西洋參莖葉總皂苷和漏蘆總甾酮組合物及其作用的制作方法
【專利摘要】本發明提供一種西洋參莖葉總皂苷和漏蘆總甾酮的藥物組合物，該組合物組成是：西洋參莖葉總皂苷和漏蘆總甾酮4.0:1-5.0:1，組合物與藥用賦形劑可制備成液體和固體的藥物制劑。對兩者最佳比例的有效部位復合物的藥效學研究，包括對多種化學物質導致記憶障礙的影響、對腦缺血及腦缺血-再灌注損傷致動物學習記憶障礙的改善作用、對大鼠海馬長時程突觸增強現象的影響，促智作用機制研究和細胞分子生物學實驗,可在制備治療阿爾茨海默病和血管性癡呆的藥物中的應用。本發明的組合物將兩種有效部位合用，作用比單用其中任何一種顯著增強，也顯著強于兩種藥材的常規水煎液。
【專利說明】西洋參莖葉總皂苷和漏蘆總留酮組合物及其作用
【技術領域】
[0001]本發明屬于天然藥物組合物，尤其涉及西洋參莖葉總皂苷和漏蘆總留酮組合物及其在制備防治血管性癡呆藥物中的應用。
【背景技術】
[0002]中醫西洋參有“滋補強壯，養陰生津，寧神益智，除煩降火”，中藥漏蘆具有“清熱解毒，舒筋通脈”，久服能“延年益壽，耳聰目明”作用。近代國內外研究報道已闡明人參中抗衰老抗疲勞提高學習記憶的主要活性成分是人參皂苷，漏蘆中降血脂、防治動脈粥樣硬化、清除體內自由基、免疫調節、抗缺氧、改善學習記憶、延緩衰老及預防老年病的主要活性成分是植物留酮類成分。最近，在臨床上應用人參和漏蘆為主要組成的方劑作為抗衰老制劑對與衰老關系密切的常見病和多發病存在明顯的預防和治療作用。
[0003]在分別對西洋參各部位(根、莖葉、果實)和漏蘆的系統研究中，發現了西洋參莖葉總皂苷作用最強，而且找出了其中含量較高，作用最顯著的有效單體PF11,在漏蘆中發現了其主要活性成分為漏蘆留酮，其代表性成分是β-蛻皮留酮。根據兩者的作用機制不同，藥效作用互補，我們對二者的復合物進行了藥效學試驗，發現了二者的增效作用。
【發明內容】
[0004]本發明所解決的技術問題是提供一種西洋參莖葉中提取有效成分-總皂苷和中藥漏蘆中提取的有效成分-漏蘆總留酮兩種多分子復合物，其重量比為4.0:1-5.0:1。經過系統的藥理及作用機制、藥效成分等研究證明其抗衰老、增強學習記憶、對血管性癡呆有增效作用。在臨床上可作為抗衰老制劑及與衰老密切相關的常見病和多發病有預防和治療作用。
[0005]所述的組合物可以與藥學上可接受的藥用賦性劑制備的制劑形式，主要包括液體制劑和固體制劑。固體制劑主要包括顆粒劑、片劑、膠囊劑(含軟膠囊)、滴丸劑。液體制劑主要包括口服液體制劑和注射液體制劑。
[0006]所述制劑的給藥形式主要包括口服給藥或非腸道給藥，優選口服給藥。
[0007]本發明的另一個目的是提供該組合物在制備治療阿爾茨海默病和血管性癡呆的藥物中的應用。
[0008]試驗結果表明，本發明的組合物對抗衰老、增強學習記憶、對血管性癡呆有增效作用。
[0009]本發明的有益效果是:
[0010]1.該組合物基于中醫藥理論，參考循證醫學資料，選用了兩種藥材中具有寧神益智、舒緩通脈、延年益壽之功效的有效部位組合，因此具有我國獨特的經歷了長期用藥證實的治療作用理論基礎，并能獲相得益彰的作用。
[0011]2.該組合物在制備用于治療和改善阿爾茨海默病和血管性癡呆藥物中應用，可解決該類疾病治療中，明顯缺乏療效肯定、不良反應輕微、用藥方便的藥物的問題。[0012]3.采用多種經典的生物評價系統，在細胞水平和基因水平證實組合物藥物在治療上述疾病中具有多層次、多靶點作用的依據。
[0013]4.經動物藥效學實驗證明，該組合物具有以下作用:
[0014]I)對腦缺血及腦缺血一再灌注損傷致動物學習記憶障礙的改善作用
[0015]2)對腦缺血損傷的保護作用
[0016]3)促智作用
[0017]5.經拆方研究，組合物將兩種有效部位合用，比單一其中任何一種作用顯著增強，并非簡單作用疊加。該組合物的上述作用顯著強于兩種藥材的常規水煎液。本組合物毒理作用研究結果表明，兩種有效部位合用的小鼠急性毒性研究結果，與單用其中任何一種相仿，均未見出現死亡和明顯的中毒癥狀。
[0018]6.本發明從西洋參和漏蘆藥材中提取有效部位西洋參莖葉總皂苷和漏蘆留酮，各達到> 50%以上，并獲得用于治療阿爾茨海默病和血管性癡呆的兩種有效部位最佳配比，可用于研制6類以上中藥新藥，拓展了單一藥物用途。
【具體實施方式】
[0019]實施例1本發明西洋參莖葉總皂苷(S)和漏蘆留酮(L)的制備方法
[0020](I)稱取西洋參莖葉粉末(20-40目)，加7倍量50% — 60%乙醇回流提取3次，每次2小時，合并濾液，減壓濃縮至一定體積，得上柱溶液。吸取該溶液上S^hadex LH-20柱，用8倍量70% — 90%乙醇洗脫，分段收集洗脫液。洗脫液水浴揮干，減壓濃縮，真空干燥，稱重并測定總阜苷含量，含量大于85%。
[0021](2)稱取漏蘆粉碎的原料(20-40目)，加乙醇回流提取3次，每次I小時，合并濾液，減壓濃縮至一定體積，得上柱溶液。吸取該溶液上大孔樹脂DM130 —蒸餾水洗脫雜質— 30% (濃度)洗脫雜質一90% (濃度)洗脫有效成分，洗脫液揮干，減壓濃縮，真空干燥，稱重并測定總皂苷含量，含量大于80%。
[0022]實施例2S及L最佳劑量的確定
[0023](I) S及L對東莨菪堿(SCPL)致大鼠記憶獲得障礙的改善作用
[0024]試驗方法:取健康昆明種小鼠，雌雄各半，體重20±2g，隨機分為正常對照組、模型對照組、S20、10、5、2.5mg.kg' L3.2、2.4、1.2、0.6mg.kg' 尼莫地平(nimo)30mg.kg-1組。給藥組分別灌服藥物，正常對照組和模型對照組灌服等容積蒸餾水，連續給予5天，在末次給藥后60min，除正常對照組腹腔注射生理鹽水外，其余各組均腹腔注射SCPL3mg *kg_1, IOmin后進行跳臺法訓練,24h后測試,記錄5min內小鼠的跳下潛伏期、錯誤次數和總電擊時間。
[0025]試驗結果:與正常對照組比較，模型對照組測試階段錯誤次數顯著增加。S20、IOmg *kg_1劑量組、L3.2mg *kg_1劑量組以及nimo組與模型對照組相比錯誤次數顯著減少。
[0026](2) S及L對小鼠急性腦缺血的保護作用
`[0027]試驗方法:取健康昆明種小鼠、雌雄各半，體積20±2g，隨機分為正常對照組、模型對照組、S20、10、5、2.5mg.kg' L3.2、2.4、1.2、0.6mg.kg' nimo30mg.kg-1 組。給藥組分別灌服不同劑量的S及L，正常對照組和模型對照組灌服等容積蒸餾水，連續給予5天，在末次給藥后60min進行急性腦缺血實驗。[0028]試驗結果:S20mg.kg-1劑量組，L3.2mg.kg-1劑量組及nimo組與正常對照組相比均顯著延長雙側頸總動脈結扎小鼠存活時間。
[0029]實施例3S和L的處方確定
[0030](I) S和L中S與L劑量的優化選擇
[0031]試驗方法:采用兩因素四水平的正交實驗設計，以S、L為兩因素，S四個水平分別為 20、15、10、5mg.kg' L 四個水平分別為 3.2,2.4、1.2,0.6mg.kg'
[0032]取健康昆明種小鼠，雌雄各半，體重20 士 2g，隨機分為正常對照組、模型對照組、S20/L3.2mg.kg \ S20/L2.4mg.kg \ S20/L1.2mg.kg \ S20/L0.6mg.kg \ S15/L3.2mg.kg \ S15/L2.4mg.kg \ S15/L1.2mg.kg \ S15/L0.6mg.kg \ S10/L3.2mg.kg \S10/L2.4mg.kg \ S10/L1.6mg.kg \ S10/L0.8mg.kg \ S5/L3.2mg.kg \ S5/L2.4mg.kg \S5/L1.2mg.kg' S5/L0.6mg.kg—1組。給藥組分別灌服不同劑量組合的SL，正常對照組和模型對照組灌服等容積蒸餾水，連續給予5天，在末次給藥后60min，除正常對照組腹腔注射生理鹽水外，其余各組均腹腔注射SCPL3mg -kg^1, IOmin后進行跳臺法訓練。24h后測試，記錄5min內小鼠的跳下潛伏期、錯誤次數和總電擊時間。以其在跳臺法中的錯誤次數為指標，并用方差分析法對各因素及水平進行分析，以考察各因素的主次及各水平的優劣。試驗結果:S，L分別以A.B代表，四個水平分別以1，2，3.4代替，按照正交設計進行正交實驗，結果進行方差分析。以SCPL致記憶獲得障礙模型小鼠在跳臺法中測試階段錯誤次數為指標，結果表明:S以及L對藥效均有顯著影響，優化劑量組合為S第二水平S2，15mg.kg—1以及L 第一水平 LI, 3.2mg.kg—1。
[0033](2) S和L對SCPL致小鼠記憶獲得障礙的改善作用
[0034]試驗方法:取健康昆明種小鼠，雌雄各半，體重20±2g，隨機分為正常對照組、模型對照組、SL 高(S30/L6.4mg.kg-1)、SL 中(S15/L3.2mg.kg-1).SL 低(S7.5/Ll.6mg.kg-1)、S15mg.kg'L3.2mg.kg'nimo30mg.kg-1組,給藥組分別灌服藥物，正常對照組和模型對照組灌服等容積蒸餾水，連續給予5天，在末次給藥后60min，除正常對照組腹腔注射生理鹽水外，其余各組均腹腔注射SCPL3mg.kg_\ IOmin后進行跳臺法訓練。24h后測試,記錄5min內小鼠的錯誤次數。采用代數和相加法，以Q值為指標對復方與單味藥物藥效進行比較，Q值大于I表示合用效果大于單方效果之和。Q值計算公式如下:
[0035]Q=Ea+b/ (Ea+Eb-Ea*Eb)
[0036]其中Ea+b表示兩藥合用后的效果，Ea、Eb分別為表示兩藥單獨使用時的效果。
[0037]表1SL在跳臺試驗中對SCPL致小鼠記憶獲得障礙的影響
【權利要求】
1.西洋參莖葉總皂苷和漏蘆總留酮組合物，其特征是:組合物的組成為西洋參莖葉總皂苷:漏蘆總甾酮的重量比值為4.0:1-5.0:1。
2.一種藥物制劑，其特征是:包含權利要求1所述的西洋參莖葉總皂苷和漏蘆總甾酮組合物。
3.根據權利要求2所述的藥物制劑，其特征是:所述制劑為液體制劑或固體制劑。
4.根據權利要求3所述的藥物制劑，其特征是:固體制劑為顆粒劑、片劑、膠囊、軟膠丸、滴丸劑或栓劑。
5.根據權利要求3所述的藥物制劑，其特征是:液體制劑為口服液體制劑或注射液體制劑。
6.根據權利要求5所述的藥物制劑，其特征是:所述制劑的給藥形式為口服給藥或非腸道給藥。
7.權利要求1所述的西洋參莖葉總皂苷和漏蘆總留酮組合物在制備治療阿爾茨海默病和血管性癡呆的藥物中的應用。
8.權利要求1所述的西洋參莖葉總皂苷和漏蘆總留酮組合物在制備抗衰老、增強學習記憶、抗血管性癡呆藥物中的應用。
9.權利要求2-6任何一項所述的藥物制劑在制備治療阿爾茨海默病和血管性癡呆的藥物中的應用。
10.權利要求2-6任何一項所述的藥物制劑在制備抗衰老、增強學習記憶、抗血管性癡呆藥物中的應用。
【文檔編號】A61P25/28GK103655659SQ201310690863
【公開日】2014年3月26日 申請日期:2013年12月13日 優先權日:2013年12月13日
【發明者】張向榮, 生依靈, 趙余慶, 李巍, 李銑 申請人:沈陽藥科大學