一種由絞股藍、西洋參和黃芪制成的藥物組合物的制作方法

專利名稱：一種由絞股藍、西洋參和黃芪制成的藥物組合物的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種具有抗腫瘤作用的藥物組合物，具體涉及一種由絞股藍或絞股藍提取物、西洋參或西洋參提取物、黃芪或黃芪提取物組成的藥物組合物及其制備方法，以及含有該藥物組合物的制劑，屬于醫藥技術領域。
2、背景技術70年代以來，我國癌癥發病及死亡率一直呈上升趨勢，至90年代的20年間，癌癥死亡率上升29.42％，年齡調整死亡率上升11.56％。2000年癌癥發病人數約180～200萬，死亡140～150萬，癌癥正在成為新世紀人類的第一殺手。目前現代醫學對癌癥的治療，主要是手術治療配合放療、化療。手術雖能去除原發病灶，但不能從根本上杜絕癌細胞的再生與繁殖；放、化療雖能殺滅癌細胞，但同時也使大量的正常組織細胞受到損害，誘發胃腸反應、骨髓抑制和肝腎、心臟功能損害。中醫中藥治療癌癥有悠久的歷史并形成了自己獨特的一些治療法則，如扶正祛邪、清熱解毒、活血化瘀等法則，已證實中醫藥治療癌癥具有抗癌抑瘤，提高機體免疫功能，降低放化療毒副反應，調節機體陰陽平衡，提高帶癌生存率及生存質量的突出作用，特別是對癌癥手術后的康復，以及對放化療的增效減毒方面發揮了重要的作用。
絞股藍Gynostemma Pentaphyllum(Thumb.)Makino，又名七葉膽，具有清熱解毒、止咳祛痰、益氣養陰、延年益壽之功效，有“南方人參”之稱。藥理研究表明，絞股藍具有抗衰老、抗應激和疲勞、抗腫瘤、性激素和雌激素樣作用、鎮咳祛痰、降血脂與治療肝臟疾病等多種藥理作用。絞股藍的抗癌作用機理為可直接殺滅癌細胞，明顯提高小鼠空斑形成細胞和血凝抗體效價，明顯增強小鼠的遲發超敏反應，從而提高帶瘤動物的免疫力。絞股藍能增加淋巴細胞數目，提高小鼠自然殺傷細胞(NK)活性和血清溶血素的產生及活性，并能增強小鼠腹腔巨噬細胞吞噬功能，提高脾細胞分泌抗體的能力，另外絞股藍還能降低S180肉瘤小鼠的脂質過氧化反應，提高其血漿中超氧化物歧化酶的活性，保護機體正常的細胞免受過多有害自由基的損傷，從而達到限制腫瘤生長及侵襲作用。
西洋參為五加科植物西洋參Panax quinquefolium L.的干燥根，別名洋參、花旗參、廣東人參。西洋參性涼，味甘微苦，入心、肺、腎三經。有補肺降火，養胃生津止渴作用，用于治療肺虛久咳、失血、咽干、口渴、虛熱、煩倦等，還可用于各種腫瘤的治療。化學成分根莖含苷類，主要是人參皂苷，又含揮發油，樹脂等。總皂苷水解后分離得人參二醇、人參三醇和齊墩果酸。現代研究表明，西洋參的藥理作用有(1)抗癌和增強機體免疫功能作用本品能增強T細胞產生淋巴因子能力，能明顯增強小鼠脾NKC的活性，有抗癌作用；(2)總皂苷和人參皂苷有顯著抗疲勞作用，抗利尿，抗缺氧作用；(3)總皂苷影響蛋白質，脂肪代謝，能降低血糖；(4)皂苷有抗心律失常作用，并能降低小白鼠因注射中樞興奮藥戊四氮與士的寧所引起的驚厥死亡率；(5)對大腦有鎮靜作用，其鎮靜作用強于中國人參。
黃芪為豆科植物蒙古黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.var.mongholicus(Bge.)Hsiao或膜莢黃芪Astragalus membranaceus(Fisch.)Bge.的干燥根，具有補氣固表、托毒生肌、利水的功效，“可治一切氣衰血虛之證”。現代藥理研究表明，黃芪除具有顯著的免疫增強作用，還具有良好的抗腫瘤、抗衰老的作用。黃芪的免疫增強作用主要表現在對正常機體的抗體生成功能有明顯促進作用，可使ConA誘導的T細胞增殖反應和B細胞免疫功能明顯增強，可明顯地促進小鼠NK細胞的活性，可明顯提高老年人的補體溶解免疫復合物(IC)能力，從而降低循環免疫復合物水平，減少IC沉積，黃芪、黃芪多糖、黃芪皂苷對單核-巨噬細胞吞噬功能均有增強作用。黃芪的抗腫瘤作用主要表現在黃芪對造血和免疫系統有保護作用，這對腫瘤的放療起積極協助作用。
目前，尚未見用絞股藍、西洋參、黃芪三者的配伍組方來治療腫瘤的報道。
3、發明內容本發明的目的是提供一種用于抗腫瘤的藥物組合物，它主要由絞股藍、西洋參和黃芪制成，其重量份數為絞股藍0.5～20份 西洋參1～30份 黃芪1～100份，優選為絞股藍1～10份 西洋參2～6份 黃芪2～25份，最佳為絞股藍5份 西洋參3份 黃芪4份。
絞股藍、西洋參和黃芪藥材可以用適宜的溶劑分別或混合經過提取加工得到其提取物，總提取物再和藥用輔料混合加工制成各種制劑。總提取物中所含的主要有效成分為皂苷和/或多糖，且總提取物中主要有效成分的總含量不低于50％。
本發明提供了上述絞股藍、西洋參和黃芪的提取制備方法，但不僅限于下述工藝絞股藍的提取制備取絞股藍藥材，加75％乙醇回流提取二次，每次2小時，濾過，流液回收乙醇至無醇味，加水使成每1ml相當于2g生藥量的溶液，攪勻，放冷，靜置過夜，濾過，濾液通過已處理好的大孔樹脂柱，先用2倍柱體積的水沖柱，棄去水液，再用3倍柱體積的60％乙醇進行洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮至相對密度為1.08～1.10的濃縮液，噴霧干燥，即得。通過本工藝制得的絞股藍提取物得率為2～4％，絞股藍總苷含量不低于50％。
還可以通過以下方法提取制備方法一取絞股藍藥材，加80％乙醇回流提取三次，每次2小時，加醇量為每次10倍量，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，加水適量，攪勻，放冷，靜置過夜，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.09～1.10的濃縮液，噴霧干燥，即得。通過本工藝通過本工藝制得的絞股藍提取物得率為5～7％，絞股藍總苷的含量不低于40％。
方法二取絞股藍藥材，加80％乙醇回流提取二次，每次3小時，第一次加醇10倍量，第二次8倍量，合并提取液，濾過，濾液回收乙醇至無醇味，放置過夜，濾過，濾液減壓回收乙醇至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過本工藝通過本工藝制得的絞股藍提取物得率為6～10％，絞股藍總苷的含量不低于30％。
西洋參的提取制備取西洋參，加10倍量水，浸泡8小時，濾出浸泡液，繼加8倍量常水，煎煮1小時，共二次，合并浸提液，減壓濃縮至密度為1.19～1.25(60℃)，噴霧干燥，得水浸膏粉。依次加8、5、5、5倍量正丁醇，沸水浴攪拌提取1h，共4次，合并提取液，減壓回收正丁醇，真空干燥得粗總皂苷。將粗總皂苷拌入20倍量(W/W)D101型大孔樹脂上，用熱水沖洗至洗滌水近無色，用4倍量80％乙醇攪拌洗脫二次，每次1h，合并洗脫液，回收乙醇，噴霧干燥即得。通過本工藝制備的西洋參提取物得率為0.5～2％，總皂苷含量不低于50％，人參皂苷Rg1、Rb1、Re的含量和不低于5％。
還可以通過以下方法提取制備方法一取西洋參，加水煎煮三次，每次1.5小時，加水量為12倍量，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.20～1.26(60)，濾過，濾液減壓濃縮、真空干燥，得水提浸膏粉。依次加8、5、5、3倍量80％，沸水浴攪拌提取1h，共4次，合并提取液，減壓回收正丁醇，真空干燥即得。通過本工藝制得的西洋參提取物，得率為1～4％，總皂苷含量不低于30％，人參皂苷Rg1、Rb1、Re的含量和不低于2％。
方法二取西洋參，加水煎煮三次，每次2小時，加水量為10倍量，合并煎液，濾過，濾液上大孔樹脂，采用D101型大孔樹脂，樹脂與生藥比例為1∶0.68，用兩倍量75％乙醇洗脫。收集洗脫液，回收乙醇，濃縮至相對密度為1.18～1.27(60℃)，真空干燥(60℃)，即得。通過本工藝制得的西洋參提取物，得率為1～3％，總皂苷含量不低于40％，人參皂苷Rg1、Rb1、Re的含量和不低于3％。
黃芪的提取制備黃芪多糖和總皂苷均具有抗腫瘤作用，下面分別提供二者的制備方法以黃芪多糖為有效成分的提取物的制備取黃芪藥材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小時，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，提取液合并，濃縮至提取液體積與生藥材的比例為1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量達到70％，過濾，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗滌，再用適量水溶解，過濾，濾液過大孔樹脂，用水洗脫，收集水洗液，將水洗液濃縮至藥液體積與藥材比例為1∶2.5，加入乙醇使含醇量達到70％，得沉淀，將沉淀用95％乙醇和丙酮洗滌脫水，減壓干燥(60℃)，即得。通過本工藝制備的黃芪提取物得率為0.5～2％，黃芪多糖的含量不低于50％。
還可以通過以下方法提取制備方法一取黃芪藥材，加水回流提取三次，每次2小時，合并提取液，濾過，濾液減壓濃縮至相對密度為1.15～1.23，加乙醇使含醇量達80％，靜置24小時，濾過，沉淀加水溶解，濾過，再加乙醇使含醇量達85％，靜置24小時，濾過，收集沉淀，真空干燥即得。通過本工藝制備的黃芪提取物得率為2～4％，黃芪多糖含量不低于40％。
方法二取黃芪藥材，加10倍量80％乙醇提取4小時，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，每次2小時，每次加水10倍量，提取液合并，過濾，濾液加乙醇使含醇量達85％，過濾，濾液減壓濃縮至稠膏狀，噴霧干燥即得。通過本工藝制備的黃芪提取物得率為3～4％，黃芪多糖含量不低于35％。
以總皂苷為主要成分的提取物的制備取黃芪，加水煎煮三次，每次1.5小時，第一次加水10倍量，二、三次均為8倍量，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含醇量為75％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當于原藥材10g，加于已處理好的大孔吸附樹脂柱，先用2倍體積的水沖柱，再用4倍體積的70％乙醇洗脫，收集洗脫液，減壓濃縮、真空干燥，即得。通過本工藝制備的黃芪提取物得率為0.5～2％，總皂苷含量不低于50％，其中黃芪甲苷含量不低于2.0％。
還可以通過以下方法提取制備方法一取黃芪加水煎煮三次，每次2小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含乙醇量60％，第二次85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當于原藥材10g，減壓濃縮，真空干燥，即得。通過本工藝制備的黃芪提取物得率為3～5％，總皂苷含量不低于30％，其中黃芪甲苷含量不低于1％。
方法二取黃芪加水煎煮三次，每次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.20～1.25(60℃)，用乙醇沉淀處理1次使含乙醇量為60％，冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當于原藥材10g，并減壓濃縮、真空干燥，即得。通過本工藝制備的黃芪提取物得率為2～4％，總皂苷含量為不低于40％，其中黃芪甲苷含量不低于1％。
本發明藥物組合物除可以上述藥材投料制得外，還可以提取物代替藥材直接投料制得。以總苷為主要有效成分的絞股藍提取物簡稱絞股藍總苷，以總皂苷為主要有效成分的西洋參提取物簡稱西洋參總皂苷，以總皂苷為主要有效成分的黃芪提取物簡稱黃芪總皂苷，以多糖為主要有效成分的黃芪提取物簡稱黃芪多糖。根據絞股藍總苷相對于藥材的得率2～4％，西洋參總皂苷相對于藥材的得率0.5～2％，黃芪多糖相對于藥材的得率0.5～2％，黃芪總皂苷相對于藥材的得率0.5～2％進行計算，有以下兩種配比，分別為配比1絞股藍總苷1～80份、西洋參總皂苷0.5～60份、黃芪多糖0.5～200份，優選2～40份、1～12份、1～50份；最佳為10～20份、1～6份、2～8份。
配比2絞股藍總苷1～80份、西洋參總皂苷0.5～60份、黃芪總皂苷0.5～200份，優選2～40份、1～12份、1～50份；最佳為10～20份、1～6份、2～8份。
上述藥物組合物中絞股藍總苷中總苷的含量不低于30％，最好不低于50％；西洋參總皂苷中總皂苷的含量不低于30％，最好不低于50％，其中人參皂苷Rg1、Rb1、Re的含量和不低于2％；黃芪多糖中多糖的含量不低于35％，最好不低于50％；黃芪總皂苷中總皂苷的含量不低于30％，最好不低于50％，其中黃芪甲苷的含量不低于1％。
以上組成是按重量份作為配比的，在生產時可按照相應比例增大或減小，如大規模生產可以以千克為原料，或以噸為單位，小規模生產也可以以克為單位，重量可以增大或者減小，但各組成之間重量配比的比例不變。若以千克為單位，可以制成100～10000次用量的制劑，如作為注射劑，可制成100～10000支，每次用量1～10支。如作為片劑，可制成100～10000片，每次服用1～10片。
以上重量配比的比例是經過科學篩選得到的，對于特殊病人，可以相應調整組成的比例，增加或者減少不超過100％。
本發明進一步要求保護本發明藥物組合物在制備治療抗腫瘤藥物中的應用。本發明藥物組合物可以抑制癌細胞生長，促進機體免疫功能，增加淋巴細胞數目，保護和改善骨髓造血功能，提高內分泌體液的調節功能，提高機體物質代謝，減輕放、化療毒副作用，增強放、化療的效果。主要用于原發性肝癌、肺癌、直腸癌、惡性淋巴瘤、婦科惡性腫瘤等。
本發明藥物組合物可以制成任何一種臨床上或藥學上可接受的制劑，優選口服制劑或注射劑，以口服或腸胃外給藥等方式施用于需要這種治療的患者。
用于腸胃外給藥時，可將其制成注射劑，注射劑系指藥物制成的供注入體內的溶液、乳液或混懸液及供臨用前配制或稀釋成溶液或混懸液的粉末或濃溶液的無菌制劑，包括注射液、注射用無菌粉末和注射用濃溶液。注射液系指藥物制成的供注射入體內用的無菌溶液型注射液、乳液型注射液或混懸型注射液，其標示裝量可以為0.5ml、1ml、2ml、5ml、10ml、20ml、50ml、100ml、200ml、250ml、500ml等，一般不小于100ml的供靜脈滴注用的大體積注射液也稱靜脈輸液。注射用無菌粉末系指藥物制成的供臨用前用適宜的無菌溶液配制成澄清溶液或均勻混懸液的無菌粉末或無菌塊狀物，無菌粉末可以用溶媒結晶法、噴霧干燥法或冷凍干燥法等制得。注射用濃溶液系指藥物制成的供臨用前稀釋供靜脈滴注用的無菌濃溶液。
用于口服給藥時，可將其制成常規的固體制劑，包括片劑、膠囊劑、顆粒劑、丸劑和口服溶液劑等。片劑系指藥物與適宜的輔料混勻壓制而成的圓片狀或異形片狀的固體制劑；片劑以口服普通片為主，另有含片、舌下片、口腔貼片、咀嚼片、分散片、可溶片、泡騰片、緩釋片、控釋片與腸溶片等。膠囊劑系指藥物或加有輔料充填于空心膠囊或密封于軟質囊材中的固體制劑；膠囊劑依據其溶解與釋放特性，可分為硬膠囊(通稱為膠囊)、軟膠囊(膠丸)、緩釋膠囊、控釋膠囊和腸溶膠囊。顆粒劑系指藥物與適宜的輔料制成具有一定粒度的干燥顆粒狀制劑；顆粒劑可分為可溶顆粒(通稱為顆粒)、混懸顆粒、泡騰顆粒、腸溶顆粒、緩釋顆粒和控釋顆粒等。丸劑系指藥物與適宜的輔料均勻混合，以適當方法制成的球狀或類球狀固體制劑；丸劑包括滴丸、糖丸、小丸等。口服溶液劑系指藥物溶解于適宜溶劑中制成供口服的澄清液體制劑。
本發明藥物組合物的制劑可采用現有制藥領域中的常規方法生產，需要的時候可以添加各種藥學上可接受的載體。所述的載體包括藥學領域常規的滲透壓調節劑、pH值調節劑、增溶劑、抗氧劑、抑菌劑、乳化劑、助懸劑、填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑等。
本發明藥物組合物在制成注射劑時，所用溶劑可以是水性溶劑和非水性溶劑，也可根據藥物的性質加入適宜的附加劑，如滲透壓調節劑、pH值調節劑、增溶劑、抗氧劑、抑菌劑、乳化劑、助懸劑等。水性溶劑最常用的水性溶劑為注射用水，也可用0.9％氯化鈉溶液或其他適宜的水溶液；非水性溶劑常用的非水性溶劑為植物油，主要為供注射用大豆油，其他還有乙醇、丙二醇、聚乙二醇等的水溶液。常用的滲透壓調節劑包括氯化鈉、葡萄糖、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈣、山梨醇等，優選氯化鈉或葡萄糖；常用的pH值調節劑包括醋酸+醋酸鈉、乳酸、枸櫞酸+枸櫞酸鈉、碳酸氫鈉+碳酸鈉等；常用的增容劑包括聚山梨酯80、丙二醇、卵磷脂、聚氧乙烯蓖麻油等；常用的抗氧劑包括亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉等；常用抑菌劑包括苯酚、甲酚、三氯叔丁醇、苯甲醇等。
本發明藥物組合物在制成口服制劑時，可以加入適宜的填充劑、粘合劑、崩解劑、潤滑劑等。填充劑包括淀粉、糖粉、磷酸鈣、硫酸鈣二水物、糊精、微晶纖維素、乳糖、預膠化淀粉、甘露醇等；粘合劑包括羧甲基纖維素鈉、PVP-K30、羥丙基纖維素、淀粉漿、甲基纖維素、乙基纖維素、羥丙甲纖維素、膠化淀粉等；崩解劑包括干淀粉、交聯聚維酮、交聯羧甲基纖維素鈉、羧甲基淀粉鈉、低取代羥丙基纖維素等；潤滑劑包括硬脂酸鎂、滑石粉、十二烷基硫酸鈉、微粉硅膠等。
本發明藥物組合物具有下列優點(1)本發明提供了一種新的具有抗腫瘤作用的藥物組合物，滿足了臨床需要。
(2)中醫認為熱毒蘊結是惡性腫瘤的主要病因病理之一。清熱解毒法治療腫瘤既有直接抑制或殺傷腫瘤細胞的作用，又能提高機體的免疫功能而達到治療效果。臨床上多見癌瘤患者呈熱郁火毒之證，無論實火(熱)、虛火(熱)，凡熱勢駑張，說明腫瘤正在發展，對這類癌瘤患者當擬清熱解毒、滋陰降火之法。本發明采用絞股藍、西洋參、黃芪配伍，絞股藍清熱解毒，西洋參滋陰降火，黃芪溫補托里、扶正祛邪，配伍合理。
(3)首次通過藥效學實驗研究證明本發明藥物組合物與單用絞股藍相比，對荷SRS-82肉瘤小鼠有顯著抑瘤作用，可顯著增強荷SRS-82肉瘤小鼠的免疫功能，對小鼠肝癌(HePA))實體瘤生長有顯著抑瘤作用，能顯著提高荷H22小鼠NK細胞的殺傷力及淋巴細胞轉化率，抑制小鼠Lewis肺癌肺轉移，與放療藥5-氟尿嘧啶及60Co化療聯用有增效作用，而且其最佳配比的療效與陽性對照藥康萊特注射液、環磷酰胺的療效相當、毒性小，這是本領域普通技術人員所意想不到的。
(4)本發明通過藥理試驗得出了絞股藍、西洋參和黃芪的最佳配比。
(5)絞股藍、西洋參與黃芪合并用藥呈協同作用，且用藥劑量相對減小。
以下通過實驗例來進一步闡述本發明所述藥物組合物的有益效果，這些實驗例包括本發明藥物組合物的藥效學以及穩定性實驗。
以下實驗例中所用的絞股藍提取物(絞股藍總苷)來源于實施例1；西洋參提取物(西洋參總皂苷)來源于實施例2；黃芪多糖來源于實施例3；黃芪總皂苷來源于實施例4。絞股藍或絞股藍總苷、西洋參或西洋參總皂苷、黃芪(以多糖為主要有效成分)或黃芪多糖的藥物組合物以下簡稱組合物A，絞股藍或絞股藍總苷、西洋參或西洋參總皂苷、黃芪(以總皂苷為主要有效成分)或黃芪總皂苷的藥物組合物以下簡稱組合物B。
實驗例1本發明藥物組合物對荷SRS-82肉瘤小鼠的抑瘤實驗實驗動物ICR種小鼠，體重18～22g，8周齡，雌雄各半，共380只，每組10只。
SRS-82細胞株，上海細胞生物所。
供試品陽性對照藥物康萊特注射液，100ml:10g，浙江康萊特藥業有限公司；絞股藍總苷注射液自制，規格2ml；西洋參總皂苷注射液自制，規格2ml；黃芪多糖注射液自制，規格2ml；黃芪總皂苷注射液自制，規格2ml；
本發明藥物組合物A注射液的不同重量配比組，自制；本發明藥物組合物B注射液的不同重量配比組自制。
表1本發明組合物對荷SRS-82肉瘤小鼠的抑瘤率比較
注與空白對照組比較，*p＜0.05，**p＜0.01；與絞股藍組比較，#p＜0.05，##p＜0.01；與西洋參組比較，△p＜0.05，△△p＜0.01；與黃芪多糖組比較，☆p＜0.05，☆☆p＜0.01；與黃芪總皂苷組比較，&p＜0.05，&&p＜0.01。
實驗方法小鼠分組小鼠分為38組空白對照組、陽性對照組、西洋參總皂苷組、黃芪多糖組、黃芪總皂苷組、絞股藍總苷組、本發明組合物注射液不同配比組。
腫瘤接種分別將培養的SRS-82細胞接種昆明小鼠后第8天，自4只小鼠腹腔中抽取腹水約15ml，用生理鹽水稀釋成細胞數為1.0×107/ml后(共30ml)，每只小鼠左腹股溝皮下注射0.2ml(2.0×106/只)。
給藥方式及時間每只小鼠腹腔注射(ip)給藥，康萊特注射液不稀釋直接ip給藥，于接種腫瘤后的第2天開始給藥，1次/天，共10天。
抑瘤率于接種后的第12天，脫頸椎處死各組小鼠，剝離腫瘤塊，稱取腫瘤重量，并按以下公式計算抑瘤率抑瘤率＝(模型組平均腫瘤重量-給藥組平均腫瘤重量)/模型組平均腫瘤重量×100％。
實驗結果與結論結果見表1。與空白對照組比較，各給藥組對荷SRS-82瘤小鼠腫瘤有明顯抑制作用(p＜0.05，p＜0.01)，其中組合物A、B在絞股藍1～10份、西洋參2～6份、黃芪3～10份的配比范圍內療效均優于單用絞股藍總苷、西洋參總皂苷、黃芪多糖和黃芪總皂苷，提示絞股藍、西洋參、黃芪合用有協同增效作用。其中以絞股藍+西洋參+黃芪(5g+3g+4g)劑量組療效最為顯著，且與陽性對照藥康萊特注射液療效相當，表明抗腫瘤活性強。
實驗例2本發明藥物組合物對荷SRS-82肉瘤小鼠免疫功能的影響實驗動物ICR種小鼠，體重18～22g，8周齡，雌雄各半。
瘤種及試劑小鼠SRS-82細胞株購自上海細胞生物所白細胞介素2(1L-2)注射液，深圳科興生物技術公司生產；IL-2及α-腫瘤壞死因子(TNF-α)試劑盒；刀豆素A(Con-A)購自晶美生物工程公司。
供試品陽性對照藥物康萊特注射液，100ml:10g，浙江康萊特藥業有限公司；絞股藍注射液自制；本發明藥物組合物A，自制(見實施例8水針劑處方1)，主要有效成分為絞股藍總苷、西洋參總皂苷、黃芪多糖(相當于絞股藍5g，西洋參3g，黃芪4g)；本發明藥物組合物B，自制(見實施例8水針劑處方2)，主要有效成分為絞股藍總苷、西洋參總皂苷、黃芪總皂苷(相當于絞股藍5g，西洋參3g，黃芪4g)。
實驗方法小鼠分組小鼠分為空白對照組、陽性對照組、本發明組合物注射液A組低、中、高劑量組、本發明組合物注射液B組低、中、高劑量組。
腫瘤接種分別將培養的SRS-82細胞接種昆明小鼠后第8天，自4只小鼠腹腔中抽取腹水約15ml，用生理鹽水稀釋成細胞數為1.0×107/ml后(共30ml)，每只小鼠左腹股溝皮下注射0.2ml(2.0×106/只)。
給藥方式及時間每只小鼠腹腔注射(ip)給藥，康萊特注射液不稀釋直接ip給藥，于接種腫瘤后的第2天開始給藥，1次/天，共10天。
2.1本發明白細胞數量變化實體瘤小鼠于接種腫瘤后的第11天，眼眶后靜脈叢采血約100μl，用日本F-800血細胞自動分析儀檢測各組小鼠的白細胞數。
2.2體外巨噬細胞吞噬功能檢測各組小白鼠于實驗第11天分別腹腔內注射冷DMEM培養基5ml，輕柔腹腔，10min后抽出腹腔液，1000r/min離心10min，棄部分上清液，留約2ml。然后混勻后加入1％雞血球2ml。放恒溫培養箱內60min后，混勻涂片，瑞氏染色，計算100個巨噬細胞吞噬百分率(多少個細胞吞噬了紅細胞)及吞噬指數(共吞噬了多少個紅細胞)。
2.3荷瘤小鼠血清比IL-2及TNP含量的測定于腫瘤接種后第12天，通過眼眶后靜脈采血，3000r/min離心10min分離血清，用晶美生物工程公司的小鼠IL-2及TNF-α試劑盒測定血清IL-2及TNF-α水平。
表2本發明藥物組合物SRS-82荷肉瘤小鼠白細胞數量的影響
注與空白對照組比較，*p＜0.05，**p＜0.01；與絞股藍組比較，#p＜0.05，##p＜0.01。
表3本發明藥物組合物SRS-82荷肉瘤小鼠巨噬細胞吞噬功能的影響
注與空白對照組比較，*p＜0.05，**p＜0.01；與絞股藍組比較，#p＜0.05，##p＜0.01。
表4本發明藥物組合物對SRS-82荷瘤小鼠血清TNF、IL-2水平的影響
注與空白對照組比較，*p＜0.05，**p＜0.01；與絞股藍組比較，#p＜0.05，##p＜0.01。
實驗結果與結論結果見表2、3、4。由表2結果可以看出本發明藥物組合物A、B和絞股藍均可使荷瘤SRS-82小鼠血白細胞數升高(p＜0.05，p＜0.01)。由表3結果可以看出本發明藥物組合物A、B和絞股藍均可使荷瘤SRS-82小鼠巨噬細胞吞噬功能增強(p＜0.05，p＜0.01)。由表4結果可以看出本發明藥物組合物A、B和絞股藍均可使荷瘤SRS-82小鼠血清的TNF及TL-2水平升高(p＜0.05，p＜0.01)。與絞股藍比，本發明藥物組合物A、B各組療效尤為顯著(p＜0.05，p＜0.01)，其中組合物A、B高劑量組療效優于陽性對照藥物康萊特注射液，提示絞股藍、西洋參、黃芪三藥合用有協同抗腫瘤作用。
實驗例3 本發明藥物組合物對小鼠肝癌(HePA)實體瘤生長的影響實驗動物ICR種小鼠，體重18～22g，8周齡，雌雄各半。
供試品陽性對照藥物環磷酰胺注射液；絞股藍注射液自制；本發明藥物組合物A，自制(見實施例9粉針劑處方1)主要有效成分為絞股藍總苷、西洋參總皂苷、黃芪多糖(相當于絞股藍5g，西洋參3g，黃芪4g)；本發明藥物組合物B，自制(見實施例9粉針劑處方2)主要有效成分為絞股藍總苷、西洋參總皂苷、黃芪總皂苷(相當于絞股藍5g，西洋參3g，黃芪4g)。
實驗方法取小鼠均皮下接種肝癌(HePA)瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日分組，稱體重。各組腹腔注射給藥，陽性對照組給藥環磷酰胺。接種瘤小鼠次日開始腹腔注射給藥，共10天，停藥次日稱體重，處死小鼠并剝離皮下瘤塊，稱瘤重，并計算抑瘤率。
實驗結果與結論結果見表5。與空白對照組比較，環磷酰胺、絞股藍、本發明藥物組合物A、B組均對小鼠肝癌(HePA)瘤生長有顯著抑制作用(p＜0.05，p＜0.01)。其中組合物A、B療效明顯優于單用絞股藍(P＜0.01)，高劑量組療效與陽性對照藥物環磷酰胺療效相近，提示絞股藍、西洋參、黃芪三藥合用有協同增效作用。
表5本發明藥物組合物對小鼠肝癌(HePA)實體瘤生長的影響
注與空白對照組比較，*p＜0.05，**p＜0.01；與絞股藍組比較，#p＜0.05，##p＜0.01。
實驗例4 本發明藥物組合物對荷H22小鼠NK細胞活性及淋巴細胞轉化率的影響實驗動物ICR種小鼠，雌性，18～22g，共80只，每組10只。
瘤種人肝癌細胞系SMMC-7721、小鼠肝癌細胞系H22，吉林省腫瘤防治研究所提供。
供試品絞股藍總苷顆粒劑自制；西洋參總皂苷顆粒劑自制；黃芪多糖顆粒劑自制；黃芪總皂苷顆粒劑自制；本發明藥物組合物A不同重量配比組，自制(見實施例7顆粒劑處方1)；本發明藥物組合物B不同重量配比組，自制(見實施例7顆粒劑處方2)。
各藥物用生理鹽水溶解成所需溶液。
實驗方法接種于昆明小鼠第7天的H22腹水，配制成瘤細胞懸液，活細胞數為1×106個/ml，腹水腫瘤細胞于離體后1h內于小鼠腹腔完成接種，每只鼠接種0.1ml(含105個細胞).各給藥組灌胃給藥，空白對照組給予同體積生理鹽水，每天一次，連續10天。
NK細胞活性觀察停藥后第1d處死小鼠，無菌摘除脾臟，制備脾細胞懸液，調脾細胞含量為4×106P/ml，加入96孔培養板，每孔100μl，每只小鼠脾細胞設3復孔，取對數生長期K562細胞，調細胞含量為2×105/ml，每孔加入100μl，使每孔效靶比為20∶1，平行設效應細胞對照孔，按MTT方法加入試劑，計算NK細胞殺傷率。
淋巴細胞轉化率觀察制備脾細胞懸液(4×106/ml)加入96孔培養板，200μl/孔，實驗孔中加入ConA15mg/L，對照孔加入等體積生理鹽水，37℃、5％CO2培養48h后，加入MTT10μl/孔，計數淋巴細胞轉化指數。
表6本發明藥物組合物對荷H22小鼠NK細胞活性及淋巴細胞轉化率的影響
注與空白對照組比較，*p＜0.05，**p＜0.01；與西洋參組比較，#p＜0.05，##p＜0.01；與黃芪多糖組比較，&p＜0.05，&&p＜0.01；與黃芪總皂苷組比較，△p＜0.05，△△p＜0.01；與絞股藍組比較，☆p＜0.05，☆☆p＜0.01。
實驗結果與結論結果見表6。與空白對照組比較，西洋參、黃芪多糖、黃芪總皂苷、絞股藍顯著升高NK細胞活性、淋巴細胞轉化率(p＜0.05)，本發明組合物A、B極顯著升高NK細胞活性、淋巴細胞轉化率(p＜0.01)；與西洋參、黃芪多糖、黃芪總皂苷、絞股藍組比較，本發明藥物組合物A、B顯著升高NK細胞活性、淋巴細胞轉化率(p＜0.05，p＜0.01)，說明本發明藥物組合物A、B的療效優于單用絞股藍，提示絞股藍、西洋參、黃芪三藥合用有協同增效作用。
實驗例5本發明藥物組合物對小鼠Lewis肺癌肺轉移的影響實驗動物ICR種小鼠，雌性，18～22g，共90只，每組10只。
供試品Lewis肺癌瘤株由中國科學院上海藥物研究所腫瘤室提供；參芪金康膠囊由黃芪、人參、姜黃、苦參、仙鶴草、僵蠶、浙貝母13味藥組成，北京瑞普達腫瘤藥物研究所提供，批號030803；絞股藍膠囊自制；本發明藥物組合物A，自制(見實施例6膠囊劑處方1)主要有效成分為絞股藍總苷、西洋參總皂苷、黃芪多糖(相當于絞股藍5g，西洋參3g，黃芪4g)；本發明藥物組合物B，自制(見實施例6膠囊劑處方2)主要有效成分為絞股藍總苷、西洋參總皂苷、黃芪總皂苷(相當于絞股藍5g，西洋參3g，黃芪4g)；各藥物用生理鹽水溶解成所需溶液。
實驗方法將小鼠隨機分為9組，空白對照組、參芪金康組、絞股藍組、本發明組合物A高、中、低劑量組、本發明組合物B高、中、低劑量組，每組10只。小鼠分別肌肉接種Lewis肺癌(1∶3癌細胞勻漿)0.2ml/只，次日各組動物連續灌胃給藥21天，在實驗第22天處死，取肺用壓片法計數肺轉移和轉移灶數。
表7本發明藥物組合對小鼠Lewis肺癌自發轉移的抑制作用
注與空白對照組比，*p＜0.05，**p＜0.01；與參芪金康組比，#p＜0.05；與絞股藍組比，$p＜0.05，$$p＜0.01。
實驗結果與結論結果見表7。與空白對照組比較，參芪金康、絞股藍、本發明藥物組合物A、B能顯著抑制肺癌轉移、顯著抑制肺癌轉移灶數(p＜0.05，p＜0.01)；與參芪金康比較，本發明藥物組合物A、B都能顯著抑制肺轉移率(p＜0.05，p＜0.01)，說明本發明藥物組合物A、B對于肺癌的轉移具有比較好的抑制作用。與絞股藍比，本發明藥物組合物A、B對于肺癌轉移的抑制作用優于單用絞股藍，提示絞股藍、西洋參、黃芪三藥合用有協同增效作用。
實驗例6本發明藥物組合物與5-氟尿嘧啶(5-Fu)合用的增效作用實驗動物ICR種小鼠，體重18～22g，8周齡，雌雄各半，共90只。
供試品陽性對照藥物5-氟尿嘧啶注射液，北京紫竹藥業有限公司；絞股藍注射液自制；本發明藥物組合物A，自制(見實施例8水針劑處方1)主要有效成分為絞股藍總苷、西洋參總皂苷、黃芪多糖(相當于絞股藍5g，西洋參3g，黃芪4g)；本發明藥物組合物B，自制(見實施例8水針劑處方2)主要有效成分為絞股藍總苷、西洋參總皂苷、黃芪總皂苷(相當于絞股藍5g，西洋參3g，黃芪4g)。
實驗方法取小鼠，均皮下接種S180瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日分組，稱體重。除空白對照組外，其余各組均腹腔注射5-氟尿嘧啶(5-Fu)60mg/kg。各組腹腔注射給藥，空白對照組給藥生理鹽水，陽性對照組給藥環磷酰胺。共10天。停藥次日稱體重，處死小鼠剝離皮下瘤塊，稱瘤重，計算抑瘤率和增效率。
增效率(％)＝(化療加水組平均瘤重-化療加藥組平均瘤重)/化療加水組平均瘤重×100％表8本發明藥物組合物與5-氟尿嘧啶抗S180腫瘤的增效作用
注與5-Fu組比較，*p＜0.05，**p＜0.01；與5Fu+絞股藍組比較，#p＜0.05，##p＜0.01。
實驗結果與結論結果見表8。與空白對照組比較，絞股藍、本發明藥物組合物A、B均與5-氟尿嘧啶有協同增效作用(p＜0.05，p＜0.01)，其中組合物A、B增效作用強于單用絞股藍，組合物A、B高劑量組療效增效作用最強(p＜0.01)，提示絞股藍、西洋參、黃芪三藥合用有協同增加抗腫瘤藥物的藥效的作用。
實驗例7本發明藥物組合物對放療的增效作用實驗動物ICR種小鼠，體重18～22g，8周齡，雌雄各半，每組10只，共90只。
供試品絞股藍注射液自制；本發明藥物組合物A，自制(見實施例9粉針劑處方1)主要有效成分為絞股藍總苷、西洋參總皂苷、黃芪多糖(相當于絞股藍5g，西洋參3g，黃芪4g)；本發明藥物組合物B，自制(見實施例9粉針劑處方1)主要有效成分為絞股藍總苷、西洋參總皂苷、黃芪總皂苷(相當于絞股藍5g，西洋參3g，黃芪4g)。
實驗方法取小鼠，均皮下接種S180瘤液(2×107/ml)0.2ml/只，次日分組，稱體重。除空白對照組外其余各組均在接種后第3、第6天用60Co全身照射，照射劑量為0.05Gy/min。各組腹腔注射給藥，空白對照組給藥生理鹽水，陽性對照組給藥環磷酰胺。共給藥10天，停藥次日稱體重，處死動物。剝離皮下瘤塊，稱瘤重，計算抑瘤率和增效率。
表9本發明藥物組合物與氟尿嘧啶抗S180腫瘤的增效作用
注與60Co組比較，*p＜0.05，**p＜0.01；與60Co+絞股藍組比較，#p＜0.05，##p＜0.01。
實驗結果與結論結果見表9。與空白對照組比較，絞股藍、本發明藥物組合物A、B均與60Co放療有協同增效作用(p＜0.05，p＜0.01)，其中組合物A、B增效作用強于單用絞股藍，組合物A、B高劑量組療效增效作用最為顯著(p＜0.01)，提示絞股藍、西洋參、黃芪三藥合用有協同增加化療療效的作用。
實驗例8本發明藥物組合物水針劑特殊安全性實驗1、過敏性實驗實驗動物豚鼠，24只，體重280～310g，雌雄兼用，隨機分為供試藥A組、供試藥B組、陰性對照和陽性對照四組，每大組6只。
供試品本發明藥物組合物A，規格5ml，來源于實施例5；本發明藥物組合物B，規格5ml，來源于實施例5；陰性對照氯化鈉注射液，山東華信制藥有限公司；
陽性對照藥5％卵白蛋白生理鹽水溶液，自制。
給藥劑量致敏劑量0.5ml/只；致敏次數隔日腹腔注射1次，連續3次；攻擊劑量1ml/只，靜脈注射。
實驗方法按上述分組分別給豚鼠隔日腹腔注射上述藥液0.5ml，共注射三次。然后將每大組豚鼠再分成兩小組，每小組3只。第一小組豚鼠于第一次致敏后14天，第二小組于第一次致敏后14天進行抗原攻擊，每只豚鼠均靜脈注射上述藥液1ml。觀察并記錄攻擊后15min內豚鼠的表現。
實驗結果與結論供試藥組和陰性對照藥組豚鼠均未發現過敏反應，而卵白蛋白組產生過敏反應并死亡。表明，組合物注射液無明顯致敏作用。
2、溶血性實驗試驗動物雄性家兔，2只，體重2.5kg。
供試品本發明藥物組合物A，劑型水針，規格5ml，來源于實施例5；本發明藥物組合物B，劑型水針，規格5ml，來源于實施例5；陰性對照氯化鈉注射液，山東華信制藥有限公司。
實驗方法制備2％紅細胞生理鹽水混懸液備用。取潔凈試管7支，編號并排列在試管架上，按下表順序操作，混勻后置37℃水浴中溫育，觀察記錄15min、30min、45min、1h、2h、3h的結果。
實驗結果與結論供試品0.1～0.5ml各管在15min、30min、45min、1h、2h、3h均未出現溶血和紅細胞凝集現象。表明組合物注射液無明顯溶血性。
3、血管刺激性實驗實驗動物家兔，體重2.1～2.3kg，雌雄兼用。
供試品本發明藥物組合物A，劑型水針，規格5ml，來源于實施例8；本發明藥物組合物B，劑型水針，規格5ml，來源于實施例8；對照藥氯化鈉注射液，山東華信制藥有限公司。
給藥劑量家兔靜滴給藥劑量為100ml/kg。
實驗方法取健康家兔9只，隨機分為供試藥A組、供試藥B組、和0.9％氯化鈉注射液對照組，每組3只，劑量均為20ml/kg。給藥前將兔置固定箱中，于耳緣靜脈按上述分組分別滴注供試藥和0.9％氯化鈉注射液，滴速為1ml/min(20滴/min)，觀察給藥后24h注射局部有無充血、水腫、出血、壞死。連續給藥3天，于末次給藥后24h在遠離注射部位1cm的向心端取兔耳用10％福爾馬林固定，做病理學檢查。
實驗結果與結論肉眼觀察及病理檢查表明，給藥組與對照組無明顯差別，用藥部位的血管及周圍組織均未見充血、水腫、出血、壞死，病理檢查無異常。表明，組合物注射液靜脈靜滴對血管無刺激性。
實驗例9本發明藥物組合物注射液穩定性實驗樣品本發明藥物組合物A，劑型水針，規格5ml，來源于實施例8；本發明藥物組合物B，劑型水針，規格5ml，來源于實施例8；考察項目性狀、pH值、澄明度；長期穩定性實驗方法及結果將本品置溫度25℃±2℃、相對濕度60％±10％的條件下放置6個月、12個月，各項指標均無明顯變化，實驗結果表明組合物注射液長期放置基本穩定。
具體實施方式
以下通過實施例形式的具體實施方式
，對本發明的上述內容作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下的實施例。凡基于本發明上述內容所實現的技術均屬于本發明的范圍。以下實施例中各劑型的輔料可以用藥學上可接受的輔料替換，或者減少、增加。
實施例1絞股藍總苷的制備取絞股藍藥材，加75％乙醇回流提取二次，每次2小時，濾過，流液回收乙醇至無醇味，加水使成每1ml相當于2g生藥量的溶液，攪勻，放冷，靜置過夜，濾過，濾液通過已處理好的大孔樹脂柱，先用2倍柱體積的水沖柱，棄去水液，再用3倍柱體積的60％乙醇進行洗脫，收集洗脫液，回收乙醇，濃縮至相對密度為1.08～1.10的濃縮液，噴霧干燥，即得。
分別制得三批絞股藍總苷，提取物得率和含量見表10。
含量測定對照品溶液的制備 精密稱取在60℃減壓干燥3小時的絞股藍皂苷-A對照品適量，加甲醇溶解，制成每1ml含2mg的溶液。
供試品溶液的制備 精密稱取本品50mg，加甲醇溶解，制成每1ml含2mg的溶液。
測定法 精密吸取對照品溶液及供試品溶液各100μl，分別置15ml具塞試管中，精密加入新配制的含5％香草醛冰醋酸溶液與高氯酸(2∶8)的混合液2ml，搖勻，密塞，置60℃水浴中加熱15分鐘，取出，立即放入冰水中冷卻2分鐘，精密加入冰醋酸10ml，搖勻，以試劑作空白，照分光光度法(中國藥典1990年版一部附錄51頁)試驗，在555±5nm波長處測定吸收度，計算，即得。
本品按干燥品計算，含絞股藍總苷以絞股藍皂苷-A(C53H90O21)計，不得少于50.0％。
以下實施例中所用的絞股藍總苷，均為本實施例中制備。
表10絞股藍提取物總皂苷的得率及含量
實施例2西洋參總皂苷的制備取西洋參，加10倍量水，浸泡8小時，濾出浸泡液，繼加8倍量常水，煎煮1小時，共二次，合并浸提液，減壓濃縮至密度為1.19～1.25(60)，噴霧干燥，得水浸膏粉。依次加8、5、5、5倍量正丁醇，沸水浴攪拌提取1h，共4次，合并提取液，減壓回收正丁醇，真空干燥得粗總皂苷。將粗總皂苷拌入20倍量(W/W)D101型大孔樹脂，用熱水沖洗至洗滌水近無色，用4倍量80％乙醇攪拌洗脫二次，每次1h，合并洗脫液，減壓回收正丁醇，噴霧干燥，即得。
西洋參總皂苷的鑒別取本品粉末0.5g，加甲醇25ml，加熱回流1小時，方冷，濾過，濾液蒸干，殘渣加水20ml使溶解，用乙醚振搖提取2次，每次10ml，棄去乙醚液，水層用飽和的正丁醇振搖提取3次，每次15ml，合并正丁醇提取液，用水洗滌2次，每次10ml，分取正丁醇液，蒸干，殘渣加甲醇1ml使溶解，作為供試品溶液。另取西洋參對照藥材1g，同法制成對照藥材溶液。再取擬人身皂苷F11對照品，人參皂苷Rb1對照品，人身皂苷Re對照品，人身皂苷Rg1對照品，加甲醇制成每1ml各含2mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述六種溶液各5ul分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-乙酸乙酯-甲醇-水(15∶40∶22∶10)5～10℃放置12小時的下層溶液為展開劑，展開，取出，晾干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰，分別置日光及子紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜及對照品色譜相應的位置上，分別顯相同顏色的斑點或熒光斑點。
分別制得三批西洋參總皂苷，提取物得率和含量結果見表12。
西洋參總皂苷含量測定對照品溶液 精密稱取西洋參總皂苷對照品4mg，置2ml量瓶中、加甲醇至刻度，搖勻，作為對照品溶液(每1ml含西洋參總皂苷2mg)。
供試品溶液 精密稱取本品1g，加甲醇提取4次(50、40、40、40ml)，每次提取30min。合并提取液，減壓回收至干。加蒸餾水溶解并轉移至50ml量瓶中，用蒸餾水分數次洗滌容器，洗液與水溶液合并，加蒸餾水至刻度，搖勻。精密吸取水溶液20ml置分液漏斗中，用水飽和的正丁醇萃取4次(20、15、15、15ml)，萃取液用正丁醇飽和的水20ml洗滌后，置水浴上減壓回收至干。殘渣加甲醇溶解并轉移至10ml量瓶中，用甲醇多次洗滌容器，洗液并入量瓶，加甲醇至刻度搖勻，即得。
標準曲線 精密量取對照品溶液20、40、60、80、100ul，分別置10ml具塞試管中，置水浴中揮干溶劑，立即取出精密加5％香草醛一冰醋酸液0.2ml、高氯酸0.8ml，搖勻，置60℃水浴中加熱15min，取出，立即以流動水冷卻2min，精密加冰醋酸5ml，搖勻。以相應的試劑為空白，于550nm波長處測定吸收度，以吸收度為縱座標，西洋參總皂苷的ug數為橫座標繪制標準曲線，計算回歸方程。
測定法 分別精密吸取供試品溶液20ul，置10ml具塞試管中。在水浴中揮干溶劑。其余步驟同標準曲線的制備。在550nm波長處測得吸收度，由回歸方程計算出總皂苷的量。
人參皂苷Rg1、Rb1、Re的含量測定照高效液相色譜法色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙睛為流動相A，以0.1％磷酸溶液為流動相B，按下表中的規定進行梯度洗脫；檢測波長為203nm；柱溫40℃。理論板數按人參Rb1峰計算不低于4000。
表11梯度洗脫流動相配比表
對照品溶液得制備 精密稱取人參皂苷Rg1對照品、人參皂苷Re對照品、人參Rb1對照品適量，加甲醇制成每1ml含人參皂苷Rg1對照品0.1mg、人參皂苷Re對照品0.4mg、人參皂苷Rb11mg，供試品溶液的制備 取本品粉末(過三號篩)約1g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入水飽和的正丁醇50ml，稱定重量，置水浴中加熱回流提取1.5小時，放冷，再稱定重量，用水飽和的正丁醇補足減失重量，搖勻，濾過。精密量取續濾液25ml，置蒸發皿中，蒸干，殘渣加50％甲醇至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液與供試品溶液各20μl，注入液相色譜儀，測定，即得。以下實施例中所用的西洋參總皂苷，均為本實施例中制備。
表12西洋參總皂苷的得率及含量
實施例3黃芪多糖的制備取黃芪藥材，加7倍量70％乙醇提取二次，每次2小時，提取液棄去，取藥渣加水提取二次，提取液合并，濃縮至提取液體積與生藥材的比例為1.05∶1，加入乙醇沉淀使含醇量達到70％，過濾，得沉淀，沉淀用70％乙醇洗滌，再用適量水溶解，過濾，濾液過大孔樹脂，用水洗脫，收集水洗液，將水洗液濃縮至藥液體積與藥材比例為1∶2.5，加入乙醇使含醇量達到70％，得沉淀，將沉淀用95％乙醇和丙酮洗滌脫水，減壓干燥(60℃)，即得。
分別制得三批黃芪多糖，提取物得率和含量結果見表13。
黃芪多糖的鑒別(1)取本品約0.2g，加水5ml溶解后，加堿性酒石酸銅試液5滴，加熱即產生紅色沉淀，冷卻，濾過，取濾液加鹽酸1滴使成酸性，水浴加熱10分鐘，放冷，調節pH值至中性，加堿性酒石酸銅試液0.5ml，水浴加熱即產生紅色的氧化亞銅沉淀。
(2)取本品約0.2g，加水2ml溶解后，加5％α-萘酚乙醇溶液0.5ml搖勻，緩緩加入硫酸3ml，兩液面交界處顯紫紅色環。
黃芪多糖含量測定標準溶液的制備 取105℃干燥至恒重的葡萄糖100mg，精密稱定，置100ml量瓶中，加水溶解，并稀釋至刻度，搖勻。精密量取10ml，置100ml量瓶中，加水至刻度，搖勻，備用。
標準曲線繪制 精密量取標準溶液0.1ml～0.6ml共6份，分別置25ml量瓶中，加水至2.0ml，并加苯酚溶液(取苯酚300g，鋁片0.3g，碳酸氫鈉0.15g，混合蒸餾，收集182℃餾分，配制成5％水溶液)1.0ml，搖勻，迅速滴加濃硫酸5.0ml，搖勻，放置5min，置水浴中加熱15min，取出，迅速冷卻至室溫，另以2.0ml水同上平行操作作為空白對照，在490nm波長處測定吸收值，計算回歸方程。
測定方法 取黃芪提取物0.5g置25ml量瓶中，照標準曲線繪制項下的方法自“加水至2.0ml”起，依法測定吸收值，依回歸方程計算多糖的含量。
以下實施例中所用的黃芪多糖，均為本實施例中制備。
表13黃芪多糖的得率及含量
實施例4黃芪總皂苷的制備取黃芪藥材，加水煎煮三次，每次1.5小時，合并煎液，濾過，濾液濃縮至相對密度為1.20～1.25(60℃)g，用乙醇沉淀處理2次，第一次溶液中含醇量為75％，第二次為85％，每次均冷藏放置，回收乙醇并濃縮至每1ml相當于原藥材10g，用注射用水稀釋至每1ml相當于原藥材1g，冷藏放置12小時，濾過，濾液減壓濃縮、真空干燥，即得。
分別制得三批黃芪總皂苷提取物，提取物得率和含量結果見下表14。
黃芪總皂苷鑒別試驗鑒別試驗一 取本品0.01g，加甲醇20ml，加熱回流1小時，濾過，濾液加于中性氧化鋁柱(100～120目，5g，內徑10～15mm)上，用40％甲醇100ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，殘渣加水30ml使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取2次，每次20ml，合并正丁醇液；用水洗滌2次，每次20ml；棄去水液，正丁醇液蒸干，殘渣加甲醇0.5ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪甲苷對照品，加甲醇制成每1ml含1mg的溶液，作為對照品溶液。吸取上述兩種溶液各2μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇-水(13∶7∶2)的下層溶液為展開劑，展開，取出，涼干，噴以10％硫酸乙醇溶液，在105℃加熱至斑點顯色清晰。供試品色譜中，在與對照品色譜相應的位置上，日光下顯相同的棕褐色斑點；紫外光燈(365nm)下顯相同的橙黃色熒光斑點。
鑒別試驗二 取本品0.01g，加乙醇30ml，加熱回流20分鐘，濾過，濾液加0.3％氫氧化鈉溶液15ml使溶解，濾過，濾液用稀鹽酸調節pH值至5～6，用乙酸乙脂15ml振搖提取，分取乙酸乙脂液，用鋪有無水硫酸鈉的濾紙濾過，濾液蒸干，殘渣加乙酸乙脂1ml使溶解，作為供試品溶液。另取黃芪對照藥材2g，同法制成對照藥材溶液。吸取上述兩種溶液各10μl，分別點于同一硅膠G薄層板上，以三氯甲烷-甲醇(10∶1)作為展開劑，展開，取出，涼干，置氨蒸氣中熏后置紫外光燈(365nm)下檢視。供試品色譜中，在與對照藥材色譜相應的位置上，顯相同顏色的熒光主斑點。
黃芪總皂苷含量測定總皂苷的含量測定對照品溶液的制備 精密稱取于105℃干燥至恒重的黃芪甲苷對照品約10mg，置100ml量瓶中，加甲醇溶解并稀釋至刻度，搖勻，即得(每1ml含黃芪甲苷干品0.1mg)。
供試品溶液的制備 取本品0.1g，精密稱定，加水25ml使溶解，移至分液漏斗中，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次20ml，合并正丁醇液，用正丁醇飽和的水洗滌兩次，每次10ml，棄去水液，正丁醇至水浴上蒸干，殘渣加甲醇溶解，移至25ml量瓶中，并加甲醇稀釋至刻度，搖勻，濾過，取續濾液，即得。
測定法 精密量取對照品溶液、供試品溶液各1ml，置25ml鈉氏比色管，置水浴中蒸干，放冷，加新鮮配制的5％香草醛-冰醋酸溶液0.4ml，高氯酸1.6ml，搖勻，放置5分鐘，置沸水浴中顯色15分鐘，取出，立即置冰浴中冷卻至室溫，加入8ml冰醋酸，搖勻，在538nm波長處測定吸光度，計算，即得。
黃芪甲苷的含量測定色譜條件與系統適用性試驗 以十八烷基鍵合硅膠為填充劑；以乙睛-水(32∶68)為流動相；蒸發光散射檢測器。理論板數以黃芪甲苷峰計算不低于4000。
對照品溶液的制備 精密稱取黃芪甲苷對照品適量，加甲醇制成每1ml含0.5mg的溶液，即得。
供試品溶液的制備 精密稱取本品0.04g，精密稱定，置索氏提取器中，甲甲醇40ml，冷侵過夜，再加甲醇適量，加熱回流4小時，提取液回收溶劑并濃縮至干，殘渣加水10ml，微熱使溶解，用水飽和的正丁醇振搖提取4次，每次40ml，合并正丁醇液，用氨試液充分洗滌2次，每次40ml，棄去氨液，正丁醇液蒸干，殘渣加水5ml使溶解，方冷，通過D101型大孔吸附樹脂柱(內徑1.5cm，長12cm)，以水50ml洗脫，棄去水液，再用40％乙醇30ml洗脫，棄去洗脫液，繼用70％乙醇80ml洗脫，收集洗脫液，蒸干，用甲醇溶解并轉移至5ml量瓶中，加甲醇稀釋至刻度，搖勻，即得。
測定法 分別精密吸取對照品溶液10μl、20μl與供試品溶液20μl，注入液相色譜儀，測定，以外標兩點對數方程計算，即得。
以下實施例中所用的黃芪總皂苷，均為本實施例中制備。
表14黃芪總皂苷的得率及含量
實施例5本發明藥物組合物片劑的制備處方1絞股藍提取物128.0g(相當于絞股藍5kg)西洋參提取物40.2g(相當于西洋參3kg)黃芪多糖43.2g(相當于黃芪4kg)淀粉120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2.0g羧甲淀粉鈉 10.0g共制備 1000片處方2絞股藍提取物128.0g(相當于絞股藍5kg)西洋參提取物40.2g(相當于西洋參3kg)黃芪總皂苷 46.0g(相當于黃芪4kg)淀粉120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2.0g羧甲淀粉鈉 10.0g共制備 1000片處方3絞股藍提取物12.8g(相當于絞股藍0.5kg)西洋參提取物13.4g(相當于西洋參1kg)黃芪多糖10.8g(相當于黃芪1kg)淀粉120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2.0g羧甲淀粉鈉 10.0g共制備 1000片處方4絞股藍提取物12.8g(相當于絞股藍0.5kg)西洋參提取物13.4g(相當于西洋參1kg)黃芪總皂苷 11.5g(相當于黃芪1kg)淀粉120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂2.0g羧甲淀粉鈉 10.0g共制備 1000片處方5絞股藍提取物 512.0g(相當于絞股藍20kg)西洋參提取物 402.0g(相當于西洋參30kg)黃芪多糖 1080.0g(相當于黃芪100kg)淀粉 120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂 2.0g羧甲淀粉鈉 10.0g共制備 5000片處方6絞股藍提取物 512.0g(相當于絞股藍20kg)西洋參提取物 402.0g(相當于西洋參30kg)黃芪總皂苷 1150.0g(相當于黃芪100kg)淀粉 120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂 2.0g羧甲淀粉鈉 10.0g共制備 5000片處方7絞股藍提取物 256.0g(相當于絞股藍10kg)西洋參提取物 80.4g(相當于西洋參6kg)黃芪多糖 270.0g(相當于黃芪25kg)淀粉 120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂 2.0g羧甲淀粉鈉 10.0g共制備 5000片處方8絞股藍提取物 256.0g(相當于絞股藍10kg)西洋參提取物 80.4g(相當于西洋參6kg)黃芪總皂苷 287.5g(相當于黃芪25kg)淀粉 120.0g微晶纖維素 40.0g2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂 2.0g羧甲淀粉鈉 10.0g共制備 5000片制備工藝原料和淀粉、微晶纖維素加2％HPMC水溶液制軟材，然后制粒、干燥，加入硬脂酸鎂、羧甲淀粉鈉整粒，半產品檢驗后確定片重，壓片、包裝得成品。
實施例6本發明藥物組合物膠囊劑的制備處方1絞股藍提取物 128.0g(相當于絞股藍5kg)西洋參提取物 40.2g(相當于西洋參3kg)黃芪多糖 43.2g(相當于黃芪4kg)淀粉 60.0g微晶纖維素 20.0g2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂 1.0g共制備 1000粒處方2絞股藍提取物 128.0g(相當于絞股藍5kg)西洋參提取物 40.2g(相當于西洋參3kg)黃芪總皂苷 46.0(相當于黃芪4kg)淀粉 60.0g微晶纖維素 20.0g2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂 1.0g共制備 1000粒處方3絞股藍提取物 128.0g(相當于絞股藍5kg)西洋參提取物 26.8g(相當于西洋參2kg)黃芪多糖 21.6g(相當于黃芪2kg)淀粉 60.0g微晶纖維素 20.0g2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂 1.0g共制備 1000粒處方4絞股藍提取物 128.0g(相當于絞股藍5kg)西洋參提取物 26.8g(相當于西洋參2kg)黃芪總皂苷 23.0g(相當于黃芪2kg)淀粉 60.0g微晶纖維素 20.0g2％HPMC水溶液適量硬脂酸鎂 1.0g共制備 1000粒處方5絞股藍提取物 128.0g(相當于絞股藍5kg)西洋參提取物 80.4g(相當于西洋參6kg)黃芪多糖 10.8g(相當于黃芪1kg)淀粉 60.0g微晶纖維素 20.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 1.0g共制備 1000粒處方6絞股藍提取物 128.0g(相當于絞股藍5kg)西洋參提取物 80.4g(相當于西洋參6kg)黃芪總皂苷 11.5g(相當于黃芪1kg)淀粉 60.0g微晶纖維素 20.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 1.0g共制備 1000粒處方7絞股藍提取物 256.0g(相當于絞股藍10kg)西洋參提取物 26.8g(相當于西洋參2kg)黃芪多糖 43.2g(相當于黃芪4kg)淀粉 60.0g微晶纖維素 20.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 1.0g共制備 1000粒處方8絞股藍提取物 256.0g(相當于絞股藍10kg)西洋參提取物 26.8g(相當于西洋參2kg)黃芪總皂苷 46.0(相當于黃芪4kg)淀粉 60.0g微晶纖維素 20.0g2％HPMC水溶液 適量硬脂酸鎂 1.0g共制備 1000粒制備工藝原料和淀粉、微晶纖維素加2％HPMC水溶液制軟材，然后制粒、干燥，加入硬脂酸鎂整粒，半產品檢驗后確定裝量，裝膠囊、包裝得成品。
實施例7本發明藥物組合物顆粒劑的制備處方1絞股藍提取物 128.0g(相當于絞股藍5kg)西洋參提取物 40.2g(相當于西洋參3kg)黃芪多糖 43.2g(相當于黃芪4kg)糖粉 2000.0g矯味劑 適量2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包處方2絞股藍提取物 128.0g(相當于絞股藍5kg)西洋參提取物 40.2g(相當于西洋參3kg)黃芪總皂苷 46.0(相當于黃芪4kg)矯味劑 適量糖粉 2000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包處方3絞股藍提取物 25.6g(相當于絞股藍1kg)西洋參提取物 26.8g(相當于西洋參2kg)黃芪多糖 21.6g(相當于黃芪2kg)糖粉 2000.0g矯味劑 適量2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包處方4絞股藍提取物 25.6g(相當于絞股藍1kg)西洋參提取物 26.8g(相當于西洋參2kg)黃芪總皂苷 23.0g(相當于黃芪2kg)矯味劑 適量糖粉 2000.0g2％HPMC50％乙醇溶液 適量共制備 1000包制備工藝原料和糖粉加2％HPMC50％乙醇溶液制軟材，然后制粒、干燥，半產品檢驗后確定裝量，分裝得成品。
實施例8本發明藥物組合物水針劑的制備處方1絞股藍提取物 128.0g(相當于絞股藍5kg)西洋參提取物 40.2g(相當于西洋參3kg)黃芪多糖 43.2g(相當于黃芪4kg)聚山梨酯-80 100ml注射用水 加至5000ml共制備 1000支處方2絞股藍提取物128.0g(相當于絞股藍5kg)西洋參提取物40.2g(相當于西洋參3kg)黃芪總皂苷 46.0(相當于黃芪4kg)聚山梨酯-80 100ml注射用水加至5000ml共制備 1000支處方3絞股藍提取物256.0g(相當于絞股藍10kg)西洋參提取物40.2g(相當于西洋參3kg)黃芪多糖270.0g(相當于黃芪25kg)聚山梨酯-80 100ml注射用水加至5000ml共制備 1000支處方4絞股藍提取物256.0g(相當于絞股藍10kg)西洋參提取物40.2g(相當于西洋參3kg)黃芪總皂苷 287.5g(相當于黃芪25kg)聚山梨酯-80 100ml注射用水加至5000ml共制備 1000支處方5絞股藍提取物25.6g(相當于絞股藍1kg)西洋參提取物40.2g(相當于西洋參3kg)黃芪多糖21.6g(相當于黃芪2kg)聚山梨酯-80 100ml注射用水加至5000ml共制備 1000支處方6絞股藍提取物25.6g(相當于絞股藍1kg)西洋參提取物40.2g(相當于西洋參3kg)黃芪總皂苷 23.0g(相當于黃芪2kg)聚山梨酯-80 100ml注射用水加至5000ml共制備 1000支制備工藝原輔料用注射用水溶解配液，經活性炭吸附處理后過濾、定容、精慮、半成品檢驗、灌封、滅菌、檢漏、燈檢、包裝制成成品。
實施例9本發明藥物組合物粉針劑的制備處方1絞股藍提取物 128.0g(相當于絞股藍5kg)西洋參提取物 40.2g(相當于西洋參3kg)黃芪多糖 43.2g(相當于黃芪4kg)聚山梨酯-80 100ml甘露醇300g無菌注射用水 加至5000ml共制備1000支處方2絞股藍提取物 128.0g(相當于絞股藍5kg)西洋參提取物 40.2g(相當于西洋參3kg)黃芪總皂苷46.0(相當于黃芪4kg)聚山梨酯-80 100ml甘露醇300g無菌注射用水 加至5000ml共制備1000支制備工藝原輔料用無菌注射用水配液，經活性炭吸附處理后過濾、定容、精慮、半成品檢驗、灌裝、凍干、壓塞、軋蓋、包裝制成成品。
實施例10本發明藥物組合物葡萄糖注射液的制備處方1絞股藍提取物 128.0g(相當于絞股藍5kg)西洋參提取物 40.2g(相當于西洋參3kg)黃芪多糖 43.2g(相當于黃芪4kg)聚山梨酯-80 100ml葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶處方2絞股藍提取物 128.0g(相當于絞股藍5kg)西洋參提取物 40.2g(相當于西洋參3kg)黃芪總皂苷46.0(相當于黃芪4kg)聚山梨酯-80 100ml葡萄糖5000g注射用水 加至100000ml共制備1000瓶制備工藝原輔料用注射用水溶解配液，經活性炭吸附處理后過濾、定容、精慮、半成品檢驗、灌裝、加塞、軋蓋、滅菌、檢漏、燈檢、包裝制成成品。
權利要求
1.一種抗腫瘤的藥物組合物，其特征在于，制成該藥物組合物所含藥效成分的原料藥的組成為絞股藍0.5～20份、西洋參1～30份、黃芪1～100份。
2.如權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，制成該藥物組合物所含藥效成分的原料藥的組成為絞股藍1～10份、西洋參2～6份、黃芪2～25份。
3.如權利要求2所述的藥物組合物，其特征在于，制成該藥物組合物所含藥效成分的原料藥的組成為絞股藍5份、西洋參3份、黃芪4份。
4.如權利要求1-3所述的任一藥物組合物，其特征在于，其中的原料藥可以用適宜的溶劑和方法單提或混提制備得到提取物，總提取物再與藥學上可接受的輔料混合制成任一制劑。
5.如權利要求4所述的藥物組合物，其特征在于，總提取物中所含的主要有效成分為皂苷和/或多糖，總提取物中主要有效成分的總含量不低于50％。
6.如權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于，該組合物還可以由下列原料藥制成，其重量配比為絞股藍總苷1～80份、西洋參總皂苷0.5～60份、黃芪多糖0.5～200份；或者為絞股藍總苷1～80份、西洋參總皂苷0.5～60份、黃芪總皂苷0.5～200份。
7.如權利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，該組合物還可以由下列原料藥制成，其重量配比為絞股藍總苷2～40份、西洋參總皂苷1～12份、黃芪多糖1～50份；或者為絞股藍總苷2～40份、西洋參總皂苷1～12份、黃芪總皂苷1～50份。
8.如權利要求7所述的藥物組合物，其特征在于，絞股藍總苷中總苷的含量不低于30％；西洋參總皂苷中總皂苷的含量不低于30％，其中人參皂苷Rg1、Rb1、Re的含量和不低于2％；黃芪多糖中多糖的含量不低于35％；黃芪總皂苷中總皂苷的含量不低于30％，其中黃芪甲苷的含量不低于1％。
9.如權利要求1、2、3、6、7所述的任一藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物可以加藥學上可接受的輔料制成任何一種制劑。
10.如權利要求9所述的藥物組合物，其特征在于，該藥物組合物可以制成注射劑或口服制劑。
全文摘要
本發明屬于醫藥技術領域，公開了一種藥物組合物及其制備方法，以及含有該藥物組合物的制劑，該藥物組合物主要由絞股藍、西洋參和黃芪制成，其重量配比為絞股藍0.5～20份、西洋參1～30份、黃芪1～100份。該組合物還可以由絞股藍總皂苷、西洋參總皂苷、黃芪多糖或黃芪總皂苷制成，其重量配比為絞股藍總皂苷1～80份、西洋參總皂苷0.5～60份、黃芪多糖0.5～200份；或者為絞股藍總皂苷1～80份、西洋參總皂苷0.5～60份、黃芪總皂苷0.5～200份。該藥物組合物可以制成任何一種臨床上或藥學上可接受的劑型。該藥物組合物具有抗腫瘤作用，可用于原發性肝癌、肺癌、直腸癌、惡性淋巴瘤、婦科惡性腫瘤等。
文檔編號A61P35/00GK1954840SQ20061014263
公開日2007年5月2日 申請日期2006年10月25日 優先權日2005年10月26日
發明者黃振華 申請人:黃振華