除脂。2、沉淀、濃縮取濃縮液加入乙醇至濃度為70%,靜置沉淀24—36小時，除去雜蛋白，得上清，再于6(TC以下真空濃縮至體積20L。3、酸性沉淀、堿性沉淀上述液體在攪拌下加入6mol/L鹽酸，調至pH至4，常壓加熱10(TC，45分鐘，冷至室溫，立即置于-20-30°(:的冷庫中，降至05"C后，移入05"C冷庫或冷柜，放置過夜。次曰取出除去酸性蛋白，收集上清液，在攪拌條件下加入5%氫氧化鈉溶液，調節pH至8.5，加熱IO(TC，45分鐘，冷至室溫，立即放入-20-3(TC的冷庫中，待冷卻o5i:移入o5x:的冷庫或冰柜中。4、過濾及超濾上述清液調體積為18升左右，過紙漿或濾紙，再過10萬道爾頓分子量的超濾柱超濾。再過1萬道爾頓分子量超濾柱超濾一次，超濾液即骨肽原液。5、制劑將骨肽原液按雙縮脲法測定多肽含量，加水調含量至5.06.0mg/ml調pH7.47.6過濾，灌封，105"滅菌30分鐘，即得骨肽注射液成品。實驗1、收率實驗精密量取本品2ml，置試管中，精密加入雙縮脲試液(取硫酸銅1.50g和灑石酸鉀鈉5.0g，加水500ml使溶解，邊攪邊加入10%氫氧化鈉溶液300ml，用水稀釋至1000ml，混勻，4ml，混勻，室溫放置30分鐘，照分光光度法，在540mn的波長處測定吸收度，另精密稱取酪蛋白對照品適量，加0.05mol/L氫氧化鈉試液制成每lml中約含7mg的溶液，精密量取2ml，自置試管中……起，同法操作，測定吸收度，計算。實驗結果如下<table>tableseeoriginaldocumentpage7</column></row><table><table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>提取溫度和時間是限制收率的關鍵，提取溫度是相對固定的，所以對時間的考察是本工藝過程的關鍵，實驗結果如下<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>在確定首次提取時間1.5小時較合適的基礎上考察了第二次提取時間對收率的影響。<table>tableseeoriginaldocumentpage8</column></row><table>2、過敏實驗取體重250350g豚鼠6支，連續三次，間日腹腔注射本品0.5ml，兩周后，再自靜脈注射本品lml，注射15分鐘內，均不得出現過敏性反應，如豎毛，呼吸困難，噴嚏、干嘔或咳嗽3次以上等現象中兩種或兩種以上者，或有羅音、抽搐、虛脫或死亡現象之一者，應判為陽性。按上述方法對050101、050102、050103批號的制劑(5mg/ml，2m1/支)進行了過敏性實驗，結果均為陰性。3、熱源實驗取上述三個批號的制劑，依法檢査(中國藥典2000年版二部附錄XID)，劑量按家兔體重每1kg注射0.5ml，應符合規定。結果表明上述三個批號制劑均符合規定。4、異常毒性取本品，依法檢査(中國藥典2000年版二部附錄XIC)，按靜脈注射法給藥，符合規定。結果表明，上述三個批號制劑均符合規定。5、蛋白質取本品lml，加30%磺基水楊酸溶液lml，不得產生混濁。結果表明，上述三個批號制劑均符合規定。6、pH值，應為6.67.5，三個批號分別為7.1、7.05、7.2。7、性狀均為微黃色的澄明液體。8、其他澄明度，無菌、裝量均符合注射劑通則的規定。權利要求1、一種骨肽注射液制備工藝，其過程是a、提取、去脂、濃縮取健康新鮮豬四肢骨，洗凈，打碎，稱重，原料加水、熱壓，用紗布過濾，骨渣再加水，同上操作熱壓，過濾，合并兩次濾液，立即置于夾層鍋中，通冷卻水，冷至室溫，放置于冷庫中，待冷卻至0～5℃轉入冷室中靜置，撇去上層脂肪，加溫使凍狀物融成液體，濃縮或真空濃縮，得濃縮液；b、沉淀、濃縮取濃縮液加入乙醇，靜置沉淀，除去雜蛋白，得上清，再真空濃縮；c、酸性沉淀、堿性沉淀上述液體在攪拌下加入鹽酸，調至pH值，常壓加熱；其特征在于d、將加熱后的液體冷至室溫，立即置于冷庫中，降至0～5℃后，移入0～5℃冷庫或冷柜，放置過夜；e、取出除去酸性蛋白，收集上清液，在攪拌條件下加入氫氧化鈉溶液，調節pH值，加熱，再冷至室溫，立即放入冷庫中，待冷卻0～5℃移入0～5℃的冷庫中；d、過濾及超濾將上述清液濾紙，再過10萬道爾頓分子量的超濾柱超濾，再過1萬道爾頓分子量超濾柱超濾一次，超濾液即骨肽原液；f、制劑將骨肽原液按雙縮脲法測定多肽含量，加水調含量、調pH值過濾，灌封，滅菌，即得骨肽注射液。全文摘要一種骨肽注射液制備工藝，屬于醫藥
技術領域：
。為了解決現有骨寧注射液存在的缺點，本發明通過對現有骨寧注射液的工藝過程的改變，從而獲得新的骨肽注射液制備工藝。本發明將豬四肢骨提取、去脂、濃縮，然后沉淀、濃縮，再進行酸性沉淀、堿性沉淀，將加熱后的液體冷至室溫后置于冷庫中，取出除去酸性蛋白，進行過濾及超濾得到骨肽原液，再加水調解、過濾、灌封、滅菌即得骨肽注射液。本發明使得骨肽注射液免除了過敏物質和毒性物質，大大降低了毒性反應，同時也使其靜脈注射用藥成為可能。文檔編號A61P19/08GK101103999SQ200610017008公開日2008年1月16日申請日期2006年7月14日優先權日2006年7月14日發明者海石,英韓申請人:海石