專利名稱：含蒺藜果呋甾皂苷的藥物組合物及其應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及中藥領域，具體涉及一種含有蒺藜總呋甾皂苷提取物的藥物組合物及其應用。
背景技術：
本發明所涉及的蒺藜是指蒺藜科蒺藜屬植物Tribulus terrestris L.的成熟果實，為常用傳統中藥材，采摘季節為每年秋季，全國各地均有分布，主產于河南、河北、新疆、陜西、山東等地。
蒺藜果實中含有多糖、生物堿、甾醇、黃酮、甾體皂苷、脂肪酸及氨基酸等多種化學成分，甾體皂苷是蒺藜的主要活性成分，有螺甾烷(spirostane)和呋甾烷(furostane)兩種結構大類，螺甾皂苷極性小，而呋甾皂苷水溶性較好。Y.Wang等報道從蒺藜果實中分離出terrestrosin A，B，C，D等螺甾皂苷，以及terrestrosin F，H，M等呋甾皂苷(Phytochemistry，1996，42(5)1417-1422；Phytochemistry，1997，45(4)811-816)。
蒺藜皂苷具有抗衰老、性強壯、調節血脂、抗菌和抑癌、利尿等多種生理活性作用(中成藥，2001，23(8)602-606)，尤其在防治心腦血管疾病等方面顯示有良好療效，可以明顯抗心臟缺血作用，減慢心率，擴張冠狀動脈和外周血管，抗動脈硬化和抗血小板聚集作用，臨床上廣泛用于防治缺血性腦血管疾病、抗動脈硬化癥、防治冠心病心絞痛、增強性功能與抗衰老等。
皂苷通常具有較強的溶血作用，主要由于螺甾皂苷的溶血作用較強，而呋甾皂苷具有溶血作用較弱和水溶性好的特點，因此本發明將蒺藜呋甾皂苷制成靜脈注射劑具有較好的安全性和制劑可行性，具有藥效更強，起效更快的特點，適合缺血性心腦血管急重癥的治療。
發明內容
本發明的目的是避免蒺藜皂苷中螺甾皂苷的溶血作用較強的缺點，提供一種藥效強、起效快、安全性高的含蒺藜果呋甾皂苷的藥物組合物。
本發明的另一目的是提供上述藥物組合物的應用。
本發明的目的可以通過以下措施達到 一種含蒺藜果呋甾皂苷的藥物組合物，該藥物組合物為自蒺藜果中提取分離純化的蒺藜總呋甾皂苷提取物，提取物中以呋甾皂苷為主要成份，其中總呋甾皂在提取物中的質量含量為80％以上。
蒺藜總呋甾皂苷提取物的制備方法，包括以下步驟 a、取蒺藜果粉碎成粗粉，用4-10倍(質量比)蒺藜果粉量的30％-90％(體積含量)的乙醇(使用5-6倍量的50％-70％的乙醇回流提取條件最佳)回流提取1-3次，每次1-3小時，合并提取液后回收乙醇，在60～100℃下濃縮至相對密度為1.08-1.12(80℃)的濃縮液； b、在上述濃縮液中加5-10倍量水，靜置6-20(12小時最佳)小時，取上清液，在60～100℃下濃縮至相對密度為1.08-1.12(80℃)的濃縮水溶液； c、在上述濃縮水溶液中用95％乙醇加至含醇量達60％-80％，用氫氧化鈉溶液調pH值至8.0-10.0，靜置6-20(12小時最佳)小時，過濾，濾液用鹽酸調溶液成中性后，回收乙醇，濃縮至無醇味的濃縮濾液； d、在上述濃縮濾液中加水稀釋至相當于2g生藥/毫升的溶液，過濾，濾液通過大孔吸附樹脂(如NKA-9、HPD100或AB-8)，用水洗至無色，再用20-100倍柱體積的10-40％乙醇洗脫，然后用50％-90％乙醇收集，濃縮干燥，粉碎成細粉，得含量在80％以上的蒺藜總呋甾皂苷提取物。
步驟d中優選采用70-90倍柱體積的10-20％乙醇洗脫，用50％-70％乙醇收集。
本藥物組合物可以將蒺藜總呋甾皂苷提取物與一種或多種藥用輔料按常規方法制備成注射制劑，最優選制備成凍干制劑。
其中凍干制劑的制備方法，包括以下步驟 取蒺藜總呋甾皂苷提取物，加入凍干保護劑(如甘露醇、右旋糖苷或乳糖，用量為蒺藜總呋甾皂苷提取物質量的0.5～4倍，1～2倍的甘露醇最佳)，加注射用水攪拌溶解，用4％的氫氧化鈉溶液調節PH值為7.0～7.5，加入活性炭，80℃攪拌30分鐘，過濾，用除菌濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，制得凍干制劑。
具體方法為取含量80％以上蒺藜總呋甾皂苷，加0.5-4倍甘露醇或右旋糖苷或乳糖等凍干保護劑，加20倍注射用水500ml，攪拌溶解，用4％的氫氧化鈉溶液調節PH值為7.0～7.5，加入1％活性炭，80℃攪拌30分鐘，初濾，再加入約20倍注射用水，用除菌濾膜過濾，測定中間體含量，分裝，冷凍干燥，密塞，壓蓋，制得規格為40mg的注射用蒺藜總呋甾皂苷。
本藥物組合物在制備治療或預防缺血性心腦血管疾病中的應用，即對心、腦動脈血管硬化或栓塞引起的心肌和腦組織缺血、缺氧及氧化脂質升高的藥物治療方面的應用。
蒺藜果提取物中含有螺甾皂苷和呋甾皂苷，其中螺甾皂苷極性小，水溶性差，溶血作用較強，而呋甾皂苷具有溶血作用較弱和水溶性好的特點，因此本發明將提取物制備成以呋甾皂苷為主要成份，其中總呋甾皂在提取物中的質量含量在80％以上，因此本品具有更好的安全性，具有藥效更強，起效更快的特點，可以用于制備注射制劑，適合缺血性心腦血管急重癥的治療。
藥效學實驗表明 本發明的藥物組合物對于電凝中動脈造成大鼠缺血性腦中風模型，能明顯減少梗塞面積，降低缺血腦組織的含水量，減輕腦水腫，陽性對照藥川芎嗪注射液組顯示相同的療效；病理組織學觀察結果表明本品對腦中風模型在不同程度上有減輕腦組織損傷作用，高劑量組(20mg/kg·d)及陽性藥鹽酸川芎嗪注射液組療效最佳(兩者療效相似)，其次為中劑量組(10mg/kg·d)。同時能降低大鼠腦組織中一氧化氮(NO)含量，升高內皮型一氧化氮合酶(NOS)含量，降低誘導型一氧化氮合酶(NOS)含量，改善神經功能，保護腦血管內皮細胞，減輕腦缺血的損害作用；電凝致缺血性腦中風大鼠表現出血液粘稠度增高，血小板最大聚集率升高，而注射用蒺藜總呋甾皂苷能顯著改善全血粘度和降低血小板最大聚集率，與模型組比較有顯著差異。上述試驗說明注射用蒺藜總呋甾皂苷對缺血性腦中風具有治療作用，改善血液流變學，減輕腦缺血缺氧損傷的作用。
利用先給予注射用蒺藜總呋甾皂苷高劑量組(20mg/kg·d)，中劑量組(10mg/kg·d)，低劑量組(5mg/kg·d)，然后線栓中動脈造成大鼠局灶性腦缺血再灌注模型，觀察注射用蒺藜總皂苷對缺血性腦中風的預防作用，結果表明注射用蒺藜總呋甾皂苷可以改善模型動物的行為學障礙，明顯縮小模型大鼠的腦梗塞面積，降低梗塞率；降低缺血腦組織的含水量，減輕腦水腫；病理組織學觀察，線栓法復制出的缺血性中風大鼠模型，表現為腦組織灰質和/或白質不同程度水腫，神經細胞輕度變性、壞死，注射用蒺藜總呋甾皂苷對腦中風模型在不同程度上有減輕腦組織損傷作用；各給藥組的大鼠血漿6-K-PGF1α含量顯著升高，其中低、高劑量組與模型組比較差異均有顯著性，TXB2、ET含量均有下降的趨勢。在上述試驗中，注射用蒺藜總呋甾皂苷高劑量組的效果優于或相似于陽性對照藥鹽酸川芎嗪注射液組。口服給藥組對局灶性腦缺血再灌注大鼠未能表現出明顯的藥效作用。說明注射用蒺藜總呋甾皂苷對缺血性腦中風具有預防作用。
通過測定麻醉犬的腦血流量、血壓、心率來觀察注射用蒺藜總呋甾皂苷的作用，實驗表明注射用蒺藜總皂苷高劑量組(6mg/kg)，中劑量組(3mg/kg)可以提高麻醉犬的腦血流量，降低其腦血管阻力，對血壓有輕微的降低作用，可以減緩心率。
采用大鼠尾靜脈注射高分子量右旋糖酐，觀察到本品對大鼠的腦部微血流較注射前明顯下降，而給予注射用蒺藜總呋甾皂苷后，中劑量組能顯著增加腦缺血部位的血流量，大、小劑量組和陽性藥鹽酸川芎嗪注射液可以減輕右旋糖酐所造成的腦血流下降趨勢，改善右旋糖酐所導致的大腦微循環障礙。
通過觀察結扎小鼠兩側頸動脈后小鼠的死亡時間，發現給小鼠注射蒺藜總呋甾皂苷可以延長結扎小鼠兩側頸動脈后小鼠的死亡時間及小鼠耐缺氧時間，說明注射用蒺藜總呋甾皂苷能提高小鼠腦部耐缺氧能力。
通過不同致聚劑引起血小板聚集，發現注射用蒺藜總呋甾皂苷對PAF和ADP所致體外血小板聚集均有顯著的抑制效果，但弱于陽性藥鹽酸川芎嗪注射液，對膠原所致血小板聚集沒有抑制作用。說明本品是通過ADP和PAF途徑抑制血小板聚集，而不是通過促使血小板釋放內源性物質起作用。
通過觀測家兔血栓形成的重量和長度，實驗顯示注射用蒺藜總呋甾皂苷對體外血栓形成有明顯的抑制作用，且呈一定的劑量依賴關系。
通過結扎犬冠狀動脈造成心肌的嚴重缺血，導致冠脈流量下降，心輸出量減少，ST上抬直至T波倒置，以及NBT染色后出現心肌缺血區等明顯變化，SOD活性明顯降低，LDH、AST酶活性明顯升高，CK、MDA活性雖有升高但未表現出明顯差異等血液生化指標的改變。注射用蒺藜總呋甾皂苷對犬冠狀動脈結扎型心肌缺血模型的影響，主要體現在增加冠狀動脈血流量，緩解因結扎冠脈造成的心肌缺血，從而改善心電ST段，抑制上抬；增加心輸出量，降低總外周阻力，改善血流動力學特性，增加對心肌的供養，改善心肌缺血；注射用蒺藜總呋甾皂苷可明顯增強SOD活性，LDH活性被明顯抑制；病理組織切片檢查結果顯示，模型組和試驗用藥組犬均出現心肌缺血導致的病理改變，只是各組表現的病理改變程度不同，注射用蒺藜總呋甾皂苷及陽性藥組要輕于模型組。
綜上所述，注射用蒺藜總呋甾皂苷治療缺血性心腦血管疾病的藥理學基礎在于增加冠狀動脈和腦部血流量，降低血管阻力，改善血流動力學特性，改善微循環，提高心腦組織清除自由基的能力，抑制血小板聚集，改善血液流變學。
一般藥理學研究表明除對血壓和心率有一定影響外，對麻醉犬心血管系統和呼吸系統無非常顯著影響，對小鼠精神神經系統也無明顯興奮或抑制作用。
急性毒性研究顯示小鼠靜脈注射給藥的LD50值為830mg/kg。長期毒性研究表明大鼠連續腹腔注射給予本品13周后，其對大鼠的安全劑量為80mg/kg，約相當于推薦臨床人用劑量(110mg/70kg/日)的50倍；Beagle犬靜脈滴注給予本品13周后，其對犬的安全劑量為27mg/kg，約相當于推薦臨床人用劑量(110mg/70kg/日)的17倍。特殊安全性試驗結果也表明注射用蒺藜總呋甾皂苷無過敏性、溶血性和局部刺激性。
另外，應特別指出的是，可根據需要在本發明的藥物組合物中加入一種或多種天然或合成的其他與蒺藜總呋甾皂苷具有協同或輔助作用的活性成分，例如三七皂苷、葛根素、川芎嗪、燈盞花素、銀杏黃酮、銀杏內酯等，這些可能被加入的天然或合成的輔助活性成分是本領域技術人員已知的和可以想到的。
可以將蒺藜總呋甾皂苷與一種或多種醫藥上可接受的載體或賦形劑按適當比例混合，制成適于臨床上使用的不同劑型的藥物組合物，例如可將所說的組合物配制成可供靜脈內，肌肉內、腹腔內、皮下、腦脊髓腔內注射給藥的注射劑。
為了制備適于胃腸道外途徑藥的溶液劑，例如可使用注射用水、等滲氯化鈉溶液或葡萄糖溶液作為載體或賦形劑。可以在這些胃腸道外給藥的制劑中加入一種或多種其他輔助成分或添加劑，例如可使用抗壞血酸作為抗氧化劑，使用苯甲酸鈉作為防腐劑。
最好將本發明的藥物組合物制成各種適于靜脈結藥的劑型，例如凍干粉針制劑。這些制劑的單位劑量一般包含40-80mg蒺藜總呋甾皂苷。例如對于某些急性心肌梗塞或腦栓塞急性期或恢復期的病人，或心絞痛頻繁發作的病人，可將本發明藥物組合物的注射液制劑加在等滲葡萄糖溶液或等滲氯化鈉溶液中，持續地滴注給藥。靜脈內給藥的劑量一般為每天40-80mg，通常60公斤體重成年人的用藥量為每天40-80mg。
具體實施例方式 實施例1蒺藜果總呋甾皂苷的制備 取蒺藜果粉碎成粗粉1000克，用8倍量70％乙醇回流提取3次，每次2小時，合并提取液后回收乙醇，濃縮至相對密度為1.08-1.12(80℃)，加8倍量水，靜置12小時，取上清液，濃縮至相對密度1.08-1.12(80℃)，加95％乙醇至含醇量達70％，用1M氫氧化鈉溶液調pH值至9.0，靜置12小時，過濾，濾液用1M鹽酸調溶液成中性后，回收乙醇，濃縮至無醇味，加水至500毫升，過濾，濾液通過AB-8大孔吸附樹脂，用水洗至無色，然后用32倍柱體積的10％乙醇洗脫，用80％乙醇收集，濃縮至相對密度1.20-1.25(80℃)，在80℃真空干燥12小時，粉碎成細粉，得黃色粉末狀蒺藜總呋甾皂苷2.8克(得率為2.8‰)。
參照衛生部藥品標準中藥成方制劑第十六冊“心腦舒通膠囊”修訂標準，測定了蒺藜總呋甾皂苷含量，本品按干燥品計算，蒺藜總呋甾皂苷含量為82.5％。
實施例2注射用蒺藜總呋甾皂苷組合物的制備 取25克蒺藜總呋甾皂苷，加25克乳糖，加注射用水500ml，攪拌溶解，用4％的氫氧化鈉溶液調節PH值為7.2，加入活性炭0.25g，80℃攪拌30分鐘，初濾，加注射用水至1000ml，用除菌濾膜過濾，測定中間體含量，分裝，冷凍干燥，密塞，壓蓋，制成注射用蒺藜總呋甾皂苷。
實施例3注射用蒺藜總呋甾皂苷的制備 取25克蒺藜總呋甾皂苷，加50克甘露醇，加注射用水500ml，攪拌溶解，用4％的氫氧化鈉溶液調節PH值為7.3，加入活性炭0.25g，80℃攪拌30分鐘，初濾，加注射用水至1000ml，用除菌濾膜過濾，測定中間體含量，分裝，冷凍干燥，密塞，壓蓋，制得含有40mg蒺藜總呋甾皂苷的凍干粉針劑。
實施例4注射用蒺藜總呋甾皂苷的制備 取25克蒺藜總呋甾皂苷，加25克甘露醇，加注射用水500ml，攪拌溶解，用4％的氫氧化鈉溶液調節PH值為7.3，加入活性炭0.25g，80℃攪拌30分鐘，初濾，加注射用水至1000ml，用除菌濾膜過濾，測定中間體含量，分裝，冷凍干燥，密塞，壓蓋，制得含有40mg蒺藜總呋甾皂苷的凍干粉針劑。
實施例5注射用蒺藜總呋甾皂苷的制備 取25克蒺藜總呋甾皂苷，加75克右旋糖苷，加注射用水500ml，攪拌溶解，用4％的氫氧化鈉溶液調節PH值為7.3，加入活性炭0.25g，80℃攪拌30分鐘，初濾，加注射用水至1000ml，用除菌濾膜過濾，測定中間體含量，分裝，冷凍干燥，密塞，壓蓋，制得含有40mg蒺藜總呋甾皂苷的凍干粉針劑。
藥效實驗 以實施例3所得的注射劑進行藥效實驗。
實驗1對電凝中動脈致大鼠缺血性腦中風的治療作用 取體重250～350g SD雄性大鼠173只，按Tamura等的方法進行大鼠腦中動脈電凝術，各鼠以10％水合氯醛麻醉(4ml/kg，腹腔注射)，以側臥位沿右外耳道與右眼外眥連線的中點，垂直于連線切開皮膚約2cm，逐層分離肌肉，除去硬腦膜，暴露中動脈，確認后電凝嗅束至大腦下靜脈之間的一段大腦中動脈，逐層縫合傷口，注射5000單位/ml青霉素鈉防止感染(3ml/kg，腹腔注射)，術后回籠飼養。觀察術后4h、8h、24h的大鼠行為，并對其行為進行評分。隨機分為6組，分別為模型組、陽性藥川芎嗪注射液組、注射用蒺藜總呋甾皂苷高、中、低三個劑量組(20mg/kg·d、10mg/kg·d、5mg/kg·d)，假手術組為找到大腦中動脈而不電凝，每天尾靜脈注射給藥一次，連續五天。第五天給藥后禁食，次晨給藥后一小時，按以上評分標準進行再評分，發現各組均有所改善，頸動脈取血后隨即將大鼠斷頭取腦，去除嗅球、小腦和低位腦干后，冷凍十分鐘，切成五片。第1刀在腦前極與視交叉連線中間；第2刀在視交叉部位；第3刀在漏斗柄部位；第4刀在漏斗柄與后葉尾極之間。然后迅速將腦片置于5ml含0.05％2，4，5-三苯基四氮唑(TTC)的PBS(10％)溶液中，37℃避光水浴溫孵10min，經染色后，正常腦組織呈攻瑰紅色，而梗塞組織呈白色，且界限分明。梗塞指數測定取出用濾紙吸干，按順序平鋪于黑紙上，拍照，打印，按以下公式計算梗塞指數。梗塞指數＝梗塞灶紙重(g)/梗塞側腦紙重(g)。結果見表1 取用于梗塞指數測定的電凝中動脈致缺血性腦中風模型大鼠的頸動脈血，置于肝素管和盛有3.8％枸櫞酸鈉的塑料試管中，進行血流變學試驗和血小板聚集試驗。
用肝素管取全血，取1ml左右加入血沉管中至上部的零刻度，靜置1小時后，從上到下讀取紅細胞沉降的刻度；然后3000rpm離心30分鐘，從下往上讀取紅細胞離心后的體積。另取全血0.8mL，在血液粘度測試儀上檢測全血粘度，然后2000rpm離心10分鐘取上清所得血漿檢測血漿粘度。并用血漿在血凝測定儀上檢測凝血酶原時間(PT)、凝血酶時間(TT)、活化部分凝血活酶時間(APTT)。
以ADP為誘導劑，按比濁法測定血小板聚集率。全血與抗凝劑(3.8％枸櫞酸鈉)9∶1混勻，1000rpm離心8分鐘，取得上層富血小板血漿(PRP)，余血再以3500rpm離心10分鐘，得貧血小板血漿(PPP)，取250μl PRP置于比濁管內，37℃溫育5分鐘，隨后在PRP中加入10μl的ADP(使其終濃度為10mmol/L)，在血小板聚集儀上檢測最大聚集率。
動物處死后，取出大腦稱濕重后將腦組織置于115℃電熱干燥箱中烘至恒重，稱干重，按下列公式計算腦含水量，結果見表2 含水量(％)＝(濕重-干重)/濕重×100％ 腦指數＝(腦濕重/體重)×100 動物處死后，取其部分腦組織置于10％福爾馬林內固定，常規取材、石蠟包埋，切片厚4～5μm，HE染色，病理專業人員閱片，根據病變輕重程度，依次半定量為“+”，“++”，“+++”，“++++”，無病變正常組織標記為“-”，又分別記分為1分，2分，3分，4分，0分，累加除血管增生、巨噬細胞增生外所有分數，得出總分。血管增生、巨噬細胞增生為損傷修復的表現，故從總分中減去，根據每例修正后的總分，計算出每組每只動物的均分(
)，分值越高提示損傷越嚴重，反之則說明經藥物處理后損傷減輕，治療有效。
結果見表3。
取用于病理組織切片檢查的電凝中動脈致缺血性腦中風模型大鼠，腦組織做病理切片后剩余部分稱重，以pH7.0 PBS緩沖液制成10％勻漿，4℃3000rpm離心30min，取上清液檢測NO、iNOS、eNOS、總NOS等指標，結果見表4。
表1對電凝中動脈致缺血性腦中風梗塞指數的影響(
) 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。與假手術組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
由表1結果顯示，電凝中動脈后可以造成大鼠缺血性腦中風，注射用蒺藜總呋甾皂苷高劑量、中劑量組與模型組相比，梗塞指數有顯著下降，說明注射用蒺藜總呋甾皂苷對大鼠缺血性腦中風有一定的治療作用。
表2.對電凝中動脈致缺血性腦中風大鼠腦指數及腦含水量的影響(
) 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。與假手術組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
由表2結果顯示，電凝中動脈后大鼠腦缺血，腦組織水腫，注射用蒺藜總呋甾皂苷能降低模型大鼠腦組織的含水量，減輕腦水腫。
表3對缺血性腦中風大鼠大腦病理組織學的影響(
) 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。與假手術組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
病理組織學觀察，注射用蒺藜總呋甾皂苷對腦中風模型在不同程度上有減輕腦組織損傷作用，其中注射用蒺藜總呋甾皂苷高劑量組及陽性藥組療效最佳(兩者療效相似)，說明注射用蒺藜總呋甾皂苷對腦組織有保護作用。
表4對電凝中動脈致缺血性腦中風大鼠腦勻漿中NO和NOS的影響(
) 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。與假手術組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
從表4結果可以看出，注射用蒺藜總呋甾皂苷具有降低一氧化氮(NO)含量，升高內皮型一氧化氮合酶(NOS)含量，降低誘導型一氧化氮合酶(NOS)含量，提示注射用蒺藜總呋甾皂苷能保護腦血管內皮細胞，減輕腦缺血損害，對缺血性腦中風有一定的治療作用。
表5對電凝中動脈致缺血性腦中風大鼠血液粘度的影響(
) 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。與假手術組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
由表5結果顯示，注射用蒺藜總呋甾皂苷高中二個劑量組對電凝中動脈致缺血性腦中風大鼠全血粘度有顯著降低作用。
表6注射用蒺藜總呋甾皂苷對電凝中動脈致缺血性腦中風大鼠血液凝血時間的影響(
) 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。與假手術組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
表6結果顯示，電凝中動脈后致缺血性腦中風大鼠的凝血時間顯著縮短，尤其以凝血酶原時間縮短最顯著，而注射用蒺藜總呋甾皂苷能顯著延長其凝血時間。
表7對電凝中動脈致缺血性腦中風大鼠血小板聚集率的影響(
) 與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01 。與假手術組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
由表7結果顯示，電凝中動脈后，缺血性腦中風大鼠的血小板最大聚集率升高，注射用蒺藜總呋甾皂苷高中低三個劑量組均能顯著抑制血小板聚集率。
從以上結果表明，注射用蒺藜總呋甾皂苷對大鼠缺血性腦中風具有明顯的治療作用，能明顯減少梗塞面積，降低缺血腦組織的含水量，減輕腦水腫，病理組織學觀察說明注射用蒺藜總呋甾皂苷對腦組織有保護作用，改善血液流變學，減輕腦缺血缺氧損傷的作用。
實驗2對大腦中動脈栓塞模型大鼠的保護作用 用頸內動脈線栓法制備該模型，取大鼠80只，分為7組，即假手術組，鹽酸川芎嗪注射液組(20mg/kg·d)，模型組、注射用蒺藜總呋甾皂苷高、中、低劑量(20mg/kg·d、10mg/kg·d、5mg/kg·d)和口服注射用蒺藜總呋甾皂苷組(100mg/kg·d)。每組8-10只，尾靜脈注射給藥(口服蒺藜總呋甾皂苷組為灌胃給藥)，半小時后以10％水合氯醛麻醉(350mg/kg，ip)，仰位固定于手術臺上，頸部正中切口，切開皮膚后，鈍性分離，找出頸總動脈(CCA)，繼續向下分離并結扎頸外動脈(ECA)及頸外動脈各分支(枕動脈、甲狀腺上動脈、舌動脈和面動脈)，輕輕剝離迷走神經，分離出頸內動脈(ICA)和翼腭動脈，ECA近心端備線，用動脈夾夾閉ICA和CCA，在ECA距ICA2mm處剪一小口，將一尼龍線(直徑0.24mm)插入ECA并進入CCA，輕扎備線，防止出血，剪斷ECA，松開ICA的動脈夾，牽引ECA，使其和ICA約成一直線，輕輕回抽尼龍線，使其順入ICA，繼續向下推進(尼龍線插入深度約為18mm，表明尼龍線已經穿過大腦中動脈(MCA)起始段，到達大腦前動脈(ACA)近端，阻斷了MCA的所有血供來源，包括來自ICA和ACA及大腦后動脈的血液供應。松開CCA動脈夾，扎緊備線，外留1cm長線頭，縫合皮膚，回籠飼養。
缺血3h后再灌注，輕拉尼龍線，使尼龍線拔出顱外，血流再通，修剪尼龍線，縫合皮膚，回籠自然喂養。以上過程均在室溫恒定(24～25℃)情況下進行，以利于評價腦缺血情況。觀察對局灶性腦缺血大鼠腦梗塞面積的影響。
大鼠中動脈線栓(MCAO)后24小時斷頭取腦，將腦置冰冷的生理鹽水中(2～3℃)10min，去除嗅球、小腦和低位腦干后，用生理鹽水沖洗大腦使表面不留血污，吸干周圍水分后，沿冠狀切四刀，切成五片。第一刀在腦前極與視交叉連線中間，第二刀在視交叉部位；第三刀在漏斗柄部位；第四刀在漏斗柄與后葉尾極之間。然后迅速將腦片置5ml含有1％TTC的磷酸緩沖溶液中，避光溫孵30分鐘，其中每隔7～8分鐘翻動一次，經染色后，正常腦組織呈玫瑰紅色，而梗塞組織呈白色，且界限分明。溫孵完畢后將腦片照相，剪下紅白顏色區稱重計算之。然后根據重量求面積法，分別計算出五個腦片共10個平面的總面積和梗塞區域的面積，求出梗塞區面積占半球總面積的百分比，即梗塞率。
腦含水量的測定動物處死后，取出大腦稱濕重后將腦組織置于115℃電熱干燥箱中烘至恒重，稱干重，按下列公式計算腦含水量 含水量(％)＝(濕重-干重)/濕重×100％ 腦指數＝(腦濕重/體重)×100 試驗結果顯示，各給藥組大鼠的腦梗塞面積和梗塞率均明顯低于模型組，經統計學處理，差異有顯著性，提示注射用蒺藜總呋甾皂苷可以明顯縮小模型大鼠的腦梗塞面積，降低梗塞率，數據見表8。
表8對局灶性腦缺血再灌注大鼠腦梗塞面積及梗塞率的影響(
) 注與模型組比較，*P＜0.05，**P＜0.01。與假手術組比較，ΔP＜0.05，ΔΔP＜0.01。
表9結果表明，模型大鼠腦指數和含水量均明顯高于假手術組，注射用蒺藜總呋甾皂苷高劑量可降低模型大鼠的腦指數及腦含水量，與模型組比較，差異均有顯著性。提示注射用蒺藜總呋甾皂苷可以減輕腦水腫。
表9對局灶性腦缺血再灌注大鼠腦指數及腦含水量的影響(
) 注各藥物組與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01。模型組與假手術組比較，ΔP＜0.05， ΔΔP＜0.01。
注射用蒺藜總呋甾皂苷可以明顯縮小模型大鼠的腦梗塞面積，降低梗塞率，降低缺血腦組織的含水量，減輕腦水腫，而口服給藥組對缺血性中風大鼠未能表現出明顯的治療作用。
實驗3對麻醉犬腦血流動力學的影響 取健康雜種犬25只，隨機分為生理鹽水組、尼莫地平組、注射用蒺藜總呋甾皂苷大劑量組、中劑量組及小劑量組共五組，每組5只，雌雄不拘。用戊巴比妥鈉30mg/kg靜脈麻醉，股動脈插管，監測血壓，股靜脈插管，供給藥及輸液(0.9％氯化鈉，15滴/min)，維持機體循環充盈和電解質平衡。從頸部正中切開，分離一側椎動脈和同側頸內動脈，分別置合適口徑的電磁流量計探頭，測定其血流；II導聯監測心電圖。血壓、血流量、心電圖信號送入PowerLab/8s，用Chart v4.01軟件進行采樣。血壓參數用Chart v4.01分析；腦血流量和腦血管阻力用Chart v4.01中的設置算法模塊計算；心率用SAECG v1.1.2擴展程序計算。待各指標穩定后，開始記錄并靜脈給藥，分別于給藥前及給藥后1、5、10、15、30、45、60、90和120min記錄數據。實驗結束后處死動物，開顱，枕骨大孔橫斷腦干，取出大腦稱重。將全腦濕重輸入Chart v4.01，自動生成腦血流量和腦血管阻力圖形和數據。
監測指標為 收縮壓(SBP，kPa)，舒張壓(DBP，kPa)，平均動脈壓(MBP，kpa)頸內動脈血流(ICAF，ml/min)，椎動脈血流(VAF ml/min)，并通過以上參數，計算腦血流(EBFV，ml/min/100g腦組織)和腦血管阻力(EBVR，dyn×s×cm×10-5)，后兩者計算公式為 EBFV(ml/min/100g腦組織)＝[(ICAF+VAF)×2/全腦濕重(g)]×100 EBVR(dyn×s×cm×10-5)＝[MBP/(ICAF+VAF)×2]×79.9 試驗統計分析采用兩樣本均數比較的t檢驗。結果以變化百分率＝(給藥后-給藥前)/給藥前×100％表示。
實驗結果表明，注射用蒺藜總呋甾皂苷可以提高麻醉犬的腦血流量，降低其腦血管阻力，對血壓有輕微的降低作用，可以減緩心率；陽性對照藥物尼莫地平可以提高麻醉犬腦血流量，與臨床使用及參考文獻一致。注射用蒺藜總呋甾皂苷大劑量組在給藥1min后，腦血量有所提高，其作用可持續到15min，中劑量組在給藥后1min起作用，作用持續到120min，結果見表10。尼莫地平可降低腦血管阻力，注射用蒺藜總呋甾皂苷大劑量及中劑量也可降低腦血管阻力，作用持續到15min，結果見表11。注射用蒺藜總呋甾皂苷對平均血壓、收縮壓及舒張壓有降低作用，對心率也有減緩作用，但與對照組比較無顯著性差異，對血壓和心率的影響與尼莫地平相似，結果見表12、13、14、15。
表10對麻醉犬腦血流量變化率的影響(M±SD，％) 注與對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 表11對麻醉犬腦血管阻力變化率的影響(M±SD，％) 注與對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 表12對麻醉犬平均動脈血壓變化率的影響(M±SD，％) 注與對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 表13對麻醉犬心率的影響(M±SD，BPM) 注與對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 表14對麻醉犬收縮壓變化率的影響(M±SD，％) 注與對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 表15對麻醉犬舒張壓變化率的影響(M±SD，％) 注與對照組比較*P＜0.05 **P＜0.01 注射用蒺藜總呋甾皂苷可以提高麻醉犬的腦血流量，降低其腦血管阻力，對血壓有輕微的降低作用，可以減緩心率。尼莫地平可以提高麻醉犬腦血流量，降低腦血管阻力，與臨床及參考文獻一致。注射用蒺藜總呋甾皂苷大劑量組在給藥1min后，腦血量有所提高，其作用可持續到15min，中劑量組在給藥后1min起作用，作用持續到120min。尼莫地平降低腦血管阻力，注射用蒺藜總呋甾皂苷大劑量及中劑量也可降低腦血管阻力，作用持續到15min。注射用蒺藜總呋甾皂苷對平均血壓、收縮壓及舒張壓有降低作用，對心率也有減緩作用，對血壓和心率的影響與尼莫地平相似。
實驗4對“高粘”模型大鼠腦部微血流的影響 取健康無孕大鼠，雌雄兼用，隨機分為六組，分別為生理鹽水組，模型組，川芎嗪注射液組(20mg/kg)，注射用蒺藜總呋甾皂苷大劑量組(20mg/kg)，中劑量組(10mg/kg)及小劑量組(5mg/kg)。用25％烏拉坦0.5ml/100g體重進行麻醉，背位固定，進行氣管插管。然后腹位固定，肛溫探頭監測體溫，用加熱板保持大鼠體溫在實驗過程中恒定不變，每個大鼠間體溫控制在33±4℃，顱頂正中矢狀切開，在距前囟3mm，中旁線2mm，右側鉆孔，沿與顱骨平面垂直方向，將Bloodflowmeter激光多普勒血流測定儀激光探頭(使用前用校準液進行校準)穿過硬腦膜置入皮質下，深度達4.5mm，監測腦微循環血流，待其穩定后(約需20min)，各給藥組和模型組尾靜脈注射分子量為50萬的右旋糖酐(濃度為10％)0.6ml/100g體重，而生理鹽水組則注射生理鹽水0.6ml/100g體重，隨后，各給藥組尾靜脈注射各相應藥物，給藥體積為0.1ml/100g體重，生理鹽水組和模型組注射等體積的生理鹽水，并用powerlab/8s藥理生理多導儀的Chart軟件系統描計血流圖，并實時記錄各參數。實驗結果用變化率表示，計算公式為 ΔV＝(V1-V2)/V2×100％ ΔV微循環血流變化率。
V1給藥后微血流，其中生理鹽水組和模型組則表示給生理鹽水后的微血流。
V2給藥前的微血流。
表16對右旋糖酐致大鼠腦微循環障礙的影響(M±S) 與生理鹽水比較##P＜0.01 與模型組比較*P＜0.05 試驗結果表明，大鼠尾靜脈注射高分子量右旋糖酐后，其大腦微血流較注射前下降11.18％，而給予注射用蒺藜總呋甾皂苷后，中劑量組能顯著增加腦缺血部位的血流量，大、小劑量組和陽性藥川芎嗪可以減輕右旋糖酐所造成的腦血流下降趨勢，明顯改善右旋糖酐所導致的大腦微循環障礙。
實驗5對小鼠頸動脈結扎死亡時間的影響 取小鼠50只，隨機分為5組，每組10只，雌雄各半，正常對照組，給予生理鹽水10ml/kg，陽性藥組給予鹽酸川芎嗪注射液28mg/kg，注射用蒺藜總呋甾皂苷大中小三個劑量組分別給予28.8mg/kg、14.4mg/kg、7.2mg/kg。給藥體積為10ml/kg。各組于尾靜脈注射給藥后5分鐘，同時結扎雙側頸總動脈(包括頸總動脈周圍的神經)并計時，觀察小鼠死亡時間。死亡時間超過5分鐘則淘汰。
表17對小鼠頸動脈結扎死亡時間的影響(
) 與對照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。
通過觀察結扎小鼠兩側頸動脈后小鼠的死亡時間，考察注射用蒺藜總呋甾皂苷對小鼠腦部耐缺氧的影響。實驗顯示注射用蒺藜總呋甾皂苷對小鼠死亡時間有明顯延長作用，說明注射用蒺藜總呋甾皂苷能提高小鼠腦部耐缺氧能力。
實驗6對兔體外血小板聚集的影響 正常對照組用生理鹽水；藥液以生理鹽水稀釋。
大耳白兔禁食8h后，頸動脈取血，放入準備好的塑料離心管中，管內預加1ml的3.8％枸櫞酸鈉溶液，使全血與抗凝劑9∶1混勻。
全血以1000rpm離心10分鐘，取上清即為富血小板血漿PRP，余血以3000rpm離心10分鐘，取上清即為貧血小板血漿PPP，用PPP調節PRP至血小板數約在20～30萬/mm3，分別取350μl的PRP和PPP置于比濁管中，加入7μl藥液，輕輕搖勻，37℃溫育5分鐘，加入攪拌磁珠，在PRP中加入一定量的致聚劑，(ADP、PAF和collagen的終濃度分別為10mM、0.4μg/ml和2.86mg/ml)描計血小板聚集曲線，計算血小板聚集抑制率，T檢驗統計實驗結果。
實驗結果顯示1mg/ml注射用蒺藜總呋甾皂苷對PAF和ADP所致體外血小板聚集均有顯著的抑制效果，但弱于陽性對照藥川芎嗪，對膠原所致血小板聚集沒有抑制作用，結果見表18、19、20。
表18對PAF所致體外血小板聚集的影響(
) 與對照組相比，*P＜0.05，**P＜0.01。下同。
表19對ADP所致體外血小板聚集的影響(
) 表20對膠原所致體外血小板聚集的影響(
) 實驗7對犬冠狀動脈結扎心肌缺血模型的影響作用 犬戊巴比妥鈉(30mg/kg)靜脈麻醉后，仰位固定于手術臺上，分別分離頸部氣管和腹股溝部位股動脈、股靜脈。前者切開插管接人工呼吸機，輔助呼吸用。后者分別插管連接壓力傳感器供測定血壓和連接三通供輸液給藥用。
犬調整為右側臥位，第IV肋間開胸，切除第IV肋，暴露心臟，剪開心包膜做心包吊籃。分離主動脈，掛上電磁流量探頭，探頭接電磁血流量計，測定心輸出量；分離冠狀動脈前降枝上1/3(心耳處)，掛上電磁流量探頭測定冠狀循環血流量；millar管壓力傳感器測定左心室內壓；在冠狀動脈前降枝第一主分支以下或前降枝1/2處，及左旋枝第二分支下1/3處(阻斷前降枝的交通枝)用縫合針穿入絲線，各打一虛結備用，供阻斷冠脈用；所有壓力傳感器、兩電磁流量探頭及生物電放大器均聯接到powerlab主機上，通過chart軟件實時顯示各參數。
用2份生理鹽水加1份中分子右旋糖酐經股靜脈輸液(10滴/min)，維持循環充盈和水電解質平衡，并供靜脈給藥用。操作完成后，觀察上述指標，分別記錄正常數據及結扎給藥后數據。
在給藥60、120min后從左心室及靜脈竇采血，測定血氧分壓。
給藥后180min記錄完畢，立即取下心臟，生理鹽水沖洗后，沿冠狀溝切除心房，留下心室，稱心室重。將心室冰凍，在心臟結扎線以下平行于冠狀溝均勻地將心室部分橫切成5片，置0.25％NBT染液中37℃恒溫振搖染色15分鐘，立即用水沖洗去多余的染料，梗塞區不著色，非梗塞區被染為藍色。剪去各心肌片被染色的梗塞區部分，把未染色的梗塞區心肌稱重，以其除心室重即分別測得梗塞區心室重量的百分比，以此判斷心肌梗塞的范圍。
實驗分為六組，其中假手術組動物為4只，其余各組動物均為6只。假手術組冠脈打虛結，不結扎；模型組冠脈結扎，給予等體積生理鹽水；注射用蒺藜總呋甾皂苷小、中、大劑量組冠脈結扎，從股靜脈分別給予注射用蒺藜總呋甾皂苷藥物1.5mg/kg、3mg/kg、6mg/kg(1ml/kg)；川芎嗪注射液組冠脈結扎，從股靜脈給予注射液4mg/kg。
所有觀察指標均輸入powerlab/8sp數據采集系統記錄，實時顯示。確定觀察指標為 ①心肌收縮性能指標 LVP(kPa)左心室內壓 LVEDP(kPa)左心室舒張期末壓 dp/dtmax(kPa/s)左心室內壓變化速率 ②心泵功能指標 CO(L/min)心輸出量 SV(ml/beat)每搏輸出量 LVSW(J/Beat)左心室每搏做功 ③外周循環指標 MBP(kPa)平均動脈血壓 TPR(kPa·s/L)總外周阻力 ④其它指標 CF(ml/min)冠狀循環流量 HR(beat/min)心率 ECG心電圖，以s-t段偏移的絕對值反映心肌缺血的程度 MVO(mlO2/min/100g)左室心肌耗氧量 ⑤血氧分壓分析PO2/PCO2 ⑥計算指標公式 每搏量＝心輸出量/心率，SV＝CO/HR 總外周阻力＝平均動脈壓/心輸出量，TPR＝MBP/CO 左心室每搏做功＝(平均動脈壓-左室舒張末壓)×心輸出量/心率，LVSW＝(MBP-LVEDP)*CO/HR 左室心肌耗氧量＝K1(收縮壓×心率)+K2*(0.8*收縮壓+0.2*舒張壓)×心率×每搏量/體重+1.43，K1＝4.08E-4，K2＝3.25E-4 數據記錄過程血壓單位為mmHg，轉換為國際單位為1mmHg＝0.133kPa powerlab八道生理記錄儀記錄數據均用chart5.0軟件進行處理分析，以均數±標準差(M±SD)表示，用t-檢驗進行統計學處理。
對犬急性心肌缺血冠狀動脈流量的影響試驗結果(表21)顯示，注射用蒺藜總呋甾皂苷6mg/kg、3mg/kg、1.5mg/kg均可明顯抑制冠脈結扎后造成的冠脈流量下降，增加冠脈流量，6mg/kg維持的時間較長，起效時間為給藥后60min，持續120min。
表22結果顯示，冠狀動脈結扎后，模型組犬心輸出量(CO)也出現下降，注射用蒺藜總呋甾皂苷6mg/kg可觀察到在120min后明顯增加心輸出量。
冠狀動脈結扎后，體循環總外周阻力(TPR)增加，120min后出現顯著差異，注射用蒺藜總呋甾皂苷6mg/kg、3mg/kg、1.5mg/kg作用90min后可明顯降低總外周阻力，與模型組比較有顯著差異(P＜0.05)，數據見表24。
實驗心電圖數據表明，模型組于結扎后其ST段上抬，其中多數出現T波倒置，說明心肌缺血嚴重，注射用蒺藜總呋甾皂苷各劑量均有一定的抑制ST上抬或T波倒置的作用，6mg/kg在作用60min后、3mg/kg在作用150min后可明顯抑制ST上抬，數據見表23。
注射用蒺藜總呋甾皂苷對犬冠狀動脈結扎型心肌缺血的影響作用主要體現在增加冠狀動脈血流量，緩解因結扎冠脈造成的心肌缺血，從而改善心電ST段，抑制上抬；增加心輸出量，降低總外周阻力，改善血流動力學特性，增加對心肌的供養，改善心肌缺血。
實驗8對大鼠急性心肌缺血模型的影響作用 取大鼠稱重，戊巴比妥鈉麻醉(30mg/kg，0.3ml/100g)，俯位固定于鼠板上，按II導聯方式連接心電圖模塊及PowerLab藥理生理通用軟硬件分析系統，實時觀測大鼠心電情況(心電記錄參數II導聯，400k/s采樣率)。待心電平穩后，先尾靜脈注射(0.1ml/kg)給予生理鹽水或注射用蒺藜總呋甾皂苷，10分鐘后再尾靜脈注射給予垂體后葉素(0.6u/kg)。記錄給藥前及給予垂體后葉素后的大鼠心電圖。
分組與劑量注射用蒺藜總呋甾皂苷分組與劑量高劑量(20mg/kg)，中劑量(10mg/kg)，低劑量(5mg/kg)；陽性對照組川芎嗪(20mg/kg)；模型組給予生理鹽水(1ml/kg)。
心電圖指標評價心肌缺血的主要指標是ST-H，同時亦對HR、QRS、T-H等指標進行了統計比較。
從表26結果顯示，大鼠在注射給予注射用蒺藜總呋甾皂苷后再注射給予垂體后葉素，可發現ST段的升高較之模型組有所下降，其中20mg/kg與10mg/kg兩劑量下，ST段的升高值與模型組比較有明顯減小，即由垂體后葉素造成的心肌缺血的ST段升高被抑制，注射用蒺藜總呋甾皂苷可緩解此時的心肌缺血。注射用蒺藜總呋甾皂苷維持抗心肌缺血作用的時間在15分鐘左右，其后作用逐漸減弱。5mg/kg對ST段的升高亦有抑制作用，但作用較弱。
表21-1注射用蒺藜總呋甾皂苷對犬冠狀動脈結扎型心肌缺血模型CF的影響(ml/min) 表21-2注射用蒺藜總呋甾皂苷對犬冠狀動脈結扎型心肌缺血模型CF的影響(ml/min) 注模型組前后比較#P＜0.05，差值與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01 表22-1注射用蒺藜總呋甾皂苷對犬冠狀動脈結扎型心肌缺血模型CO的影響(L/min) 表22-2注射用蒺藜總呋甾皂苷對犬冠狀動脈結扎型心肌缺血模型CO的影響(L/min) 注模型組前后比較#P＜0.05，##P＜0.01， 差值與模型組比較*P＜0.05 表23-1 注射用蒺藜總呋甾皂苷對犬冠狀動脈結扎型心肌缺血模型ST的影響(mv) 表23-2注射用蒺藜總呋甾皂苷對犬冠狀動脈結扎型心肌缺血模型ST的影響(mv) 表24-1注射用蒺藜總呋甾皂苷對犬冠狀動脈結扎型心肌缺血模型TPR的影響(kPa.s/L) 表24-2注射用蒺藜總呋甾皂苷對犬冠狀動脈結扎型心肌缺血模型TPR的影響(kPa.s/L) 表25對犬冠狀動脈結扎心肌缺血率的影響 注與模型組比較*P＜0.05，**P＜0.01 表26-1對急性心肌缺血大鼠ST-H的影響(M±SD，n＝10)單位mv 表26-1對急性心肌缺血大鼠ST-H的影響(M±SD，n＝10)單位mv 注模型組前后比較#P＜0.05；差值與模型組比較*P＜0.05。
權利要求
1、一種含蒺藜果呋甾皂苷的藥物組合物，該藥物組合物為自蒺藜果中提取分離純化的蒺藜總呋甾皂苷提取物，提取物中以呋甾皂苷為主要成份，其中總呋甾皂在提取物中的質量含量為80％以上。
2、根據權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于所述的蒺藜總呋甾皂苷提取物的制備方法，包括以下步驟
a、取蒺藜果粉碎成粗粉，用乙醇回流提取1-3次，每次1-3小時，合并提取液后回收乙醇，在60～100℃下濃縮至相對密度為1.08-1.12的濃縮液；
b、在上述濃縮液中加5-10倍量水，靜置6-20小時，取上清液，在60～100℃下濃縮至相對密度為1.08-1.12的濃縮水溶液；
c、在上述濃縮水溶液中用95％乙醇加至含醇量達60％-80％，用氫氧化鈉溶液調pH值至8.0-10.0，靜置6-20小時，過濾，濾液用鹽酸調溶液成中性后，回收乙醇，濃縮至無醇味的濃縮濾液；
d、在上述濃縮濾液中加水稀釋至相當于2g生藥/毫升的溶液，過濾，濾液通過大孔吸附樹脂，用水洗至無色，再用20-100倍柱體積的10-40％乙醇洗脫，然后用50％-90％乙醇收集，濃縮干燥，粉碎成細粉，得含量在80％以上的蒺藜總呋甾皂苷提取物。
3、根據權利要求2所述的藥物組合物，其特征在于步驟a中的乙醇采用4-10倍蒺藜果粉量的30％-90％的乙醇。
4、根據權利要求2所述的藥物組合物，其特征在于步驟d中的大孔吸附樹脂采用NKA-9、HPD100或AB-8大孔吸附樹脂。
5、根據權利要求2所述的藥物組合物，其特征在于步驟d中采用70-90倍柱體積的10-20％乙醇洗脫，用50％-70％乙醇收集。
6、根據權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于蒺藜總呋甾皂苷提取物與一種或多種藥用輔料制備成注射制劑。
7、根據權利要求6所述的藥物組合物，其特征在于蒺藜總呋甾皂苷提取物與一種或多種藥用輔料制備成凍干制劑。
8、根據權利要求7所述的藥物組合物，其特征在于所述的凍干制劑的制備方法，包括以下步驟
取蒺藜總呋甾皂苷提取物，加入凍干保護劑，加注射用水攪拌溶解，用4％的氫氧化鈉溶液調節PH值為7.0～7.5，加入活性炭，80℃攪拌30分鐘，過濾，用除菌濾膜過濾，分裝，冷凍干燥，制得凍干制劑。
9、根據權利要求8所述的藥物組合物，其特征在于凍干保護劑采用甘露醇、右旋糖苷或乳糖，用量為蒺藜總呋甾皂苷提取物質量的0.5～4倍。
10、根據權利要求1所述的藥物組合物，其特征在于在制備治療或預防缺血性心腦血管疾病中的應用。
全文摘要
本發明公開了一種含蒺藜果呋甾皂苷的藥物組合物，該藥物組合物為自蒺藜果中提取分離純化的蒺藜總呋甾皂苷提取物，提取物中以呋甾皂苷為主要成份，其中總呋甾皂在提取物中的質量含量為80％以上。本發明還公開了這種藥物組合物的用途。本發明藥物組合物中蒺藜總呋甾皂苷含量為80％以上，具有溶血作用較弱和水溶性好的特點，本發明將蒺藜呋甾皂苷制成靜脈注射劑具有較好的安全性，藥效更強，起效更快，適用于缺血性心腦血管急重癥的治療。
文檔編號A61K9/08GK101019905SQ20071002032
公開日2007年8月22日 申請日期2007年2月13日 優先權日2007年2月13日
發明者任宇, 王雪根, 吳友琴, 沈佳, 鄭軍義, 韋超, 陳彬輝 申請人:南京凱騰科技有限公司