專利名稱：育亨賓和小檗堿混合在制藥中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及育亨賓和小檗堿混合制劑在制藥中的應用。
背景技術：
盡管在過去50年中抗生素的應用和臨床治療措施取得了長足的進步，但是膿毒癥患者的死亡率仍高達40％-60％，降低感染性多器官功能衰竭患者的死亡率是目前醫學面臨的一大難題。研究表明，45％-60％的膿毒癥是由革蘭氏陰性細菌感染引起，革蘭氏陰性細菌細胞壁的主要成分內毒素或脂多糖(LPS)在這種感染引起的全身炎癥反應綜合癥(SIRS)中發揮重要的作用。因此，尋找新的藥物防治內毒素性多器官功能衰竭，對降低膿毒癥患者的死亡率具有重大意義。
80年代以來，內毒素性休克的分子機制的研究已取得了許多新的進展，特別是LPS信號轉導通路的深入研究，致炎細胞因子和細胞黏附分子的分子克隆、內皮素和一氧化氮介導作用的發現，導致了一系列阻斷LPS信號通路和對抗各種單一介質的治療制劑的產生，如抗LPS抗體、抗腫瘤壞死因子抗體、血小板活化因子拮抗劑、抗凝血酶III、一氧化氮合酶抑制劑、內皮素拮抗劑等。但迄今為止，多中心臨床研究發現，還沒有一種制劑能夠顯著降低死亡率。另一方面，腸源性內毒素血癥是嚴重燒傷、創傷并發多器官功能障礙的重要致病因素，目前尚缺乏防治腸源性內毒素血癥的有效藥物。因此，如何防治內毒素性多器官功能障礙綜合征(multiple organ dysfunction syndrome，MODS)一直是醫學面臨的重要課題。
發明內容
為了克服以上現有醫療技術存在的不足，本發明提供了一種育亨賓(yohimbine)和小檗堿(berberine)混合制劑在制備防治內毒素性多器官功能障礙綜合征的藥物中的應用，并進一步提供該防治內毒素性多器官功能障礙綜合征的藥物。
該防治內毒素性多器官功能障礙綜合征的藥物的有效成分為育亨賓和小檗堿。
在該藥物中，育亨賓與小檗堿的質量比為1～4∶40～60。
作為最佳方案，所述育亨賓與小檗堿的質量比為2∶50。
所述藥物可制成各種口服制劑。
經過大量的實驗證明本發明發現小檗堿(berberine)與育亨賓(yohimbine)混合制劑的聯合應用能防治內毒素性多器官功能衰竭，明顯提高內毒素血癥小鼠的生存率，其效果明顯強于小檗堿單獨應用，提供了防治內毒素性多器官功能障礙的新制劑，可用于內毒素血癥的治療。臨床上，除革蘭氏陰性細菌感染可引起內毒素血癥外，嚴重創傷、燒傷都能引起腸源性內毒素血癥，此新制劑也可作為輔助藥物，因此，小檗堿與育亨賓合劑用于防治內毒素性多器官功能障礙具有廣泛的應用前景。
圖1是實施例1中不同試驗組在6天中的存活率對照圖。
圖2是實施例2中不同試驗組在6天中的存活率對照圖。
圖3是實施例4中各組小鼠肝臟組織學照片。A對照組，BLPS組，C小檗堿與育亨賓合劑防治組，D小檗堿與育亨賓合劑組，LPS或生理鹽水注射后12小時，取肝臟組織切片，H&E染色。
圖4是實施例4中各組小鼠腎臟組織學照片。A對照組，BLPS組，C小檗堿與育亨賓合劑防治組，D小檗堿與育亨賓合劑組，LPS或生理鹽水注射后12小時，取腎臟組織切片，H&E染色。
圖5是實施例4中各組小鼠肺組織學照片。A對照組，BLPS組，C小檗堿與育亨賓合劑防治組，D小檗堿與育亨賓合劑組，LPS或生理鹽水注射后12小時，取肺組織切片，H&E染色。
圖6是實施例4中各組小鼠小腸組織學照片。A對照組，BLPS組，C小檗堿與育亨賓合劑防治組，D小檗堿與育亨賓合劑組，LPS或生理鹽水注射后12小時，取小腸組織切片，H&E染色。
具體實施例方式
下面結合附圖和實施例對本發明進一步說明。
實施例1觀察小檗堿與育亨賓聯合應用對內毒素血癥小鼠死亡率的影響。
將健康雄性BALB/C小鼠(體重20-25g)隨機分成6組分別做如下處理①對照組(control)，圖1中用實心正方形表示提前3天，腹腔注射生理鹽水(0.05ml/10g)，30分鐘后用水灌胃(0.2ml/10g)，每天1次，最后1天灌胃后1小時，腹腔注射生理鹽水；②LPS組(LPS)，圖1中用空心三角形表示提前3天，腹腔注射生理鹽水(0.05ml/10g)，30分鐘后用水灌胃(0.2ml/10g)，每天1次，最后1天灌胃后1小時，腹腔注射內毒素(LPS，055B5，Sigma，20mg/kg)；③小檗堿防治組[Ber(50mg/kg)+LPS]，圖1中用實心三角形表示提前3天，腹腔注射生理鹽水(0.05ml/10g)，30分鐘后用小檗堿灌胃(0.2ml/10g，50mg/kg)，每天1次，最后1天灌胃后1小時，腹腔注射內毒素(LPS，20mg/kg)；④50mg/kg小檗堿與2mg/kg育亨賓聯合應用防治組[Y(2mg/kg)+Ber(50mg/kg)+LPS]，圖1中用空心正方形表示提前3天，腹腔注射育亨賓(0.05ml/10g，2mg/kg)，30分鐘后用小檗堿灌胃(0.2ml/10g，50mg/kg)，每天1次，最后1天灌胃后1小時，腹腔注射內毒素(LPS，20mg/kg)；⑤2mg/kg育亨賓防治組[Y(2mg/kg)+LPS]，圖1中用空心圓圈表示提前3天，腹腔注射育亨賓(0.05ml/10g，2mg/kg)，30分鐘后用水灌胃(0.2ml/10g)，每天1次，最后1天灌胃后1小時，腹腔注射內毒素(LPS，20mg/kg)；⑥50mg/kg小檗堿與2mg/kg育亨賓對照組[Y(2mg/kg)+Ber(50mg/kg)]，圖1中未表示提前3天，腹腔注射育亨賓(0.05ml/10g，2mg/kg)，30分鐘后用小檗堿灌胃(0.2ml/10g，50mg/kg)，每天1次，最后1天灌胃后1小時，腹腔注射生理鹽水。
于內毒素注射后不同時間，觀察各組小鼠的死亡率。
實驗結果如圖1所示腹腔注射LPS組，6天小鼠的死亡率為86％(空心三角形表示)；50mg/kg小檗堿灌胃3天(每天1次)能明顯降低內毒素血癥小鼠的死亡率，小檗堿防治組小鼠的死亡率為60％(實心三角形表示)；2mg/kg育亨賓防治組LPS攻擊后6天，小鼠的死亡率為65％(空心小圓圈表示)；50mg/kg小檗堿與2mg/kg育亨賓聯合應用防治組LPS攻擊后6天小鼠的死亡率僅為25％(空心正方形表示)；單純用50mg/kg小檗堿與2mg/kg育亨賓并沒有引起小鼠死亡。表明50mg/kg小檗堿與2mg/kg育亨賓聯合應用能明顯提高內毒素血癥小鼠的存活率，其效果明顯強于小檗堿或育亨賓單獨作用。(圖1中n＝20-21.*P＜0.05vs LPS組，#P＜0.05vs小檗堿防治組或2mg/kg育亨賓防治組，圖2同)實施例2不同劑量的育亨賓與50mg/kg小檗堿聯合應用對內毒素血癥小鼠死亡率的影響。
將健康雄性BALB/C小鼠(體重20-25g)隨機分成5組分別做如下處理①對照組(control)，圖2中用空心正方形表示提前3天，腹腔注射生理鹽水(0.05ml/10g)，30分鐘后用水灌胃(0.2ml/10g)，每天1次，最后1天灌胃后1小時，腹腔注射生理鹽水；②LPS組(LPS)，圖2中用空心三角形表示提前3天，腹腔注射生理鹽水(0.05ml/10g)，30分鐘后用水灌胃(0.2ml/10g)，每天1次，最后1天灌胃后1小時，腹腔注射內毒素(LPS，055B5，Sigma，20mg/kg)；③1mg/kg育亨賓與50mg/kg小檗堿聯合應用防治組[Y(1mg/kg)+Ber(50mg/kg)+LPS]，圖2中用空心小圓圈表示提前3天，腹腔注射育亨賓(0.05ml/10g，1mg/kg)，30分鐘后用小檗堿灌胃(0.2ml/10g，50mg/kg)，每天1次，最后1天灌胃后1小時，腹腔注射內毒素(LPS，20mg/kg)；④2mg/kg育亨賓與50mg/kg小檗堿聯合應用防治組[Y(2mg/kg)+Ber(50mg/kg)+LPS]，圖2中用實心小圓圈表示提前3天，腹腔注射育亨賓(0.05ml/10g，2mg/kg)，30分鐘后用小檗堿灌胃(0.2ml/10g，50mg/kg)，每天1次，最后1天灌胃后1小時，腹腔注射內毒素(LPS，20mg/kg)；⑤4mg/kg育亨賓與50mg/kg小檗堿聯合應用防治組[Y(4mg/kg)+Ber(50mg/kg)+LPS]，圖2中用實心三角形表示提前3天，腹腔注射育亨賓(0.05ml/10g，4mg/kg)，30分鐘后用小檗堿灌胃(0.2ml/10g，50mg/kg)，每天1次，最后1天灌胃后1小時，腹腔注射內毒素(LPS，20mg/kg)；于內毒素注射后不同時間，觀察各組小鼠的死亡率。
試驗結果如圖2所示50mg/kg小檗堿與2mg/kg育亨賓聯合應用防治內毒素血癥的作用明顯優于50mg/kg小檗堿與1mg/kg育亨賓或50mg/kg小檗堿與4mg/kg育亨賓聯合應用，50mg/kg小檗堿與2mg/kg育亨賓聯合應用是防治小鼠內毒素血癥的最佳劑量。
實施例32mg/kg育亨賓與50mg/kg小檗堿混合制劑(小檗堿與育亨賓合劑)灌胃對內毒素血癥小鼠死亡率的影響。
將健康雄性BALB/C小鼠(體重20-25g)隨機分成4組分別做如下處理①對照組(control)用水灌胃(0.2ml/10g)3天，每天1次，最后1天灌胃后1小時，腹腔注射生理鹽水；②LPS組(LPS)用水灌胃(0.2ml/10g)3天，每天1次，最后1天灌胃后1小時，腹腔注射內毒素(LPS，055B5，Sigma，20mg/kg)；③2mg/kg育亨賓與50mg/kg小檗堿混合制劑3天防治組[小檗堿與育亨賓合劑(3)組]2mg/kg育亨賓與50mg/kg小檗堿混合制劑灌胃，每天1次，共3天，第3天灌胃后1小時，腹腔注射LPS(20mg/kg)；④2mg/kg育亨賓與50mg/kg小檗堿混合制劑1天防治組[小檗堿與育亨賓合劑(1)組]用水灌胃(0.2ml/10g)2天，每天1次，第3天用2mg/kg育亨賓與50mg/kg小檗堿混合制劑灌胃1次，灌胃后1小時，腹腔注射LPS(20mg/kg)；于內毒素注射后不同時間，觀察各組小鼠的死亡率。
試驗結果如表1所示，在上述實驗的基礎上，將2mg/kg育亨賓與50mg/kg小檗堿混合配成小檗堿與育亨賓合劑，用此合劑灌胃3天或1天，每天1次，觀察該混合制劑口服對內毒素血癥小鼠死亡率的影響。結果發現，LPS組，內毒素攻擊后6天100％的小鼠死亡；小檗堿與育亨賓合劑灌胃3天能明顯降低內毒素血癥小鼠的死亡率，該組小鼠的死亡率僅為20％；即使是內毒素攻擊前1小時給予小檗堿與育亨賓合劑灌胃一次也能明顯降低內毒素血癥小鼠的死亡率。
表1.育亨賓(Y，2mg/kg)與小檗堿(Ber，50mg/kg)混合制劑灌胃對內毒素血癥Balb/C小鼠死亡率(％)的影響
*P＜0.01vs Control組，#P＜0.01vs LPS組。
實施例4小檗堿與育亨賓合劑灌胃對內毒素血癥小鼠器官組織結構和功能的影響。
將健康雄性BALB/C小鼠(體重20-25g)隨機分成4組分別做如下處理①對照組(control)用水灌胃(0.2ml/10g)3天，每天1次，最后1天灌胃后1小時，腹腔注射生理鹽水；②LPS組(LPS)用水灌胃(0.2ml/10g)3天，每天1次，最后1天灌胃后1小時，腹腔注射內毒素(LPS，055B5，Sigma，20mg/kg)；③小檗堿與育亨賓合劑防治組2mg/kg育亨賓與50mg/kg小檗堿混合制劑灌胃，每天1次，共3天，第3天灌胃后1小時，腹腔注射LPS(20mg/kg)；④小檗堿與育亨賓合劑組2mg/kg育亨賓與50mg/kg小檗堿混合制劑灌胃，每天1次，共3天，第3天灌胃后1小時，腹腔注射生理鹽水。
于內毒素注射后12小時，測定各組小鼠肝、腎功能，并在光學顯微鏡下觀察肺、腸、肝、腎組織結構的變化。
試驗結果如表2所示，LPS攻擊后12小時，小鼠血尿素氮含量和血丙氨酸氨基轉移酶的活性明顯高于對照組，小檗堿與育亨賓合劑防治組小鼠血尿素氮含量和血丙氨酸氨基轉移酶的活性明顯低于LPS組，單獨給予小檗堿與育亨賓合劑灌胃組，小鼠血尿素氮含量和血丙氨酸氨基轉移酶的活性與對照組比較沒有明顯差別。這些結果說明，小檗堿與育亨賓合劑灌胃能顯著減輕內毒素引起的肝、腎功能損傷；單獨給予該劑量的小檗堿與育亨賓合劑灌胃并不會引起小鼠肝、腎功能損傷。
如圖3～6所示，組織學檢查發現，LPS注射后12h，肝細胞出現變性腫脹、部分細胞發生凋亡；腎臟間質出血、腎小管上皮細胞發生水變性；小鼠肺泡間隔明顯增厚，有大量的炎癥細胞浸潤，可見肺血管淤血、肺出血及肺氣腫；腸絨毛充血水腫、壞死，有炎癥細胞浸潤，腸腔可見大量炎癥細胞。小檗堿與育亨賓合劑灌胃防治組，LPS注射后12h，上述各器官病理變化明顯減輕。單純用小檗堿與育亨賓合劑灌胃，并沒有引起肝、腎、肺、腸發生明顯病理改變。
表2.小檗堿與育亨賓合劑灌胃對內毒素血癥小鼠肝、腎功能的影響
*P＜0.01vs對照組，#P＜0.01vs LPS組。
權利要求
1.育亨賓(yohimbine)和小檗堿(berberine)混合在制備防治內毒素性多器官功能障礙綜合征的藥物中的應用。
2.一種防治內毒素性多器官功能障礙綜合征的藥物，其特征在于有效成分為育亨賓和小檗堿。
3.根據權利要求2所述的藥物，其特征在于所述藥物中育亨賓與小檗堿的質量比為1～4∶40～60。
4.根據權利要求3所述的藥物，其特征在于所述藥物中育亨賓與小檗堿的最佳質量比為2∶50。
5.根據權利要求2、3或4所述的藥物，其特征在于所述藥物為口服制劑。
全文摘要
本發明提供育亨賓和小檗堿混合在制備防治內毒素性多器官功能障礙綜合征的藥物中的應用。育亨賓和小檗堿混合能防治內毒素性多器官功能衰竭，明顯提高內毒素血癥患者的生存率，其效果明顯強于小檗堿單獨應用，提供了防治內毒素性多器官功能障礙的新制劑，可用于內毒素血癥的治療。臨床上，除革蘭氏陰性細菌感染可引起內毒素血癥外，嚴重創傷、燒傷都能引起腸源性內毒素血癥，此新制劑也可作為輔助藥物，因此，小檗堿與育亨賓合劑用于防治內毒素性多器官功能障礙具有廣泛的應用前景。
文檔編號A61P31/04GK1965831SQ20061012339
公開日2007年5月23日 申請日期2006年11月7日 優先權日2006年11月7日
發明者陸大祥, 王華東, 張昊晴, 戚仁斌 申請人:暨南大學