一種延緩男性衰老的藥物組合物的制作方法

專利名稱：：一種延緩男性衰老的藥物組合物的制作方法
技術領域：
：本發明涉及來源于植物材料的醫用配置品，具體涉及具有延緩男性衰老作用的植物材料醫用配置品。
背景技術：
：隨著我國人口老齡化進程的加快，老年人口的增加及生活水平的提高，中老年男子的健康問題也越來越引起人們的關注。男性衰老進程中，最突出表現的是下丘腦-垂體-睪丸這一生殖軸功能的下降。作為生殖軸最終效應內分泌激素，睪酮水平隨年齡增長而逐漸降低，55歲以上男子中血清總睪酮下降約36%,而游離睪酮下降約50%，血清脫氫表雄酮及其硫化物也明顯下降。睪酮水平下降的主要原因是下丘腦、垂體功能減退和睪丸間質細胞減少及功能減退。睪酮替代治療是治療老年男性雄激素水平不足的一種有效療法。但睪酮的替代治療仍有不足之處，人體內存在多種雄激素的靶細胞，如長期采用睪酮替代治療可能引起部分人群出現前列腺組織增生，病人需要頻繁地檢查和調整藥物劑量，給患者生活帶來不便。人體雄激素的分泌有晨髙夜低的自然規律，而睪酮替代治療破壞了這一自然規律。長期服用外源性雄激素，還可能抑制自身睪丸的分泌和生精功能。在中醫藥領域中，延緩男性衰老多采用補腎方法，具有延緩下丘腦-垂體-睪丸生殖軸功能下降的藥效報道，由于成分復雜，在促進下丘腦-垂體-睪丸生殖軸功能的同時，可能有其他成分興奮交感神經系統而產生心跳加速、血壓升高、口咽干燥等現象。
發明內容本發明要解決的技術問題是提供一種富含有效成分的提取物組合物，以改善療效，減少日服用量，并使不同批次間質量易于控制。本發明解決上述技術問題的技術方案是一種延緩男性衰老的藥物組合物，該組合物由活性成分和醫學上可接受的輔料組成，其中所述的活性成分由以下重量百分比的組分組成淫羊藿提取物20~70%、山藥提取物30~80%;上述各組分均是由公知方法制備獲得，其中淫羊藿提取物是提取淫羊藿的水溶或醇溶部分并精制得到的，含有20~90%淫羊藿總黃酮；山藥提取物是經酸水解后提取石油醚溶解部分得到的，含有20~60%薯蕷皂苷元；上述百分比均為重量百分比。本發明的較佳方案是-淫羊藿提取物30~60%、山藥提取物40~70%;淫羊藿提取物中含有淫羊藿總黃酮20~80%，山藥提取物中含有薯蕷皂苷元20~60%。本發明的最佳方案是-本發明所述的藥物組合物，其中活性成分由以下重量百分比的組分組成淫羊藿提取物30%、山藥提取物70%;淫羊藿提取物中含有淫羊藿總黃酮70%，山藥提取物中含有薯蕷皂苷元20%。本發明所述的藥物組合物的活性成分中各組分的制備方法如下所述1、淫羊藿提取物可以用水煎煮后將水煎液通過大孔樹脂提純后得到，具體方法是稱取淫羊藿全草干粉，加入8~12倍生藥量的水，加熱微沸提取30~90min，冷卻，粗濾；濾渣重復提取1次；合并兩次粗濾液，過濾。將濾液上大孔樹脂柱，用2~5倍體積蒸餾水洗滌樹脂柱，然后用24倍體積50~70%的乙醇洗脫，5(K70X:減壓濃縮至干，即可。所得的淫羊藿提取物還可以依次用氯仿萃取(除去極性小的雜質)和乙酸乙酯萃取，然后取乙酸乙酯相濃縮后得黃色粉末，最后用60%乙醇重結晶，即可得到純度較高的淫羊藿提取物。2、山藥提取物是先將山藥用酸水解后用石油醚提取#到，具體方法是將山藥飲片粉碎至10目左右，按原藥材2.%硫酸-l:8~12的比例，加入等體積的2%的硫酸和石油醚，于859(TC水解35h,傾出、冷卻、分層、取上層(石油醚部分)，用碳酸鈉溶液洗至中性，再用蒸餾水洗，回收石油醚，蒸干，再用乙醇洗，回收乙醇，蒸干，置5(K70'C真空干燥，即可；本發明組方中的山藥提取物還可以將山藥酸水解產物通過二氧化碳超臨界萃取法提取獲得。本發明所述的藥物組合物是常見的口服制劑，如軟膠囊、滴丸等。本發明所述的藥物組合物制備方法是按配比取淫羊藿提取物和山藥提取物混合均勻，然后按照制備不同制劑的要求添加所需的輔料，即可。本發明的藥物組合物在制備之前須要對各種原料提取物中的有效成分進行定性和定量檢測，具體的方法如下-1、淫羊藿總黃酮定性和定量檢測以淫羊藿苷為對照品，將樣品用硅膠H薄層層析，醋酸乙酯-丁酮-甲酸-水(10:1:1:l)展開，三氯化鋁定性反應，均顯橙紅色熒光斑點，證實為淫羊藿總黃酮。淫羊藿總黃酮含量測定采用《中國藥典》2005年版淫羊藿項下的總黃酮含量測定方法進行，分光光度法在270nm波長處測定吸收度，計算總黃酮含量。2、薯蕷皂苷元定性和定量檢測(1)定性分析采用薄層層析的方法。展開劑(石油醚)V(氯仿)V(甲醇)=10:10:0.5。展開方式..上行展開，展距8cm。顯色劑20g/L磷鉬酸無水乙醇溶液。噴濕潤，140'C烘烤5min至斑點顯色清晰。薯蕷皂苷元與其它成分得到有效分離，呈深藍色，Rf值約為0.32。(2)定量分析薄層掃描條件在CAMAGScanner3上采用單波長線性掃描，掃描波長650nm;狹縫6.00X0.30mm;掃描速度20nm/s。標準曲線的測定用半自動進樣儀對薯蕷皂苷元對照品溶液進行點樣，點樣量分別為0.1，0.2，0.4，0.8，1.2,1.6，2.0，2.4，2.8，3.2uL，點于同一塊硅膠G高效薄層板上進行檢測，以薯蕷皂苷元峰面積(Y)為縱坐標，進樣體積(V)為橫坐標，繪制標準曲線，回歸方程為Y-l.979V-229.474，r=0.9983;在.0.3一.8"g范圍內線性關系良好。取lg山藥提取物用10ml甲醇溶解，采用外標兩點法對樣品進行測定；分別記錄3份樣品3次測定的平均值。本發明藥物組合物成品的活性成分同樣可用上述方法進行鑒定。中醫學認為衰老主要歸于先天之本腎精氣的衰竭，和后天之本脾氣的虧虛，本發明組合物正是采取脾腎雙補這一途徑來達到延緩男性衰老的目的。本發明組合物中的活性成分來源于淫羊藿和山藥，其中淫羊藿具有補腎壯陽、祛風濕、強筋骨等功效，從淫羊藿中提取的淫羊藿總黃酮可調整下丘腦單胺類遞質、促進腺垂體、性腺等功能，從而全方面地調節下丘腦-垂體-性腺軸功能，從先天之本對衰老的生殖軸功能進行調補；實驗發現從淫羊藿提取的淫羊藿總黃酮能使小鼠附睪及精囊腺增重并明顯促進大鼠睪丸間質細胞基礎分泌。而山藥具有平補脾腎，益氣養陰的功效，含薯蕷皂苷(酸水解后得薯蕷皂苷元)，山藥素i、n、m、IV、V、尿囊素等成分，薯蕷皂苷元與體內甾體激素分子基本結構相似，被人體吸收后，可促進包括性激素、皮質激素等甾體激素生物合成的前體，從后天之本對衰老的生殖軸功能進行調補。本發明藥物組合物具有升高血清睪酮、增強抗疲勞能力、抗自由基損害的作用，能有效延緩男性衰老。下面將通過動物實驗來證明本發明具有的技術效果。(一)材料與方法1材料實驗動物3月齡的青年雄性SD大鼠和24月齡雄性老年SD大鼠，其中青年大鼠體重300g320g，老年大鼠體重650720g。治療用藥本發明軟膠囊，每粒軟膠囊約重500mg/粒，每粒含65mg淫羊藿提取物和130mg山藥提取物，其中淫羊藿提取物含有70%淫羊藿總黃酮，山藥提取物含有20%薯蕷皂苷元。2實驗方法2.1動物分組大鼠分為3組，分別是A組(青年對照組)、B組(老年對照組)、C組(本發明治療組)每組10只。2.2給藥方法以成人(70kg)每日服用量(500mg)的IO倍劑量給藥，即71mg/kg(以軟膠囊計)，以豆油溶化和稀釋，予大鼠灌胃。青年對照組以等量的豆油灌胃。每日給藥一次，持續8W。2.3負重游泳實驗按體重的5%于大鼠尾部縛上鉛條，于水溫28t,水深80cm的水池內分別以單只進行負重游泳，記錄大鼠頭部全部入水持續8S不能浮出水面為止的時間作為該鼠的游泳時間。2.4血液總睪酮檢測于早晨8~10時取大鼠血2ml，離心分離血清，-20"保存。以放射免疫法進行檢測。2.5血清超氧化物歧化酶SOD活性、血清MDA含量的測定取血方法同上，SOD活性檢測采用羥胺氧化法，血清MDA含量測定采用硫代巴比妥酸化學比色法。2.6大鼠睪丸病理學檢査取出大鼠睪丸，中性甲醛溶液固定，石蠟切片，HE染色，10X10光鏡下觀察病變情況。2.7統計方法各組檢測值用均數和標準差表示，方差齊性參數各組間比較采用單因素方差分析，對于方差不齊參數的組間比較，采用多個獨立樣本非參數檢驗中的Kruskal-WallisH檢驗。(二)結果1、各組大鼠總睪酮、超氧化物歧化酶、丙二醛變化，見表l。表l:各組大鼠血清總睪酮、超氧化物歧化酶、丙二醛變化值。<table>tableseeoriginaldocumentpage6</column></row><table>與青年大鼠組相比，好<0.05，抑P〈0.01;與老年對照組相比，AP〈0.05,AAP〈0.01。如表1所示，青年大鼠血清睪酮水平為23.23土3.53mmo1/L,明顯高于老年大鼠睪酮水平13.31±2.28，顯著低于青年大鼠(PO.01);經給藥治療2個月后，血清睪酮明顯提高，達到19.76±3.12mmol/L，顯著高于未經治療的老年對照組，(PO.Ol)。SOD作為體內的抗氧化重要酶系之一，可催化超氧化物陰離子((V)發生歧化反應生成H202和02，其產物H202再由過氧化酶催化生成的H20和Oa或氧化產物，從而達到清除活性氧，減少自由基損害。而MDA是02-介導的機體內不飽和脂類過氧化反應的特征性終末代謝產物，其含量直接反映體內脂質過氧化的程度。本實驗結果表明，30月齡雄性大鼠與6月齡雄性大鼠比較，血清SOD活性顯著降低，MDA含量顯著升高。而經治療2個月后，SOD活性得以顯著提高，MDA含量同步顯著下降。2、大鼠負重游泳實驗，結果見表2。表2:各組大鼠負重游泳時間變化值。組別n游泳時間(S)A10380.78士45.32據B10120.38±20.45*"C10226.76±36.76"與青年大鼠組相比，《<0.05,##P<0.01;與老年對照組相比，AP〈0.05，AAP〈0.01。負重游泳時間是反映抗疲勞功能的一項良好指標，如表2所示，老年大鼠對照組負重游泳時間顯著低于青年對照組；經過2個月的治療后，C組抗疲勞能力明顯提高，可見本發明組合物能增強老年大鼠的抗疲勞能力。3、各組大鼠睪丸病理檢查1.大體標本老年大鼠睪丸存在明顯的老化現象，與青年大鼠比較，其色澤灰暗，不如青年組大鼠睪丸外觀紅潤，質地也松弛、彈性較差。2.光鏡觀察(10X10):青年大鼠曲細精管及各級生精細胞、精子及間質支持細胞，形態結構正常，如圖1所示；老年對照組大鼠部分曲細精管纖維組織增生并有玻璃樣變性，各級生精細胞、精子細胞及精子明顯減少，間質水腫，如圖2所示；本發明用藥組的老年大鼠病變較同期對照組明顯減輕，僅見部分曲細精管萎縮，各級生精細胞、精子細胞及精子輕度減少，如圖3所示；實驗證明，本發明藥物組合物具有升高血清睪酮、增強抗疲勞能力、抗自由基損害的作用，能有效延緩男性衰老。圖l是青年大鼠睪丸病理檢査的光鏡圖(10X10)。圖2是老年大鼠睪丸病理檢査的光鏡圖(10X10)。圖3是給予本發明藥物組合物用藥后老年大鼠睪丸病理檢查的光鏡圖(10X10)。具體實施方式例11、活性成分中各組分的制備-(1)淫羊藿提取物稱取淫羊藿全草干粉，加入IO倍量的蒸餾水，加熱微沸提取30min，冷卻，粗濾；濾渣重復提取1次；合并兩次粗濾液，抽濾。采用AB-8大孔吸附樹脂，洗脫時采用70%乙醇為洗脫劑，洗脫劑用量為6倍量樹脂體積，洗脫，將經樹脂洗脫后的溶液依次用氯仿萃取3次(除去極性小的雜質)和乙酸乙酯萃取3次，每次萃取劑的用量為待萃取液體積的2倍，合并乙酸乙酯相，濃縮后得黃色粉末。將上述黃色粉末用60%乙醇重結晶，得到淡黃色含90%淫羊藿總黃酮的提取物。(2)山藥提取物將山藥飲片粉碎至10目左右，按原藥材水解液=1:8的比例，加入等體積的2%的硫酸，于85"C水解3h，用碳酸鈉溶液洗至中性，再用蒸餾水洗，回收石油醚，蒸干，移入萃取器，以C02超臨界萃取法進行提取。以壓力35.0MPaCO2氣體，經過過濾器進入C02冷凝器中冷卻液化，然后泵入管道；同時以體積分數為95%乙醇為攜帶劑，攜帶劑含量3%,攜帶待萃取的水解產物由另一泵入管道；C02和攜帶劑經三通進入萃取器，在45'C恒溫靜置浸泡6h之后開始動態分離，含萃取物的C02氣體經過針閥降壓進入分離器，在常壓60'C下動態分離3h,C02流速2L'min-l，C02經過體積計量計后由排氣口排出，分離山藥提取物，其中含薯蕷皂苷元60%。2、制備軟膠囊(1)取淫羊藿提取物200g、山藥提取物700g以2000g豆油混合，攪拌磨勻。取250g食用蜂蠟(作為乳化劑)加入豆油加熱熔解，將上述兩部分攪拌均勻。(2)制備藥用明膠預熱煮膠鍋，加入純水30kg、甘油13.5148，加熱至82'C，加入明膠30kg及對羥基苯甲酸乙酯0.15kg。攪拌并抽真空，液面穩定后繼續抽真空，真空度大于0.07mpa。抽檢膠液質量，合格后放膠備用。稱取鐵紅加甘油，熔解過磨，倒入明膠中混合，攪拌均勾。(3)以壓丸法進行壓丸，膠皮厚度80mm,膠液溫度6(TC，噴體溫度44'C。(4)將定型干燥后的膠丸，在洗丸機內用酒精進行洗丸。(5)上述原料制成的軟膠囊約重500mg/粒，每粒含200mg藥物成分，每日服用1~2粒。例21、活性成分中各組分的制備(1)淫羊藿提取物稱取淫羊藿全草干粉，然后用10倍體積70%的乙醇回流提取，收集回流液，濾過并回收乙醇，薄膜旋轉蒸發器濃縮并干燥得淫羊藿提取物，其中含淫羊藿總黃酮20%。(2)山藥提取物將山藥飲片粉碎至10目左右，按原藥材水解液=1:12的比例，加入等體積的2%的硫酸和石油醚，于90'C水解5h，傾出、冷卻、分層、取上層(石油醚部分)，用碳酸鈉溶液洗至中性，再用蒸餾水洗，回收石油醚，蒸干，再用乙醇洗，回收乙醇，蒸干，置7(TC真空干燥，得山藥提取物，其中含薯蕷皂苷元20%。2、制備軟膠囊-(1)取淫羊藿提取物300g、山藥提取物800g以2000g豆油混合，攪拌磨勻。取250g食用蜂蠟(作為乳化劑)加入豆油加熱熔解，將上述兩部分攪拌均勻。(2)制備藥用明膠預熱煮膠鍋，加入純水30kg、甘油13.5kg，加熱至82'C，加入明膠30kg及對羥基苯甲酸乙酯0.15kg。攪拌并抽真空，液面穩定后繼續抽真空，真空度大于0.07mpa。抽檢膠液質量，合格后放膠備用。稱取鐵紅加甘油，熔解過磨，倒入明膠中混合，攪拌均勻。(3)以壓丸法進行壓丸，膠皮厚度80mm，膠液溫度60'C,噴體溫度44'C。(4)將定型干燥后的膠丸，在洗丸機內用酒精進行洗丸。(5)上述原料制成的軟膠囊約重500mg/粒，每粒含200mg藥物成分，每日服用2~4粒。例31、活性成分中各組分的制備-(1)淫羊藿提取物稱取淫羊藿全草干粉，加入IO倍量的蒸餾水，加熱微沸提取30min，冷卻，粗濾；濾渣重復提取1次；合并兩次粗濾液，抽濾。取經過預處理的D101大孔吸附樹脂，濕法裝柱，將淫羊藿水提液上D101樹脂柱(樹脂重100g)，用5倍體積蒸餾水洗滌樹脂柱，然后用3倍體積50%的乙醇洗脫，60"減壓濃縮至干，淫羊藿提取物，其中含淫羊藿總黃酮70%。(2)山藥提取物將山藥飲片粉碎至10目左右，按原藥材水解液-l:10的比例，加入等體積的2%的硫酸，于87'C水解6h，用碳酸鈉溶液洗至中性，再用蒸餾水洗，回收石油醚，蒸干，乙醇洗，回收乙醇，分離山藥提取物，其中含薯蕷皂苷元20%。2、制備滴丸取淫羊藿提取物300g、山藥提取物700g,將聚乙二醇6000加熱至90'C100t:,待全部熔融后，按聚乙二醇與藥物比例3:l的比例，加入淫羊藿提取物、山藥提取物，攪拌至熔解，轉移至貯液瓶中，密閉并保溫在90'C，調節滴液定量閥門，由上往下，滴入10'C15'C的液狀石蠟中，將成形的滴丸瀝盡并擦除液狀石蠟，干燥并貯藏。制成品為黃色滴丸，規格每粒50mg,有效成分12.5mg/粒，每日服用3次，每次服用6粒，每次約服用藥量為75mg。例41、活性成分中各組分的制備(1)淫羊藿提取物稱取淫羊藿全草干粉，然后用10倍體積70%的乙醇回流提取，收集回流液，濾過并回收乙醇，薄膜旋轉蒸發器濃縮并干燥得淫羊藿提取物，其中含淫羊藿總黃酮20%。(2)山藥提取物將山藥飲片粉碎至10目左右，按原藥材水解液-l:8的比例，加入等體積的2%的硫酸，于85'C水解3h，用碳酸鈉溶液洗至中性，再用蒸餾水洗，回收石油醚，蒸干，移入萃取器，以C02超臨界萃取法進行提取。以壓力35.0MPaCO2氣體，經過過濾器進入C02冷凝器中冷卻液化，然后泵入管道；同時以體積分數為95%乙醇為攜帶劑，攜帶劑含量3%，攜帶待萃取的水解產物由另一泵入管道；C02和攜帶劑經三通進入萃取器，在45"C恒溫靜置浸泡6h之后開始動態分離，含萃取物的C02氣體經過針閥降壓進入分離器，在常壓60'C下動態分離3h，C02流速2Lmin-l,C02經過體積計量計后由排氣口排出，分離山藥提取物，其中含薯蕷皂苷元60%。2、制備滴丸取淫羊藿提取物700g、山藥提取物300g,將聚乙二醇6000加熱至90'C，待全部熔融后，按聚乙二醇與藥物比例3:l的比例，加入淫羊藿提取物、山藥提取物，攪拌至熔解，轉移至貯液瓶中，密閉并保溫在90'C，調節滴液定量閥門，由上往下，滴入10"C15。C的液狀石蠟中，將成形的滴丸瀝盡并擦除液狀石蠟，干燥并貯藏。制成品為黃色滴丸，規格每粒50mg，有效成分12.5mg/粒，每日服用3次，每次服用6粒，每次約服用藥量為75mg。例51、活性成分中各組分的制備(1)淫羊藿提取物稱取淫羊藿全草干粉，然后用10倍體積70%的乙醇回流提取，收集回流液，濾過并回收乙醇，薄膜旋轉蒸發器濃縮并干燥得淫羊藿提取物，其中含淫羊藿總黃酮20%。(2)山藥提取物將山藥飲片粉碎至10目左右，按原藥材水解液-l:10的比例，加入等體積的2%的硫酸，于87C水解6h,用碳酸鈉溶液洗至中性，再用蒸餾水洗，回收石油醚，蒸干，乙醇洗，回收乙醇，分離山藥提取物，其中含薯蕷皂苷元20%。2、制備滴丸取淫羊藿提取物300g、山藥提取物800g，將聚乙二醇6000加熱至90'C10(rC，待全部熔融后，按聚乙二醇與藥物比例3:l的比例，加入淫羊藿提取物、山藥提取物，攪拌至熔解，轉移至貯液瓶中，密閉并保溫在9(TC，調節滴液定量閥門，由上往下，滴入10'C15'C的液狀石蠟中，將成形的滴丸瀝盡并擦除液狀石蠟，干燥并貯藏。制成品為黃色滴丸，規格每粒50mg,有效成分12.5mg/粒，每日服用3次，每次服用6粒，每次約服用藥量為75mg。權利要求1、一種延緩男性衰老的藥物組合物，該組合物由活性成分和醫學上可接受的輔料組成，其中所述的活性成分由以下重量百分比的組分組成淫羊藿提取物20～70％、山藥提取物30～80％；其中淫羊藿提取物是提取淫羊藿的水溶或醇溶部分并精制得到的，含有20～90％淫羊藿總黃酮；山藥提取物是經酸水解后提取石油醚溶解部分得到的，含有20～60％薯蕷皂苷元；上述百分比均為重量百分比。2、根據權利要求1所述的一種延緩男性衰老的藥物組合物，其特征在于所述的活性成分由以下重量百分比的組分組成淫羊藿提取物30~60%、山藥提取物40~70%;其中淫羊藿提取物中含有淫羊藿總黃酮20~80%，山藥提取物中含有薯蕷皂苷元20~60%。3、根據權利要求1所述的一種延緩男性衰老的藥物組合物，其特征在于所述的活性成分由以下重量百分比的組分組成淫羊藿提取物30%、山藥提取物70%;淫羊藿提取物中含有淫羊藿總黃酮70%，山藥提取物中含有薯蕷皂苷元20%。4、根據權利要求l、2或3所述的一種延緩男性衰老的藥物組合物，該組合物是軟膠囊或滴丸。全文摘要本發明提供了一種延緩男性衰老的藥物組合物，該組合物由活性成分和醫學上可接受的輔料組成，其中所述的活性成分由以下重量百分比的組分組成淫羊藿提取物20～70％、山藥提取物30～80％；其中淫羊藿提取物含有20～90％淫羊藿總黃酮；山藥提取物含有20～60％薯蕷皂苷元。本發明藥物組合物具有升高血清睪酮、增強抗疲勞能力、抗自由基損害的作用，能有效延緩男性衰老。文檔編號A61K9/20GK101099814SQ20071002921公開日2008年1月9日申請日期2007年7月18日優先權日2007年7月18日發明者劍王申請人:廣州中醫藥大學