專利名稱：紫杉醇脂質體及其制備方法
技術領域：
本發明屬于醫藥技術領域，涉及抗腫瘤藥物紫杉醇的熱敏脂質體、長循環脂質體和熱敏長循環脂質體制劑，還涉及這些脂質體的制備方法。
背景技術：
紫杉醇為20世紀后期人類發現的具有確切和較強抗癌效果的單體化合物，被稱為人類攻克癌癥路程上的里程碑，尤其是該藥在治療乳腺癌，卵巢癌，非小細胞肺癌等惡性腫瘤方面已成為首選藥物。
目前臨床應用的紫杉醇注射液有國產的紫素，泰素，進口的Taxol(美國BMS公司)，Anzatax(澳大利亞Fauliding公司)等產品，這些產品均利用表面活性劑增溶法解決紫杉醇不溶于水的缺點，以達到靜脈給藥目的。但這些制劑在臨床使用上出現不少副作用，尤其是已有市售紫杉醇注射液Taxol通常使用聚氧乙烯蓖麻油與無水乙醇作為混合溶媒溶解了包裝袋上的有機物質，從而有引發過敏反應、超過敏反應的風險，使得用藥前不得不給與抗過敏藥作為預處理，即使如此仍有超過2％的嚴重過敏反應發生而引起死亡，并且該藥還有相當強的心臟毒性。以上問題給患者和醫護人員帶來相應痛苦和不便，使該藥在臨床使用上受到限制。克服紫杉醇水不溶性缺點的同時減少其毒副作用是目前亟待解決的問題。
脂質體系指由磷脂為膜材及附加劑組成的封閉囊泡，具有雙分子層結構。由于其結構類似生物膜，可包封水溶性和脂溶性藥物，具有提高藥物穩定性，減少藥物用量，降低毒性；減輕變態反應和免疫反應；延緩釋放，降低體內消除速度；改變藥物在體內的分布，并能靶向性釋藥等優點而得到廣泛注意和深入研究。因為脂質體的獨特性能，對其的研究一直沒有停止，目前正處于蓬勃發展的階段。近年來脂質體的研究和應用有很大進展，一些藥物的脂質體已用于多種給藥途徑和制劑，并開展了廣泛的臨床應用。作為藥物載體，脂質體可用于腫瘤、感染性疾病、心血管疾病和皮膚病等的治療。同時發現脂質體的穩定性差已成為其應用中的主要問題，脂質體進入體內后，由于血中的白蛋白、調理素、抗體等各種因素作用，脂質體發生破裂，包封藥物快速滲漏，很快被網狀內皮系統識別、吸收，限制了它的靶向功能。為此從各種途徑想辦法提高脂質體的穩定性，并增強其靶向性，制備了熱敏長循環脂質體。
長循環脂質體是用聚乙二醇衍生物等高分子物質修飾或包覆的脂質體制劑，由于脂質體表面被修飾或包覆上高分子物質，其立體位阻保護脂質體不被血液中的調理素識別、攝取，從而降低了與MPS的親和性，使脂質體的清除速度減慢，在血液中的駐留時間明顯延長，有利于腫瘤組織及病理部位對藥物的吸收。
熱敏脂質體在高于生理溫度的條件下可有效地將藥物釋放到靶部位，包封抗腫瘤藥物的熱敏脂質體與腫瘤熱療相結合治療腫瘤的效果更好(1)在脂質體的相轉變溫度附近提高藥物的選擇性釋放；(2)熱療使腫瘤外周血循環增強，微血管和組織細胞滲透性增強，使抗腫瘤藥物在網狀內皮系統的蓄積增加；(3)使腫瘤細胞對脂質體釋放的藥物更易接受和滲入，促進藥物擴散和內吞進入腫瘤細胞，減少腫瘤細胞的耐藥性。
單純熱敏脂質體和單純長循環脂質體都有不足熱敏脂質體雖然有明確的“被動”靶向性，但在血液中滯留時間短，未到達加熱靶區部位時已部分被破壞，影響了治療效果；而單純長循環脂質體只是在體內留存時間較長但不具有在特定部位釋藥的“被動”靶向性。為了取長補短，制備出了熱敏長循環脂質體，這種熱敏長循環脂質體既具有熱敏性，又具有在生物體內穩定的長循環性，是真正意義的“靶向”制劑。
將紫杉醇載入到脂質體中是解決其臨床給藥困難，給藥時易產生副作用的一種途徑，從而可以解決相應問題1、將紫杉醇載入脂質體中，免除了產生毒副作用的表面活性劑的使用。
2、將其制成脂質體制劑，由于網狀內皮系統的吞噬，使紫杉醇在體內產生一定的儲庫效應和靶向性。
3、將其制成熱敏長循環脂質體不僅可延長其在血液中的循環時間，還可顯著增強其腫瘤靶向性，更有利于藥物在腫瘤部位的蓄積和釋放，繼而產生有效的藥理作用。
發明內容
本發明目的是解決紫杉醇水不溶性和副作用而制備了熱敏脂質體、長循環脂質體以及熱敏長循環脂質體。
本發明也相應提供了紫杉醇熱敏脂質體注射劑、長循環脂質體注射劑、熱敏長循環脂質體注射劑、熱敏脂質體凍干制劑、長循環脂質體凍干制劑以及熱敏長循環脂質體凍干制劑的制備方法。
本發明通過以下措施實現紫杉醇熱敏脂質體、長循環脂質體和熱敏長循環脂質體的配方包括1％-30％紫杉醇，1％-95％磷脂，0％-30％膽固醇，0％-50％熱敏性輔料D，0％-50％輔料G，0-80％凍干保護劑，0-10％十八胺，0.001-50％抗氧劑，緩沖鹽適量。
其磷脂采用現已上市的商品磷脂，其中包括天然提取磷脂，或者半合成或全合成的磷脂，或者天然磷脂和半合成或全合成磷脂的混合物。
其商品天然磷脂源于大豆、蛋黃、動物腦中的天然磷脂。
其商品半合成或全合成磷脂包括二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、磷脂酰絲氨酸(PS)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰乙醇胺(PE)、磷脂酰甘油(PG)、磷脂酰膽堿(PC)、二鯨蠟磷酸酯(DCP)、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿(DMPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)、二月桂酰磷脂酰膽堿(DLPC)、二油酰磷脂酰膽堿(DOPC)等。
其熱敏性輔料D是可使脂質體具有熱敏性的輔料，或者是一種摻入后可使脂質體膜材具有熱敏性的藥物，或者是可使膜材具有熱敏性的表面活性劑，或者是本身具有熱敏性的磷脂如二棕櫚酰磷脂酰膽堿(DPPC)、二硬脂酰磷脂酰膽堿(DSPC)等。也可以在膜材中加入熱敏性聚合物如聚異丙烯酰胺，聚異丙烯酸、聚磷酸酯、聚磷酯酰胺共聚物等熱敏聚合物；也可采用在膜材中加入某些油性藥物，例如莪術油、欖香烯或鴨膽子油等；也可以在處方中加入表面活性劑，例如芐澤類表面活性劑或吐溫80等。可以使脂質體的相變溫度適合于腫瘤熱療溫度的各種方法均包括在內。
其輔料G為聚乙二醇(PEG)或聚山梨醇酯(Tween)，均為聚氧乙烯型非離子表面活性劑，包括各不同分子量的聚乙二醇(200-8000)，一系列聚山梨醇酯(20-85)聚氧乙烯失水山梨醇單月桂酸酯(Tween20)，聚氧乙烯失水山梨醇單棕櫚酸酯(Tween40)，聚氧乙烯失水山梨醇單硬脂酸酯(Tween60)，聚氧乙烯失水山梨醇酯三硬脂酸酯(Tween65)，聚氧乙烯失水山梨醇酯單油酸酯(Tween80)，聚氧乙烯失水山梨醇三油酸酯(Tween85)。
其凍干保護劑包括單糖為甘露醇、葡萄糖，雙糖為乳糖、蔗糖、麥芽糖，多糖為海藻糖。
其抗氧劑為亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、抗壞血酸、沒食子酸丙酯、抗壞血酸棕櫚酸酯、叔丁基對羥基茴香醚(BHA)、二叔丁基對甲酚(BHT)、維生素E、半胱氨酸、蛋氨酸中的一種或一種以上的混合物。丁羥基茴香醚(BHA)、丁羥基甲苯(BHT)、硫二丙酸、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、二硫代氨基苯甲酸類、抗壞血酸、枸櫞酸、蘋果酸、山梨醇、甘油、丙二醇、抗壞血酸棕櫚酸酯、氫醌、羥基香豆素、維生素E、乙醇胺、磷酸及其鹽、亞磷酸及其鹽中的一種或幾種。
其緩沖鹽溶液為乙醇-醋酸緩沖液、三羥甲基氨基甲烷緩沖液、巴比妥緩沖液、甲酸鈉緩沖液、鄰苯二甲酸鹽緩沖液、枸櫞酸鹽緩沖液、枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液、氨-氯化銨緩沖液、硼砂-氯化鈣緩沖液、醋酸鹽緩沖液、醋酸-鋰鹽緩沖液、醋酸-醋酸鈉緩沖液、醋酸-醋酸銨緩沖液、磷酸-三乙胺緩沖液、磷酸鹽緩沖液，且pH范圍為3-10。
本發明的制備方法可采用逆向蒸發法、凍融法、薄膜分散法、冷凍干燥法以及以上任意兩種或兩種以上方法結合使用的方法等。
本發明的優點有解決了紫杉醇水不溶性缺點，與現有制劑相比降低了毒副作用，由于其作用時間長，因而延長了給藥時間，提高了病人的順應性，同時也提高了化療藥物紫杉醇的靶向性，增強了其抗腫瘤作用。各種配方成分均為生理相容性物質，安全且易購，通過調整處方中原料的量，可制得熱敏脂質體、長循環脂質體以及熱敏長循環脂質體，并可控制脂質體粒徑大小，以適應各種給藥途徑及用藥要求。
具體實施例方式
實施例1處方紫杉醇 0.4g注射用豆磷脂20.0g膽固醇 2.4g輔料D 5.0g十八胺 0.1g
維生素E 0.2g緩沖鹽溶液至200mL制備工藝將處方量紫杉醇、注射用豆磷脂、膽固醇、輔料D、維生素E溶解于有機溶劑中并倒入梨形瓶，再加入含有十八胺的少量緩沖鹽溶液，超聲使成均勻乳，旋轉蒸發儀上減壓除盡有機溶劑，使成凝膠，渦流振蕩間隔減壓蒸餾，得白色均勻脂質體溶液，再用緩沖溶液定容至200mL。再通過加壓過膜(0.22μm)整粒除熱原，分裝至西林瓶中冷凍干燥，即得紫杉醇熱敏脂質體。
實施例2處方紫杉醇 0.4g注射用豆磷脂20.0g膽固醇 2.4g輔料D 5.0g十八胺 0.1g維生素E 0.2g緩沖鹽溶液 至200mL制備工藝將處方量紫杉醇、注射用豆磷脂、膽固醇、輔料D、維生素E溶解于有機溶劑中并倒入梨形瓶，再加入含有十八胺的少量緩沖鹽溶液，超聲使成均勻乳，旋轉蒸發儀上減壓除盡有機溶劑，使成凝膠，渦流振蕩間隔減壓蒸餾，得白色均勻脂質體溶液，再用緩沖溶液定容至200mL。再通過加壓過膜(0.22μm)整粒除熱原，分裝至安瓿中冰箱冷凍后室溫融化，重復3次，即得紫杉醇熱敏脂質體。
實施例3處方紫杉醇 0.4g注射用豆磷脂20.0g膽固醇 2.4g輔料D 5.0g蔗糖5.0g甘露醇 0.1g十八胺 0.1g維生素E 0.2g緩沖鹽溶液 至200mL制備工藝將處方量紫杉醇、注射用豆磷脂、膽固醇、輔料D、維生素E溶解于有機溶劑中并倒入梨形瓶，在30轉/秒，60℃水浴條件下旋轉蒸干有機溶劑，使在玻璃瓶壁上形成干膜，將處方量蔗糖與甘露醇溶解在200mL緩沖鹽溶液中，倒入梨形瓶中在40轉/秒，室溫(25℃)條件下旋轉水化直至將瓶壁上的干膜完全洗脫下來為止，并將所得粗混懸液在室溫(25℃)條件下水化1小時。所得粗混懸液依次通過0.8μm微孔濾膜1次，0.45μm微孔濾膜3次，0.22μm微孔濾膜3次，0.1μm微孔濾膜3次，得最終混懸液，裝瓶，罐封氮氣，冷凍干燥，即得紫杉醇熱敏脂質體。
實施例4紫杉醇0.3g注射用豆磷脂 20.0g膽固醇2.5gPEG4000 0.5g維生素E 0.1g緩沖鹽溶液至200mL制備工藝將處方量紫杉醇、注射用豆磷脂、膽固醇、維生素E溶解于有機溶劑中并倒入梨形瓶，在30轉/秒，60℃水浴條件下旋轉蒸干有機溶劑，使在玻璃瓶壁上形成干膜，將處方量PEG4000溶解在200mL緩沖鹽溶液中，倒入梨形瓶中在40轉/秒，室溫(25℃)條件下旋轉水化直至將瓶壁上的干膜完全洗脫下來為止，并將所得粗混懸液在室溫(25℃)條件下水化1小時。所得粗混懸液依次通過0.8μm微孔濾膜1次，0.45μm微孔濾膜3次，0.22μm微孔濾膜3次，0.1μm微孔濾膜3次，得最終混懸液，裝安瓿，罐封氮氣，即得紫杉醇長循環脂質體。
實施例5處方紫杉醇 0.5g注射用豆磷脂20.0g膽固醇 2.5g輔料D 5.0gPEG400 0.5g十八胺 0.1g維生素E 0.2g緩沖鹽溶液 至200mL制備工藝將處方量紫杉醇、注射用豆磷脂、膽固醇、輔料D、維生素E溶解于有機溶劑中并倒入梨形瓶，再加入含有十八胺的少量緩沖鹽溶液，超聲使成均勻乳，旋轉蒸發儀上減壓除盡有機溶劑，使成凝膠，渦流振蕩間隔減壓蒸餾，得白色均勻脂質體溶液，再用含有PEG4000的緩沖溶液定容至200mL。通過加壓過膜(0.22μm)整粒除熱原，分裝至安瓿中，灌封氮氣，即得紫杉醇熱敏長循環脂質體。
實施例6紫杉醇0.5g
DSPC 5.0gDPPC 1.0gPEG40000.5g維生素E0.2g緩沖鹽溶液 至200mL制備工藝將處方量紫杉醇、DSPC、DPPC、維生素E溶解于有機溶劑中并倒入梨形瓶，在30轉/秒，60℃水浴條件下旋轉蒸干有機溶劑，使在玻璃瓶壁上形成干膜，將處方量PEG4000溶解在200mL緩沖鹽溶液中，倒入梨形瓶中在40轉/秒，室溫(25℃)條件下旋轉水化直至將瓶壁上的干膜完全洗脫下來為止，并將所得粗混懸液在室溫(25℃)條件下水化1小時。所得粗混懸液經短時超聲后依次通過0.8μm微孔濾膜，0.45μm微孔濾膜，0.22μm微孔濾膜，0.1μm微孔濾膜，得最終混懸液，裝安瓿，罐封氮氣，即得紫杉醇熱敏長循環脂質體。
權利要求
1.紫杉醇脂質體，其特征在于處方中各組分重量百分比如下1％-30％紫杉醇，1％-95％磷脂，0％-30％膽固醇，0％-50％熱敏性輔料D，0％-50％輔料G，0-80％凍干保護劑，0-10％十八胺，0.001-50％抗氧劑，緩沖鹽適量。
2.根據權利要求1所述的紫杉醇脂質體，其特征在于所述的磷脂采用現已上市的商品磷脂，包括天然提取磷脂，或者半合成或全合成的磷脂，或者天然磷脂和半合成或全合成磷脂的混合物。
3.根據權利要求2所述的紫杉醇脂質體，其特征在于所述的商品天然磷脂源于大豆、蛋黃、動物腦或臟器中的天然磷脂。
4.根據權利要求2所述的紫杉醇脂質體，其特征在于所述的商品半合成或全合成磷脂包括二棕櫚酰磷脂酰膽堿、磷脂酰絲氨酸、磷脂酰肌醇、磷脂酰乙醇胺、磷脂酰甘油、磷脂酰膽堿、二鯨蠟磷酸酯、二肉豆蔻酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿、二月桂酰磷脂酰膽堿、二油酰磷脂酰膽堿。
5.根據權利要求1所述的紫杉醇脂質體，其特征在于所述的熱敏性輔料D是可使脂質體具有熱敏性的輔料，或者是一種摻入后可使脂質體膜材具有熱敏性的藥物，或者是可使膜材具有熱敏性的表面活性劑，或者是本身具有熱敏性的二棕櫚酰磷脂酰膽堿、二硬脂酰磷脂酰膽堿或在膜材中加入聚異丙烯酰胺，聚異丙烯酸、聚磷酸酯、聚磷酯酰胺共聚物類熱敏聚合物；或在膜材中加入莪術油、欖香烯或鴨膽子油等油性藥物；或處方中加入吐溫80或芐澤類表面活性劑。
6.根據權利要求1所述的紫杉醇脂質體，其特征在于所述的輔料G為聚乙二醇或聚山梨醇酯，均為聚氧乙烯型非離子表面活性劑，包括各種分子量為200-8000的聚乙二醇；聚氧乙烯失水山梨醇單月桂酸酯，聚氧乙烯失水山梨醇單棕櫚酸酯，聚氧乙烯失水山梨醇單硬脂酸酯，聚氧乙烯失水山梨醇酯三硬脂酸酯，聚氧乙烯失水山梨醇酯單油酸酯，聚氧乙烯失水山梨醇三油酸酯。
7.根據權利要求1所述的紫杉醇脂質體，其特征在于所述的凍干保護劑為單糖、雙糖或多糖，單糖為甘露醇、葡萄糖，雙糖為乳糖、蔗糖、麥芽糖，多糖為海藻糖。
8.根據權利要求1所述的紫杉醇脂質體，其特征在于所述的抗氧劑為亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、焦亞硫酸鈉、硫代硫酸鈉、抗壞血酸、沒食子酸丙酯、抗壞血酸棕櫚酸酯、叔丁基對羥基茴香醚、二叔丁基對甲酚、維生素E、半胱氨酸、蛋氨酸中的一種或一種以上的混合物；丁羥基茴香醚、丁羥基甲苯、硫二丙酸、亞硫酸鹽、亞硫酸氫鹽、二硫代氨基苯甲酸類、抗壞血酸、枸櫞酸、蘋果酸、山梨醇、甘油、丙二醇、抗壞血酸棕櫚酸酯、氫醌、羥基香豆素、維生素E、乙醇胺、磷酸及其鹽、亞磷酸及其鹽中的一種或幾種。
9.根據權利要求1所述的紫杉醇脂質體，其特征在于所述的緩沖液為乙醇-醋酸緩沖液、三羥甲基氨基甲烷緩沖液、巴比妥緩沖液、甲酸鈉緩沖液、鄰苯二甲酸鹽緩沖液、枸櫞酸鹽緩沖液、枸櫞酸-磷酸氫二鈉緩沖液、氨-氯化銨緩沖液、硼砂-氯化鈣緩沖液、醋酸鹽緩沖液、醋酸-鋰鹽緩沖液、醋酸-醋酸鈉緩沖液、醋酸-醋酸銨緩沖液、磷酸-三乙胺緩沖液、磷酸鹽緩沖液，且pH范圍為3-10。
10.紫杉醇脂質體的制備制備方法，其特征在于采用注入法、逆向蒸發法、凍融法、薄膜分散法、冷凍干燥法以及以上任意兩種方法結合使用的方法。
全文摘要
本發明屬于醫藥技術領域，公開了紫杉醇脂質體及其制備方法，主要包括長循環脂質體、紫杉醇熱敏脂質體以及紫杉醇熱敏長循環脂質體。其組成為1％－30％紫杉醇，1％－95％磷脂，0％－30％膽固醇，0％－50％熱敏性輔料D，0％－50％輔料G，0－80％凍干保護劑，0－10％十八胺，0.001－50％抗氧劑，緩沖鹽適量。這是三種新型紫杉醇脂質體制劑，解決了紫杉醇水不溶性缺點，紫杉醇熱敏長循環脂質體不僅具有紫杉醇普通脂質體制劑的低毒性、高穩定性和減少毒副作用等特點，還同時具有長循環脂質體的長循環性以及熱敏脂質體的熱敏性，可延長紫杉醇在體內的循環時間，提高對腫瘤的靶向性，從而提高其抗腫瘤作用。
文檔編號A61P35/00GK101015525SQ200710010448
公開日2007年8月15日 申請日期2007年2月15日 優先權日2007年2月15日
發明者鄧英杰, 王浩 申請人:沈陽藥科大學